Nguyễn quốc hoài nghiên cứu bào chế pellet che vị chứa nano andrographolid và nano betaglucan khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN QUỐC HOÀI NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ PELLET CHE VỊ CHỨA NANO ANDROGRAPHOLID VÀ NANO BETAGLUCAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN QUỐC HOÀI Mã sinh viên: 1801252 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ PELLET CHE VỊ CHỨA NANO ANDROGRAPHOLID VÀ NANO BETAGLUCAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thạch Tùng ThS Cao Công Khánh Nơi thực hiện: Bộ môn Bào chế Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Nguyễn Thạch Tùng ThS Cao Cơng Khánh ln tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ, trang bị cho em kiến thức kĩ cần thiết suốt trình thực khoá luận Em xin gửi lời cảm ơn đến tất thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Bào chế, Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia anh chị cơng tác Viện Kiểm nghiệm an tồn vệ sinh thực phẩm Quốc gia quan tâm tạo điều kiện để em thực hoàn thành khoá luận Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban Giám hiệu thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội truyền đạt cho em nhiều kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường Em xin chân thành cảm ơn bạn tổ 12 M1K73, anh chị, bạn em nhóm nghiên cứu thầy Thạch Tùng, đặc biệt anh Nguyễn Hữu Mạnh, chị Lê Thu Hằng, bạn Vũ Mai Linh, bạn Đặng Thị Huế, bạn Dương Thế Khang, bạn Đỗ Thu Hà, bạn Phan Thị Phương Mai, em Nguyễn Thị Khánh Ly em Phạm An Khánh ln đồng hành em q trình thực đề tài Em cảm thấy vô may mắn ln có gia đình bạn bè quan tâm, ủng hộ em suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 05 tháng 06 năm 2023 Sinh viên Nguyễn Quốc Hoài MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan andrographolid 1.1.1 Nguồn gốc cấu trúc hoá học 1.1.2 Tính chất lý hố 1.1.3 Tác dụng dược lý đặc điểm hấp thu andrographolid 1.1.4 Một số nghiên cứu cải thiện sinh khả dụng andrographolid 1.2 Tổng quan betaglucan 1.2.1 Nguồn gốc cấu trúc hoá học 1.2.2 Tính chất lý hố 1.2.3 Tác dụng dược lý đặc điểm hấp thu betaglucan 1.2.4 Ứng dụng betaglucan bao che vị bảo vệ hoạt chất 1.3 Phương pháp nghiền bi bào chế tiểu phân nano 1.4 Các phương pháp hoá rắn hệ hỗn dịch nano 1.5 Mơ hình viêm màng phổi chuột carrageenan đánh giá tác dụng chống viêm thuốc .10 1.5.1 Cơ chế viêm mơ hình viêm màng phổi chuột carrageenan 11 1.5.2 Các thơng số đánh giá mơ hình viêm màng phổi chuột carrageenan 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên, vật liệu thiết bị 13 2.1.1 Nguyên, vật liệu 13 2.1.2 Thiết bị 13 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố lên trình bào chế nano ADG nano betaglucan phương pháp nghiền bi 14 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố lên q trình hố rắn nano ADG nano betaglucan phương pháp bồi dần 14 2.2.3 Đánh giá số đặc tính in vitro in vivo hệ nano ADG nano betaglucan .14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp bào chế 14 2.3.2 Phương pháp đánh giá 15 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 21 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 Phát triển phương pháp định lượng andrographolid HPLC 22 3.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng andrographolid in vitro HPLC 22 3.1.2 Phát triển phương pháp định lượng andrographolid huyết tương HPLC .23 3.2 Tiếp tục xây dựng cơng thức quy trình bào chế tiểu phân nano andrographolid 25 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ cao chất ổn định 26 3.2.2 Ảnh hưởng số yếu tố thuộc quy trình nghiền bi 26 3.3 Bồi dần nano andrographolid lên nhân trơ 28 3.3.1 Tối ưu hố cơng thức dịch bồi 28 3.3.2 Đánh giá ảnh hưởng loại nhân mức nạp hoạt chất 31 3.3.3 Sơ đánh giá sinh khả dụng pellet mang nano ADG 33 3.3.4 Sơ đánh giá tác dụng chống viêm nano ADG .34 3.4 Tiếp tục xây dựng cơng thức quy trình bào chế tiểu phân nano betaglucan 35 3.4.1 Ảnh hưởng nồng độ betaglucan chất ổn định 36 3.4.2 Ảnh hưởng số yếu tố thuộc quy trình nghiền bi 37 3.5 Bồi dần nano betaglucan lên pellet mang nano andrographolid 38 3.5.1 Đánh giá độ đắng nguyên liệu .38 3.5.2 Tối ưu hố cơng thức dịch bồi 39 3.5.3 Đánh giá số đặc tính pellet mang nano ADG nano betaglucan 40 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 Kết luận .44 4.2 Kiến nghị .44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Ý nghĩa ADG Andrographolid AUC0-∞ Diện tích đường cong biểu diễn nồng độ-thời gian từ thời điểm đến ∞ Cmax Nồng độ ADG cực đại huyết tương DĐVN V Dược điển Việt Nam V DMSO Dimethyl sulfoxid DSC Phương pháp quét nhiệt lượng vi sai GP Giải phóng HD nano Hỗn dịch nano HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao kl/tt Khối lượng/Thể tích KLPT Khối lượng phân tử KLTN Khoá luận tốt nghiệp KTTP Kích thước tiểu phân KTTPTB Kích thước tiểu phân trung bình MCC Cellulose vi tinh thể Na-CMC Natri carboxymethylcellulose P-gp P-glycoprotein PDI Hệ số đa phân tán PL Phụ lục SEM Kính hiển vi điện tử quét TCCS Tiêu chuẩn sở TCNSX Tiêu chuẩn nhà sản xuất Tmax Thời gian để ADG đạt nồng độ cực đại huyết tương tt/tt Thể tích/Thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số nghiên cứu cải thiện sinh khả dụng andrographolid Bảng 2.1 Các hoá chất sử dụng nghiên cứu .13 Bảng 2.2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 13 Bảng 2.3 Chương trình dung mơi phương pháp HPLC định lượng ADG huyết tương thỏ 19 Bảng 3.1 Độ lặp lại độ ổn định hệ thống phương pháp phân tích ADG in vitro 23 Bảng 3.2 Kết khảo sát dung môi chiết ADG từ huyết tương thỏ 24 Bảng 3.3 Độ phù hợp hệ thống, độ lặp lại độ thu hồi phương pháp phân tích ADG huyết tương 25 Bảng 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ cao chất ổn định tới đặc tính tiểu phân nano ADG .26 Bảng 3.5 KTTPTB PDI ADG sau tái phân tán từ màng phim HPMC Copovidon .28 Bảng 3.6 KTTPTB PDI ADG sau tái phân tán từ màng phim HPMC nồng độ khác 30 Bảng 3.7 KTTPTB PDI ADG sau tái phân tán từ pellet sau bồi với loại nhân mức nạp khác 31 Bảng 3.8 Thông số dược động học ADG đánh giá mơ hình thỏ 33 Bảng 3.9 Kết thử độ đắng nguyên liệu 38 Bảng 3.10 KTTPTB PDI betaglucan sau trung hoà tái phân tán từ màng phim HPMC Copovidon 39 Bảng 3.11 Khả che vị in vitro màng bao betaglucan kết hợp với HPMC Copovidon .40 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc hố học ADG Hình 1.2 Cấu trúc hố học β-(1,3-1,6)-D-glucan Hình 1.3 Ngun tắc hố rắn hỗn dịch nano phương pháp bồi dần [100] .10 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ ADG 22 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tỷ lệ diện tích pic nồng độ ADG huyết tương thỏ .24 Hình 3.3 Ảnh hưởng số yếu tố quy trình tới KTTPTB PDI tiểu phân nano ADG: (a) ảnh hưởng tốc độ nghiền, (b) ảnh hưởng thời gian nghiền, (c) ảnh hưởng khối lượng bi 27 Hình 3.4 Khả giải phóng ADG từ màng phim HPMC Copovidon .29 Hình 3.5 Khả giải phóng ADG từ màng phim HPMC nồng độ khác 30 Hình 3.6 Khả giải phóng ADG từ pellet sau bồi nano ADG với loại nhân mức nạp khác 32 Hình 3.7 Nồng độ ADG huyết tương thỏ mẫu nguyên liệu pellet tối ưu 33 Hình 3.8 Kết định lượng (a) bạch cầu tổng (b) công thức bạch cầu lô chuột 34 Hình 3.9 Kết định lượng hoạt độ enzym MPO lơ chuột 35 Hình 3.10 Cơ chế tác động tác nhân thuỷ phân tháo xoắn [2] .36 Hình 3.11 Ảnh hưởng nồng độ chất ổn định betaglucan tới KTTPTB PDI tiểu phân nano betaglucan 36 Hình 3.12 Ảnh hưởng số yếu tố quy trình tới KTTPTB PDI tiểu phân nano betaglucan: (a) ảnh hưởng tốc độ nghiền, (b) ảnh hưởng thời gian nghiền, (c) ảnh hưởng khối lượng bi .37 Hình 3.13 Khả giải phóng ADG từ pellet mang nano ADG nano betaglucan 41 Hình 3.14 Hình ảnh chụp SEM mặt cắt pellet mang nano ADG nano betaglucan 42 Hình 3.15 Kết quét phổ DSC 43 ĐẶT VẤN ĐỀ Andrographolid (ADG) thành phần có hoạt tính sinh học xuyên tâm liên (Andrographis paniculata), sở hữu nhiều tác dụng sinh học khả chống viêm kích thích miễn dịch mạnh mẽ [114] Tuy nhiên, việc sử dụng ADG đường uống hạn chế ADG gặp vấn đề độ tan, độ hoà tan, khả thấm, dẫn tới sinh khả dụng tương đối thấp [101] Ngồi ra, ADG có độ đắng cao, gây ảnh hưởng đến tuân thủ bệnh nhân, đặc biệt với đối tượng trẻ em người già [114] Betaglucan polysaccharid có thành tế bào nấm men, thể tác dụng chống viêm, kích thích miễn dịch hệ thống chỗ [14, 77] Tuy nhiên, tiểu phân betaglucan cần có kích thước phù hợp để tế bào M mảng Peyer’s bắt giữ hiệu khởi động phản ứng điều hoà hệ miễn dịch, thể tác dụng dược lý thành phần [33] Bên cạnh đó, gần betaglucan quan tâm nhiều với vai trò vật liệu bao sinh học sử dụng cho mục đích bao gói bảo vệ hoạt chất khỏi tác động bất lợi môi trường, kiểm sốt giải phóng, che mùi vị khó chịu dược chất [46, 72, 104] KLTN DS Nguyễn Hữu Mạnh ứng dụng thành công phương pháp nghiền bi để bào chế tiểu phân nano ADG betaglucan để cải thiện độ tan, tốc độ hoà tan ADG khả hấp thu cho hai chất, sau hố rắn phối hợp hai hệ tiểu phân nano tá dược hấp phụ, tạo tiền đề cho việc đánh giá tác dụng hiệp đồng hệ miễn dịch hai hệ tiểu phân nano [2] Tuy nhiên, phương pháp hấp phụ sử dụng nghiên cứu có thời gian xử lý tương đối dài, hạt tạo có độ trơn chảy tỷ trọng thấp, chưa giải vấn đề độ đắng ADG Phương pháp bồi dần khắc phục nhược điểm phương pháp hấp phụ nói trên, có thời gian xử lý ngắn hơn, hạt tạo thành cho khả trơn chảy, chịu nén tốt hơn, cách đưa tiểu phân nano ADG lên nhân trơ, sau bồi nano betaglucan bên ngồi, pellet thu có khả che vị đắng nano ADG (do betaglucan không tan nên đóng vai trị hàng rào ngăn cản phân tử ADG tiếp xúc với thụ cảm thể vị đắng lưỡi, mặt khác, việc làm giảm kích thước betaglucan làm tăng mạnh diện tích tiếp xúc tiểu phân betaglucan, từ cho khả che phủ hiệu hơn) Bên cạnh đó, KLTN DS Nguyễn Hữu Mạnh chưa thực đánh giá in vivo để chứng minh tác dụng việc nano hố ADG betaglucan Trên sở đó, chúng tơi tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu bào chế pellet che vị chứa nano andrographolid nano betaglucan” với mục tiêu: Phát triển phương pháp nghiền bi bồi dần để bào chế pellet che vị mang nano andrographolid nano betaglucan Đánh giá số đặc tính in vitro in vivo hệ tiểu phân nano andrographolid nano betaglucan CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan andrographolid 1.1.1 Nguồn gốc cấu trúc hố học ADG diterpen lacton có hoạt tính sinh học xuyên tâm liên (Andrographis paniculata Wall ex Nees, thuộc họ Ơ rơ Acanthaceae), bên cạnh diterpen lacton khác neoandrographolid, 14-deoxyandrographolid, 14-deoxy-11,12didehydroandrographolid [52, 114] Cấu trúc phân tử ADG thể Hình 1.1 Hình 1.1 Cấu trúc hố học ADG Tên khoa học: (3E,4S)-3-[2-[(1R,4aS,5R,6R,8aS)-6-hydroxy-5-(hydroxymethyl)5,8a-dimethyl-2-methyliden-3,4,4a,6,7,8-hexahydro-1H-naphthalen-1-yl]ethyliden]-4hydroxyoxolan-2-on Công thức phân tử: C20H30O5, khối lượng phân tử: 350,45 g/mol 1.1.2 Tính chất lý hố Cảm quan: bột kết tinh trắng tinh thể hình kim, không màu, không mùi, vị đắng [99] Độ tan: ADG tan ethanol sơi, tan aceton, methanol, ethanol, butan-1ol, tan CHCl3, khơng tan nước [25, 99] ADG nóng chảy 230-231°C [22] Độ ổn định: có cấu trúc ester nội phân tử, ADG dễ bị thuỷ phân, mở vòng đồng phân hoá dung dịch nước Ở nhiệt độ thấp, độ ổn định ADG tăng lên ADG ổn định môi trường kiềm, pH cao, ADG ổn định Ngồi ra, ADG bị thuỷ phân chậm điều kiện acid mạnh, cịn bền vững mơi trường trung tính acid yếu [99] 1.1.3 Tác dụng dược lý đặc điểm hấp thu andrographolid Xuyên tâm liên ADG ngày quan tâm nghiên cứu nhiều hơn, chứng minh có nhiều tác dụng dược lý bật ADG dẫn chất thể hoạt tính chống viêm mạnh nhiều mơ hình khác Các nghiên cứu gần cho thấy TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Ngọc Chiến (2019), Công nghệ nano ứng dụng sản xuất thuốc, Bộ môn Công nghiệp dược, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Hữu Mạnh (2022), Bước đầu ứng dụng phương pháp nghiền bi bào chế hệ nano andrographolid betaglucan, Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ, trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Ngơ Hồi Xuân (2021), Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano betaglucan ứng dụng làm chất mang curcumin, Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ, trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Tiếng Anh 10 11 12 13 Au - Kim Janice J., Au - Shajib Md Sharif, et al (2012), "Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD", JoVE, (60), pp e3678 Bai Junying, Ren Yikai, et al (2019), "Physiological functionalities and mechanisms of β-glucans", Trends in Food Science & Technology, 88, pp 57-66 Balap Aishwarya, Atre Bhagyashri, et al (2016), "Pharmacokinetic and pharmacodynamic herb–drug interaction of Andrographis paniculata (Nees) extract and andrographolide with etoricoxib after oral administration in rats", Journal of ethnopharmacology, 183, pp 9-17 Balap Aishwarya, Lohidasan Sathiyanarayanan, et al (2017), "Herb-drug interaction of Andrographis paniculata (Nees) extract and andrographolide on pharmacokinetic and pharmacodynamic of naproxen in rats", Journal of ethnopharmacology, 195, pp 214-221 Balap Aishwarya, Lohidasan Sathiyanarayanan, et al (2017), "Pharmacokinetic and pharmacodynamic interaction of andrographolide and standardized extract of Andrographis paniculata (Nees) with nabumetone in Wistar rats", Phytotherapy Research, 31(1), pp 75-80 Baldassano Sara, Accardi Giulia, et al (2017), "Beta-glucans and cancer: The influence of inflammation and gut peptide", European Journal of Medicinal Chemistry, 142, pp 486-492 Basa Shradhanjali, Muniyappan Thilekkumar, et al (2008), "Production and in vitro characterization of solid dosage form incorporating drug nanoparticles", Drug development and industrial pharmacy, 34(11), pp 1209-1218 Beirowski Jakob, Inghelbrecht Sabine, et al (2012), "Freeze-Drying of Nanosuspensions, Part 3: Investigation of Factors Compromising Storage Stability of Highly Concentrated Drug Nanosuspensions", Journal of Pharmaceutical Sciences, 101(1), pp 354-362 Beirowski Jakob, Inghelbrecht Sabine, et al (2011), "Freeze-Drying of Nanosuspensions, 1: Freezing Rate Versus Formulation Design as Critical Factors to Preserve the Original Particle Size Distribution", Journal of Pharmaceutical Sciences, 100(5), pp 1958-1968 Bhakay Anagha, Azad Mohammad, et al (2014), "Redispersible fast dissolving nanocomposite microparticles of poorly water-soluble drugs", International Journal of Pharmaceutics, 461(1-2), pp 367-379 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Bowman Shaun M., Free Stephen J (2006), "The structure and synthesis of the fungal cell wall", BioEssays, 28(8), pp 799-808 British Pharmacopoeia Commission (2022), British Pharmacopoeia 2022, pp VA377,378 Brown G D, Gordon S (2001), "Immune recognition A new receptor for betaglucans", Nature, 413(6581), pp 36-37 Brown Gordon D (2006), "Dectin-1: a signalling non-TLR pattern-recognition receptor", Nature Reviews Immunology, 6(1), pp 33-43 Brown Gordon D, Taylor Philip R, et al (2002), "Dectin-1 is a major beta-glucan receptor on macrophages", Journal of Experimental Medicine, 196(3), pp 407-412 Brown Gordon D., Gordon Siamon (2003), "Fungal β-Glucans and Mammalian Immunity", Immunity, 19(3), pp 311-315 Cal Krzysztof, Sollohub Krzysztof (2010), "Spray drying technique I: Hardware and process parameters", Journal of pharmaceutical sciences, 99(2), pp 575-586 Castro Elena De Marco, Calder Philip C., et al (2020), "β-1,3/1,6-Glucans and Immunity: State of the Art and Future Directions", Molecular Nutrition and Food Research, (1901071), pp 1-15 Cava M P., Chan W R., et al (1962), "The structure of andrographolide", Tetrahedron, 18, pp 397-403 Chellampillai Bothiraja, Pawar Atmaram Pandurang (2011), "Improved bioavailability of orally administered andrographolide from pH-sensitive nanoparticles", European journal of drug metabolism and pharmacokinetics, 35, pp 123-129 Chen Jiezhong, Seviour Robert (2007), "Medicinal importance of fungal β-(1→3), (1→6)-glucans", Mycological Research, 111(6), pp 635-652 Chen Meili, Xie Chunying, et al (2010), "Solubility of Andrographolide in Various Solvents from (288.2 to 323.2) K", Journal of Chemical & Engineering Data, 55(11), pp 5297-5298 Chien Chao-Feng, Wu Yu-Tse, et al (2010), "Herb–drug interaction of Andrographis paniculata extract and andrographolide on the pharmacokinetics of theophylline in rats", Chemico-biological interactions, 184(3), pp 458-465 Chin William Wei Lim, Parmentier Johannes, et al (2014), "A brief literature and patent review of nanosuspensions to a final drug product", Journal of Pharmaceutical Sciences, 103(10), pp 2980-2999 Colaỗo Mariana, Marques Ana P., et al (2020), "Safe-by-Design of Glucan Nanoparticles: Size Matters When Assessing the Immunotoxicity", Chemical Research in Toxicology, 33, pp 915-932 Cuzzocrea S., Crisafulli C., et al (2006), "Inhibition of glycogen synthase kinase‐ 3β attenuates the development of carrageenan‐induced lung injury in mice", British journal of pharmacology, 149(6), pp 687-702 De Smet Lieselotte, Saerens Lien, et al (2014), "Formulation of itraconazole nanococrystals and evaluation of their bioavailability in dogs", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 87(1), pp 107-113 Desai Manisha P., Labhasetwar Vinod, et al (1996), "Gastrointestinal uptake of biodegradable microparticles: effect of particle size", Pharmaceutical Research, 13(12), pp 1838-1845 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 Eerdenbrugh B Van, Vermant J, et al (2009), "A screening study of surface stabilization during the production of drug nanocrystals", Journal of Pharmaceutical Sciences, 98, pp 2091-2103 Ermak Thomas H., Giannasca Paul J (1998), "Microparticle targeting to M cells", Advanced Drug Delivery Reviews, 34, pp 261-283 Fröde Tânia Silvia, Medeiros Y S (2001), "Myeloperoxidase and adenosinedeaminase levels in the pleural fluid leakage induced by carrageenan in the mouse model of pleurisy", Mediators of Inflammation, 10, pp 236120 Fu Kaiqiang, Chen Hao, et al (2021), "Andrographolide attenuates inflammatory response induced by LPS via activating Nrf2 signaling pathway in bovine endometrial epithelial cells", Research in Veterinary Science, 134, pp 36-41 Guan Yanbin, Huang Jiangeng, et al (2011), "Effect of pluronic P123 and F127 block copolymer on P-glycoprotein transport and CYP3A metabolism", Archives of Pharmacal Research, 34(10), pp 1719-1728 Guo Bao-Jian, Liu Zhuyun, et al (2019), "Andrographolide derivative ameliorates dextran sulfate sodium-induced experimental colitis in mice", Biochemical Pharmacology, 163, pp 416-424 Guo Ligang, Kang Le, et al (2017), "A novel nanosuspension of andrographolide: Preparation, characterization and passive liver target evaluation in rats", European Journal of Pharmaceutical Sciences, 104, pp 13-22 He Wei, Lu Yi, et al (2013), "Formulating food protein-stabilized indomethacin nanosuspensions into pellets by fluid-bed coating technology: physical characterization, redispersibility, and dissolution", International journal of nanomedicine, 8, pp 3119 HuiLoh Zhi, Samantab Asim Kumar, et al (2015), "Overview of milling techniques for improving the solubility of poorly water-soluble drugs", Asian Journal of Pharmaceutical Sciences, 10(4), pp 255-274 Hwang Jangsun, Lee Kyungwoo, et al (2018), "Synthesis of Beta-glucan Nanoparticles for the Delivery of Single Strand DNA", Biotechnology and Bioprocess Engineering, 23, pp 144-149 Impellizzeri Daniela, Esposito Emanuela, et al (2011), "The effects of oleuropein aglycone, an olive oil compound, in a mouse model of carrageenan-induced pleurisy", Clinical Nutrition, 30(4), pp 533-540 Jiang Yunxia, Wang Fang, et al (2014), "Development of andrographolide loaded PLGA microspheres: Optimization, characterization and in vitro–in vivo correlation", International Journal of Pharmaceutics, 475(1), pp 475-484 Jing Mei, Wang Yuqiang, et al (2019), "Andrographolide Derivative AL-1 Ameliorates Dextran Sodium Sulfate-Induced Murine Colitis by Inhibiting NF-κB and MAPK Signaling Pathways", Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2019, pp 6138723 JRS Pharma, Performance of MCC Spheres and Sugar Spheres in a Multiparticulate Omeprazole Formulation 2018 Kasai Takahide, Eguchi Takahiro, et al (2000), "Application of acid-treated yeast cell wall (AYC) as a pharmaceutical additive: I AYC as a novel coating material", International Journal of Pharmaceutics, 204(1), pp 53-59 Kayaert Pieterjan, Anné Michaël, et al (2011), "Bead layering as a process to stabilize nanosuspensions: influence of drug hydrophobicity on nanocrystal 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 reagglomeration following in-vitro release from sugar beads", Journal of Pharmacy and Pharmacology, 63(11), pp 1446-1453 Kecka Cornelia M., Muller Rainer H (2006), "Drug nanocrystals of poorly soluble drugs produced by high pressure homogenisation", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 62, pp 3-16 Kesisoglou Filippos, Panmai Santipharp, et al (2007), "Nanosizing — Oral formulation development and biopharmaceutical evaluation", Advanced Drug Delivery Reviews, 59(7), pp 631-644 Kim Nami, Lertnimitphun Peeraphong, et al (2019), "Andrographolide inhibits inflammatory responses in LPS-stimulated macrophages and murine acute colitis through activating AMPK", Biochemical Pharmacology, 170, pp 113646 Kumar R Ajaya, Sridevi K., et al (2004), "Anticancer and immunostimulatory compounds from Andrographis paniculata", Journal of Ethnopharmacology, 92(2004), pp 291-295 Lee Meng Jen, Rao Yerra Koteswara, et al (2010), "Andrographolide and 14deoxy-11,12-didehydroandrographolide from Andrographis paniculata attenuate high glucose-induced fibrosis and apoptosis in murine renal mesangeal cell lines", J Ethnopharmacol, 132(2), pp 497-505 Lee Wonhwa, Yang Eun-Ju, et al (2013), "Anti-inflammatory Effects of Oleanolic Acid on LPS-Induced Inflammation In Vitro and In Vivo", Inflammation, 36(1), pp 94-102 Li Jingru, Wang Zengming, et al (2021), "Progress in the development of stabilization strategies for nanocrystal preparations", Drug Delivery, 8, pp 19-36 Lin Tsuey Pin, Chen Shih-Ying, et al (2008), "Inhibition of the epstein-barr virus lytic cycle by andrographolide", Biological and Pharmaceutical Bulletin, 31(11), pp 2018-2023 Liu Wan, Cheng Meng, et al (2022), "Multi-functional chitosan copolymer modified nanocrystals as oral andrographolide delivery systems for enhanced bioavailability and anti-inflammatory efficacy", Drug Delivery, 29(1), pp 34323442 Luchese Cristiane, Prigol Marina, et al (2012), "Diphenyl diselenide reduces inflammation in the mouse model of pleurisy induced by carrageenan: reduction of pro-inflammatory markers and reactive species levels", Inflammation Research, 61(10), pp 1117-1124 Luo Yanfei, Xu Lishuang, et al (2013), "Preparation, characterization, stability and in vitro-in vivo evaluation of pellet-layered Simvastatin nanosuspensions", Drug development and industrial pharmacy, 39(7), pp 936-946 Malamatari Maria, Taylor Kevin M.G., et al (2018), "Pharmaceutical nanocrystals: production by wet milling and applications", Drug Discovery Today, 2149, pp 114 Malik Zoya, Parveen Rabea, et al (2021), "Anticancer potential of andrographolide from Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees and its mechanisms of action", Journal of Ethnopharmacology, 272, pp 1-16 Manabe Noriyoshi, Yamaguchi Yoshiki (2021), "3D Structural Insights into βGlucans and Their Binding Proteins", International Journal of Pharmaceutics, 22(1578), pp 1-13 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 Medarevic D, Djuris J, et al (2018), "Optimization of formulation and process parameters for the production of carvedilol nanosuspension by wet media milling", International Journal of Pharmaceutics, 540, pp 150-161 Mo Li, Chen Yafei, et al (2017), "Anti-tumor effects of (1→3)-β-d-glucan from Saccharomyces cerevisiae in S180 tumor-bearing mice", International Journal of Biological Macromolecules, 95, pp 385-392 Möschwitzer Jan, Müller Rainer H (2006), "Spray coated pellets as carrier system for mucoadhesive drug nanocrystals", European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics, 62(3), pp 282-287 Möschwitzer Jan P, Müller Rainer H (2013), "Factors influencing the release kinetics of drug nanocrystal-loaded pellet formulations", Drug Development and Industrial Pharmacy, 39(5), pp 762-769 Nakach Mostafa, Authelin Jean-René, et al (2018), "Comparison of high pressure homogenization and stirred bead milling for the production of nano-crystalline suspensions", International Journal of Pharmaceutics, 547(1-2), pp 61-71 O’Hagan Derek T., Singh Manmohan (2003), "Microparticles as vaccine adjuvants and delivery systems", Expert Review of Vaccines, 2(2), pp 269-283 Panossian A., Hovhannisyan A., et al (2000), "Pharmacokinetic and oral bioavailability of andrographolide from Andrographis paniculata fixed combination Kan Jang in rats and human", Phytomedicine, 7(5), pp 351-364 Parmentier Johannes, Tan En Hui, et al (2017), "Downstream drug product processing of itraconazole nanosuspension: Factors influencing drug particle size and dissolution from nanosuspension-layered beads", International Journal of Pharmaceutics, 524(1), pp 443-453 Parvataneni Radhika, Rajendra Y.P., et al (2009), "Anti-inflammatory activity of chloroform extract ofAndrographis Paniculata nees stem", Research Journal of Biotechnology, 4(2), pp 35-38 Peltonen Leena (2018), "Design Space and QbD Approach for Production of Drug Nanocrystals by Wet Media Milling Techniques", Pharmaceutics, 10(3), pp 1-17 Peltzer Mercedes A., Salvay Andres G., et al (2017), "Use of edible films and coatings for functional foods developments: A review", Functional foods sources, health effects and future perspectives, pp 1-26 Puri Anju, Saxena Ragini, et al (1993), "Immunostimulant Agents from Andrographis paniculata", Journal of Natural Products, 56(7), pp 995-999 Rajagopal Sriram, kumar R Ajaya, et al (2003), "Andrographolide, a potential cancer therapeutic agent isolated from Andrographis paniculata", Journal of Experimental Therapeutics and Oncology, 3, pp 147-158 Reyes B A S, Bautista N D, et al (2006), "Anti-diabetic potentials of Momordica charantia and Andrographis paniculata and their effects on estrous cyclicity of alloxan-induced diabetic rats", Journal of Ethnopharmacology, 105(1-2), pp 196200 Rice Peter J, Adams Elizabeth L, et al (2005), "Oral delivery and gastrointestinal absorption of soluble glucans stimulate increased resistance to infectious challenge", Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 324(3), pp 1079-1086 Ruiz-Herrera José, Ortiz-Castellanos Lucila (2019), "Cell wall glucans of fungi A review", The Cell Surface, 5, pp 1-14 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 Saleh Tania Silvia Frưde, Calixto Jỗo Batista, et al (1996), "Anti-inflammatory effects of theophylline, cromolyn and salbutamol in a murine model of pleurisy", British Journal of Pharmacology, 118(3), pp 811-819 Schmidt Martin, Kusche Robert, et al (1998), "Irregular variations in the melting point of size-selected atomic clusters", Nature, 393(6682), pp 238-240 Scholz Patrik, M Keck Cornelia (2015), "Nanocrystals: from raw material to the final formulated oral dosage form-a review", Current pharmaceutical design, 21(29), pp 4217-4228 Sheeja K, Kuttan Girija (2006), "Protective effect of Andrographis paniculata and andrographolide on cyclophosphamide-induced urothelial toxicity", Integrative Cancer Therapies, 5(3), pp 244-251 Shi Guorong, Rao Liqun, et al (2007), "Yeast-cell-based microencapsulation of chlorogenic acid as a water-soluble antioxidant", Journal of Food Engineering, 80(4), pp 1060-1067 Shikov Alexander N., Pozharitskaya Olga N., et al (2009), "Nanodispersions of taxifolin: Impact of solid-state properties on dissolution behavior", International Journal of Pharmaceutics, 377(1), pp 148-152 Sievens-Figueroa Lucas, Bhakay Anagha, et al (2012), "Preparation and characterization of hydroxypropyl methyl cellulose films containing stable BCS Class II drug nanoparticles for pharmaceutical applications", International Journal of Pharmaceutics, 423(2), pp 496-508 Singha Prajjal, Roy Somenath, et al (2004), "Antimicrobial activity of Andrographis paniculata", Fitoterapia, 74(7), pp 692-694 Sletmoen Marit, Stokke Bjørn T (2008), "Higher Order Structure of (1,3)-β-DGlucans and Its Influence on Their Biological Activities and Complexation Abilities", Biopolymers, 89, pp 310-321 Stange Ulrike, Führling Christian, et al (2014), "Taste masking of naproxen sodium granules by fluid-bed coating", Pharmaceutical Development and Technology, 19(2), pp 137-147 Stone Bruce A (2009), "Chemistry, Biochemistry, and Biology of 1-3 Beta Glucans and Related Polysaccharides", Academic Press, US, pp 5-46 Suo Xu‐Bin, Zhang Han, et al (2007), "HPLC determination of andrographolide in rat whole blood: study on the pharmacokinetics of andrographolide incorporated in liposomes and tablets", Biomedical Chromatography, 21(7), pp 730-734 Syukri Yandi, Martien Ronny, et al (2018), "Novel Self-Nano Emulsifying Drug Delivery System (SNEDDS) of andrographolide isolated from Andrographis paniculata Nees: Characterization, in-vitro and in-vivo assessment", Journal of Drug Delivery Science and Technology, 47, pp 514-520 Taylor Philip R, Brown Gordon D, et al (2002), "The beta-glucan receptor, dectin1, is predominantly expressed on the surface of cells of the monocyte/macrophage and neutrophil lineages", The Journal of Immunology, 169(7), pp 3876-3882 Tewa-Tagne Patrice, Brianỗon Stéphanie, et al (2007), "Preparation of redispersible dry nanocapsules by means of spray-drying: Development and characterisation", European Journal of Pharmaceutical Sciences, 30(2), pp 124-135 Van Eerdenbrugh Bernard, Van den Mooter Guy, et al (2008), "Top-down production of drug nanocrystals: nanosuspension stabilization, miniaturization and 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 transformation into solid products", International journal of pharmaceutics, 364(1), pp 64-75 Volman Julia J., Ramakers Julian D., et al (2007), "Dietary modulation of immune function by β-glucans", Physiology & Behavior, 94, pp 276-284 Walters Robert H, Bhatnagar Bakul, et al (2014), "Next generation drying technologies for pharmaceutical applications", Journal of pharmaceutical sciences, 103(9), pp 2673-2695 Wang Puxiu, Luo Qing, et al (2012), "Improved dissolution rate and bioavailability of fenofibrate pellets prepared by wet-milled-drug layering", Drug Development and Industrial Pharmacy, 38(11), pp 1344-1353 Wong Siew Ying, Tan Michelle G K., et al (2016), "Andrographolide induces Nrf2 and heme oxygenase in astrocytes by activating p38 MAPK and ERK", Journal of Neuroinflammation, 13(251), pp 1-12 Xi Hanmi, Ren Jie, et al (2020), "The Effect of Inorganic Salt on Disintegration of Tablets with High Loading of Amorphous Solid Dispersion Containing Copovidone", Pharmaceutical Research, 37(4), pp 70 Yan Yu, Fang Lian-Hua, et al (2018), "Andrographolide", Natural Small Molecule Drugs from Plants, pp 357–362 Yao Qing, Tao Xiaoguang, et al (2014), "Improved oral bioavailability of core– shell structured beads by redispersion of the shell-forming nanoparticles: Preparation, characterization and in vivo studies", Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 113, pp 92-100 Ye LING, Wang TAO, et al (2011), "Poor Oral Bioavailability of a Promising Anticancer Agent Andrographolide is Due to Extensive Metabolism and Efflux by P-Glycoprotein", Journal of Pharmaceutical Sciences, 100(11), pp 5007-5017 Yen Ching Chi, Liang Yu-Kai, et al (2020), "Oral Bioavailability Enhancement and Anti-Fatigue Assessment of the Andrographolide Loaded Solid Dispersion", International Journal of Molecular Sciences, 21(2506), pp 1-18 Yen Ching-Chi, Chen Yi-Chen, et al (2018), "Nanoemulsion as a strategy for improving the oral bioavailability and anti-inflammatory activity of andrographolide", International journal of nanomedicine, 13, pp 669 Yuasa Hiroshi, Kaneshige Junichi, et al (2002), "Application of acid-treated yeast cell wall (AYC) as a pharmaceutical additive III AYC aqueous coating onto granules and film formation mechanism of AYC", International Journal of Pharmaceutics, 237(1), pp 15-22 Zhang Lulu, Bao Mei, et al (2020), "Effect of Andrographolide and Its Analogs on Bacterial Infection: A Review", Pharmacology, 105(3-4), pp 123-134 Zhang Xiao, Wu Hongwei, et al (2018), "Determination of Bitterness of Andrographis Herba Based on Electronic Tongue Technology and Discovery of the Key Compounds of Bitter Substances", Molecules, 23, pp 3362 Zhang Zaijun, Jiang Jie, et al (2009), "Hypoglycemic and beta cell protective effects of andrographolide analogue for diabetes treatment", Journal of Translational Medicine, 7(62), pp 1-13 Zhao Jingxiang, Yang Gengliang, et al (2002), "Determination of Andrographolide, Deoxyandrographolide and Neoandrographolide in the Chinese Herb Andrographis paniculata by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography", Phytochemical Analysis, 13, pp 222-227 109 110 111 112 113 114 Iruretagoyena M I., Sepúlveda S E., et al (2006), "Inhibition of nuclear factorkappa B enhances the capacity of immature dendritic cells to induce antigenspecific tolerance in experimental autoimmune encephalomyelitis", J Pharmacol Exp Ther, 318(1), pp 59-67 Iruretagoyena M I., Tobar J A., et al (2005), "Andrographolide interferes with T cell activation and reduces experimental autoimmune encephalomyelitis in the mouse", J Pharmacol Exp Ther, 312(1), pp 366-72 Kim J J., Shajib M S., et al (2012), "Investigating intestinal inflammation in DSSinduced model of IBD", J Vis Exp, (60), pp Salari R., Rajabi O., et al (2015), "Characterization of Encapsulated Berberine in Yeast Cells of Saccharomyces cerevisiae", Iran J Pharm Res, 14(4), pp 1247-56 Vinegar R., Truax J F., et al (1982), "Pathway of onset, development, and decay of carrageenan pleurisy in the rat", Fed Proc, 41(9), pp 2588-95 Zeng B., Wei A., et al (2022), "Andrographolide: A review of its pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and clinical trials and pharmaceutical researches", Phytother Res, 36(1), pp 336-364 PHỤ LỤC Phụ lục Pic sắc kí andrographolid Phụ lục Kết đo mẫu thiết bị Zetasizer ZS90 Phụ lục Hình ảnh kết đo mẫu thiết bị Zetasizer ZS90 Phụ lục Độ hoà tan andrographolid Phụ lục 5: Kết nồng độ ADG huyết tương mơ hình đánh giá sinh khả dụng đường uống thỏ Phụ lục Kết đánh giá tác dụng chống viêm ADG mơ hình viêm màng phổi chuột Phụ lục Pic sắc kí andrographolid PL-1.1 Pic sắc ký mẫu chuẩn ADG PL-1.2 Pic sắc ký mẫu thử cao xuyên tâm liên (a) (b) PL-1.3 Pic sắc ký (a) mẫu chuẩn ADG huyết tương (b) mẫu thử Phụ lục Kết đo mẫu thiết bị Zetasizer ZS90 PL-2.1 Ảnh hưởng tốc độ nghiền tới KTTPTB PDI nano ADG Tốc độ nghiền (rpm) 300 500 KTTP (nm) 475,4 ± 75,8 0,236 ± 0,104 PDI 252,4 ± 2,4 0,173 ± 0,019 PL-2.2 Ảnh hưởng thời gian nghiền tới KTTPTB PDI nano ADG Thời gian nghiền (giờ) 0,5 KTTP (nm) 383,5 ± 4,5 302,5 ± 10,7 292,1 ± 9,8 257,3 ± 1,3 PDI 0,194 ± 0,022 0,157 ± 0,017 0,159 ± 0,016 0,155 ± 0,021 PL-2.3 Ảnh hưởng khối lượng bi tới KTTPTB PDI nano ADG Khối lượng bi (g) 100 200 KTTPTB (nm) 476,7 ± 18,9 252,4 ± 2,4 PDI 0,143 ± 0,062 0,173 ± 0,019 PL-2.4 Ảnh hưởng nồng độ betaglucan PVP K30 tới KTTPTB PDI nano betaglucan Nồng độ betaglucan PVP K30 (%) 0,25 2,5 KTTPTB (nm) 364,8 ± 40,3 493,2 ± 0,473 585,7 ± 87,6 PDI 0,402 ± 0,063 0,399 ± 0,021 0,523 ± 0,060 PL-2.5 Ảnh hưởng tốc độ nghiền tới KTTPTB PDI nano betaglucan Tốc độ nghiền (rpm) 300 500 KTTP (nm) 618,9 ± 66,3 493,2 ± 0,5 PDI 0,463 ± 0,101 0,399 ± 0,021 PL-2.6 Ảnh hưởng thời gian nghiền tới KTTPTB PDI nano betaglucan Thời gian nghiền (giờ) 0,5 KTTP (nm) 649,2 ± 88,0 566,8 ± 51,5 476,3 ± 21,7 472,0 ± 40,8 PDI 0,417 ± 0,111 0,412 ± 0,073 0,265 ± 0,124 0,394 ± 0,103 PL-2.7 Ảnh hưởng khối lượng bi tới KTTPTB PDI nano betaglucan Khối lượng bi (g) 100 200 KTTPTB (nm) 667,6 ± 124,3 493,2 ± 0,5 PDI 0,374 ± 0,058 0,399 ± 0,021 Phụ lục Hình ảnh kết đo mẫu thiết bị Zetasizer ZS90 PL-3.1 Hình ảnh kết KTTPTB PDI mẫu nano ADG tối ưu PL-3.3 Hình ảnh kết KTTPTB PDI mẫu nano betaglucan tối ưu Phụ lục Độ hoà tan andrographolid PL-4.1 Độ hoà tan ADG thử nghiệm sàng lọc polymer tạo phim Thời gian (phút) % Giải phóng Nguyên liệu Hỗn dịch nano ADG Copovidon VA64 4% HPMC E6 4% HPMC E6 1% HPMC E6 8% TB SD TB SD TB SD TB SD TB SD TB SD 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 8,30 2,25 88,62 2,06 29,95 0,02 71,39 9,11 6,83 0,02 83,27 10,64 10 11,16 3,09 90,61 2,71 37,11 1,13 81,92 5,00 9,38 0,84 81,49 1,07 15 12,91 3,19 92,90 0,66 46,87 1,80 85,68 6,57 10,38 0,54 84,52 4,67 30 16,98 4,07 92,02 1,30 55,99 1,06 91,58 5,44 15,49 0,64 89,89 3,67 45 21,36 4,10 90,84 0,32 63,21 3,85 91,17 2,23 20,07 1,30 92,14 4,07 60 24,11 3,17 91,70 0,77 64,71 0,31 92,07 3,20 23,09 0,76 95,38 2,50 PL-4.2 Độ hoà tan ADG từ pellet sau bồi nano ADG Thời gian (phút) % Giải phóng MCC nạp 10% MCC nạp 20% Suglet nạp 10% Suglet nạp 20% TB SD TB SD TB SD TB SD 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 67,18 7,48 65,23 1,08 75,10 5,89 60,67 5,32 10 71,95 6,03 73,79 3,21 84,43 2,16 77,79 7,79 15 73,02 5,68 79,34 9,37 85,58 0,02 84,09 13,21 30 89,59 11,61 93,34 5,77 94,96 5,59 95,47 1,63 45 94,53 2,11 97,40 4,57 96,25 4,12 99,57 0,04 60 95,81 0,08 98,07 4,82 95,28 2,02 100,66 0,39 PL-4.3 Độ hoà tan ADG từ pellet mang nano ADG sau bồi nano betaglucan Thời gian (phút) % Giải phóng SD 0,00 0,00 18,20 2,96 10 73,80 5,32 15 82,12 0,73 30 91,51 2,50 45 94,29 0,80 60 94,42 0,98 Phụ lục Kết nồng độ ADG huyết tương mơ hình đánh giá sinh khả dụng đường uống thỏ (n = 3) Nồng độ ADG huyết tương (ng/ml) Thời điểm (phút) Nguyên liệu Pellet mang nano ADG TB SD TB SD 0,0000 0,0000 46,2932 60,2857 15 0,0000 0,0000 499,7468 443,7194 30 23,5600 20,8330 882,0076 729,3093 45 37,7556 11,6358 636,9297 281,4164 60 51,0849 19,0332 537,6650 195,6142 90 65,0857 28,9654 310,7125 65,5706 120 71,5532 33,4671 304,4465 118,4529 180 131,1336 39,8834 270,4777 61,9698 240 115,2056 40,7102 66,7290 24,4149 360 78,9713 41,3300 55,3514 33,4121 480 40,7869 16,1347 26,3853 5,6770 1440 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Phụ lục Kết đánh giá tác dụng chống viêm ADG mơ hình viêm màng phổi chuột PL-6.1 Kết định lượng bạch cầu tổng lô chuột (⨉ 109 tế bào) (n = 10) C100 0,8 1,3 10,7 8,5 9,0 2,0 3,3 8,4 C300 6,2 1,3 5,9 11,9 5,1 9,3 9,0 12,0 1,1 3,7 Lô chuột N100 SLY 0,8 3,3 4,0 1,0 9,3 2,0 15,3 1,4 5,4 1,1 3,5 4,7 9,4 1,5 5,1 1,5 9,1 1,3 Bệnh 16,9 11,1 33,1 17,8 3,4 7,4 11,7 12,5 13,7 DEX 4,2 10,1 5,9 1,5 4,4 2,9 3,5 PL-6.2 Kết công thức bạch cầu lô chuột (⨉ 109 tế bào) (n = 10) Loại BC BC đa nhân BC lympho BC khác Bệnh 13,0 0,3 0,8 SLY 1,5 0,1 0,4 Lô chuột DEX C100 4,2 5,2 0,2 0,1 0,3 0,2 C300 5,6 0,1 0,2 N100 6,4 0,2 0,3 PL-6.3 Kết định lượng hoạt độ enzym MPO lô chuột (mU/ml) (n = 10) C100 21,15 6,28 48,61 40,51 40,45 4,44 22,49 308,81 C300 151,14 8,76 4,24 161,43 481,66 162,44 395,5 309,34 38,14 Lô chuột N100 SLY 5,55 1,82 19,77 0,31 146,32 1,11 172,42 0,37 13,79 0,31 52,92 0,86 3,54 2,66 42,9 2,69 0,87 Bệnh 1816,01 894,52 2326,97 2848,39 644,11 1197 1491,56 2856,56 4163,73 1794,34 DEX 52,09 151,68 56,79 5,5 16,14 38,74 36,16 34,38 155,09