Phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất từ nấm daldinia concentrica ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH TỐNG PHƢƠNG THỦY PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ NẤM DALDINIA CONCENTRICA Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Vinh, 2015 (Ghi năm hoàn thành luận văn) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH TỐNG PHƢƠNG THỦY PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ NẤM DALDINIA CONCENTRICA Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: HÓA HỌC HỮU CƠ Mã số: 60440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ VĂN HẠC Vinh, 2015 LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành Phịng thí nghiệm Hố hữu cơ, Khoa Hố Học, Trường Đại học Vinh, Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: PGS.TS Lê Văn Hạc giao đề tài, hướng dẫn tận tình chu đáo, tạo điều kiện vật chất tinh thần suốt trình nghiên cứu hồn thành luận văn PGS.TS Trần Đình Thắng giúp đỡ tơi q trình thực nghiệm, phân tích giải phổ PGS.TS Nguyễn Hoa Du, PGS.TS Trần Đình Thắng đọc luận văn cho nhận xét quý báu Đồng thời xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo mơn Hố Hữu thầy Khoa Hoá, Khoa Sau đại học, Trường Đại học Vinh, Các anh chị Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Các anh chị lớp CH21 Hố Hữu bạn bè, gia đình, người thân động viên giúp đỡ q trình hồn thành luận văn Tác giả Tống Phƣơng Thủy MỤC LỤC A Mở đầu Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Những đóng góp B Nội dung Chƣơng Tổng quan Chi Daldinia 1.1.1 Lịch sử hình thành chi Daldinia 1.1.2 Đặc điểm phân bố 1.1.3 Phân loại Nấm Daldinia concentrica 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Thành phần hóa học 1.2.3 Môi trường sống phân bố nấm Daldinia concentrica 1.2.4 Hoạt tính sinh học a Hợp chất Cytochalasan 1.3.1 Cấu trúc đa dạng 1.3.2 Hoạt tính sinh học 1.3.2.1 Tính gây độc tế bào tiềm tác nhân chống ung thư 1.3.2.2 Hoạt tính chống vi trùng ký sinh trùng 1.3.2.3 Tính chất dược lý khác 1.3.2.4 Cytochalasan độc tố thực vật 1.3.2.5 Tầm quan trọng độc tính tác động đến hư hỏng thực phẩm Chƣơng Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.1.1 Phương pháp lấy mẫu 2.1.2 Phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân lập chất 2.1.3 Phương pháp khảo sát cấu trúc hợp chất 2.2 Thực nghiệm 2.2.1 Hóa chất 2.2.2 Các phương pháp sắc ký 2.2.3 Dụng cụ thiết bị 2.2.4 phân lập hợp chất từ nấm Chƣơng Kết thảo luận 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất A 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất B C Kết luận Tài liệu tham khảo C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT * Các phương pháp sắc ký: GC-MS: Sắc ký khí - khối phổ ký liên hợp TLC: Sắc ký lớp mỏng CC: Sắc ký cột thường FC: Sắc ký cột nhanh HPLC: Sắc ký lỏng cao áp * Các phương pháp phổ : MS: phổ khối lượng EI - MS: phổ khối va chạm electron H - MNR: phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 13 C- NMR: phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C DEPT: Distotionless Enhancement by polarisaton Transfer HSQC: Heteronuclear Single Quantum Correlation (Phổ tương quan đa lượng tử) HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Phổ tương quan dị hạt nhân qua nhiều liên kết) UV: Phổ tử ngoại IR: Phổ hồng ngoại - Các danh mục khác : s: Singlet brs: Singlet tù d: dublet t: tritplet TMS: Tetramethylsilan DMSO : DimethylSulfoxide BNT: Binaphthyl Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG – HÌNH – SƠ ĐỒ Bảng 3.1 Bảng số liệu phổ hợp chất A Bảng 3.2 Bảng số liệu phổ hợp chất B Hình 1.1 Nấm Daldinia concentrica Hình 1.2 Daldinia concentrica dễ cháy Hình 1.3.(a) Cấu trúc cytochalasin Hình 1.3.(b) Cấu trúc cytochalasin Hình 1.4 Cấu trúc tyrosin-nguồn gốc từ cytochalasan Hình 1.5.(a) Cấu trúc tryptophan-nguồn gốc từ cytochalasan Hình 1.5.(b) Cấu trúc tryptophan-nguồn gốc từ cytochalasan Hình 1.6 Cấu trúc leucin - nguồn gốc từ cytochalasan Hình 1.7 Cấu trúc Alachalasin Hình 3.1 Phổ 1H-NMR hợp chất A Hình 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất A Hình 3.3 Phổ 1H-NMR hợp chất A Hình 3.4 Phổ 13C-NMR hợp chất A Hình 3.5 Phổ 13C-NMR hợp chất A Hình 3.6 Phổ DEPT hợp chất A Hình 3.7 Phổ DEPT hợp chất A Hình 3.8 Phổ HSQC hợp chất A Hình 3.9 Phổ HSQC hợp chất A Hình 3.10 Hình 3.11 Hình 3.12 Hình 3.13 Phổ HSQC hợp chất A Phổ HMBC hợp chất A Phổ HMBC hợp chất A Phổ HMBC hợp chất A Hình 3.14 Hình 3.15 Hình 3.16 Hình 3.17 Phổ HMBC hợp chất A Phổ HMBC hợp chất A Phổ HMBC hợp chất A Phổ MS hợp chất B Hình 3.18 Phổ 1H-NMR hợp chất B Hình 3.19 Phổ 1H-NMR hợp chất B Hình 3.20 Phổ 1H-NMR hợp chất B Hình 3.21 Phổ 13C-NMR hợp chất B Hình 3.22 Phổ 13C-NMR hợp chất B Hình 3.23 Phổ 13C-NMR hợp chất B Hình 3.24 Phổ DEPT hợp chất B Hình 3.25 Phổ DEPT hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.26 Phổ DEPT hợp chất B Hình 3.27 Phổ HSQC hợp chất B Hình 3.28 Phổ HSQC hợp chất B Hình 3.29 Phổ HSQC hợp chất B Hình 3.30 Phổ HSQC hợp chất B Hình 3.31 Phổ HMBC hợp chất B Hình 3.32 Phổ HMBC hợp chất B Hình 3.33 Phổ HMBC hợp chất B Hình 3.34 Phổ HMBC hợp chất B Hình 3.35 Phổ HMBC hợp chất B Hình 3.36 Phổ HMBC hợp chất B Sơ đồ 2.1 Phân lập hợp chất thể nấm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Giới nấm (Fungi) bao gồm sinh vật nhân chuẩn tự dưỡng có thành tế bào kitin Giới nấm có số lượng loài lớn, bao gồm 97861 loài, 8283 chi (và gần 5101 giống), 560 họ, 140 bộ, 36 lớp mơ tả [3] ước tính số lượng lồi lên tới 1,5 triệu [2] bên cạnh giới Thực vật (Plant), Động vật (Animal), Vi khuẩn (Bacteria) Số lượng lồi nấm lớn (Marcrofungi) có thể nhìn thấy mắt thường khoảng 14 nghìn lồi lên tới 22 nghìn lồi [2] Nấm nói chung họ Xylariaceae, thuộc Xylariales, lớp nấm túi, ngành nấm túi nói riêng đối tượng hấp dẫn cho nghiên cứu đa dạng sinh học Xylariaceae họ lớn lớp Nấm túi Ascomycetes, thuộc ngành Nấm túi Ascomyccota Hiện nay, giới xác định 75 chi thuộc họ [2] Chúng tìm thấy khắp vùng ơn đới nhiệt đới giới Tuy nhiên nước ta chưa có cơng trình nghiên cứu đầy đủ họ mà thống kê 82 lồi với 13 chi thuộc họ Xylariaceae cơng bố [6] Con số chưa thể hết mức độ đa dạng thực tế vùng miền có đặc điểm khí hậu nhiệt đới, thuận lợi cho nấm phát triển Việt Nam Các loài thuộc họ Xylariaceae chủ yếu hoại sinh tên gỗ mục, gốc cụt, cành cây, số hoại sinh phân động vật, số ký sinh gây bệnh nguy hiểm thực vật [31] Nấm ứng dụng rộng rãi đời sống lẫn sản xuất, nhiều loài sử dụng công nghệ thực phẩm, sử dụng làm thức ăn trình lên men để tạo rượu bia bánh mì, số lồi nấm khác sử dụng để sản xuất xì dầu tenpeh Nấm dùng để sản xuất hoocmon y học nhiều loại enzym Nhiều loại nấm sử dụng để sản xuất kháng sinh gồm kháng sinh β-lactam penicillin cephalosporin Những loại kháng sinh sử dụng rộng rãi việc chữa trị bệnh vi khuẩn, lao, phong cùi, giang mai nhiều bệnh khác đầu kỷ 20 tiếp tục đóng vai trị quan trọng hóa học trị liệu kháng khuẩn Từ lâu tính chất y dược nấm thu hút ý nhà nghiên cứu Trong số 14,000–15,000 nấm lớn giới, biết khoảng 400 lồi có tính chất y dược, dự kiến khoảng 1800 lồi có tiềm tính chất y dược Đa số loài thuộc họ Xylariaceae (Daldinia concentrica, Xylaria grammica, Xylaria plebeja, Xylaria polymorpha, Xylaria ianthino-velutina ) loài hoại sinh gây mục gỗ Một số lồi thuộc họ Xylariaceae sử dụng cơng nghiệp dược phẩm (Daldinia concentrica, Xylaria polymorpha ) [29] Nhiều loài thuộc họ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Xylariaceae (Daldinia concentrica, Xylaria polymorpha, Hypoxylon fragiforme ) có khả tổng hợp chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học mạnh [80] Các dịch chiết thơ từ số loài thuộc họ Xylariaceae (Daldinia sp., Hypoxylon sp., Nodulisporium sp ) có hoạt tính kháng khuẩn [29][30] Chính chúng tơi chọn đề tài: “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất cytochalasan từ nấm Daldinia concentrica Việt Nam” từ góp phần xác định thành phần hóa học hợp chất tìm nguồn ngun liệu cho ngành hóa dược, hương liệu, mỹ phẩm Mục đích nghiên cứu Xác định thành phần loài đánh giá đa dạng sinh học, đặc điểm sinh học, thành phần hóa học nấm Daldinia concentrica Việt Nam Xác định cấu trúc, tính chất, hoạt tính sinh học hợp chất cytochalasan nấm Daldinia concentrica Việt Nam Nhiệm vụ nghiên cứu Chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất cytochalasan từ nấm Daldinia Concentrica Sử dụng phương pháp sắc ký kết tinh phân đoạn để phân lập hợp chất Sử dụng phương pháp phổ để xác định cấu trúc hợp chất thu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu dịch chiết cytochalasan nấm - Phạm vi nghiên cứu: Loài nấm Daldinia Concentrica Việt Nam Phƣơng pháp nghiên cứu 5.1 Phƣơng pháp lấy mẫu Mẫu nấm thu hái vào thời điểm thích hợp năm Mẫu tươi sau lấy rửa sạch, để nơi thống mát sấy khơ 400C Việc xử lý tiếp mẫu phương pháp chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất dùng cho nghiên cứu nêu phần thực nghiệm 5.2 Phƣơng pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân lập hợp chất Để phân tích phân tách phân lập hợp chất, sử dụng phương pháp sắc ký phương pháp kết tinh phân đoạn 5.3 Phƣơng pháp khảo sát cấu trúc hợp chất Cấu trúc hợp chất khảo sát nhờ kết hợp phương pháp phổ Những đóng góp - Đây luận văn nghiên cứu hợp chất cytochalasan từ nấm Daldinia Concentrica Việt Nam Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 10 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.28 Phổ HSQC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 61 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.29 Phổ HSQC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 62 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.30 Phổ HSQC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 63 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.31 Phổ HMBC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 64 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.32 Phổ HMBC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 65 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.33 Phổ HMBC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 66 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.34 Phổ HMBC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 67 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.35 Phổ HMBC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 68 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.36 Phổ HMBC hợp chất B Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 69 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an C KẾT LUẬN Nghiên cứu thành phần hoá học nấm Daldinia concentrica Nghệ An, thu số kết sau: - Mẫu phần từ vỏ nấm chiết metanol Dịch chiết cất thu hồi dung môi, sau chiết với hexan, etyl axetat, butanol thu dịch chiết tương ứng - Phân lập hợp chất từ cao etyl axetat việc sử dụng phương pháp sắc ký silicagel kết tinh phân đoạn thu chất A B - Sử dụng phương pháp phổ đại: phổ khối lượng (EI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC để xác định cấu trúc hợp chất tách Từ kết phổ với tài liệu tham khảo cho phép khẳng định: Chất A axit 3α-hydroxy-lup-20(29)-en-23,28-dioic Chất B [11]-Cytochalasan-6(12),13-dien-1,21-dion-7,18,19-trihydroxy16,18-dimethyl-10-phenyl (7S*, 13E, 16S*, 18S*, 19R*) Đây hai hợp chất phân lập từ nấm Daldinia concentrica Việt Nam Hợp chất B có tên gọi cytochalasin B Hợp chất Buchanan M cộng phân lập (năm 1995) từ loài Daldinia [20] Có hoạt tính ức chế tế bào ung thư [48] phát triển ký sinh trùng, ức chế tiết tuyến giáp giải phóng hoocmon tăng trưởng Nó ức chế vận chuyển glucozơ kết tập tiểu huyết cầu Chính vậy, cytochalasin dùng điều hòa sinh trưởng thực vật điều hòa trình tổng hợp protein [20] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 70 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Đỗ Đức Quế, Dương Minh Lam (2012), “Bổ sung ba loài nấm túi họ Xylariaceae cho khu hệ nấm Việt Nam”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, số 29 (2): 38-43 Đỗ Đức Quế, Dương Minh Lam, Trần Huyền Trang, 2011 Hai loài nấm túi Hypoxylon hypomiltum H vinosopurpureum ghi nhận Việt Nam, Báo cáo Khoa học Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Hội nghị Khoa học toàn quốc lần thứ tư, Hà Nội, 21/12/2011, NXB Nông nghiệp, Hà Nội: 299-303 Lê Cẩm Tú, Phan Văn Lợi, Bùi Thị Thu Hiền, Đỗ Đức Quế, Dương Minh Lam, Đặng Ngọc Quang (2013), “Nghiên cứu hoạt chất kháng tế bào ung thư từ hai lồi nấm họ Xylariaceae Việt Nam”, Tạp chí Hóa học, 51 (2C): 999-1002 Mai Thị Hằng, Nguyễn Văn Diễn (2005), Bước đầu tìm hiểu thành phần lồi nấm túi (Ascomycetes) hoại sinh phần chết dừa nước (Nypa fruiticans Wurmb) rừng ngập mặn Cần Giờ, Việt Nam, Tạp chí Sinh học, tập 27 số 2, 49-56 Ngơ Anh, Trần Thị Bích Thủy (2011), “Nghiên cứu khu hệ nấm lớn huyện Xuyên Mộc, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu”, Báo cáo khoa học Sinh thái tài nguyên sinh vât Hội nghị khoa học lần thứ tư, 37-43 Trịnh Tam Kiệt, 2012 Nấm lớn Việt Nam, NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ, Tập Trịnh Tam Kiệt (1996), “Danh mục nấm lớn Việt Nam”, NXB Nông Nghiệp Trịnh Tam Kiệt, Trịnh Tam Bảo (2011), “Đa dạng nấm lớn Việt Nam giá trị tài nguyên chúng”, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc lần thứ hệ thống Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam, NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ, 97-104 Trịnh Tam Kiệt, Đặng Vũ Thị Thanh, Hà Minh Trung (2001), “Danh mục loài thực vật Việt Nam” NXB nông Nghiệp, 66-103 Tài liệu tiếng anh 10 Adam G., M Lischewski, H V Phiet, A Preiss, J Schmidt, Tran Van Sung (1982) Phytochemistry, Vol 21, P 1388 11 A Cimmino, A Andolfi, A Berestetskiy and A Evidente, J Agric (2008) Food Chem Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 71 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 12 A Evidente, A Andolfi, M Vurro, M C Zonno and A Motta, J Nat (2003) Prod 13 A Hoeltzel, D G Schmid, G J Nicholson, P Krastel, A Zeeck, K Gebhardt, H P Fiedler and G Jung, (2004) J Antibiot 14 A Makioka, M Kumagai, S Kobayashi and T Takeuchi, (2004) Parasitol Res 15 A Numata, C Takahashi, Y Ito, K Minoura, T Yamada, C Matsuda and K Nomoto, (1996) J Chem Soc., Perkin Trans 16 A Virag and A J Griffiths, (2004) Fungal Genet Biol 17 18 B Andersen, J Smedsgaard and J C Frisvad, J Agric (2004) Food Chem Boddy L., Gibbon O M., Grundy M A (1985) Ecology of Daldinia concentrica: Effect of abiotic variables on mycelial extension and interspecific interactions Transactions of the British Mycological Society 19 Bolton, J (1789) An history' of funguses growing about Halifax Halifax and Huddersfield 20 Buchanan M., Toshihiro Hashimoto, Yoshinori Asakawa (1995) Five 10phenyl-[11]-cytochalasans from a Daldinia fungal species 21 Cannon, P F., (1985), “The identity of the genus Spirogramma”, Syst Ascomycetum 22 Cartwright, K StG & Findlay, W P K (1950) Decay of timber and its prevention London, H.M.S.O Crivelli, P Petrini, L., Petrini, & Samuels, G.J (1981) A list of Daldini’s fungus taxa deposited at the muse0 Cantonale di Storia naturale in Lugano, TI (Switzerland) 24 D C Aldridge, J J Armstrong, R N Speake and W B Turner, (1967) Chem 23 Commun (London) 25 D Cunningham, D Schafer, S W Tanenbaum and M Flashner, (1979) J Bacteriol 26 D Vesely, D Vesela and R Jelinek, (1995) Mycopathologia 27 D W Goddette and C Frieden, (1986) J Biol Chem 28 E M Bonder and M S Mooseker, (1986) J Cell Biol 29 FAO, (2004) Wild edible fungi-A global overview of their use and importain to people, Rome 30 Fernanda Pinheiro de Carvalho Ribeiro, Fernanda Carolina Sousa Fonseca, Isabella Alves Reis, Isabella Santos Araújo, Hélio Mitoshi Kamida, Alexsandro Branco & Ana Paula Trovatti Uetanabaro, (2012) Xylariaceae Endophytic Fungi Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 72 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Metabolites Against Salmonella, State University of Feira de Santama & State University of Santa Cruz Brazil 31 Geeta Subali & B M Johri, (2005) The Fungi, Alpha Science International Ltd Harows U.K 32 G F Smith, M A C Ridler and J A Faunch, (1967) Nature 33 G S Shephard, (2008) Chem Soc Rev 34 Hawksworth D L., Kirk P M., Sutton B C., Pegler D M (1995) Ainsworth & Bisby’s dictionary of the fungi 8th edition CAB International, Wallingford 35 H Jayasuriya, K B Herath, J G Ondeyka, J D Polishook, G F Bills, A W Dombrowski, M S Springer, S Siciliano, L Malkowitz, M Sanchez, Z Q Guan, S Tiwari, D W Stevenson, R P Borris and S B Singh, J Nat (2004) Prod 36 H Minato, T Katayama, M Matsumoto, K Katagiri, S Matsuura, N Sunagawa, K Hori, M Harada and M Takeuchi, (1973) Chem Pharm Bull 37 H Ohmori, S Toyama and S Toyama, (1992) J Cell Biol 38 H Oikawa, Y Murakami and A Ichihara, (1991) Tetrahedron Lett 39 I Foissner and G O Wasteneys, (2007) Plant Cell Physiol 40 41 42 J A Cooper, (1987) J Cell Biol J G Schofield, (1971) Nature New Biol Johannesson, K H., Lyons, W B., Graham, E Y., Welch, K A., (2000) Oxyanion concentrations in Eastern Sierra Nevada Rivers - Boron, molybdenum, vanadium, and tungsten Aquat Geochem 43 J Ondeyka, O D Hensens, D Zink, R Ball, R B Lingham, G Bills, A Dombrowski and M Goetz, (1992) J Antibiot 44 J S Allingham, V A Klenchin and I Rayment, (2006) Cell Mol Life Sci 45 Ju, Y M., Rogers, J D and San Martín F (1997), “A revision of the genus Daldinia”, Mycotaxon 46 Ju YM, Rogers JD (1996) A revision of the genus Hypoxylon [Mycologia Memoir no 20] APS Press, St Paul, MN 47 Kirk, P.M., Cannon, P.F., Minter, D.W & Stalpers, J.A (Eds) (2008) Ainsworth & Bisby’s Dictionary of the Fungi 10th Edition xv + 655 pp Wallingford: CAB International 48 Kirstin Scherlach, Daniela Boettger, Nicole Remme and Christian Hertweck (2010) The chemistry and biology of cytochalasans 49 K A Alvi, B Nair, H Pu, R Ursino, C Gallo and U Mocek, (1997) J Org Chem 50 K Ohtsubo, M Saito, S Sekita, K Yoshihira and S Natori, (1978) Jpn J Exp Med Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 73 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 51 Laessøe T., (1994), “Index Ascomycetum Xylariaceae”, Systema Ascomycetum 52 Möller A (1901) Phycomyceten und Ascomyceten Untersuchungen aus Brasilien G Fischer, Jena, Germany, pp 53 M Binder and C Tamm, (1973) Angew Chem., Int Ed Engl 54 M Binder, C Tamm, W B Turner and H Minato, (1973) J Chem Soc., Perkin Trans 55 Nilsson T., Daniel G., Kirk T K & Obst J R (1989) Chemistry and microscopy of wood decay by some higher ascomycetes Holzforschung 56 57 N Moebius and C Hertweck, (2009) Curr Opin Plant Biol Panisset T (1929) Daldinia concentrica attacking the wood of Fraxinus excelsior Annals of Applied Biology 58 Pereira, R C., Cavalcanti, D N & Teixeira, V L., (2000) Effects of secondary metabolites from the tropical Brazilian brown alga Dictyota menstrualis on the amphipod Parhyale hawaiensis Mar Ecol Prog Ser 59 P Sampath and T D Pollard, (1991) Biochemistry 60 P M Scott, J Harwig, Y K Chen and B P C Kennedy, (1975) J Gen Microbiol 61 Quang D N, Hashimoto T., Tanaka M., Baumgartner M., Stadler M., Asakawa Y (2002) Chemical constituents of the ascomycete Daldinia concentrica Journal of Natural Products 62 Rogers J D (1979) The Xylariaceae: systematic, biological and evolutionary aspects Mycologia 63 R Liu, Z Lin, T Zhu, Y Fang, Q Gu and W Zhu, (2008) J Nat Prod 64 R W Hungate, J L Chen, K E Starbuck, S A Macaluso and R S Rubino, (1996) Tetrahedron Lett 65 Saccardo, P A., (1882), “Sylloge fungorum omnium hucusque cognitorum I”, Patavii (Typis Seminarii) 66 Scopoli JA (1772) Flora carniolica Vol 2(2) J P Krauss, Vienna 67 Schaeffer JC (1774) Fungorum qui in Bavaria et Palatinatu circa Ratisbonam nascuntur Icones 68 69 S B Carter, (1967) Nature S Sekita, K Yoshihira, S Natori, S Udagawa, F Sakabe, H Kurata and M Umeda, (1982) Chem Pharm Bull 70 S Rochfort, J Ford, S Ovenden, S S Wan, S George, H Wildman, R M Tait, B Meurer-Grimes, S Cox, J Coates and D Rhodes, (2005) J Antibiot 71 S Sekita, K Yoshihira, S Natori and H Kuwano, (1982) Chem Pharm Bull Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 74 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn