Phân lập vi khuẩn nội sinh ở cây diếp cá (houttuynia cordata thunb ) có hoạt tính kháng khuẩn trên vi khuẩn staphylococcus aureus từ mụn nhọt (furuncle) ở người

XÁC NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Luận án với tựa đề “Phân lập vi khuẩn nội sinh Diếp cá (Houttuynia cordata Thunb.) có hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus từ mụn nhọt (Furuncle) người” nghiên cứu sinh Huỳnh Văn Trương thực theo hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp báo cáo Hội đồng thông qua Ủy viên Thư ký (ký tên) (ký tên) Phản biện Phản biện (ký tên) (ký tên ) Cán hướng dẫn Chủ tịch Hội đồng (ký tên) (ký tên ) i LỜI CẢM TẠ Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: Thầy PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp cô PGS.TS Đái Thị Xuân Trang dành nhiều thời gian, cơng sức tận tình hướng dẫn tơi thời gian thực luận án học trường Thầy cô động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho việc nghiên cứu học tập Viện NC PT Công nghệ sinh học, nghiên cứu sinh bạn Trần Chí Linh học viên cao học khóa 25 ngành Cơng nghệ sinh học trường Đại học Cần Thơ nhiệt tình giúp cho tơi hồn thành luận án Xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Ban Giám Hiệu trường Đại học Cần Thơ, trường Đại học Y Dược Cần Thơ; Ban lãnh đạo Viện NC PT Công nghệ Sinh học khoa Sau đại học, trường Đại học Cần Thơ quý thầy cô đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi thời gian để tơi hồn thành chương trình học tập Cuối cùng, thành công luận án không kể đến đóng góp khơng nhỏ thành viên gia đình, vợ Lý Tú Hương Huỳnh Gia Bảo, người ủng hộ, động viên giúp vượt qua nhiều khó khăn thời gian học tập Trân trọng cảm ơn Cần Thơ, ngày tháng năm 2021 Ký tên Huỳnh Văn Trương ii ABSTRACT Many studies using Houttuynia cardata Thunb for disease treatment are based on the fact that Houttuynia cardata Thunb has antibacterial, antiinflammatory and anti-oxidant activities However, the study of endophytic bacteria and extracts of endophytic bacteria in Houttuynia cardata Thunb with antibacterial activity on Staphylococcus aureus from furuncles in humans has not been studied The objectives of the research were to isolate and identify some endophytic bacterial strains of Houttuynia cardata Thunb with antibacterial activity on Staphylococcus aureus and determine antibacterial, antiinflammatory and anti-oxidant activities of extracts of endophytic bacteria in Houttuynia cardata Thunb with high antibacterial activity against Staphylococcus aureus The result showed that 231 endophytic bacteria strains that are found in all parts of Houttuynia cardata Thunb such as leaves, stems and roots of Houttuynia cardata Thunb grown in various ecological regions such as salt water, brackish water and fresh water or sea, islands, high mountains and plains in Kien Giang, Soc Trang, An Giang and Can Tho Among 231 strains 65 endophytic bacteria ones in Houttuynia cardata Thunb with antibacterial activity on Staphylococcus aureus isolated from human furuncles Thirteen endophytic bacteria strains in Houttuynia cardata Thunb which had strongest antibacterial activity on Staphylococcus aureus with a sterile ring of 20-33 mm Endophyic bacteria were identified and belonged to Bacillus genus The ethyl acetate extract from selected endophytic bacterial culture (RGT2) determined antibacterial activity on Staphylococcus aureus bacteria strain with high concentration of minimal inhibitory extract (MIC) fluctuated from 80 to 160 µg/mL The minimum bactericidal concentration (MBC) of the extract on the Staphylococcus aureus fluctuated from 640 to 1280 µg/mL The antioxidant activity of ethyl acetate extract from selected endophytic bacterial fluid culture (RGT2) was determined through free radical neutralization methods DPPH, ABTS, RP, TAC and FRAP with EC50 iii successive values of 57,38 µg/mL; 57,01 µg/mL; 32,00 µg/mL; 94,80 µg/mL and 41,41 µg/mL respectively The anti-inflammatory activity of extracts was investigated based on the inhibitory activity of the denaturation of bovine serum albumin Extraction was capable of 50% inhibition of denaturation at a concentration of 73,74 µg/mL The result of this study showed that endophytic bacteria strain (RGT2) in Houttuynia cardata Thunb not only has antibacterial activity, but also has antioxidant and anti-inflammatory activities which are potential in treatment of human diseases of furuncles and skin infections caused by Staphylococcus aureus Keywords: Antibacterial, Bacillus sp., endophytic bacteria, furuncle, Houttuynia cordata Thunb iv TĨM TẮT Nhiều cơng trình nghiên cứu Diếp cá cho việc điều trị bệnh dựa sở Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn, kháng viêm kháng oxy hóa Tuy nhiên, việc nghiên cứu vi khuẩn nội sinh cao chiết từ dịch nuôi tăng sinh vi khuẩn nội sinh Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus từ mụn nhọt người chưa nghiên cứu nhiều Mục tiêu luận án phân lập định danh số dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng viêm, kháng oxy hóa cao chiết từ dịch ni tăng sinh dịng vi khuẩn nội sinh Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn cao với vi khuẩn Staphylococcus aureus Kết nghiên cứu phân lập 231 dòng vi khuẩn nội sinh, dòng vi khuẩn nội sinh phân lập diện phận lá, thân rễ Diếp cá, trồng vùng sinh thái nước mặn, nước lợ nước hay biển đảo, núi cao đồng thể Kiên Giang, Sóc Trăng, An Giang Cần Thơ Trong số 231 dịng có 65 dịng vi khuẩn nội sinh Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus phân lập từ mụn nhọt người Mười ba dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá có hoạt tính kháng khuẩn mạnh dịng vi khuẩn Staphylococcus aureus với vịng vơ khuẩn từ 20 – 33 mm Các dòng vi khuẩn nội sinh nhận diện thuộc chi Bacillus Cao chiết ethyl acetate từ dịch ni tăng sinh dịng vi khuẩn nội sinh (RGT2) tuyển chọn nghiên cứu, có nồng độ cao chiết ức chế tối thiểu (MIC) dao động từ 80 đến 160 µg/mL Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) cao chiết dòng vi khuẩn Staphylococcus aureus dao động từ 640 đến 1280 µg/mL Hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết ethyl acetate từ dịch nuôi cấy tăng sinh dòng vi khuẩn nội sinh (RGT2) tuyển chọn nghiên cứu, xác định thông qua phương pháp trung hòa gốc tự DPPH, ABTS+, RP, TAC FRAP với giá trị EC50 lần lược 57,38 µg/mL, 57,01 µg/mL, 32,00 µg/mL, v 94,80 µg/mL 41,41 µg/mL Ngoài ra, hoạt tính kháng viêm cao chiết khảo sát dựa hoạt tính ức chế biến tính albumin huyết bị, có khả ức chế 50% biến tính nồng độ 73,74 µg/mL Kết nghiên cứu chứng tỏ dòng vi khuẩn nội sinh (RGT2) Diếp cá khơng có hoạt tính kháng khuẩn mà cịn có khả kháng oxy hóa, kháng viêm có tiềm lĩnh vực điều trị bệnh lý cho người mụn nhọt nhiễm khuẩn da vi khuẩn Staphylococcus aureus Từ khóa: Bacillus sp., Diếp cá, hoạt tính kháng khuẩn, mụn nhọt, vi khuẩn nội sinh vi LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án “Nghiên cứu vi khuẩn nội sinh Diếp cá (Houttuynia cordata Thunb.) có hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus từ mụn nhọt (Furuncle) người” cơng trình nghiên cứu với hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp Các số liệu kết trình bày luận án trung thực chưa người khác công bố công trình khác Người hướng dẫn khoa học Tác giả luận án PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp NCS Huỳnh Văn Trương vii MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ ii ABSTRACT iii TÓM TẮT v LỜI CAM ĐOAN vii MỤC LỤC viii DANH MỤC BẢNG xv DANH MỤC HÌNH xvii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT xix Chương GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết nghiên cứu 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Những đóng góp khoa học 1.5 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm thực vật Diếp cá 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Thành phần hóa học 2.1.2.1 Tinh dầu 2.1.2.2 Flavonoid 2.1.2.3 Alkaloid 2.1.2.4 Acid hữu acid béo 2.1.2.5 Sterol 2.1.2.6 Các acid amin 2.1.2.7 Các thành phần khác 2.1.3 Công dụng Diếp cá 2.1.3.1 Tác dụng kháng khuẩn 2.1.3.2 Tác dụng kháng virus viii 2.1.3.3 Tác dụng hoạt tính tế bào ung thư 2.1.3.4 Tác dụng kháng viêm 10 2.1.3.5 Tác dụng kháng dị ứng 10 2.1.3.6 Tác dụng kháng oxy hóa 10 2.1.3.7 Các tác dụng khác 11 2.2 Sơ lược vi khuẩn nội sinh thực vật 11 2.2.1 Vi khuẩn nội sinh thực vật 11 2.2.2 Các dòng vi khuẩn nội sinh thực vật thường gặp 13 2.2.2.1 Vi khuẩn Pseudomonas sp 13 2.2.2.2 Vi khuẩn Burkholderia sp 14 2.2.2.3 Vi khuẩn Bacillus sp 14 2.3 Tổng quan da người 15 2.3.1 Thượng bì (epidemis) 16 2.3.2 Trung bì (dermis) 16 2.3.3 Hạ bì (hypodermis) 17 2.3.4 Phần phụ da 17 2.3.4.1 Thần kinh da 17 2.3.4.2 Tuyến mồ hôi 17 2.4 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 20 2.5 Sơ lược khuếch tán đĩa thạch (Disk diffusion assay) 22 2.6 Một số kỹ thuật sinh học phân tử 23 2.6.1 Kỹ thuật Polymerase Chain Reaction 23 2.6.2 Giải trình tự DNA 24 2.6.3 Phần mềm phân tích trình tự DNA 25 2.7 Nồng độ ức chế tối thiểu nồng độ diệt khuẩn tối thiểu 25 2.8 Phương pháp xác định tác nhân oxy hóa 26 2.9 Sơ lược viêm 34 2.9.1 Giới thiệu viêm 34 2.9.2 Phân loại viêm 34 2.9.3 Các tác nhân gây viêm 34 2.9.4 Cơ chế đáp ứng viêm 35 ix 2.9.5 Điều trị viêm 36 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 3.1 Phương tiện nghiên cứu 38 3.1.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 38 3.1.1.1 Đối tượng nghiên cứu 38 3.1.1.2 Phạm vi nghiên cứu 38 3.1.1.3 Thời gian nghiên cứu 38 3.1.1.4 Địa điểm nghiên cứu 38 3.1.2 Vật liệu 38 3.1.3 Dụng cụ thiết bị 39 3.1.4 Hóa chất 40 3.1.5 Công thức môi trường nuôi cấy 41 3.2 Phương pháp nghiên cứu 41 3.2.1 Phương pháp thu thập, xử lý mẫu nghiên cứu 41 3.2.1.1 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 41 3.2.2 Phân lập dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá 42 3.2.2.1 Phân lập vi khuẩn nội sinh Diếp cá 42 3.2.3 Khảo sát đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập 44 3.2.3.1 Mô tả đặc điểm khuẩn lạc quan sát vi khuẩn đĩa thạch môi trường PDA 44 3.2.3.2 Khảo sát khả di động 44 3.2.3.3 Khảo sát tế bào vi khuẩn 44 3.2.4 Xác định khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Diếp cá vi khuẩn Staphylococcus aureus 45 3.2.4.1 Tính kháng khuẩn dịng vi khuẩn nội sinh Diếp cá vi khuẩn Staphylococcus aureus 45 3.2.4.2 Đánh giá khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá vi khuẩn Staphylococcus aureus 46 3.3 Nhận diện dòng vi khuẩn nội sinh có hoạt tính kháng khuẩn cao vi khuẩn Staphylococcus aureus 46 3.3.1 Ly trích DNA vi khuẩn 46 x PHỤ LỤC E BẢNG KẾT QUẢ THỐNG KÊ Bảng Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 24 dịng vi khuẩn nội sinh Diếp cá Staphylococcus aureus Kiên Giang One-way ANOVA: Đường kính vịng kháng khuẩn versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 13 2312.411 177.878 2716.68 0.000 Error 28 1.833 0.065 Total 41 2314.244 S = 0.2559 R-Sq = 99.92% R-Sq(adj) = 99.88% Level N HTL2 HTL4 HTR1 HTR4 HTT2 HTT3 HTT8 PQR2 PQR3 PQR8 PQT4 RGL1 RGR1 RGT2 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev -+ -+ -+ -+ 14.000 0.000 *) 18.000 0.000 (*) 29.000 0.000 *) 24.167 0.289 *) 33.000 0.000 (*) 14.000 0.000 *) 12.667 0.577 *) 17.000 0.000 *) 26.000 0.000 *) 17.333 0.289 (* 32.000 0.000 *) 15.333 0.289 (* 15.667 0.577 *) 33.000 0.000 (*) -+ -+ -+ -+ 18.0 24.0 30.0 36.0 Pooled StDev = 0.256 Grouping Information Using Fisher Method Dòng RGT2 HTT2 PQT4 HTR1 PQR3 HTR4 HTL4 PQR8 PQR2 RGR1 RGL1 HTT3 HTL2 HTT8 N 3 3 3 3 3 3 3 Mean 33.000 33.000 32.000 29.000 26.000 24.167 18.000 17.333 17.000 15.667 15.333 14.000 14.000 12.667 Grouping A A B C D E F G G H H I I J Means that not share a letter are significantly different - 32 - Bảng Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 24 dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá Staphylococcus aureus Sóc Trăng One-way ANOVA: Đường kính vịng kháng khẩn versus Dịng Source DF SS MS F P Dòng 17 323.2037 19.0120 821.32 0.000 Error 36 0.8333 0.0231 Total 53 324.0370 S = 0.1521 R-Sq = 99.74% R-Sq(adj) = 99.62% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -CTL3 22.333 0.289 *) CTR5 18.000 0.000 (*) CTR6 16.000 0.000 (*) CTT3 19.000 0.000 (*) MXL2 15.333 0.289 *) MXL4 16.000 0.000 (*) MXR2 17.333 0.289 *) MXT3 15.000 0.000 (*) MXT9 21.333 0.289 *) STL3 20.333 0.289 *) STL4 14.000 0.000 (*) STR2 18.000 0.000 (*) STR5 18.000 0.000 (*) STT2 18.000 0.000 (*) VCL5 19.000 0.000 (*) VCR6 16.000 0.000 (*) VCT3 23.000 0.000 (*) VCT5 19.000 0.000 (*) -+ -+ -+ -+ -15.0 17.5 20.0 22.5 Pooled StDev = 0.152 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping VCT3 23.0000 A CTL3 22.3333 B MXT9 21.3333 C STL3 20.3333 D VCT5 19.0000 E VCL5 19.0000 E CTT3 19.0000 E STT2 18.0000 F STR5 18.0000 F STR2 18.0000 F CTR5 18.0000 F MXR2 17.3333 G VCR6 16.0000 H MXL4 16.0000 H CTR6 16.0000 H MXL2 15.3333 I MXT3 15.0000 J STL4 14.0000 K Means that not share a letter are significantly different - 33 - Bảng Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 24 dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá Staphylococcus aureus An Giang One-way ANOVA: Đường kính vịng kháng khẩn versus Dịng Source DF SS MS F P Dòng 18 4856.211 269.789 15378.00 0.000 Error 38 0.667 0.018 Total 56 4856.877 S = 0.1325 R-Sq = 99.99% R-Sq(adj) = 99.98% Level LXL1 LXL4 LXT1 LXT2 LXT5 LXT6 PTL2 PTL3 PTL5 PTL6 PTL8 PTR1 TBL1 TBL5 TBL6 TBR2 TBR3 TBT1 TBT2 N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev + -+ -+ -+ 11.333 0.289 * 32.000 0.000 *) 10.000 0.000 (* 32.000 0.000 *) 11.000 0.000 *) 11.000 0.000 *) 10.000 0.000 (* 15.333 0.289 (* 32.333 0.289 * 31.000 0.000 (* 10.000 0.000 (* 11.000 0.000 *) 10.000 0.000 (* 12.000 0.000 * 10.000 0.000 (* 11.000 0.000 *) 11.333 0.289 * 16.000 0.000 (* 33.000 0.000 * + -+ -+ -+ 12.0 18.0 24.0 30.0 Pooled StDev = 0.132 Grouping Information Using Fisher Method Dòng TBT2 PTL5 LXT2 LXL4 PTL6 TBT1 PTL3 TBL5 TBR3 LXL1 TBR2 PTR1 LXT6 LXT5 TBL6 TBL1 PTL8 PTL2 LXT1 N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean Grouping 33.000 A 32.333 B 32.000 C 32.000 C 31.000 D 16.000 E 15.333 F 12.000 G 11.333 H 11.333 H 11.000 I 11.000 I 11.000 I 11.000 I 10.000 J 10.000 J 10.000 J 10.000 J 10.000 J Means that not share a letter are significantly different - 34 - Bảng Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 24 dòng vi khuẩn nội sinh Diếp cá Staphylococcus aureus Cần Thơ One-way ANOVA: Đường kính vòng kháng khẩn versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 13 1798.310 138.332 3319.96 0.000 Error 28 1.167 0.042 Total 41 1799.476 S = 0.2041 R-Sq = 99.94% R-Sq(adj) = 99.91% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ BTL2 16.000 0.000 * BTR1 14.333 0.289 (* BTT3 14.000 0.000 * BTT4 31.000 0.000 * NKL3 27.000 0.000 * NKR3 13.333 0.289 (* NKR4 15.000 0.000 * NKT2 16.000 0.000 * NKT3 29.000 0.000 * PDL2 14.000 0.000 * PDR1 13.000 0.000 * PDR5 12.000 0.000 * PDT2 27.333 0.289 (* PDT4 19.667 0.577 *) + -+ -+ -+ 15.0 20.0 25.0 30.0 Pooled StDev = 0.204 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping BTT4 31.000 A NKT3 29.000 B PDT2 27.333 C NKL3 27.000 C PDT4 19.667 D NKT2 16.000 E BTL2 16.000 E NKR4 15.000 F BTR1 14.333 G PDL2 14.000 G BTT3 14.000 G NKR3 13.333 H PDR1 13.000 H PDR5 12.000 I Means that not share a letter are significantly different - 35 - Bảng Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 24 nghệm thức dịch nội bào, dịch ngoại bào dịch nuôi tăng sinh từ dòng vi khuẩn nội sinh RGT2 tuyển chọn One-way ANOVA: Đường kính vịng kháng khuẩn versus Nghệm thức Source DF SS MS F P Nghệm thức 1674.889 837.444 1884.25 0.000 Error 2.667 0.444 Total 1677.556 S = 0.6667 R-Sq = 99.84% R-Sq(adj) = 99.79% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -Dịch hỗn hợp 32.000 1.000 (*) Dịch ngoại bào 7.667 0.577 (*) Dịch nội bào 0.000 0.000 (*) -+ -+ -+ -+ -0 10 20 30 Pooled StDev = 0.667 Grouping Information Using Fisher Method Nghệm thức N Mean Grouping Dịch hỗn hợp 32.000 A Dịch ngoại bào 7.667 B Dịch nội bào 0.000 C Means that not share a letter are significantly different Ghi chú: Dịch hỗn hợp dịch nuôi tăng sinh vi khuẩn Bảng Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 24 cao chiết ly trích từ dịch ni tăng sinh từ dòng vi khuẩn nội sinh RGT2 One-way ANOVA: Đường kính vịng kháng khuẩn versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 810.733 202.683 810.73 0.000 Error 10 2.500 0.250 Total 14 813.233 S = 0.5 R-Sq = 99.69% R-Sq(adj) = 99.57% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -80 0.000 0.000 (*) 160 13.667 0.577 (*) 320 17.500 0.500 (*) 640 18.667 0.577 (*) 1280 20.333 0.577 (*) -+ -+ -+ -+ -0.0 6.0 12.0 18.0 Pooled StDev = 0.500 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 1280 20.333 A 640 18.667 B 320 17.500 C 160 13.667 D - 36 - 80 0.000 E Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Đường kính vịng kháng khuẩn versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 257.461 64.365 97.99 0.000 Error 10 6.568 0.657 Total 14 264.029 S = 0.8105 R-Sq = 97.51% R-Sq(adj) = 96.52% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 80 11.000 1.000 ( * ) 160 15.333 0.577 ( * ) 320 18.000 1.000 ( * ) 640 20.667 0.577 ( * ) 1280 22.850 0.786 ( * ) + -+ -+ -+ 10.5 14.0 17.5 21.0 Pooled StDev = 0.810 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 1280 22.850 A 640 20.667 B 320 18.000 C 160 15.333 D 80 11.000 E Means that not share a letter are significantly different Bảng Hiệu suất kháng viêm (%) cao chiết ly trích từ dịch ni tăng sinh từ dịng vi khuẩn nội sinh RGT2 One-way ANOVA: Hiệu suất kháng viêm (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 9411.22 1568.54 563.73 0.000 Error 14 38.95 2.78 Total 20 9450.18 S = 1.668 R-Sq = 99.59% R-Sq(adj) = 99.41% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0.000 0.000 0.000 (*) 3.125 3.528 0.822 (*) 6.250 7.554 2.506 (*) 12.500 13.118 1.568 (*) 25.000 22.700 2.687 (*) 50.000 37.877 1.328 (*) 100.000 64.136 1.038 (*) -+ -+ -+ -+ -0 20 40 60 Pooled StDev = 1.668 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 100.000 64.136 A 50.000 37.877 B 25.000 22.700 C 12.500 13.118 D 6.250 7.554 E 3.125 3.528 F 0.000 0.000 G Means that not share a letter are significantly different - 37 - One-way ANOVA: Hiệu suất kháng viêm Diclofenac (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 11304.25 1884.04 560.85 0.000 Error 14 47.03 3.36 Total 20 11351.28 S = 1.833 R-Sq = 99.59% R-Sq(adj) = 99.41% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0.0000 0.000 0.000 (*) 0.7813 6.062 0.092 (*) 1.5625 13.638 0.207 (*) 3.1250 18.682 0.640 (*) 6.2500 27.246 2.618 (-*) 12.5000 43.403 3.787 (*) 25.0000 72.731 1.363 (*-) -+ -+ -+ -+ -0 20 40 60 Pooled StDev = 1.833 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 25.0000 72.731 A 12.5000 43.403 B 6.2500 27.246 C 3.1250 18.682 D 1.5625 13.638 E 0.7813 6.062 F 0.0000 0.000 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Kháng viêm Giá trị IC50 versus Mẫu thử Source Mẫu thử Error Total DF SS MS F P 5037.44 5037.44 2939.57 0.000 6.85 1.71 5044.30 S = 1.309 R-Sq = 99.86% R-Sq(adj) = 99.83% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -Cao chiết 73.743 1.769 (*) Diclofenac 15.792 0.545 (*) -+ -+ -+ -+ -16 32 48 64 Pooled StDev = 1.309 Grouping Information Using Fisher Method Mẫu thử N Mean Grouping Cao chiết 73.743 A Diclofenac 15.792 B Means that not share a letter are significantly different - 38 - Bảng Hiệu suất kháng oxy hóa (%) cao chiết ly trích từ dịch ni tăng sinh từ dịng vi khuẩn nội sinh RGT2 One-way ANOVA: DPPH Hiệu suất kháng oxy hóa (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source Nồng độ (µg/mL) Error Total DF SS MS F P 16046.49 2674.42 338.21 0.000 14 110.71 7.91 20 16157.20 S = 2.812 R-Sq = 99.31% R-Sq(adj) = 99.02% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 0.000 0.000 (*) 10 12.054 2.984 (-*) 20 21.789 3.434 (-*) 40 41.029 3.904 (*-) 60 53.246 2.895 (*-) 80 68.153 3.282 (*-) 100 80.845 0.512 (*-) -+ -+ -+ -+ -0 25 50 75 Pooled StDev = 2.812 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 100 80.845 A 80 68.153 B 60 53.246 C 40 41.029 D 20 21.789 E 10 12.054 F 0.000 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: DPPH Hàm lượng chất kháng oxy hoá versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 383.993 63.999 338.21 0.000 Error 14 2.649 0.189 Total 20 386.642 S = 0.4350 R-Sq = 99.31% R-Sq(adj) = 99.02% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 -0.506 0.000 (-*) 10 1.359 0.462 (-*) 20 2.865 0.531 (*-) 40 5.841 0.604 (-*) 60 7.731 0.448 (*-) 80 10.037 0.508 (-*) 100 12.001 0.079 (*-) -+ -+ -+ -+ -0.0 3.5 7.0 10.5 Pooled StDev = 0.435 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 100 12.001 A 80 10.037 B - 39 - 60 40 20 10 3 3 7.731 5.841 2.865 1.359 -0.506 C D E F G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: ABTS Hiệu suất kháng oxy hóa (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 18399.63 3066.61 6676.95 0.000 Error 14 6.43 0.46 Total 20 18406.06 S = 0.6777 R-Sq = 99.97% R-Sq(adj) = 99.95% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.000 0.000 * 10 8.946 1.132 (* 20 19.018 0.134 (* 40 36.674 0.243 (* 60 54.082 1.184 (* 80 70.330 0.507 * 100 84.775 0.444 * + -+ -+ -+ 25 50 75 Pooled StDev = 0.678 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) 100 80 60 40 20 10 3 N Mean Grouping 84.775 A 70.330 B 54.082 C 36.674 D 19.018 E 8.946 F 0.000 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: ABTS Hàm lượng chất kháng oxy hoá versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 34.25565 5.70928 6676.95 0.000 Error 14 0.01197 0.00086 Total 20 34.26762 S = 0.02924 R-Sq = 99.97% R-Sq(adj) = 99.95% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+0 0.2391 0.0000 *) 10 0.6251 0.0489 *) 20 1.0597 0.0058 (* 40 1.8215 0.0105 *) 60 2.5726 0.0511 (* 80 3.2737 0.0219 (* 100 3.8969 0.0192 * + -+ -+ -+1.0 2.0 3.0 4.0 Pooled StDev = 0.0292 Grouping Information Using Fisher Method - 40 - Nồng độ (µg/mL) 100 80 60 40 20 10 3 N Mean Grouping 3.8969 A 3.2737 B 2.5726 C 1.8215 D 1.0597 E 0.6251 F 0.2391 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: TAC Abs versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 0.571964 0.095327 672.22 0.000 Error 14 0.001985 0.000142 Total 20 0.573950 S = 0.01191 R-Sq = 99.65% R-Sq(adj) = 99.51% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 0.12100 0.00265 (*) 10 0.18200 0.02689 (*) 20 0.23667 0.00493 (*) 40 0.34800 0.00361 (*) 60 0.41900 0.00200 (*) 80 0.58067 0.00321 (*) 100 0.54800 0.01453 (*) -+ -+ -+ -+ -0.15 0.30 0.45 0.60 Pooled StDev = 0.01191 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) 80 100 60 40 20 10 3 N Mean Grouping 0.58067 A 0.54800 B 0.41900 C 0.34800 D 0.23667 E 0.18200 F 0.12100 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: TAC Hàm lượng chất kháng oxy hố versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 27.09180 4.51530 672.22 0.000 Error 14 0.09404 0.00672 Total 20 27.18584 S = 0.08196 R-Sq = 99.65% R-Sq(adj) = 99.51% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ -0.2932 0.0182 (*) 10 0.1266 0.1851 (*) 20 0.5029 0.0339 (*) 40 1.2691 0.0248 (*) 60 1.7577 0.0138 (*) 80 2.8704 0.0221 (*) 100 2.6456 0.1000 (*) + -+ -+ -+ - - 41 - 0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.0820 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 80 2.8704 A 100 2.6456 B 60 1.7577 C 40 1.2691 D 20 0.5029 E 10 0.1266 F -0.2932 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: RP Abs versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 5.43869 0.90645 259.79 0.000 Error 14 0.04885 0.00349 Total 20 5.48754 S = 0.05907 R-Sq = 99.11% R-Sq(adj) = 98.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.0530 0.0020 (*-) 10 0.2827 0.0012 (-*) 20 0.4147 0.0100 (*-) 40 0.6860 0.0096 (-*) 60 0.9297 0.0400 (-*) 80 1.1643 0.0015 (*-) 100 1.6383 0.1504 (-*) + -+ -+ -+ 0.00 0.50 1.00 1.50 Pooled StDev = 0.0591 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) 100 80 60 40 20 10 3 N Mean Grouping 1.6383 A 1.1643 B 0.9297 C 0.6860 D 0.4147 E 0.2827 F 0.0530 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: RP Hàm lượng chất kháng oxy hố versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 345.859 57.643 259.79 0.000 Error 14 3.106 0.222 Total 20 348.966 S = 0.4710 R-Sq = 99.11% R-Sq(adj) = 98.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 -0.526 0.016 (*-) 10 1.306 0.009 (-*) 20 2.359 0.080 (-*) 40 4.522 0.077 (-*-) 60 6.465 0.319 (*-) - 42 - 80 8.337 0.012 (-*) 100 12.117 1.199 (-*) -+ -+ -+ -+ -0.0 3.5 7.0 10.5 Pooled StDev = 0.471 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 100 12.117 A 80 8.337 B 60 6.465 C 40 4.522 D 20 2.359 E 10 1.306 F -0.526 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: FRAP Abs versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 3.362636 0.560439 20397.27 0.000 Error 14 0.000385 0.000027 Total 20 3.363021 S = 0.005242 R-Sq = 99.99% R-Sq(adj) = 99.98% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.00000 0.00000 * 10 0.15133 0.00551 *) 20 0.27333 0.00321 * 40 0.48900 0.01114 * 60 0.69033 0.00252 * 80 0.93200 0.00200 (* 100 1.19467 0.00416 * + -+ -+ -+ 0.00 0.35 0.70 1.05 Pooled StDev = 0.00524 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 100 1.19467 A 80 0.93200 B 60 0.69033 C 40 0.48900 D 20 0.27333 E 10 0.15133 F 0.00000 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: FRAP Hàm lượng chất kháng oxy hoá versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 76.54157 12.75693 20397.27 0.000 Error 14 0.00876 0.00063 Total 20 76.55032 S = 0.02501 R-Sq = 99.99% R-Sq(adj) = 99.98% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ -0.8197 0.0000 (* 10 -0.0976 0.0263 *) 20 0.4844 0.0153 * 40 1.5134 0.0531 * 60 2.4739 0.0120 *) 80 3.6269 0.0095 * - 43 - 100 4.8801 0.0199 (* + -+ -+ -+ 0.0 1.5 3.0 4.5 Pooled StDev = 0.0250 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 100 4.8801 A 80 3.6269 B 60 2.4739 C 40 1.5134 D 20 0.4844 E 10 -0.0976 F -0.8197 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: DPPH, Trolox Hiệu suất kháng oxy hóa (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 10562.48 1760.41 323.57 0.000 Error 14 76.17 5.44 Total 20 10638.65 S = 2.333 R-Sq = 99.28% R-Sq(adj) = 98.98% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 0.000 0.000 (*) 10.313 3.577 (*-) 19.406 3.765 (-*) 29.319 2.852 (-*) 42.051 0.342 (*) 55.307 1.211 (-*) 10 66.879 1.182 (*-) -+ -+ -+ -+ -0 20 40 60 Pooled StDev = 2.333 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 10 66.879 A 55.307 B 42.051 C 29.319 D 19.406 E 10.313 F 0.000 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: ABTS, Trolox Hiệu suất kháng oxy hóa (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 22731.69 2841.46 4597.97 0.000 Error 18 11.12 0.62 Total 26 22742.81 S = 0.7861 R-Sq = 99.95% R-Sq(adj) = 99.93% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.0 0.000 0.000 * 0.5 6.526 0.930 (* 1.0 17.055 1.232 (* 1.5 29.410 1.116 (* 2.0 39.696 0.094 (* - 44 - 2.5 3.0 3.5 4.0 3 3 54.073 62.831 76.502 86.739 0.709 (* 0.645 *) 0.609 (* 0.796 (* + -+ -+ -+ 25 50 75 Pooled StDev = 0.786 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 4.0 86.739 A 3.5 76.502 B 3.0 62.831 C 2.5 54.073 D 2.0 39.696 E 1.5 29.410 F 1.0 17.055 G 0.5 6.526 H 0.0 0.000 I Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: RP, Trolox Abs versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 4.38757 0.73126 308.72 0.000 Error 14 0.03316 0.00237 Total 20 4.42073 S = 0.04867 R-Sq = 99.25% R-Sq(adj) = 98.93% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.0000 0.0000 (-*-) 0.2210 0.0381 (-*) 0.3933 0.0101 (-*) 0.6233 0.0371 (-*) 0.8817 0.0597 (*-) 1.1040 0.0675 (-*) 10 1.3780 0.0744 (*-) + -+ -+ -+ 0.00 0.40 0.80 1.20 Pooled StDev = 0.0487 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 10 1.3780 A 1.1040 B 0.8817 C 0.6233 D 0.3933 E 0.2210 F 0.0000 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: FRAP, Trolox Hiệu suất kháng oxy hóa (%) versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 13.47222 1.92460 4181.27 0.000 Error 16 0.00736 0.00046 Total 23 13.47958 S = 0.02145 R-Sq = 99.95% R-Sq(adj) = 99.92% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.0 0.0000 0.0000 * 0.5 0.2760 0.0010 (* - 45 - 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 3 3 3 0.4253 0.6070 1.0153 1.4330 1.8533 2.2523 0.0015 *) 0.0020 *) 0.0081 (* 0.0211 (* 0.0190 (* 0.0529 (* + -+ -+ -+ 0.00 0.60 1.20 1.80 Pooled StDev = 0.0215 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 10.0 2.2523 A 8.0 1.8533 B 6.0 1.4330 C 4.0 1.0153 D 2.0 0.6070 E 1.0 0.4253 F 0.5 0.2760 G 0.0 0.0000 H Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: TAC, Trolox Abs versus Nồng độ (µg/mL) Source DF SS MS F P Nồng độ (µg/mL) 6.942012 0.991716 1761.62 0.000 Error 16 0.009007 0.000563 Total 23 6.951020 S = 0.02373 R-Sq = 99.87% R-Sq(adj) = 99.81% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0.0 0.0000 0.0000 (*) 0.5 0.2600 0.0000 *) 1.0 0.2757 0.0649 (* 2.0 0.5160 0.0066 *) 4.0 0.6827 0.0085 (* 6.0 0.9557 0.0032 *) 8.0 1.3183 0.0130 *) 10.0 1.6847 0.0015 (* -+ -+ -+ -+ -0.00 0.50 1.00 1.50 Pooled StDev = 0.0237 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ (µg/mL) N Mean Grouping 10.0 1.6847 A 8.0 1.3183 B 6.0 0.9557 C 4.0 0.6827 D 2.0 0.5160 E 1.0 0.2757 F 0.5 0.2600 F 0.0 0.0000 G Means that not share a letter are significantly different - 46 -