NGHIÊN CỨU TRƯỜNG HỢP NHIỄM KST SỐT RÉT TRÊN KHỈ TẠI TỈNH BÌNH PHƯỚC

WHO: 30 tác nhân trnhiễm mới, 75% nguồn gốc từ đvậtngười SARS, cúm A týp H5N1, H1N1, CTM… Liên quan: môi trường, phtục, tập quán sinh hoạt, canh tác, tính chất lao động, khả năng pchống dịch bệnh ở VN. Đặc biệt khu vực NB LĐ hội đủ các đk để các bệnh từ động vật có khả năng lây truyền và gây bệnh cho người. Nhiều báo cáo: KSTSR gây bệnh SR cho khỉ, khả năng lây nhiễm cho người cao Việt Nam 2004: Viện sốt rét KST CT TƯ phát hiện 3 mẫu dương tính (người) P. knowlesi = PCR Tiếp cận, XD các đề tài NCKH về các bệnh lây truyền động vật người, bệnh do NKS gây cho người. VSR KST CT TP. HCM tiến hành đề tài NC trường hợp nhiễm KSTSR trên khỉ tại tỉnh Bình Phước.

NGHIÊN CỨU TRƯỜNG HỢP NHIỄM KST SỐT RÉT TRÊN KHỈ TẠI TỈNH BÌNH PHƯỚC Viện Sốt rét - KST - CT TP Hồ Chí Minh ĐẶT VẤN ĐỀ      WHO: 30 tác nhân tr/nhiễm mới, 75% nguồn gốc từ đ/vật-người SARS, cúm A týp H5N1, H1N1, CTM… Liên quan: môi trường, ph/tục, tập quán sinh hoạt, canh tác, tính chất lao động, khả p/chống dịch bệnh VN Đặc biệt khu vực NB - LĐ hội đủ đk để bệnh từ động vật có khả lây truyền gây bệnh cho người Nhiều báo cáo: KSTSR gây bệnh SR cho khỉ, khả lây nhiễm cho người cao ĐẶT VẤN ĐỀ (tiếp)  Việt Nam 2004: Viện sốt rét KST - CT TƯ phát mẫu dương tính (người) P knowlesi = PCR  Tiếp cận, XD đề tài NCKH bệnh lây truyền động vật - người, bệnh NKS gây cho người  VSR - KST - CT TP HCM tiến hành đề tài NC trường hợp nhiễm KSTSR khỉ tỉnh Bình Phước Mục tiêu: Xác định loài KSTSR khỉ bị nhiễm bệnh sốt rét PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Kỹ thuật xác định KSTSR:  KHV: Mẫu máu từ khỉ bị SR h.Phước Long (BP), soi phát KSTSR (giọt mỏng giọt dày) thấy dương tính, khó x/định xác loài KST  PCR lồng (Nested PCR) theo phương pháp Mallika Imwong, 2009(6) Mồi: rPLU1, rPLU5, PkF 1060, PkF 1140, PkF1550(6) Control: P.knowlesi (H strain) P.cynomolgi (Cambodia strain) PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU (tiếp) Giải mã trình tự gen (sequencing)  Cloning đoạn ADN gắn vào VK E.coli, đoạn chèn ứng với P knowlesi được xác định Geno Screen, trình tự nucleotide dịng sau phát triển thành clone  Clone được kiểm tra lại PCR có nhận đoạn gen hay khơng, clone nhận được giải trình tự KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU  Hình thể giống P.fal g/đoạn sớm: hồng cầu khơng biến dạng, thấy rõ hạt HC, thể nhẫn nhỏ, mảnh KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU (tiếp) Giống P.malariae: dải khăn quàng, nguyên sinh chất đều, dày đặc; sắc tố màu vàng nhạt phân tán rộng thể tư dưỡng muộn KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU (tiếp) Thể phân liệt thể giao bào với sắc tố thô, rải rác, phân bố phía ngồi KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU (tiếp)  Kết PCR Âm tính với P.knowlesi P.cynomolgi  Kết Sequencing: Sequence với Cytochrom B theo phân đoạn gen 810 bp 816 bp, kết sequence phù hợp với SSJ2010, A number GU 930214.1, GU 930216 Sequence Pubmid: 96% tương đồng với P inui, A number AB 444113.1 BÀN LUẬN  Ở người:4 loài KSTSR:̀ P falciparum, P vivax, P malariae, P ovale  Phần lớn P falciparum P vivax tuỳ vùng địa lý mà tỷ lệ 02 loại gây nhiễm người khác  Ở loài linh trưởng: có 26 lồi, KSTSR khỉ liên quan gần với loài gây bệnh người: P simium, P brazilianum, P cynomolgi, P inui P knowlesi BÀN LUẬN (tiếp)  khỉ: nuôi nhà hàng Phước Long: đuôi lợn (pigtailed macaques), đuôi dài (long-tailed macaques) ĐN Á  Triệu chứng ban đầu: số 1: rét run, tự lấy chăn đắp lên mình, hoạt động chậm chạp, biếng ăn Số 2: mập mạp, linh hoạt, khơng rét run BÀN LUẬN (tiếp)  Kính HV: giọt dầy mỏng hình thể giống P.fal g/đoạn sớm: HC không biến dạng, thấy rõ hạt HC, thể nhẫn nhỏ, mảnh P.knowlesi  Giống P.malariae: NSC đều, dày đặc, sắc tố phân tán rộng, màu vàng nhạt thể tư dưỡng muộn hay dải khăn quàng thể phân liệt thể giao bào với sắc tố thơ, rải rác, phân bố phía ngồi BÀN LUẬN (tiếp)  PCR: âm tính, giống kết Đơn vị NCLS ĐH Oxford, tp.HCM LSNĐ Vương Quốc Bỉ Khẳng định KST khỉ P knowlesi  Viện LSNĐ, Vương Quốc Bỉ, giải trình tự gen (sequencing) thực đồng thời kỹ thuật Real-Time PCR BÀN LUẬN (tiếp)     Mỗi loại KST có đồ gen (gene map), so sánh trình tự nhận được với đồ gen Chuỗi NNN trình tự xi được sửa thơng tin từ trình tự ngược: A-T, GC, đoạn thừa được cắt bỏ So sánh trình tự thu được với NH gen (Gene Bank) Thơng thường, trình tự phải giống 100% so với Gen Bank khẳng định được Control P knowlesi khơng tương thích: âm tính Trong mẫu NC: nucleotid khác biệt, tương thích 96% với P inui BÀN LUẬN (tiếp)  Nuôi cấy Labo: KST khỉ rửa lần= môi trường nuôi cấy RPMI 1640 với 20% huyết AB người KST khơng nhân lên xâm nhập HC khơng tương thích nhóm máu nên HC bị ngưng kết Sau ngày nuôi KST lụi chết thấy sắc tố KST  2000 - 2002, NC Malaysia: 208 ca P.malariae = KHV; PCR lồng: 120 ca xác định nhiễm P.knowlesi 2004, Borneo (Malaysia) nhiều người được phát nhiễm P knowlesi  Cùng thời gian: phát tr/hợp nhiễm P.knowlesi rừng biên giới Thái Lan-Myanmar tr/hợp khác Philippines BÀN LUẬN (tiếp)  SR truyền từ khỉ - người người - người, trung gian muỗi?  Borneo (Malaysia) P knowlesi : lây truyền người-người, khỉngười, trung gian truyền bệnh muỗi? Chưa được CM?  Muỗi An.leucosphyrus truyền KST P knowlesi  VN: cộng đồng dân cư sống: rừng, bìa rừng, giao lưu rừng núi, vùng SR lưu hành, nhiều động vật linh trưởng sống (Bình Phước, Phú Quốc…) có nguy nhiễm KSTSR từ động vật Đặc biệt, P knowlesi - có mặt quốc gia ĐNÁ VN BÀN LUẬN (tiếp)  Khá́ nh Phú́ (Khánh Hòà) 2002: muỗi Anopheles dirus nhiễm thoa trùng khỉ tuyến nước bọt với tỷ lệ tương đối cao (1 -2%) Nhiễm bệnh cho người? Và P.cynomolgi, P.inui?  Anopheles dirus - loài véc tơ chính sốt rét phát hiện dương tính với P cynomolgi   Primer của P.vivax cho phản ứng chéo với P.cynomolgi KSTSR/ động vật hoang dại lây truyền sang người hay không, loài nào, véc tơ nào truyền còn chưa được sáng tỏ: chiến lược loại trừ bệnh sốt rét cũng cần phải cân nhắc khía cạnh này KẾT LUẬN Bằng kỹ thuật giải trình tự ADN sequencing xác định khỉ Phước Long (BP) nhiễm KSTSR Plasmodium inui KIẾN NGHỊ Nghiên cứu tiếp để xác định có lan truyền ký sinh trùng sốt rét từ động vật sang người  Xin chân thành cảm ơn!