Xác Định Đột Biến Gen Gla, Gaa Và Đặc Điểm Di Truyền Của Bệnh Fabry Và Pompe.pdf

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN GLA, GAA VÀ ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN CỦA BỆNH FABRY VÀ POMPE LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI 2023 CÁC CHỮ VIẾ[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN GLA, GAA VÀ ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN CỦA BỆNH FABRY VÀ POMPE LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2023 CÁC CHỮ VIẾT TẮT BNP Bp DBS DNA ERT FD GAA Gb3 GLA HSCT IOPD IVS LOPD LSD B natriuretic peptide Base pair Dried blood spot Deoxyribonucleic acid Enzyme replacement therapy Fabry disease Alpha-glucosidase A Globotriaosylceramide Alpha-galactosidase A Hematopoietic stem cell transplantation Infantile Onset Pompe Disease Intervening sequence Late Onset Pompe Disease Lysosomal stogage diease LVI Left ventricular index LVMI Left ventricular mass index LVPWd Left ventricular posterior wall diastolic MLPA Multiplex ligation-dependent probe amplification MS Mass spectrometry NST PCR Polymerase Chain Reaction SNP Single Nucleotide Cặp base Giọt máu khô Acid deoxyribonucleic Nghiệm pháp enzyme thay bệnh Fabry Ghép tế bào gốc tạo máu Bệnh Pompe khởi phát sớm Trình tự nối Bệnh Pompe khởi phát muộn Bệnh rối loạn tích đọng tiêu thể Chỉ số khối thất trái Chỉ số khối thất trái Độ dày thành sau thất trái tâm trương Đo khối phổ Nhiễm sắc thể Phản ứng tổng hợp chuỗi Polymerase Đa hình đơn nucleotid Polymorphism VUS Variants uncertain signification Biến thể chưa rõ ý nghĩa MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀ I LIỆU 1.1 Rố i loa ̣n dự trữ tiêu thể 1.1.1 Đa ̣i cương 1.1.2 Chẩn đoán LSDs 1.1.3 Điều trị LSDs 1.1.4 Các phương pháp sàng lọc bệnh LSDs 1.2 Bệnh Fabry 1.2.1 Biểu lâm sàng Fabry 1.2.2 Di truyền học phân tử Fabry 11 1.2.3 Liên quan kiểu gen kiểu hình 18 1.2.4 Chẩn đoán sàng lọc Fabry 21 1.3 Bệnh Pompe 26 1.3.1 Biểu lâm sàng Pompe 28 1.3.2 Di truyền học phân tử Pompe 28 1.3.3 Mối liên quan kiểu gen kiểu hình 31 1.3.4 Chẩn đoán sàng lọc Pompe 32 1.4 Các phương pháp sinh học phân tử xác định đột biến gen GLA, GAA 34 1.4.1 Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) 35 1.4.2 Giải trình tự gen trực tiếp 36 1.4.3 Giải trình tự gen hệ NGS 37 1.4.4 Dự đoán khả gây bệnh đột biến phần mềm tin sinh học 37 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 41 2.3 Phương pháp nghiên cứu 42 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 42 2.3.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 42 2.3.3 Phương pháp thu thập mẫu 42 2.3.4 Các biến số nghiên cứu 44 2.3.5 Sơ đồ nghiên cứu 45 2.3.6 Phương tiện nghiên cứu 46 2.3.7 Quy trình kỹ thuật đo hoạt độ enzyme 50 2.3.8 Quy trình giải trình tự trực tiếp tìm đột biến gen GLA GAA 52 2.4 Thu thập xử lý số liệu 58 2.4.1 Công cụ thu thập số liệu 58 2.4.2 Quy trình thu thập số liệu 58 2.4.3 Xử lý số liệu 58 2.4.4 Khống chế sai số 59 2.5 Đạo đức nghiên cứu 59 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 60 3.1 Đặc điểm chung đối tượng tham gia nghiên cứu 60 3.1.1 Bệnh Fabry 60 3.1.2 Bệnh Pompe 61 3.2 Kết đo hoạt độ enzyme 62 3.2.1 Hoạt độ enzyme GLA người bệnh nghi ngờ Fabry 62 3.2.2 Kết hoạt độ enzyme GAA người bệnh nghi ngờ Pompe 63 3.3 Kết phân tích gen tìm đột biến 64 3.3.1 Kết phân tích gen GLA 64 3.3.2 Kết giải trình tự gen người bệnh nghi ngờ Pompe 71 3.4 Phát người lành mang gen thành viên gia đình người bệnh 79 3.4.1 Phát người lành mang gen thành viên gia đình người bệnh Fabry 79 3.4.2 Phát người lành mang gen thành viên gia đình người bệnh Pompe 83 3.5 Đặc điểm lâm sàng người bệnh Fabry Pompe 93 3.5.1 Đặc điểm lâm sàng người bệnh Fabry 93 3.5.2 Đặc điểm lâm sàng người bệnh Pompe 93 CHƯƠNG BÀN LUẬN 96 4.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 96 4.1.1 Đặc điểm chung tuổi giới bệnh Fabry 96 4.1.2 Đặc điểm chung tuổi giới bệnh Pompe 98 4.2 Biến đổi hoạt độ enzyme GLA, GAA người bệnh tham gia nghiên cứu 98 4.2.1 Hoạt độ enzyme GLA 98 4.2.2 Hoạt độ enzyme GAA người bệnh nghi ngờ Pompe 100 4.3 Các đột biến gen GLA, GAA người bệnh Fabry Pompe 100 4.3.1 Các đột biến gen GLA 100 4.3.2 Các đột biến gen GAA 103 4.4 Phát người lành mang gen thành viên gia đình người bệnh tham gia nghiên cứu 113 4.4.1 Phát người lành mang gen thành viên gia đình người bệnh Fabry 113 4.4.2 Phát người lành mang gen thành viên gia đình người bệnh Pompe 114 4.5 Biểu lâm sàng người bệnh Fabry Pompe 123 4.5.1 Biểu lâm sàng người bệnh Fabry 123 4.5.2 Đặc điểm lâm sàng bệnh Pompe 124 KẾT LUẬN 127 KHUYẾN NGHỊ 128 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Phân bố loại đột biến gen GLA 15 Bảng 1.2: Các SNP gen GLA 17 Bảng 1.3 Phân bố loại đột biến gen GAA 30 Bảng 2.1 Trình tự mồi gen GLA sử dụng nghiên cứu 48 Bảng 2.2 Trình tự mồi để khuếch đại gen GAA 49 Bảng 2.3: Thành phần phản ứng PCR khuếch đại exon gen GLA 53 Bảng 2.4: Chu trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại gen GLA 54 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR cho giải trình tự gen GLA 55 Bảng 2.6 Chu trình nhiệt phản ứng PCR cho giải trình tự gen GLA 55 Bảng 2.7: Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen GAA 56 Bảng 2.8: Chu trình nhiệt khuếch đại gen GAA 56 Bảng 2.9: Thành phần phản ứng PCR giải trình tự gen GAA 57 Bảng 2.10: Chu trình nhiệt PCR giải trình tự gen GAA 57 Bảng 3.1: Phân bố theo giới nhóm người bệnh tham gia nghiên cứu 61 Bảng 3.2: Phân bố theo tuổi khởi phát người bệnh Pompe nghiên cứu 61 Bảng 3.3: Phân bố theo giới người bệnh Pompe nghiên cứu 62 Bảng 3.4: Kết đo hoạt độ enzyme GLA 62 Bảng 3.5: Kết đo hoạt độ enzyme GAA 64 Bảng 3.6: Kết giải trình tự gen GLA 27 mẫu có hoạt độ enzyme thấp 66 Bảng 3.7 Dự đoán khả gây bệnh đột biến phầm mềm tin sinh học 69 Bảng 3.8: Kết hoạt độ enzyme theo loại đột biến 70 Bảng 3.9: Kết giả trình tự gen GAA đối tượng nghiên cứu 73 Bảng 3.10 Tần suất xuất đột biến nghiên cứu 76 Bảng 3.11 Kết dự đoán khả gây bệnh đột biến c.625T>C phần mền tin sinh học 77 Bảng 3.12: Kết đo hoạt độ enzyme GLA từ mẫu máu toàn phần 79 Bảng 3.13: Kết đo hoạt độ enzyme GLA từ giấy thấm DBS 80 Bảng 3.14: Kết đo hoạt độ enzyme kết giải trình tự exon gia đình người bệnh mã số VN.06 82 Bảng 3.15: Tỷ lệ thành viên mang đột biến qua hệ 92 Bảng 3.16: Triệu chứng lâm sàng khởi phát người bệnh 93 Bảng 3.17: Biến đổi số tim ngực LVMI Xquang tim phổi siêu âm tim 94 Bảng 3.18: Kết hoạt độ enzyme CK, ALT người bệnh nghiên cứu 95 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình ảnh tế bào với tiêu thể bị tích đọng Hình 1.2: Hình ảnh tổn thương da Fabry 10 Hình 1.3: Cấu trúc alpha-galactosidase người 11 Hình 1.4: Phân bố đột biến điểm gây bệnh Fabry exon gen GLA (theo HGMD) 16 Hình 2.1: Các phản ứng enzyme đo khối phổ song song GLA 51 Hình 3.1: Kết điện di sản phẩm PCR khuếch đại gen GLA mẫu BN mã số FB64 65 Hình 3.2: Hình ảnh biến thể 5’UTR -12G>A 68 Hình 3.3: Kết đột biến c.178C>T, (p.Pro60Ser) người bệnh mã số FB64 68 Hình 3.4: Hình ảnh minh họa sử dụng cơng cụ PolyPhen-2 để dự đốn khả gây bệnh đột biến c.178C>T 69 Hình 3.5: Hình ảnh minh họa sử dụng cơng cụ MutationTaster để dự đốn khả gây bệnh đột biến c.178C>T 70 Hình 3.6: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR sau khuếch đại exon14 gen GAA 72 Hình 3.7: Hình ảnh đột biến gen người bệnh mã số Pom11.0 75 Hình 3.8: Hình ảnh kết đột biến c.1411-1414delGAGA người bệnh Pom20.4 Pom20.7 75 Hình 3.9: Hình ảnh đột biến chỗ nối intron 14 người bệnh mã số Pom12.0 76 Hình 3.10: Hình ảnh minh họa kết dự đoán khả gây bệnh đột biến c.625T>C phần mềm PolyPhen2 78 Hình 3.11: Hình ảnh minh họa kết dự đoán khả gây bệnh đột biến c.625T>C phần mềm MutationTaster 78 Hình 3.12: Phả hệ gia đình mã số VN.06 81 Hình 3.13: Phả hệ gia đình mã số Pom16 83 Hình 3.14: Phả hệ gia đình mã số Pom17 85 Hình 3.15: Phả hệ gia đình mã số Pom18 86 Hình 3.16: Phả hệ gia đình mã số Pom19 87 Hình 3.17: Phả hệ gia đình mã số Pom20 88 Hình 3.18: Phả hệ gia đình mã số Pom21 89 Hình 3.19 Phả hệ gia đình mã số Pom22 90 Hình 3.20: Phả hệ gia đình mã số VN.0055 91 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Phân bố theo nhóm tuổi BN nghi ngờ Fabry 60 Biểu đồ 3.2: Kết đo hoạt độ enzyme GLA 63 Biểu đồ 3.3: Đồ thị phân tích hoạt độ enzyme GLA theo kết giải trình tự gen 71 B3 Gia đình có chẩn đốn Fabry/ Pompe? Có Khơng …………………… Quan hệ với người bệnh C TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG C1 Lý đến khám Chiều cao Cân nặng Nhịp tim C2 Triệu chứng lâm sàng người bệnh khởi phát Khó thở Tím tái Yếu Lưỡi dày Bú C3 Thời điểm xuất triệu chứng lâm sàng khởi phát D D1 CẬN LÂM SÀNG: XQ tim phổi: …………………… …………………… …………………… …………………… …………………… Chỉ số tim ngực D2 D3 D4 D5 D6 Siêu âm tim: …………………… Độ dày thất trái (LVI) Chỉ số khối thất trái (LVMI) Bề dày thành sau thất trái tâm trương (LVPWd) Hóa sinh máu: …………………… CK ALT GAA …………………… GLA …………………… KQ giải trình tự gen …………………… Ngày …… tháng…… năm… Người thu thập thông tin PHỤ LỤC DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM16 STT 10 11 12 13 14 15 16 Ký hiệu Pom 16.0 Pom 16.1 Pom 16.2 Pom 16.3 Pom 16.4 Pom 16.5 Pom 16.6 Pom 16.7 Pom 16.8 Pom 16.9 Pom 16.10 Pom 16.11 Pom 16.12 Pom 16.13 Pom 16.14 Pom 16.15 Họ tên Nguyễn Phương T Nguyễn Thị L Nguyễn Huy D Nguyễn Huy C Khiếu Thị Đ Nguyễn Thị H Nguyễn Văn K Nguyễn Thị Thùy L Nguyễn Thùy D Nguyễn Anh T Nguyễn Đức Q Nguyễn Thị Kim L Nguyễn Đức Đ Nguyễn Thị Diệp A Nguyễn Khánh N Nguyễn Văn K Năm sinh 2015-2016 1998 1990 1965 1969 1989 1989 2009 2015 2019 1970 1975 2005 1995 2018 1993 Quan hệ với BN Bênh nhân Mẹ Bố Ông nội Bà nội Chị gái bố Anh rể bố Cơ (bố) Chị họ Anh họ Ơng ngoại Bà Ngoại Cậu Bác gái (mẹ) Chị họ Chồng bác gái(mẹ) DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM17 STT 10 11 Ký hiệu Pom 17.0 Pom 17.1 Pom 17.2 Pom 17.3 Pom 17.4 Pom 17.5 Pom 17.6 Pom 17.7 Pom 17.8 Pom 17.9 Pom 17.10 Họ tên Phùng Quang T Phùng Minh C Lê Thị Thu V Phùng Thị M Nguyễn Văn T Phùng Văn T Kiều Thị Như Q Kiều Văn C Nguyễn Thị T Kiều Thị Hồng N Kiều Ngọc D Năm sinh 2020 1970 1972 1995 1994 1995 2000 1976 1982 2007 2011 Quan hệ với BN Bênh nhân Ông nội Bà nội Chị gái chồng Anh rể chồng Bố Mẹ Ông ngoại Bà ngoại Em gái (vợ) Cậu DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM18 STT Ký hiệu Họ tên Năm sinh Quan hệ với BN Pom 18.0 Phạm Tú Anh 2007 Bênh nhân Pom 18.1 Phạm Công T 1961 Ông nội Pom 18.2 Hà Thị D 1962 Bà nội Pom 18.3 Phan Văn M 1955 Ông ngoại Pom 18.4 Nguyễn Thị P 1957 Bà ngoại Pom 18.5 Phạm Minh T 1988 Bố Pom 18.6 Phan Thị Thu H 1988 Mẹ Pom 18.7 Phạm Anh Đ 2013 Em trai DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM19 STT Ký hiệu Họ tên Năm sinh Quan hệ với BN Pom 19.0 Đặng Anh T Pom 19.1 Đặng Văn D 1985 Bố Pom 19.2 Ngô Thị Thanh T 1987 Mẹ Pom 19.3 Đặng Nhật M 2012 Anh trai Pom 19.4 Đặng văn T 1954 Ông nội Pom 19.5 Nguyễn Thị N 1955 Bà nội Pom 19.6 Ngô Văn T 1961 Ông ngoại Pom 19.7 Man Thị M 1963 Bà ngoại Pom 19.8 Đặng Văn L 1980 Anh trai bố 10 Pom 19.9 Đặng Hải N 2008 Anh họ 11 Pom 19.10 Đặng Hào N 2009 Anh họ 12 Pom 19.11 Ngơ Chí C 1992 Cậu 13 Pom 19.12 Nguyễn Thị A 1996 Vợ cậu 14 Pom 19.13 Nguyễn Thị H 1989 Chị dâu bố Bênh nhân DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM20 STT Ký hiệu Họ tên Năm sinh Quan hệ với BN Pom 20.0 Nguyễn Ngọc D 2018 Bênh nhân Pom 20.1 Nguyễn Thị L 1995 Mẹ Pom 20.2 Nguyễn Minh Q 2003 Cậu Pom 20.3 Nguyễn Thùy D 2002 Em gái mẹ Pom 20.4 Tạ Thị H 1970 Bà nội Pom 20.5 Nguyễn Thị H 1974 Bà Ngoại Pom 20.6 Nguyễn Văn Q 1971 Ông ngoại Pom 20.7 Nguyễn Hữu H 1993 Bố DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM21 Pom 21.0 Nguyễn Nhật N Năm sinh 2018 Pom 21.1 Nguyễn Hà A 2008 Cô Pom 21.2 Nguyễn Thị L 1971 Bà Nội Pom 21.3 Nguyễn Ngọc Khánh L 2003 Cô Pom 21.4 Nguyễn Việt L 1970 Ông nội Pom 21.5 Lê Thị H 1980 Bà ngoại Pom 21.6 Đào Minh Triết 2021 Em họ Pom 21.8 Nguyễn Thị Mỹ D 1998 Mẹ Pom 21.9 Nguyễn Việt D 1994 Bố 10 Pom 21.10 Nguyễn Tuấn V 2002 Cậu 11 Pom 21.11 Nguyễn Văn C 1975 Ông ngoại 12 Pom 21.12 Đào Tiến T 1990 Em rể bố 13 Pom 21.13 Nguyễn Thị Thu H 1992 Em gái bố STT Ký hiệu Họ tên Quan hệ với BN Bênh nhân DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH POM22 Năm sinh 2020 1996 1968 1993 1994 1972 1973 STT Ký hiệu Pom 22.0 Pom 22.1 Pom 22.2 Pom 22.3 Pom 22.4 Pom 22.5 Pom 22.6 Họ tên Nguyễn Mạnh D Nguyễn Văn T Nguyễn Văn T Nguyễn Thị Thu H Nguyễn Thị L Bùi Thị Đ Bùi Thị Thu V Pom 22.7 Nguyễn Hồng T 1992 Quan hệ với BN Bênh nhân Cậu Ông nội Mẹ Em gái bố Bà Ngoại Bà nội Bố Pom 22.8 Nguyễn Quốc T 1967 Ông ngoại DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU CỦA GIA ĐÌNH NGƯỜI BỆNH VN0055 STT Ký hiệu VN.0055.0 VN.0055.1 VN.0055.2 VN.0055.3 VN.0055.4 VN.0055.5 VN.0055.6 Họ tên VN.0055 Nhữ Thị L Nguyễn Văn H Nguyễn Văn T Nguyễn Thảo N Nhữ Văn K Nguyễn Thị T Năm sinh VN.0055.7 Nguyễn Văn C 1970 Quan hệ với BN Con - Bênh nhân Đối tượng nghiên cứu Chồng Em trai chồng Con gái Bố Mẹ Bố chồng VN.0055.8 Nguyễn Thị H 1972 Mẹ Chồng 1993 1991 1993 2017 1968 1968 PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ GEN CỦA CÁC THÀNH VIÊN TRONG GIA ĐÌNH Gia đình người bệnh mã số VN.06 STT Mã số người bệnh VN.01 VN.02 VN.03 VN.04 VN.05 VN.06 VN.07 VN.08 VN.09 Giới tính Kết giải trình tự gen Nữ Nam Nữ Nam Nữ Nam Nữ Nam Nam c.178 C>T – dị hợp tử c.178 C>T Không phát đột biến Không phát đột biến c.178 C>T dị hợp tử c.178 C>T c.178 C>T dị hợp tử c.178 C>T c.178 C>T Gia đình người bệnh mã số Pom16 STT Mã số Đột biến Đồng/dị hợp tử Pom 16.1 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 16.2 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 16.3 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 16.4 E14 bình thường Pom 16.5 c.1933G>C(p.Asp645His) Pom 16.6 E14 bình thường Pom 16.7 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 16.8 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 16.9 E14 bình thường 10 Pom 16.10 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Dị hợp tử 11 Pom 16.11 E14 bình thường 12 Pom 16.12 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử 13 Pom 16.13 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử 14 Pom 16.14 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Gia đình bênh nhân mã sơ Pom17 STT Mã số Đột biến Đồng/dị hợp tử Dị hợp tử Pom 17.1 c.1933G>C(p.Asp645His) Pom 17.2 E14 bình thường Pom 17.3 c.1933G>C(p.Asp645His) Pom 17.4 E14 bình thường Pom 17.5 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 17.6 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 17.7 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 17.8 E14 bình thường Pom 17.9 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử 10 Pom 17.10 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Dị hợp tử Gia đình người bệnh mã số Pom18 STT Mã số Đột biến Đồng/dị hợp tử Pom 17.1 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 17.2 E14 bình thường Pom 17.3 c.1933G>C(p.Asp645His) Pom 17.4 E14 bình thường Pom 17.5 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 17.6 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Pom 17.7 c.1933G>C(p.Asp645His) Dị hợp tử Dị hợp tử Gia đình người bệnh mã số Pom19 STT Mã số Pom 19.0 Pom 19.1 Pom 19.2 Pom 19.3 Pom 19.4 Pom 19.5 Pom 19.6 Pom 19.7 Pom 19.8 10 Pom 19.9 11 Pom 19.10 12 Pom 19.11 13 Pom 19.12 Đột biến c.1735G>A(P.E579K) c.2040+1G>T c.2040+1G>T E14 bình thường, c.1735G>A(P.E579K) E14 bình thường, c.1735G>A(P.E579K) c.2040+1G>T E14 bình thường, E12 bình thường E14 bình thường, c.1735G>A(P.E579K) E14 bình thường, E12 bình thường E14 bình thường, E12 bình thường E14 bình thường, E12 bình thường E14 bình thường, E12 bình thường E14 bình thường, E12 bình thường E14 bình thường, E12 bình thường STT Mã số Gia đình người bệnh mã số Pom20 Đột biến Đồng/dị hợp tử Đồng/dị hợp tử dị hợp tử dị hợp tử dị hợp tử dị hợp tử dị hợp tử dị hợp tử c 1411_1414del(p.Glu471Profs*5) E9 dị hợp tử Pom 20.0 c.1735G>A(C579K)dị hợp E12 Pom 20.1 c.1735G>A(E579K) dị hợp tử Pom 20.2 c.1735G>A(E579K) dị hợp tử Pom 20.3 E12, E9 bình thường Pom 20.4 c.1411delGAGA dị hợp tử Pom 20.5 c.1735G>A(E579K) dị hợp tử Pom 20.6 E12, E9 bình thường Pom 20.7 c.1411delGAGA dị hợp tử Gia đình người bệnh mã số Pom21 STT Mã số Đột biến Đồng/dị hợp tử Đồng hợp Pom 21.0 c.625T>C (p.Tyr209His) Pom 21.1 E3 bình thường Pom 21.2 E3 bình thường Pom 21.3 c.625T>C (p.Tyr209His) dị hợp tử Pom 21.4 c.625T>C (p.Tyr209His) dị hợp tử Pom 21.5 E3 bình thường Pom 21.6 c.625T>C (p.Tyr209His) dị hợp tử Pom 21.8 c.625T>C (Y209H) dị hợp tử Pom 21.9 c.625T>C (p.Tyr209His) dị hợp tử 10 Pom 21.10 E3 bình thường 11 Pom 21.11 c.625T>C (p.Tyr209His) dị hợp dị hợp tử 12 Pom 21.12 E3 bình thường 13 Pom 21.13 c.625T>C (Y209H) dị hợp dị hợp tử Gia đình người bệnh mã số Pom22 STT Mã số Đột biến Đồng/dị hợp tử Pom 22.0 c.1933G>C(p.Asp645His) đồng hợp tử Pom 22.1 c.1933G>C(p.Asp645His) dị hợp tử Pom 22.2 c.1933G>C(p.Asp645His) dị hợp tử Pom 22.3 c.1933G>C(p.Asp645His) dị hợp tử Pom 22.4 c.1933G>C(p.Asp645His) dị hợp tử Pom 22.5 c.1933G>C(p.Asp645His) dị hợp tử Pom 22.6 E14 bình thường Pom 22.7 c.1933G>C(p.Asp645His) dị hợp Pom 22.8 E14 bình thường dị hợp tử Gia đình người bệnh mã số VN0055 STT Mã số Đột biến Đồng/dị hợp tử VN.0055.0 VN.0055.1 c.2040+1G>T dị hợp tử VN.0055.2 c.2040+1G>T dị hợp tử VN.0055.3 bình thường VN.0055.4 c.2040+1G>T dị hợp tử VN.0055.5 c.2040+1G>T dị hợp tử VN.0055.6 bình thường VN.0055.7 c.2040+1G>T VN.0055.8 bình thường dị hợp tử PHỤ LỤC Hình ảnh điện di exon genGAA Hình ảnh điện di Exon 2.1 (420bp) Hình ảnh điện di Exon 2.2 (424bp) Hình ảnh điện di Exon (343bp) Hình ảnh điện di Exon 17 Exon 4,5 (618bp) Hình ảnh điện di Exon (249bp) Hình ảnh điện di Exon 7,8 (441bp) Hình ảnh điện di Exon (333bp) Hình ảnh điện di Exon 10,11 (450bp) Hình ảnh điện di Exon 12 (502bp) Hình ảnh điện di Exon 13 (287bp) Hình ảnh điện di Exon 14 (286bp) Hình ảnh điện di Exon 15 (343bp) Hình ảnh điện di Exon 16 (415bp) Hình ảnh điện di Exon 6, exon 15, exon 20 (416bp) PHỤ LỤC Một số hình ảnh kết giải trinh tự genGLA Hình ảnh biến thể 5’UTR -12 G>A Hình ảnh biến thể 5’UTR -10 C>T Hình ảnh biến thể IVS1 +17 A>G Một số hình ảnh kết giải trinh tự genGAA Hình ảnh SNP 2065G>A (p.Glu689Lys) z Hình ảnh đột biến 2818-2819delTinsCAG Hình ảnh đột biến c.2173C>T p.Arg725Asn Hình ảnh đột biến c.625T>C p.Tyr209His Hình ảnh đột biến c.1735 G>A p.Glu579Lys Hình ảnh đột biến c.736delT p.Leu246fs