Trần thị hồng xây dựng phương pháp định lượng picaridin trong dung dịch chống côn trùng bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ HỒNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG PICARIDIN TRONG DUNG DỊCH CHỐNG CƠN TRÙNG BẰNG SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ HỒNG MÃ SINH VIÊN: 1801267 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG PICARIDIN TRONG DUNG DỊCH CHỐNG CÔN TRÙNG BẰNG SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Đỗ Thị Thanh Thủy ThS Mạc Thị Thanh Hoa Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa Dược Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến: TS Đỗ Thị Thanh Thủy - Bộ mơn Hóa dược, Khoa Cơng nghệ Hóa Dược Trường Đại học Dược Hà Nội ThS Mạc Thị Thanh Hoa - Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia - người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình thực hồn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến anh chị nghiên cứu viên, kĩ thuật viên Khoa nghiên cứu phát triển Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia cho em lời khuyên quý báu suốt trình học tập nghiên cứu Em xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội, Ban Giám đốc Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành luận văn Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè đồng nghiệp, người bên em, động viên khích lệ để em đạt kết ngày hôm Em mong nhận góp ý nhận xét q thầy để hồn thiện khóa luận tốt Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 06 năm 2023 Sinh viên Trần Thị Hồng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thuốc chống côn trùng .2 1.1.1 Khái niệm, lịch sử .2 1.1.2 Phân loại 1.2 Picaridin 1.2.1 Thông tin chung Picaridin 1.2.2 Cơ chế hoạt động .4 1.2.3 Tác dụng - hiệu .4 1.2.4 An tồn – độc tính .5 1.2.5 Công dụng 1.2.6 Một số chế phẩm chứa Picaridin 1.3 Phương pháp phân tích Picaridin 1.3.1 Phương pháp định lượng Picaridin sắc ký khí 1.3.2 Phương pháp định lượng Picaridin HPLC 1.4 Tổng quan phương pháp HPLC 1.4.1 Nguyên tắc 1.4.2 Cấu tạo hệ thống HPLC 1.4.3 Các đại lượng đặc trưng 10 1.4.4 Ứng dụng kiểm nghiệm phương pháp HPLC 10 1.5 Thẩm định phương pháp phân tích HPLC 11 1.5.1 Tính thích hợp hệ thống sắc ký 11 1.5.2 Độ đặc hiệu 11 1.5.3 Độ xác .11 1.5.4 Độ tuyến tính khoảng xác định 11 1.5.5 Độ .12 CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị dụng cụ 13 2.1.1 Chất chuẩn 13 2.1.2 Hóa chất dung mơi 13 2.1.3 Mẫu phân tích .13 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ 13 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng HPLC 14 2.2.2 Thẩm định phương pháp phân tích .14 2.2.3 Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng mẫu thử 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Xây dựng phương pháp 15 2.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích .15 2.3.3 Áp dụng phương pháp xây dựng thẩm định để phân tích mẫu dung dịch chống côn trùng Remos Baby Spray 16 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 16 CHƯƠNG III THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 Xây dựng phương pháp HPLC để định lượng Picaridin 18 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 18 3.1.2 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 20 3.1.3 Phương pháp HPLC xây dựng 23 3.2 Thẩm định phương pháp .24 3.2.1 Tính thích hợp hệ thống sắc ký 24 3.2.2 Độ đặc hiệu 25 3.2.3 Độ tuyến tính .27 3.2.4 Độ xác .28 3.2.5 Độ .30 3.3 Ứng dụng phương pháp xây dựng định lượng sản phẩm chứa picaridin 32 3.4 Bàn luận 33 3.4.1 Về phương pháp định lượng Picaridin HPLC 33 3.4.2 Về thẩm định phương pháp phân tích Picaridin 34 3.4.3 Về ứng dụng phương pháp xây dựng định lượng Picaridin sản phẩm chống côn trùng 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .36 Kết luận 36 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN AOAC (Association Agricultural Chemists) Acetonitril of Official Hiệp hội nhà hố phân tích thống DEET N,N-Diethyl-3-methylbenzamide EtOH Ethanol GC – FID (Gas Chromatography - Flame Sắc ký khí – đầu dị ion hóa lửa Ionization Detection) H2 O Nước HCOOH Acid fomic HPLC (High Performance Chromatography) IR3535 ICH (International Harmonisation) Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Ethyl butylacetylaminopropionate Council for Hội nghị quốc tế hài hịa hóa thủ tục đăng ký dược phẩm KBR 3023 Picaridin MeOH Methanol RSD (Relative standard deviation) Độ lệch chuẩn tương đối PDA (Photo diode array) Đầu dò mảng diod STT Số thứ tự TT Thứ tự UPLC (Ultra High Performance Liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu Chromatography) UV (Ultraviolet) Tia tử ngoại VIS (Visible) Ánh sáng nhìn thấy WHOPES (WHO Pesticide Evaluation Chương trình đánh giá thuốc trừ sâu Scheme) Tổ chức y tế Thế giới λmax Bước sóng cực đại DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Tóm tắt số đặc điểm tính chất Picaridin Bảng Hiệu Picaridin chống lại lồi trùng truyền bệnh ngồi mơi trường Bảng Một số chế phẩm chứa Picaridin thị trường Bảng Chương trình nhiệt độ phương pháp GC - FID Bảng Chương trình pha động gradient Bảng Một số thông số thống kê sử dụng đề tài .17 Bảng Kết khảo sát pha động 20 Bảng Bảng khảo sát dung môi pha mẫu 21 Bảng 3 Kết khảo sát nồng độ phân tích .22 Bảng Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống sắc ký 24 Bảng Cách pha dung dịch chuẩn làm việc thẩm định độ tuyến tính .27 Bảng Kết khảo sát độ tuyến tính .28 Bảng Kết thẩm định độ lặp lại phương pháp HPLC 29 Bảng Kết thẩm định độ xác trung gian phương pháp HPLC 30 Bảng Cách pha mẫu thẩm định độ 31 Bảng 10 Kết thẩm định độ phương pháp HPLC 31 Bảng 11 Hàm lượng Picaridin dung dịch chống côn trùng 33 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1 Cơng thức cấu tạo Picaridin Hình Skin Technology Insect Repellent 25% Picaridin Hình Natrapel Hình Sawyer Picaridin .7 Hình Skin So Soft Bug Guard Hình Off! Family Care Insect Repellent II Clean Feel Hình Cân phân tích Quintix 125D-1S – Sartorius (Đức) 14 Hình Sắc ký đồ khảo sát pha động ACN/H2O =55/45 18 Hình Sắc ký đồ khảo sát pha động ACN/H2O =50/50 19 Hình 3 Sắc ký đồ khảo sát pha động H2O/MeOH=60/40 .19 Hình Sắc ký đồ khảo sát pha động H2O/MeOH=50/50 .20 Hình Sắc kí đồ khảo sát dung môi pha mẫu 21 Hình Sắc ký đồ Picaridin mức nồng độ 400 g/ml 22 Hình Sắc ký đồ Picaridin mức nồng độ 100 µg/ml 23 Hình Sắc ký đồ Picaridin mức nồng độ 50 µg/ml 23 Hình Sắc ký đồ mẫu trắng .25 Hình 10 Sắc ký đồ mẫu placebo .26 Hình 11 Sắc ký đồ mẫu chuẩn 26 Hình 12 Sắc ký đồ mẫu thử 27 Hình 13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ diện tích pic Picaridin .28 Hình 14 Sắc ký đồ phân tích dung dịch chống côn trùng chứa Picaridin 33 ĐẶT VẤN ĐỀ Các bệnh vật trung gian truyền bệnh gây vấn đề sức khỏe toàn cầu người Vật trung gian truyền bệnh chủ yếu côn trùng bọ chét, ruồi bọ ve, đặc biệt thường gặp muỗi Muỗi đốt không gây phản ứng dị ứng da chỗ sưng đỏ, mẩn ngứa, nặng gây khó thở, mạch nhanh Muỗi cịn vật trung gian truyền bệnh viêm não, sốt rét, sốt xuất huyết Đáng ý nước ta ca bệnh ngày gia tăng thuốc chống côn trùng biện pháp hiệu để ngăn ngừa, kiểm soát bùng phát dịch bệnh liên quan đến muỗi Nhiều loại sản phẩm có thành phần, nồng độ, thời gian tác dụng giá khác Tuy nhiên, tất loại thuốc chống trùng an tồn để sử dụng cho trẻ em, phụ nữ mang thai số trường hợp cần có hướng dẫn y tế Các nghiên cứu nỗ lực tìm kiếm chất chống trùng lý tưởng vừa có hiệu kéo dài ổn định mặt hóa học vừa có tính an tồn cao Picaridin hoạt chất đầy triển vọng để trở thành thuốc chống trùng lý tưởng có tác dụng xua đuổi trùng dùng cho người Sản phẩm chứa picaridin đăng ký lần đầu Hoa Kỳ vào năm 2001 [9] Hoạt chất có hiệu rộng rãi loài động vật chân đốt khác muỗi, ruồi, bọ ve bọ chét Chế phẩm chứa 20% Picaridin trì khả bảo vệ thể khỏi muỗi đốt lên đến 14 Picaridin không mùi khơng cảm thấy dính hay nhờn thoa, khơng làm phân hủy nhựa, sợi tổng hợp phân hủy sinh học Theo Cục Bảo vệ Môi trường Hoa Kỳ Picaridin chất độc nhẹ ăn phải tiếp xúc với da, mắt không độc hại tiếp xúc qua đường hô hấp xếp vào loại hóa chất khơng có khả gây ung thư cho người dùng liều thích hợp [9], [15] Hiện thị trường Việt Nam xuất ngày nhiều sản phẩm chống côn trùng có chứa Picaridin nước ta chưa có phương pháp thống xác định hàm lượng picaridin dung dịch chống côn trùng Để đảm bảo chất lượng sản phẩm an toàn cho người dùng, việc xây dựng phương pháp định lượng Picaridin thực cần thiết Xuất phát từ nhu cầu thực tiễn đó, chúng tơi tiến hành đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng Picaridin dung dịch chống trùng sắc kí lỏng hiệu cao”, với mục tiêu: Xây dựng phương pháp định lượng Picaridin dung dịch chống trùng sắc kí lỏng hiệu cao Thẩm định phương pháp định lượng Picaridin Áp dụng phương pháp xây dựng để xác định hàm lượng Picaridin dung dịch chống côn trùng thị trường Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu placebo Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu chuẩn Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu thử PHỤ LỤC 3: SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ TUYẾN TÍNH Sắc ký đồ dung dịch chuẩn mức nồng độ 50 % Sắc ký đồ dung dịch chuẩn mức nồng độ 80 % Sắc ký đồ dung dịch chuẩn mức nồng độ 100 % Sắc ký đồ dung dịch chuẩn mức nồng độ 120 % Sắc ký đồ dung dịch chuẩn mức nồng độ 150 % PHỤ LỤC 4: MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ CHÍNH XÁC Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu thử độ lặp lại Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu thử độ xác trung gian PHỤ LỤC 5: MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu mức nồng độ 80 % (Mẫu 1.3) Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu mức nồng độ 100 % (mẫu 2.3) Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu mức nồng độ 120 % (Mẫu 3.1) PHỤ LỤC 6: SẮC KÝ ĐỒ PHẦN ỨNG DỤNG Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu chuẩn 100 µg/ml Sắc ký đồ : Dung dịch mẫu thử