Nguyễn thị xanh góp phần nghiên cứu đặc điểm hiển vi, thành phần hoá học và hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu hai loài conamomum pierreanum (gagnep ) skornick a d poulsen và amomum truncatum (gagnep ), họ gừng (zing

AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA BỘ Y TẾ AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ XANH GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HIỂN VI, THÀNH PHẦN HỐ HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU HAI LOÀI Conamomum pierreanum (Gagnep.) Skornick & A.D Poulsen VÀ Amomum truncatum (Gagnep.), HỌ GỪNG (ZINGIBERACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ XANH Mã sinh viên: 1801780 GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HIỂN VI, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU HAI LỒI Conamomum pierreanum (Gagnep.) Skornick & A.D Poulsen VÀ Amomum truncatum (Gagnep.), HỌ GỪNG (ZINGIBERACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thanh Tùng TS Lưu Đàm Ngọc Anh Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Trải qua năm xuân học tập rèn luyện mái trường Đại học Dược Hà Nội, tơi nhận nhiều tình cảm, quan tâm, kiến thức từ thầy cô bạn bè Với tất lịng biết ơn mình, xin chân thành gửi lời cảm ơn tới Bộ môn Dược Liệu, Khoa Dược liệu – Dược học cổ truyền tạo điều kiện để tơi thực khóa luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thanh Tùng - người thầy tận tuỵ, nhiệt tình trực tiếp hướng dẫn dìu dắt suốt thời gian thực NCKH Bộ mơn Dược Liệu suốt q trình thực đề tài tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Khắc Tiệp – Bộ môn Công nghiệp Dược trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình hỗ trợ giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn TS Lưu Đàm Ngọc Anh – Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam người hỗ trợ tạo điều kiện để tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn bạn bè, anh chị, em NCKH môn Dược liệu hỗ trợ, giúp đỡ tơi q trình thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới tồn thể thầy cơ, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược Liệu trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi tồn thời gian thực khố luận Tơi xin chân thành cảm ơn tồn thể thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội tận tình dạy bảo truyền đạt kiến thức quý báu cho suốt năm học vừa qua Lời cuối cùng, tơi xin tỏ lịng cảm ơn chân thành, sâu sắc tới bố mẹ, gia đình, bạn bè sát cánh, động viên ủng hộ tơi suốt chặng đường học tập hồn thành khố luận Một lần nữa, tơi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 13 tháng năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thị Xanh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN .2 1.1 Tổng quan chi Etlingera Giseke .2 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố khóa phân loại chi Etlingera Giseke Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Etlingera Giseke Việt Nam Thành phần hoá học chi Etlingera Giseke Tác dụng sinh học công dụng loài thuộc chi Etlingera Giseke 1.2 Tổng quan chi Conamomum Ridl 11 Vị trí phân loại, phân bố khóa phân loại chi Conamomum Ridl .11 Tên khoa học phân bố số loài thuộc chi Conamomum Ridl Việt Nam .12 Thành phần hoá học chi Conamomum Ridl 12 Tác dụng sinh học công dụng loài thuộc chi Conamomum Ridl 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 16 Đối tượng nghiên cứu 16 Thiết bị hóa chất 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi .19 Nghiên cứu thành phần hóa học 19 Nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật .19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 Chiết xuất tinh dầu 20 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi 20 Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu 21 Nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật .22 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Loài Etlingera alba A.D Poulsen .24 Kết thực nghiệm 24 Bàn luận 32 3.2 Loài Connamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) 34 Kết thực nghiệm 34 Bàn luận 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 42 KẾT LUẬN .42 ĐỀ XUẤT 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ đầy đủ Giải nghĩa A Amomum C Conamomum E Etlingera DĐVN Dược điển Việt Nam GC Gas Chromatography Sắc ký khí MBC Minimum Bactericidal Concentration Nồng độ tối thiểu diệt khuẩn MFC Minimum Fungicidal Concentration Nồng độ tối thiểu diệt nấm MIC Minimum Inhibitor Nồng độ tối thiểu ức chế Concentration MS Mass spectrometry NXB Nhà xuất 10 Rf Retention factor 11 STT Số thứ tự 12 TT Thuốc thử 13 UV Ultra Violet Khối phổ Chỉ số lưu giữ Tử ngoại DANH MỤC CÁC BẢNG STT 1.1 1.2 Tên bảng Tên khoa học phân bố lồi Etlingera Giseke có mặt Việt Nam Thành phần hóa học tinh dầu lồi Etlingera Giseke có mặt Việt Nam Trang 1.3 Tên khoa học phân bố loài Conamomum Ridl có mặt Việt Nam 12 1.4 Thành phần hóa học tinh dầu thân loài C rubidium Lamxay & N.S.Lý 13 1.5 Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ loài C vietnamense N.S.Lý & T.S.Hoang 14 3.1 Kết thành phần tinh dầu toàn loài Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) (TH13) 28 3.2 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu tồn loài Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) (TH13) 32 3.3 Kết thành phần tinh dầu thân rễ loài Connamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) 38 3.4 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu thân rễ loài Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) 40 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Cấu trúc hóa học acid caffeoylquinic phân lập từ loài Etlingera Giseke 1.2 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 Cấu trúc hóa học chất phân lập từ thân rễ E elatior (Jack) R.M.Sm Đặc điểm hình thái loài Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) Đặc điểm hình thái lồi Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm (TH13) Đặc điểm hình thái loài Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen ĐN19 (Sa nhân Pierre) Đặc điểm vi phẫu Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) Đặc điểm vi phẫu Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm (TH13) 16 17 18 24 25 3.3 Đặc điểm bột phần mặt đất loài Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) 26 3.4 Đặc điểm bột phần mặt đất loài Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm (TH13) 27 3.5 Sắc ký đồ tinh dầu Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) (TH13) 28 3.6 Đặc điểm vi phẫu Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) 35 3.7 Đặc điểm bột phần mặt đất loài Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) 36 3.8 Sắc ký đồ tinh dầu thân rễ Connamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Họ Zingiberaceae Martinov có khoảng 50 chi với 1300 loài phân bố khắp vùng nhiệt đới Châu Phi, Châu Á Châu Mỹ [21] Trong đó, chi Etlingera Giseke chi Conamomum Ridl hai chi ghi nhận Việt Nam Chi Etlingera bao gồm khoảng 150 loài [43] phân bố rộng rãi từ vùng nhiệt đới cận nhiệt đới châu Á đến đảo Thái Bình Dương [54] Ở Việt Nam ghi nhận khoảng loài thuộc chi Etlingera, bật là: E elatior, E yunnanensis, E pavieana E littoralis [3][6][7][34] Nhiều loài thuộc chi sử dụng từ thời cổ đại nguồn dinh dưỡng cho mục đích y học Trong số đó, lồi Etlingera alba A.D Poulsen (là tên đồng nghĩa loài Amomum truncatum Gagnep., tên Etlingera alba A.D Poulsen sử dụng suốt đề tài) nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật hoạt tính gây độc tế bào [24][54] Tuy nhiên, theo hiểu biết chúng tơi, chưa có nghiên cứu tinh dầu Etlingera alba A.D Poulsen Chi Conamomum Ridl chi khác thuộc họ Gừng Trước năm 2018, loài chi xếp thuộc chi Amomum roxb [11] Chi Conamomum bao gồm 12 loài, số loài C rubidum, C odorum C vietnamense ghi nhận Việt Nam [41] Loài Conamomum pierreanum (Gagnep.) kornik & A.D Poulsen c Franỗois Gagnepain mụ tả khoa học năm 1906 với tên Amomum pierreanum Gagnep Với khu vực phân bố loài từ Thái Lan đến Campuchia [35] Năm 2020, Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen ghi nhận Việt Nam (tên tiếng Việt Sa nhân Pierre) chưa có nghiên cứu tinh dầu loài [35] Dựa luận điểm trên, chúng tơi tiến hành đề tài: “Góp phần nghiên cứu đặc điểm hiển vi, thành phần hố học hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu hai loài Conamomum pierreanum (Gagnep.) Skornick & A.D Poulsen Amomum truncatum (Gagnep.), họ Gừng (Zingiberaceae)” với mục tiêu: Nghiên cứu đặc điểm hiển vi hai loài Etlingera alba A.D Poulsen (Amomum truncatum Gagnep.) loài Conamomum pierreanum Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu hai loài Etlingera alba A.D Poulsen (Amomum truncatum Gagnep.) Conamomum pierreanum Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu hai loài Etlingera alba A.D Poulsen (Amomum truncatum Gagnep.) Conamomum pierreanum Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Etlingera Giseke Theo website WFO plant list Plants of the World Online, tên Amomum truncatum Gagnep coi tên đồng nghĩa loài Etlingera alba A.D Poulsen Do đó, phần tổng quan lồi Amomum truncatum viết theo chi Etlingera Giseke [43][57] Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố khóa phân loại chi Etlingera Giseke a) Vị trí phân loại chi Etlingera Giseke Chi Etlingera Giseke, tên thường gọi Ét ling [3], chi thực vật nằm họ Zingiberaceae Martinov Vị trí phân loại chi Etlingera Giseke nằm theo hệ thống phân loại thực vật Takhtajan (2009) sau: Ngành Ngọc lan Magnoliophyta Lớp Hành Liliopsida Phân lớp Thài lài Commelinidae Liên Gừng Zingiberanae Bộ Gừng Zingiberales Họ Gừng Zingiberaceae Chi Etlingera Giseke [50] b) Đặc điểm thực vật phân bố chi Etlingera Giseke Đặc điểm thực vật: Theo Thực vật chí Trung Quốc, đặc điểm thực vật chi Etlingera Giseke mô tả sau: Thân rễ leo Thân giả phát triển mạnh mẽ Lá có cuống, hình mũi mác, to Cụm hoa phát sinh từ thân rễ, hoa xếp thành vòng tròn đồng tâm đế phẳng, phần gốc có nhiều bắc bao quanh; cuống nhô cao khỏi mặt đất dài, cắm sâu xuống đất ngắn; bắc hình ống dài Đài hoa hình ống, có màng, đỉnh có Tràng hoa dài đài hoa; thùy 3, ngắn nhiều so với ống Hoa mơi hình lưỡi, ± thùy, dài nhiều so với thùy tràng hoa, thùy trung tâm có màu rực rỡ Nhị ngắn hoa mơi; bao phấn cong phía trước Bầu nhụy ngăn; nhiều noãn ngăn Quả nang thịt, khơng nứt, nhẵn, có gờ dọc [21] Phân bố: Phụ lục 2.1 Mẫu tiêu Etlingera alba A.D Poulsen TH10 Phụ lục 2.2 Mẫu tiêu Etlingera alba A.D Poulsen TH13 Phụ lục 2.3 Mẫu tiêu Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) Phụ lục 3.1 Kết phân tích sắc ký đồ phần mềm VisionCATs tinh dầu Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) (TH13) ➢ Tại λ = 366 nm: Track 1: TH10 Track 2: TH13 ➢ Tại ánh sáng trắng: Track 1: TH10 Track 2: TH13 Phụ lục 3.2 Kết phân tích thành phần tinh dầu Etlingera alba A.D Poulsen thời điểm hoa (TH10) (TH13) phương pháp sắc ký khí kết nối khối phổ GC/MS Mẫu TH10: Mẫu TH13: Phụ lục 3.3 Kết phân tích sắc ký đồ phần mềm VisionCATs tinh dầu thân rễ Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) ➢ Tại λ = 366 nm: Track 1: Mẫu thân rễ Track 2: Mẫu ➢ Tại ánh sáng trắng: Track 1: Mẫu thân rễ Track 2: Mẫu Phụ lục 3.4 Kết phân tích thành phần tinh dầu thân rễ Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân Pierre) phương pháp sắc ký khí kết nối khối phổ GC/MS Mẫu thân rễ: Mẫu lá: Phụ lục 4.1: Biên giám định loài Conamomum pierreanum (Gagnep.) Škorničk & A.D Poulsen (Sa nhân pierre) Phụ lục 4.2: Biên giám định loài Etlingera alba A.D Poulsen