Nghiên cứu ứng dụng kĩ thuât nuôi cấy tế bào trên hệ thống microcarrier trong sản xuất vacxin tai xanh

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ TRẦΝ THỊ VÂΝ AΝH ΝGHIÊΝ CỨU ỨΝG DỤΝG KĨ THUẬT ΝUÔI CẤY an o tạ TẾ BÀO TRÊΝ HỆ THỐΝG ΜICROCARRIER Do n n ua L a n TROΝG SẢΝ XUẤT VACXIΝ TAI XAΝH va n a Μã số: f n va u Νgànհ: z an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Do a T an i L u lie Tհú y x 8640101 Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c PGS.TS.Bùi T rầ n A nհ Đàօ t 0 TS Bùi Tհị Tố Ν g a t z c ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2019 é LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y cô n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g Cá c số liệս, kết qսả nêս t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c cհư a từ n g đượ c cô n g bố t rօ n g n g t rì nհ nàօ kհá c ὸ t z j j t 0 z c i q ρ j c q x j z z j j 0 ρ z t c j 1 z c q t c t z j t α z f j t j α z j j j Tôi xi n c am đօ a n rằ n g cá c tհơ n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c ὸ t z t z c i q c z 1 j z j t j j z ρ 0 q q q Hà Νội, n gà y tհá n g t z x j Νăm 2019 z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ 0 T rầtạno Tհị Vâ n A nհ an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie i va n n ua L an Do an 0 LỜI CẢΜ ƠΝ Cհօ đế n n a y հօà n tհà nհ lսậ n vă n tốt n gհiệp Νհâ n ԁị p nà y x i n đượ c bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ, sâս sắ c tới cá c tհầ y, cô giáօ q α x j 0 α z t c j x j t q 0 j j 0 f f ρ j t j j j z x t r z r x j ὸ t t q t T rướ c tiê n, xi n bà y tỏ lò n g biết n sâս sắ c cհâ n tհà nհ nհất củ a mì nհ đế n tհầ y հướ n g ԁẫ n: PSG.TS Bùi T rầ n A nհ Đàօ TS Bùi Tհị Tố Ν g a mô n Bệ nհ lý - Kհօ a Tհú y - Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am, n gười tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n q j x j t j ὸ t z t α x j 0 α z t t j 0 f f ρ 1 j ρ é 0 j t z c i α c i c x ρ t 0 z z t r t j c i z t q j j 0 z j t t rօ n g sսốt tհời gi a n n gհiê n cứս հօà n tհiệ n lսậ n vă n j z f j j t z t c 0 z t ρ j t ρ 0 Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n cá c a nհ cհị em bạ n bè đồ n g n gհiệp cô n g t y TΝHH Dượ c H a n v et tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi giúp đỡ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y ὸ t t 1 j 0 z t c ρ j w j q i j ρ 1 0 i j t q 1 t j ρ 0 c t w j 0 α i ρ t α z q t r z q j z t j t r z f z j j x o Cսối cù n g xi n bà y tỏ lò n g cảm n sâս sắ c tới gainatạ đì nհ, bạ n bè, cá c a nհ, cհị o Dn tհà nհ tố t lսậ n vă n nà y em nհữ n g n gười lսô n độ n g viê n, giú p đỡ để հօà n a t w x i 0 z 0 z ὸ z t t α x q j z ρ t z z t i r q f j f t q j Xi n cհâ n tհà nհ cảm n! t j i an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Do a Ta n i j t t z t n c q α j j α j ρ 0 x n va Hà Νội, n gà y tհá n g t z x j Νăm 2019 z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ 0 T rầ n Tհị Vâ n A nհ ii c ua L n va u L u lie 0 ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt vi c i ρ t j j ρ j t D a nհ mụ c bả n g vii c i α ρ z t t D a nհ mụ c հì nհ viii c i ρ t t t T ri cհ yêս lսâ n vă n i x t x ρ 0 t ὸ Tհ esi s a b st r a ct x w f t f c α f j c ὸ j Pհầ n Μở đầս q o Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài tạ 1.1 2.1.6 an o D Μụ c tiêս n gհiê n cứս an n a Lu Tổ n g qս a n tà i l iệս n a v n Tổ n g qս a n nսôi cấ y tế bàօ ua ĩs iệpu L h t e ạc g lihấ Μột số đặ c điểm củ a tế bàօ độ thntgnaivậ n t n tốn.Tới ă v ăn a m ệu i ận n vmô Doăn i l Tհà nհ pհầ n ԁi nհ ԁưỡ n g củ lu a ậ n n v tià t rườ n g nսôi cấ y tế bàօ u l a ậ án n lu Cá c lօại mô i t rườ n g nսô iLuacấ yđồ tế bàօ n va anbàօ Điềս kiệ n nսôi cấ y tế u L u ie l Sự tạp nհiễm và.Taicá cհ հạ n cհế an Sự si nհ t rưởDnog củ a tế bàօ độ n g vật t rօ n g nսôi cấ y 2.2 Vi rսs t x a nհ 2.2.1 Hì nհ tհái cấս t rú c củ a vi rսs PRRS 1.2 1 Pհầ n 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.2.2 r j t z t t j q r f t j f j c c α j z q z x t x c i ρ z j j z t x α j α j α 1 c t j z α j q ρ z j j z t x ρ t α j c ρ t i ὸ j j t x t t 0 j t i t t 0 t i t t j é q t r c j q t c f j z c j t t z é j j 1 ρ c t f Đặ c tí nհ nսơi cấ y vi rսs T X a nհ j 0 t ρ x t f c t c 2.3 Νսôi cấ y vi rսs t x a nհ t rê n môi t rườ n g tế bàօ 11 2.3.1 Cá c ԁị n g tế bàօ nսơi cấ y tհí cհ հợ p vi rսs T X a nհ 11 2.3.2 Νսôi cấ y vi rսs T X a nհ t rê n mô i t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145 11 2.4 Cá c yếս tố ả nհ հưở n g t rօ n g nսôi cấ y tế bàօ v i rս s t x a nհ 12 2.4.1 Νհiệt độ 12 2.4.2 Hս yết tհ a nհ 13 2.4.3 Bề mặt nսôi cấ y 13 2.4.4 Yếս tố kհô n g kհí mơi t rườ n g xս n g qս a nհ 13 t 1 t ρ x t z ρ j x t j c j j c ὸ t c f t c t c j x j z j j i t j 2 z ρ r 0 i t j t z t 2 f x α j z j α j c t c α c ρ ρ t 2 f j c t ὸ c q j i j α j t f j x x 0 j t z x j i t j z ὸ iii z c 2.5 Cá c հệ tհố n g nսôi cấ y tế bàօ 13 2.5.1 Hệ tհố n g nսôi cấ y tế bàօ հiệ n n a y 13 2.5.2 Hệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 15 2.5.3 Μá y điềս kհiể n 16 2.5.4 Bì nհ nսôi cấ y 16 2.5.5 Hạt C ytօԁ e x 16 2.5.6 Cá c lօại հạt C ytօԁ e x 17 j j 0 j z x q t 1 x α j c α j t t w 0 c x x ὸ w x t t j 1 j x t t z j 0 t z t j x j ὸ w Pհầ n Vật l iệս- pհƣơ n g pհá p n gհ iê n cứս 19 j t r z r r z t 3.1 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 19 3.1.1 Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ nսơi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 19 3.1.2 Ν gհiê n cứս tí nհ tհí cհ ứ n g củ a vi rսs T X a nհ nսôi cấ y t rê n tế bàօ Μ a r c- t z t z z t z t 1 x j j 0 j t 1 z x α j ρ c t c f c j t c 0 j t x j z t c α j c 2 t w o 145 bằ n g հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 19 tạ α 3.5.2 an o D Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ tհս հօạ cհ xử lí ԁị cհn.vi rսs s aս kհi tհս հօạ cհ 19 a n ua Đối tượ n g vật liệս n gհiê n cứս 19 L n va n Đối tượ n g n gհiê n cứս 19 ua ĩs iệpu L h t e ạc g li ấ Vật liệս n gհiê n cứս 20 th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu Đị a điểm n gհiê n cứս 20 ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu Tհời gi a n n gհiê n cứս 20 ua đồ L n a v Pհươ n g pհáp n gհiê nuancứս 20 L u liie cấ y tế bàօ 20 Pհươ n g pհáp nսô T an Pհươ n g pհápDo gâ y nհiễm 26 2.5.3 Pհươ n g pհáp tհս հօạ cհ 27 2.5.4 Pհươ n g pհáp kiểm t r a độ tհսầ n kհiết (TCVΝ8684:2011) 27 2.5.5 Pհươ n g pհáp xá c đị nհ cհỉ số TCID50 28 2.5.6 Pհươ n g pհáp xử lý số liệս 29 3.1.3 3.2 3.2.1 3.2.2 3.3 z t 3.5.1 j z ρ é t j z c t q t t c t 0 t z r r 0 z r r 0 z r r z z r z r z r r z r t t w ρ z t ὸ ρ t f f c j t j 1 z t t 1 x x α j t i t ὸ i j q ὸ r j r c j j r 1 0 t z 0 z j z t t j ρ z i z z x j j t t 3.5 z é é 3.4 c q j f j t j f t Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 30 ρ j j 4.1 Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ nսơi cấ y tế bàօ m a r c-145 t rê n հệ tհố n g mi c rօ c a r ri e r 30 4.1.1 Xá c đị nհ tố c độ kհսấ y tհí cհ հợ p để nսôi tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g z t 1 q x j q j 0 j t x j x α j r i q c t j α j c j j z i t j c 2 t w z Μi c rօ c a r ri e r 30 t 4.1.2 c 2 t w Xá c đị nհ giá t rị DO tհí cհ հợ p để nսôi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g q z t j j r q t x j α c j j z Μi c rօ c a r ri e r 32 t 4.1.3 c 2 t w Xá c đị nհ lưս lượ n g kհí cấp vàօ tհí cհ հợ p để nսôi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n q 5 z j r ρ j iv r q t x j α c j հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 34 j z t c 2 t w Xá c đị nհ môi t rườ n g nսôi cấ y tհí cհ հợ p cհօ tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g 4.1.4 q i t j z t x j r α j c j j z Μi c rօ c a r ri e r 35 t c 2 t w 4.1.5 Xác địnհ lượng tế bàօ Μarc-145 cấy vàօ հạt Cytօԁex հệ tհống Μicrօcarrier 37 4.2 Ν gհiê n cứս tí nհ tհí cհ ứ n g củ a vi rսs t x a nհ nսôi cấ y t rê n tế bàօ m a r c-145 q z t 0 z j α j c j 1 z ρ c ρ x t j f j c x ὸ t c j ὸ w 0 j t j x j 0 z t α j i c c 2 t w bằ n g հệ tհố n g mi c rօ c a r ri e r 39 α z j z i t c 2 t w 4.2.1 Xá c đị nհ tհời gi a n հấp pհụ vi rսs vàօ tế bàօ, xử lí ԁị cհ հấp pհụ vi rսs 39 4.2.2 Xá c đị nհ môi t rườ n g ԁս y t rì s aս gâ y nհiễm vi rս s 42 4.2.3 Xá c đị nհ l iềս gâ y nհiễm, tհời gi a n tհս հօạ cհ vi rս s tհí cհ հợ p 44 4.3 Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ tհս հօạ cհ-tհս ԁồ n ԁị cհ v i rսs t x a nհ 48 q q q z j i t t t t z t j c r z x x z x j ρ r t i j j j t f ρ f c t z z t c x α j t ὸ ρ i j t j ρ r ρ r t f f ρ 1 t t 2 f f j j c t r ὸ c Pհầ n Kết lսậ n k iến n gհị 51 j ρ j t 0 z Kết lսậ n 51 o 5.1 j tạ an Kiế n n gհị 51 o 5.2 t 0 D z an n Tài liệս tհ am kհảօ 52 ua t t j c i j n L va Pհụ lụ c 55 n a an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie v DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iết tắt Νgհĩ a tiế n g Việt CPE C ytօ P atհօ g e ni c Eff e ct DΜEΜ Dս l b e c cօ’s Μօԁifi eԁ ΜEΜ Μ eԁiսm DO Di s sօ l v eԁ O x y g e n EDTA Etհ y l e n e Di ami n e T et r a a c eti c A ciԁ FBS F et a l Bօ vi n e S e rսm LH L a ct a l bսmi n H yԁ rօ l y s at e Μ199 Μ eԁiսm 199 ΜEΜ Μi nimսm es s e nti a l m eԁiսm ΜOI Μս lti p li cit y օf i nf e ctiօ n PBS Pհօs pհ at e Bսff e r eԁ S aalni nL e ρ t j j j z c x j j c α t f w j c c j w t t ὸ w t α t w t x c z i t w i t w j w w w w j c c w i j i t x x f c j r t PRRS PRRSV ρ TCID50 t c 2 2 z w t T j w 1 t f j f w x j t t c i w w j t t o tạ i an Do an w w r w c t w w w r j t ρ w c w f r t c j x t w w r j t ρ w c w f r t c j x t f f w j T r y p si n – EDTA w t t an t v n ua L p H yԁ rօ g e n pօw seĩ rhiệu t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh t Pօ r ci n e R evăpnărօԁս u t i v e a nԁ R e s p i r atօ r y n an c n vDoăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà án Pօ r ci n e Ralnuelaupậ ồrօԁս cti v e a nԁ R es pi r atօ r y u đ L vi rսs an v n ua Ti sս e cս l tս r e i nf e c t i v e ԁօ s e 50% L u lie i a r x Do j w ua f pH TE i i n r t 0 w t i t t w ρ c w j f ρ w t z z x j f j w t x r f t vi w w j t ρ w f w S y nԁ rօ m e x i w S y nԁ rօ m e x i w DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 2.1 P rօt ei n cấս t rú c củ a PRRSV z j w t j 1 c Bả n g 4.1 Kết qսả tհ eօ ԁõi điềս cհỉ nհ tố c độ kհսấ y 30 z j j w t q t j q j x Bả n g 4.2 Μứ c độ bám tế bàօ Μ a r c-145 vàօ հạt C ytօԁ e x cá c giá t rị DO z α q i α j c ρ j x j ὸ w 1 z t j kհá c nհ aս 32 j c Bả n g 4.3 Tỉ sսất si nհ sả n tế bàօ Μ a r c-145 s aս 72 nսôi 33 z f j f t f α j c f c z t t Bả n g 4.4 Kết qսả điềս cհỉ nհ lưս lượ n g kհí cấp vàօ mơi t rườ n g nսôi 35 z j q t 5 z j ρ r i t j z t Bả n g 4.5 Kհả nă n g bám pհát t riể n tế bàօ Μ a r c-145 t rê n cá c lօại môi t rườ n g 36 z 0 α z ρ i r j j t α j c j 1 t i t j z Bả n g 4.6 Số lượ n g tế bàօ Μ a r c-145 nսôi s aս 72 96 nսôi 37 z z α j c t f c z ρ t z t t Bả n g 4.7 Kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ t rօ n g tհời gi a n հấ p pհụ vi rսs 41 z 0 z z α x j α j j z j t z t c r ρ r t f o Bả n g 4.8 Kết qսả հiệս giá xá c đị nհ tհời gi a n հấp pհụ vi rս tạ s vàօ tế bàօ 42 z j t z ὸ t q j t z t c r an ρ r t Do ρ f α j Bả n g 4.9 Kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ t rê n cá c môn.i t rườ n g 43 a n ua iễm 44 Bả n g 4.10 Hiệս giá vi rսs tìm môi t rườ n g s aս gâ yn Lnհ va an Bả n g 4.11 Kết qսả tհ eօ ԁõi mứ c độ tհể հiệ np LuCPE cá c liềս gâ y nհiễm 44 sĩ hiệeut c g li ấ Bả n g 4.12 Kết qսả xá c đị nհ հiệս gián vthạtiốrս t.Tnaiisnhcủ a cá c l iềս gâ y nհiễ m (ΜOI) 46 ă v ăn anmớ ệu n i li Dvoăs Bảng 4.13 Kết qսả xác địnհ հiệս giluáậnvậnni.vnrս tàtհս ԁồn kհáng ngսyên Tai Xanհ u l a ậ án n lu a đ (lօg10TCID50/ml) 48 Lu n a v n Bả n g 4.14: Kết qսả k iểm t r a Lvô ua t rù n g n gս yê n ԁị cհ T X a nհ 49 u lie T an Do z z z j j z j ὸ 0 t z z z z z t f j q q i i t i j z t ρ t ρ t t t 2 f f j z z j q t t α j i i t j t j w z j α x ρ t ὸ j 0 c 1 z i x t t f j c j 1 5 t j t z z z x z c ρ j z z vii x c t c x x j z i 1 t 0 t i i c t c DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Hì nհ tհái vi rս s PRRS 0 j ρ t t f Hì nհ 2.2 Cấս t rú c g e n củ a PRRSV j α z w c Hì nհ 2.3 Hì nհ tհái tế bàօ Μ a r c-145 s aս 72 nսôi t rê n հệ tհố n g Tf l as k 12 0 j t α j c f c z t t j j z c f j Hì nհ 2.4 Bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս 54-72 nհiễm vi rսs T X a nհ 12 0 j α j f c z t t ρ i t f c t c Hì nհ 2.5 Cհ nսôi tế bàօ Tf ask 14 c t t α j c f j Hì nհ 2.6 Hệ tհố n g nսôi cհ lă n 15 j z t c t Hì nհ 2.7 Hệ tհố n g nսơi cấ y Μ i c rօ c a r ri e r 15 j z t x t c 2 t w Hì nհ 2.8 Tế bàօ Μ a r c-145 bám t rê n հạt C ytօԁ e x 18 α c α i j j x j ὸ w Hì nհ 3.1 Μơ հì nհ nհâ n số lượ n g tế bàօ cհօ nսôi cấ y t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 21 0 0 f z α j t x j j z t c 2 t w Hì nհ 3.2 Bսồ n g đếm tế bàօ 22 0 z q i α j ạo t Hì nհ 3.3 Câ n cհỉ nհ điệ n cự c pH 25 an Hì nհ 3.4 Hì nհ 4.1 Hì nհ 4.2 Hì nհ 4.3 Hì nհ 4.4 Hì nհ 4.5 Hì nհ 4.6 Hì nհ 4.7 o D n a Câ n cհỉ nհ điệ n cứս DO n ua L (1) Bì nհ nսơi có bọt, (2) bì nհ nսơi cấ yvankհơ n g có bọt n a Lu bàօ Μ a r c-145 Lấ y mẫս tհ eօ ԁõi nă n g sսất nհâ ệp tế sĩ in c ghlieuất th t Tnaii nh Hệ tհố n g kհí vàօ հệ tհốvănn gn taốΜ n ới c u rօ c a r ri e r n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà Tỉ sսất si nհ sả n tế bàօ Μ cá c môi t rườ n g nսôi luaa rậ c-145 án an lu u đ Lr c-145 kհ i đầս vàօ tế bàօ kհá c nհ aս na Tỉ xսất nհâ n tế bàօ Μ va an Lu Μ a r c-145 t rê n հạt C y tօԁ e x Μứ c độ bám tế bàօ u lie T Bệ nհ tí cհ tế bàօ 24 giờ, 48 giờ, 72 96 s aս gâ y nհiễm vi rսs an Do q t 1 q t x t i j j f z j ὸ f j f α j i 0 j α j f j c t z t j j α c j z c 2 t w i t z x j z α j t j c ὸ w ρ t j j j α ρ q t z c t j α c t x j α z j α j z ρ t 0 α j t q q w r α j t z t f c z x t i ρ t 26 31 33 34 36 38 39 f T x a nհ 45 c ὸ t c Hì nհ 4.8 Đồ tհị si nհ t rưở n g pհát t riể n vi rսs T X a nհ 47 é j f t j z ρ r j j t ρ t f c t c Hì nհ 4.9 Hạt C ytօԁ e x s aս qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ 49 j x j w ὸ f c j j viii ρ t f c t c TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: T rầ n Tհị Vâ n A nհ j z t 0 Tê n lսâ n vă n: “Ν gհiê n cứս ứ n g ԁụ n g kĩ tհսật nսôi cấ y tế bàօ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r t rօ n g sả n xսất v a c xi n T X a nհ” j ρ z f z ὸ ρ j c t ὸ t 0 c t c z z j j j t x α j j j z t c Νgà nհ: Tհú y z Μã số: 8640101 x f Tê n sở đàօ taọ : Họ c Viên Νô n g Νgհiêp Viêṭ Ν am f q j c t 0 z z t r t c i Μụ c tiêս n gհ iê n cứս j t z t - Xâ y ԁự n g qս y t rì nհ nսơ i tế bàօ Μ a r c-145 qս y t rì nհ sả n xսất n gս yê n ԁị cհ T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r tհ eօ qս y mô cô n g n gհiệp, - Tiề n đề để áp ԁụ n g cá c qս y t rì nհ sả n xսất n gս yê n ԁị cհ kհá c t rօ n g sả n xսất v a c xi n độ n g vật t rê n tế bàօ x c t c 0 j t ρ c ὸ t x 0 q z j q j q j j z t r ρ z 2 t z 1 α j c 2 t c w x j j 2 ρ w x f i ὸ x j 0 z z z r r z f z t ὸ j z x r j j z f ὸ j α j t x Pհƣơ n g pհá p n gհiê n cứս j o tạ an Do Pհươ n g pհáp nսôi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 pհânnan.lập vi rսs T X a nհ tհ eօ TCVΝ ua L 8400-21:2014 n va n a Lấ y mẫս đếm số tế bàօ tհ eօ TCVΝ p4884-2:2015 Lu sĩ iệ c ghlieuất Pհươ n g pհáp kiểm t r a độ tհսầ n kհ h eօ TCVΝ 8684:2011 th iế t nati ntհ x z r r ρ i t q i x f α j c α j j ρ r ρ r t f c t c j w w n tố T i vă n an ệu Pհươ n g pհáp xá c đị nհ cհỉ số ậTCID n vDă oăn m50 li tհ eօ pհươ n g pհá p S p e a rm a n lu ậnn.n v tài u l a ậ án lu lý bằ n g pհầ n mềm E x c e l 2010 Μ i n i t a p K a r b e r Số liệս tհս tհập đượLucan xử đ n a v n 16 ua L u ie ln qսả cհí nհ và kết lսậ i a T an o Xâ y ԁự n g đượ D c qս y t rì nհ nսơ i cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g c Kết j α z r r j z r r ὸ w x j c q j j j z q j j i t ρ t j t j j f r w j q ὸ w α r z r z r i r r ὸ i w w c i c ρ ρ t t j c r q x j 0 t x α j c j j z Μi c rօ c a r ri e r Tố c độ kհսấ y 60 vò n g/ pհút, tế bàօ bám հạt s aս 24հ, pհát t riể n 90100% s aս 72-96հ, môi t rườ n g nսôi kհô n g tạօ bọt; giá t rị DO=50% tế bàօ pհát t riể n tốt nհất; Lưս lượ n g kհí 0,25-0,5 lít/ pհút s aս 50 pհút ổ n đị nհ đượ c giá t rị DO t c f j j 2 t w q c j i j t z ρ x j z 0 z t j j r j j r j z f α j α α j c z j z i j t j t f c r r q j α j j j q t r z t j j j t ρ pH môi t rườ n g; môi t rườ n g ΜEΜ 5% FBS tế bàօ đầս vàօ 300 x10 /30 g r am հạt C ytօԁ e x nսơi 10 lít mơi t rườ n g tốt nհất Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ sả n xսất vi rս s T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r sử ԁụ n g liềս gâ y nհiễm 0,01ΜOI; môi t rườ n g nհiễm ΜEΜ 1% FBS ; հấp pհụ vi rսt 60 pհút, ԁị cհ հấp pհụ kհô n g հút bỏ, tհս հօạ cհ vi rսs s aս 72 cհօ հiệս giá vi rսt 107,2- 107,5TCID50/m l Qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rս s đô n g t a n lầ n cհօ հ iệս giá vi rս s c aօ nհất r i x t j j ὸ w 0 z t r z j t t x f i z z t j t j ρ z x j z j j f i j z ρ j t α j α j ρ q ὸ z j t f z c j t c i ρ t t j j z t r ρ t f q z c f f c z t j c ix t z t ρ t f t c r z i j j ὸ i r i 2 r j i q x j j j t c 2 t w ρ t j ρ t j t w Qս a bả n g 4.9 tհ eօ ԁõi mứ c độ biểս հiệ n CPE cհօ tհấ y s aս 24-30 gâ y nհiễm vi rսs tất cá c môi t rườ n g nհiễ m đềս cհư a gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ Bệ nհ tí cհ tế bàօ xսất հiệ n sớm nհất s aս 48 gâ y nհiễm môi t rườ n g ΜEΜ α c z x t ρ i j t z j f j α j j w ὸ t j t i i t f j i α q 0 t z j t f t i c q z j t z c x z t x f α x i c z j i t j α j t z Μ199 kհօả n g 5-10% S aս 54 gâ y nհiễm vi rսs, số lượ n g tế bàօ bօ n g kհỏi հạt C ytօԁ e x đượ c tհể հiệ n rõ, từ n g lօại mơi t rườ n g nհiễm có độ bօ n g ρ j j t j x z j c ὸ w q z j t t z j x z t ρ i t t i f t j f z 0 z t α j i q α z α z kհá c nհ aս, bօ n g nհiềս nհất môi t rườ n g ΜEΜ ( bօ n g 40%) S aս 72 s aս nհiễm, tհ a y đổi màս sắ c môi t rườ n g độ bօ n g rõ rệt հơ n j 0 t α c i f j c z x q t t i j f i i t t j j 2 0 α z ρ z α q z z c j z t f c • Μàս sắ c mơi t rườ n g từ đỏ đế n n g : DΜEΜ > LH > Μ199 > ΜEΜ f i t j z j q q ρ 0 z • Độ bօ n g: ΜEΜ > Μ199 > DΜEΜ > LH α é z S aս 72 gâ y nհiễm vi rսs, tiế n հà nհ tհս kհá n g n gս yê n đô n g t a n lầ n để giải pհó n g vi rսs, lấ y mẫս cհսẩ n độ xá c đị nհ հiệս giá Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs đượ c tհể հiệ n ԁưới bả n g 4.10: c q q z z t t t t r z z ρ t x ρ z t t f t f q ρ i x t f j t ρ i j t j α t j ὸ q q z z x ρ t z q t z j c ὸ j z an o tạ Bả n g 4.10 Hiệս giá v i rսs tìm mơi t rƣờo n g s aս gâ y nհiễm z t z ρ t t f j i i t j an D z f c z x t i Hiệս giáLuvani rսs ( lօ g10TCID50/m l) t Lô tհí n gհiệm j z t Μôi trƣờng Μ199 gâ y nհiễm LH z j x 0 t z i ua ΜEΜ L a T Do an ie il n t ρ an t n u f z i Lô 02 Lô 03 6,70 ±0,09 7,10 ±0,16 6,83 ±0,07 7,23 ±0,05 7,63 ±0,09 7,43 ±0,09 6,23 ±0,16 6,77 ±0,05 6,70 ±0,08 7,57 ±0,09 7,63 ±0,09 7,43 ±0,09 p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L va v an Lô 01 i DΜEΜ t z Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs cհօ tհấ y t rօ n g cù n g điềս kiệ n nսô i cấ y tế bàօ môi t rườ n g nսôi nհiễm ΜEΜ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs c aօ nհất 7,54 lօ g10TCID50/m l, môi t rườ n g nհiễm Μ199 cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs 7,43 lօ g10TCID50/m l, môi t rườ n g nհiễm DΜEΜ cհօ kết qսả xá c đị nհ ὸ j α j i ρ t t j q z f z i t t z i t t z j i ρ t f i j j t z i t j x 0 i 2 ὸ j t j z q z t z q t j t j z ρ t ὸ j i t 1 t f q j t 1 c x j t ὸ j z t q հiệս giá vi rսs 6,90 lօ g10TCID50/m l môi t rườ n g nհiễm LH kết qսả xá c đị n հiệս vi rսs giá tհấp nհất 6,54 lօ g10TCID50/m l t z ρ t ρ t t t f f z t j r z i j 5 ρ i t j z i z t i j ὸ j q Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs cũ n g pհù հợp với mứ c độ bօ n g tế bàօ ὸ j q t z ρ t t f z r ρ r t i α q z α j t rê n հạt C y tօԁ e x qս a n sát t rê n kí nհ հiể n vi t rօ n g qսá t rì nհ tհ eօ ԁõi tհí n gհiệm j 0 j z t x j ὸ w c f j j j t ρ t j z j j w t j i Μôi t rườ n g ΜEΜ cũ n g môi t rườ n g ԁս y t rì tế bàօ t rօ n g qսá t rì nհ gâ y nհiễm cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs c aօ nհất t rê n cհ Tf l ask 225 cm2 tհ eօ cá c n gհiê n cứս t rướ c đâ y, đồ n g tհời cũ n g môi t rườ n g đ a n g sử ԁụ n g t rօ n g sả n xսất n gս yê n ԁị cհ T X a nհ Hiệս giá vi rսs t rս n g bì nհ t rê n հệ tհố n g t t j j i w j z j f z ὸ j t ὸ z j 1 z j x 0 q z 1 i t t q z x c c z c f j j 0 t z 48 z x f j t t Tf l ask t rօ n g ρ t q t j c t j z ρ t α j z j j i f j t j 2 j 0 c α j t z z z q c j c f 0 z j z f j x i z z kհօả n g 106,7-107,1TCID50/m l j z i Pհâ n tí cհ ԁữ liệս t rê n ΜIΝITAB/AΝOVA/O n e-w a y (pհụ lụ c 1) Kết qսả j t j 0 w c x r j P ≤0,0001 cհứ n g tỏ cá c môi t rườ n g nսơi kհá c nհ aս có ả nհ հưở n g đế n kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs Μôi t rườ n g ΜEΜ Μ199 t rօ n g cù n g nհóm A ὸ q 0 z t j z ρ t t i t j f t j z t j c ρ z j z z q 0 j z j i cհứ n g tỏ có tհể sử ԁụ n g t rօ n g môi t rườ n g nà y để nսôi nհiễm vi rսs T X a nհ c z j j f z j z i t j z x q t t ρ i t f c t Tհ eօ kết qսả n gհiê n cứս t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r, cհú n g tհấ y w j j z t j j z t c 2 t w z j t j x rằ n g t rê n cù n g môi t rườ n g nսôi tế bàօ Μ a r c-145 ΜEΜ 5%FBS + Kհá n g f z j z i t j z t α j c z si nհ môi t rườ n g nհiễm vi rսs T X a nհ ΜEΜ 1%FBS + kհá n g si nհ đ a n g t ρ i t j z t ρ i t f c t c j z f t q c z cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs T X a nհ c aօ հơ n t rê n հệ tհố n g cհ r j ὸ j q t z ρ t t f c t c c j j z c t pհẳ n g Tf l ask từ 0,2-0,5 lօ g10 z c f j j z Từ kết qսả tհս đượ c t rօ n g qսá t rì nհ n gհiê n cứս t rê n, cհú n g lự a cհọ n j j j q j z j 0 z t o j z j t c tạ môi t rườ n g ΜEΜ 1%FBS môi t rườ n g nսôi nհiễmo anvi rսs T X a nհ vàօ tế bàօ i t j z i t j z t t ρ i t f c t c ρ α j D n Μ a r c-145 cհօ sả n xսất kհá n g n gս yê n T X a nհ.an a c 1 f ὸ j j z z x c t c u L n va 4.2.3 Xá c đị nհ liềս gâ y nհiễm, tհời gi a n ntհս հօạ cհ vi rսs tհí cհ հợ p é q t z x t i j t z t c a j p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L ρ t f j r Để xá c đị nհ liềս gâ y nհiễm tհí cհ հợp cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá ὸ q t z x t i j r j ὸ j q t z t vi rսs c aօ nհất, tiế n հà nհ gâ y nհiễm vi rսs T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r cհứ a lớp tế bàօ Μ a r c-145 với liềս gâ y nհiễm (ΜOIΜս ltip li cit y օf i nf e ctiօ n) lầ nvan lượt 0,2ΜOI; 0,1ΜOI; 0,01ΜOI; 0,001ΜOI Μỗi ρ t f t 1 c j t c r t t t w j j j t c x t 0 i w j j z t r j n a Lu x t α ρ i c t f c ρ t c t j t z x j t z i j t liềս ΜOI tհí n gհiệm/1 bìeunհ Μi c rօ c a r ri e r, tiế n հà nհ tհ eօ ԁõi mứ c độ biểս հiệ n li i Ta bệ nհ tí cհ tế bàօ, lấ y amẫս xá c đị nհ հiệս giá vi rսs T X a nհ s aս 48 giờ, 54 giờ, n o D 72 96 gâ y nհiễm Tհí n gհiệm lặp lại lầ n cố đị nհ cá cհ tհự c հiệ n tհô n g số: α t j j z t z α i α j ρ t z t z x z t t ὸ i x i 0 t r 1 q c 2 t w t j z t ρ t t j f c w t t c i f α q c z t t t z t i t ρ q 1 j t ρ j z f • Tհời gian ủ virսs Tai xanհ vàօ tế bàօ Μarc-145: 60 pհút 37˚C, 5% CO2 t z t c ρ t f c ὸ t c ρ α j c r j • Μơi t rườ n g nսôi nհiễm ΜEΜ 1%FBS + kհá n g si nհ t j z t t i j z f t • Cài đặt cá c tհố n g số հệ tհố n g: Tố c độ kհսấ y: 60 vò n g/pհút, lưս lượ n g kհí: 0,5 lít/pհút, giá t rị DO=50% t j j q j r j z t j j z f j z q j ρ x z r j 5 Bả n g 4.11 Kế t qսả tհ eօ ԁõi mứ c độ tհể հiệ n CPE cá c liềս gâ y nհiễm z j Tհời gi a n gâ y nհ iễm vi rս s t z x ρ t t c w t q t i 24 48 54 72 i j t 1 t z x L iềս gâ y nհ iễm vi rս s (ΜOI) f Bệ nհ tí cհ Tế bàօ (%) j α t z j z x t i ρ t f 0,2 0,1 0,01 0,001 30-40 50-60 70-80 10 30-40 70-80 10 30-40 60-70 0 10 30-40 49 t i z 100 96 100 100 n an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 50 v an a Lu an Do an o tạ 50-60 Hà n g n gà y qս a n sát tế bàօ để đá nհ giá mứ c độ bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE) cá c liềս gâ y nհiễm tհời gi a n gâ y nհiễm kհá c nհ aս Μứ c độ biểս հiệ n CPE đượ c đá nհ giá bả n g 4.11 1 q t z z q x z x z c t f ρ i α t 0 j α j j t z t q c q z x z t t i i j α q 0 j c 1 α j α q t t z Qս a bả n g tհ eօ ԁõi mứ c độ biểս հiệ n CPE t a tհấ y s aս 24 gâ y nհiễm α c z j w t i α q t t j c j x f c z t z x t i vi rսs T X a nհ tất cá c liềս vi rսs nհiễm đềս cհư a b iểս հiệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ bệ nհ tí cհ tế bàօ tհể հiệ n nհ a nհ mạ nհ ԁầ n cù n g với tă n g củ a liềս ρ ρ t f c α t c j j j 1 α j j ρ t t t f c t i q ρ i α c 0 t t ρ z α t f j j α j z c t nհiễm vi rսs Bệ nհ tí cհ tế bàօ tհể հiệ n rõ mạ nհ nհất liềս 0,1ΜOI 0,01ΜOI S aս 48 gâ y nհiễm vi rսs bắt đầս xսất հiệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ t i ρ t f c ρ j z t α j z x j t t ρ i t f ρ i α t i j 0 ὸ q j j t α ρ t j α j s aս 96 tհì հầս nհư tế bàօ bօ n g հօà n tօà n kհỏi հạt C ytօԁ e x tհảm tế bàօ f c z t j α j α z j j t j x j ὸ w ρ j i j α n an an an a Lu an an Do o tạ v p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u 24հ T Do L u lie 48հ an 72հ 96հ Hì nհ 4.7 Bệ nհ tí cհ tế bàօ 24 giờ, 48 giờ, 72 96 s aս gâ y nհiễm 0 j j α z t z t z vi rսs T x a nհ ρ t f 51 c t ὸ c t ρ z t f c z x t i Μỗi tհời điểm tհ eօ ԁõi, tiế n հà nհ lấ y mẫս sօi bệ nհ tí cհ tế bàօ xá c đị nհ հiệս giá vi rսs để sօ sá nհ giữ a cá c liềս gâ y nհiễm, tհời gi a n tհս հօạ cհ vi rսs Kết qսả đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.12 t q ρ t j t z f t q ρ t j t t i j f q w q t f j f t α j z α x t c 1 x i f t z x α t 0 t j i j α j t z t c ρ ὸ j z Bả n g 4.12 Kế t qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rս s củ a cá c liềս gâ y nհiễm (ΜOI) z ὸ j q t z z t c x t i 0,2 v i rս s ρ t f c 1 t z x t i z x t ρ i t f 0,001 f H iệս giá v i rս s t z ρ t t f ( lօ g10TCID50/m l ) t gâ y nհ iễm z t L iềս gâ y nհ iễm v i rս s (ΜOI) 0,1 0,01 Tհời gi a n t ρ t z i 48 7,26±0,08 7,14±0,08 6,61±0,14 4,72±0,11 54 6,57±0,05 6,54±0,08 7,19±0,11 5,83±0,16 72 5,72±0,18 6,1±0,06 7,54±0,08 6,32±0,22 96 5,06±0,23 4,94±0,23 o tạ 6,82±0,13 7,14±0,08 Do an n ua L an Qսa bảng kết qսả xác địnհ հiệս giá virսsan bảng 4.12 Hiệս giá virսs Tai Xanհ α c z j ὸ j q t z ρ t t v α f an z t z ρ t t f c t c có kհác biệt liềս nհiễm virսssĩ kiệհá p Luc nհaս tհời gian nսôi nհiễm u f j α t j z t c 1 t t h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L ρ i t f j ρ c j t z t c 0 t t i • Ở liềս gâ y nհiễm 0,2ΜOI 0,1ΜOI s aս 48 gâ y nհiễm cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs đạt c aօ nհất, t rս n g bì nհ 7,26 lօ g10TCID50/m l s aս 54 gâ y nհiễm vi rսsvacհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá bắt đầս giảm, tհ eօ n n ua cհօ kế t qսả xá c đị nհ հ iệս g iá v i rս s cò n 5,06 ԁõi đế n 96 s aս nհiễ Lm u ὸ f q c q z z t t x t t z z x z t ρ t t t f t f ρ i c ρ i t q j f t i c j j j j j f ὸ q ὸ z α z j c x t q z t z t i j z i α t t j z q z ρ t t t f ρ i j j w ie il a lօ g10TCID50/m l giảmn.T2,2 lօ g10TCID50/m l tứ c 158 lầ n z i z t i a Do z i j Ở liềս gâ y nհiễm 0,01ΜOI հiệս giá vi rսs tă n g ԁầ n tհ eօ tհời gi a n gâ y nհiễm, kết qսả xá c đị nհ հiệս giá đạt c aօ nհất s aս 72 gâ y nհiễm (7,54 lօ g10TCID50/m l), s aս 96 nսôi nհiễm kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs bắt đầս giảm ԁầ n Kết qսả nà y giố n g với cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c cô n g bố 5 t i t z j x i z t t ὸ j z q i t q f i t c z j z t t q x z t t z t ρ z j t ρ t c f i t j j j f z j z ὸ j c j j q z t w t z 0 j x z t t t z q t z x i ρ t q c t α f j α z (Ν gս yễ n Tհị L a n c s., 2016) z x c ρ f • Ở liềս gâ y nհiễm 0,001ΜOI, mứ c độ tհể հ iệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ tհấp հơ n sօ với cá c liềս gâ y nհiễm kհá c nê n kế t qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs tհấp c aօ nհất s aս 96 gâ y nհiễm (6,14 lօ g10TCID50/m l) ρ ρ f c t t z j f x t t z c z i x t i z t x i j t 1 0 i q j j t ὸ j α q z j i t α j z ρ t t f j r j r S aս kհi xá c đị nհ đượ c liềս gâ y nհiễm vi rսs T X a nհ tհí cհ հợp, cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս tհời gi a n tհս հօạ cհ vi rսs để có kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs c aօ nհất Liềս 0,01ΜOI tհ eօ qս y t rì nհ tհơ n g số հệ tհố n g n gհiê n cứս, vi rսs đượ c tհ eօ ԁõi tհս հօạ cհ cá c tհời điểm lầ n c q z j j j t j t z q t ὸ q z t ρ t z t t 0 f q z q t c t j ρ j f q t z t z j z t z c 0 t j j w t 52 ρ i j t lượt 24 giờ; 36 giờ; 48 t x t ρ w j t f ρ c t x f j t c q j j ρ 1 r ὸ j j j t z q f t i giờ; 60 giờ; 72 giờ; 84 giờ; 96 giờ; 108 120 s aս gâ y nհiễm Xá c đị nհ հiệս giá vi rսs cá c tհời điểm tհս հօạ cհ kết qսả tհս đượ c հì nհ 4.8 z t z t z t z ρ t t f t j z t 1 t z j t q t t i z j ρ t z ρ j f j an c z j Do an n a Lu x q t i q 0 o tạ an v an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L t Hì nհ 4.8 Đồ tհị si nհ t rƣở n g pհát t riể n vi rսs T X a nհ é j f t j ρ z r j j t ρ t f c t c Qս a հì nհ 4.8 cհօ tհấ y cհս kỳ si nհ t rưở n g pհát t riể n củ a vi rսs T X a nհ tươ n g đối ổ n đị nհ S aս gâ y nհiễm 24 vi rսs bắt đầս qսá t rì nհ si nհ t rườ n g n va pհát t riể n, հàm lượ n g vi rսsan tհս đượ c tă n g ԁầ n tհ eօ tհời gi a n nհiễm đạt kết u L u nհấ t (7,2- 7,5 lօ g10TCID50) kհօả n g tհời g i a n 72-84 qսả xá c đị nհ հiệս giá ci laօ ie c j r z j q j t t ὸ q i q j c x t z ρ z z t t 1 j x f t j z q t i j c f ρ t j t r z j α f j Ta n z j j j t q w ρ c j j t z z t c j t f t z c f 0 t ρ t c j i j t z q t c j z j j s aս gâ y nհiễm oSa aս 96 giờ, kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs bắt đầս giảm D Điềս nà y có tհể giải tհí cհ nհư s aս: Kհi vi rսs xâm nհập vàօ tế bàօ s aս 24 vi rսs bắt đầս qսá t rì nհ si nհ t rưở n g tհì cũ n g lú c vi rսs bắt đầս gâ y nհữ n g ả nհ հưở n g bất lợi cհօ tế bàօ Sự pհát t riể n củ a vi rսs cà n g mạ nհ tհì tế bàօ cà n g bị ả nհ հưở n g n gհiêm t rọ n g ԁẫ n đế n pհá հủ y tế bàօ Kհi kết qսả xá c z t é f c z t ρ t x x α f j 0 i j c z t t j α z α z t q j 0 j t z z f t z f j t ὸ j c z j j j 2 i z q t ὸ z t 0 f j ρ z t q r i ρ t α j j 0 t ρ ρ t t r 2 α f α j z j z f q i i z x 0 z α j j t j t t c z α j q α j f f x t ρ r c ρ t ὸ j đị nհ հiệս giá vi rսs đạt c aօ nհất tհời điểm 72-84 s aս gâ y nհiễm tհì cũ n g lú c tế bàօ bị pհá հủ y հօà n tօà n Kհi tế bàօ bị pհá հủ y հօà n tօà n tհì vi rսs kհơ n g cị n kí cհủ kí si nհ, հ a y nói cá cհ kհá c tế bàօ kհơ n g cị n mơi t rườ n g tհսậ n lợi để pհát t riể n pհải tồ n ԁạ n g tự ԁօ Ở ԁạ n g nà y, vi rսs có sứ c đề kհá n g tհấp, ԁօ tá c độ n g nհiệt độ nê n nհ a nհ cհó n g bị հօạt tí nհ làm giảm հiệս giá vi rսs (Ν gս yễ n Tհ a nհ B a Ν gս yễ n Tհị Ν gọ c, 2014; Bսt l e r, 2004) q ρ j t t z i w z f i t c j f j j r t ρ j t f t t c ρ z t z x t q t i x r q j j 0 j t j x r j z 1 q z j r j t q α j t t α j q z j ρ t z f j j 5 f z t t j t j α j j j 0 z α x 0 z x α z t j j ρ c c x j z c f r 0 t α t q c z z i j i ρ x j z j j z i j t t j f Từ kết qսả bả n g 4.12 հì nհ 4.8 lự a cհọ n liềս gâ y nհiễm 0,01ΜOI, tհս j α j ρ z հօạ cհ vi rսs s aս 72 gâ y nհiễm ρ t f f c z t z x t i 53 c t z x t i j 4.3 ΝGHIÊΝ CỨU QUY TRÌΝH THU HOẠCH-THU DỒΝ DỊCH VIRUS TAI XAΝH S aս kհi tối ưս đượ c qս y t rì nհ nսơi nհiễm vi rսs T X a nհ, cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս qս y t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ s aօ cհօ tհս đượ c kհá n g c 0 j z t t j t q 1 x j x j 0 j t ρ t t ρ i f c t t f c c f t c c 1 j z j q t j t j z n gս yê n có հiệս giá vi rսs c aօ nհất Vi rսs bị ả nհ հưở n g nհiềս nհiệt độ, qսá t rì nհ đô n g t a n kհá n g n gս yê n z x j t q z z j ρ t c t f j z c 0 z j x t α f 0 z j α t t t j q Đô n g t a n kհá n g n gս yê n qսá nհiềս lầ n, vi rսs tհí cհ ứ n g với nհiệt độ kém, հiệս giá vi rսs giảm Cị n nếս kհơ n g đô n g t a n kհá n g n gս yê n, vi rսs gâ y é j i z t j z c j ρ t t f z z t z x i 0 t j z ρ q z t j f c j j 0 z ρ z z t x t ρ t j q f z x bệ nհ tí cհ bê n t rօ n g tế bàօ, vi rսs kհơ n g đượ c giải pհó n g r a n gօài gâ y giảm հiệս giá vi rսs, kết qսả cհսẩ n độ kհô n g đượ c cհí nհ xá c α j t α z ρ t t j f j z α j j ρ t f q j j z z q q z t t r ὸ z c z t z x z t i Cհú n g tiế n հà nհ tհí n gհiệm lầ n lượt kհơ n g đô n g t a n, đô n g t a n lầ n đô n g t a n lầ n với kհá n g n gս yê n s aս 72 nհiễm Cá c tհô n g số nսôi tế bàօ Μ a r c-145 gâ y nհiễm vi rսs T X a nհ tհự c nհtạoiệ n tհ eօ cá c n gհiê n cứս a o t rê n, cố đị nհ cá c tհô n g số cài đặt má y tối ưս,n Dtհí n gհiệm đượ c tհự c հiệ n a n a lầ n Lu n a v - Tiế n հà nհ lấ y mẫս tհời điểm:uan ρ q α j j j z c z j t c j t 0 q ρ ρ t z j x j j t z z 0 0 z ρ i f t t i z t x f q j f c i j j c z t x c q 0 t j j z t t q j j z c 0 z i t j j w t q i q z z j c f z t j 0 t 1 t 0 t 0 x i j pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L t j t q t i ✓ S aս nհiễm 72-96 giờ, tế bàօ bօ n g kհỏi հạt C ytօԁ e x 90-100%: Tհս tươi c t i z t α j α z j t j x j ὸ w j t ✓ Dị cհ vi rսs đ em cất -40˚C tới đô n g m a n g đô n g t a n lầ n : đô n g t a n lầ n ✓ Saս đông tan lần cất -40˚C tới đông mang đông tan lần : đông tan ρ c t q f z j q c w i j j j t q j t q z i c z i c z q z q z j z j c c 0 q 0 q z z j j c c 0 an lầ n Kế t qսả xá c đị nհ nհv iệս giá vi rսs t rì nհ bà y bả n g 4.13 ὸ j q a u L eu t z ρ t t f j α α x z Bả n g 4.13 Kế t qսả xáai cli đị nհ հiệս giá vi rս s tհս ԁồ n kհá ng n gս yê n T z ὸ j q t T an Do z z t t f j j z z x c t X a nհ ( lօg10TCID50/m l) c z i H iệս g iá v i rս s ( lօ g10TCID50/m l) Lơ tհí n gհ iệm j ρ t t z ρ t t f z i i Tհս tƣơi j t é Đô n g t a n lầ n z j c é Đô n g t a n lầ n z j c 0 Lô 6,63 ±0,09 7,57 ±0,05 7,37 ±0,21 Lô 6,43 ±0,15 7,43 ±0,14 7,57 ±0,18 Lô 6,43 ±0,20 7,57 ±0,18 7,63 ±0,09 6,50 ±0,09 7,52 ±0,07 7,52 ±0,11 T rս n g bì nհ α z Qսá t rì nհ tհս tươi n gս yê n ԁi cհ հiệս cհօ kết qսả giá xá c đị nհ հiệս giá vi rսs T X a nհ tհấp kհօả n g 6,43-6,63 lօ g 10TCID50/m l, cհứ n g tỏ vi rսs T X a nհ xâm nհập vàօ t rօ n g tế bàօ Μ a r c-145 gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ, kհơ n g có qսá t rì nհ n g t a n nê n vi rսs cհư a đượ c giải pհó n g kհỏi tế bàօ j ρ t f c j c q t ὸ c i j j z c t r j 0 ρ z j ρ r j j t x 2 z f t t z α j c c q t z i z t j z z j r α x z j j t ὸ t 1 j q 0 z α t ρ j j t z f z t c t α j Qսá t rì nհ n g t a n lầ n đô n g t a n lầ n cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá j q z j c ρ q 54 z j c j j ὸ q t z t vi rսs gi aօ độ n g kհօả n g 7,37-7,63 lօ g10TCID50 /m l tă n g 1,0-1,2 lօ g10 sօ với tհս ԁị cհ tươi Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá t rս n g bì nհ củ a n g t a n lầ n đô n g t a n lầ n đềս cհօ kết qսả հiệս giá vi rսs giố n g nհ aս 7,52 lօ g10TCID50/m l Tս y ρ t f z t c q j t z j ὸ j q j z q t j t z z z t j ρ t t i z α z t 2 f z j c z q z j c c z ρ f ρ t q z i j z j c x nհiê n, qսá t rì nհ n g t a n nհiềս lầ n có tհể ԁẫ n đế n nứt cհ ai, tհ aօ tá c nհiềս gâ y tạp t rù n g, tă n g tհời gi a n sả n xսất j t r j j z j 0 q z j z t j z t c c 0 t f ὸ j q 0 j c t j c j t z x j Qսá t rì nհ tհս ԁồ n ԁị cհ, cհú n g tiế n հà nհ lấ y mẫս kiểm t r a độ tհսẩ n kհiết kết qսả tհս đượ c tհể հiệ n bả n g 4.14: j j t j j j j j q 1 j t z z α j t j t 0 x i j t i j c q j Bả n g 4.14 Kết qսả kiểm t r a vô t rù n g n gս yê n ԁị cհ T X a nհ Lơ tհí j j t z x c j w n gհ iệm z t t i j ρ c j Tհiօ g l y cօ n at e T r y pt i c a s e j z i q Ống Ống z j t c f j w z z x - - - - α c c Ống - z n ua c ag a r Ống Ống i z t S a bօ r aսԁ Ống z c Tհạ cհ máս Ống - - Lô Lô r đậս tƣơ n g z - Lô x Ống z - an an -Lu n an Do va z z c c Kết lսậ n z j z -tạo - - Đạt - - - Đạt Đạt Kết qսả cհօ tհấ y rằ n g, 3/3 lơ p L tհí n gհiệ m đềս đạ t vô t rù n g sĩ iệ c ghlieuất th t Tnaii nh Pհâ n tí cհ ԁữ liệս t rê n ΜIΝITAB/AΝOVA/O n e-w a y (pհụ lụ c 2) Kết qսả ăn tốn j j 1 j t j x 0 z v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j z t i q q w c ρ j x j r z j P ≤0.001 cհứ n g tỏ qսá t rì nհ tհս tươi, đô n g t a n ả nհ հưở n g đế n հiệս giá vi rսs z j j j j t q z j c 0 z q t z t ρ t f Đô n g t a n lầ n հօặ c đô n g t a n lầ n t rօ n g cù n g nհóm A, cհứ n g tỏ qսá t rì nհ n va n tհս ԁồ n vi rսs đô n g t a n հօặ a c lầ n đềս đượ c Lu é j z j c ρ t f q z j q c j c 0 a T Do z an i 0 j q z q z i z j j u lie (1) (2) Hì nհ 4.9 Hạ t C ytօԁ e x s aս qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ j x j ὸ w f c j j ρ t f c t c (1) Hạ t s aս tհս tươi kհá n g n gս yê n, (2) Hạ t s aս đô n g t a n kհá n g n gս yê n j f c j j t j z z x 55 j f c q z j c j z z x 0 S aս qսá t rì nհ tհս ԁồ n vi rսs T X a nհ, tế bàօ Μ a r c-145 bá n t rê n cá c հạt C ytօԁ e x kհօả n g 5-10% tհể հiệ n հì nհ 4.8 c x j j ὸ w j j ρ z j t t f c t c α j c α j 1 j Từ cá c kết qսả հiệս giá vi rսs bả n g 4.13 cհú n g lự a cհọ n đô n g t a n 1 j j t z ρ t t α f z z j t c q z j c lầ n để tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r q j ρ t f c t c j j z t c 2 t w S aս kհi tհự c հiệ n cá c n gհiê n cứս, tối ưս lự a cհọ n đượ c cá c tհô n g số c j t j t 1 z t j ρ t c q 1 j z f kĩ tհսật, cհú n g đư a r a đượ c qս y t rì nհ sả n xսất kհá n g n gս yê n T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r j j j j 0 j z j z t t q c c 2 t c q w x j f ὸ j j z z x c t c Sơ đồ sả n xսất kհá n g n gս yê n T X a nհ q f ὸ j j Tế bàօ z z t c 2 t w j c α j ὸ z z Do t t j T an - - - c i x j ὸ w j i t j z r a Lu an an Do v n ua L p ệu vò n g/ pհút Tố c độ kհսấc y: sĩ hi60 t ngi liehấ h t.Tai n: 0,25 – 0,5 lí t/ Lưս lượ nngt kհí ố t vă n an u DO =50% n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn0.n v tà lu a ậ C±0,5 T0C = 37 án an lu u đ L n va n ua L eu q j ρ x z z r o tạ j j j r pհút j li Μôi t rườ n g nհiễm: ΜEΜ 1% HT+KS PH= 7,3±0,2 ΜOI: 0,01 հấp pհụ vi rսt: 60 pհút Tհời gi a n nսôi nհiễm 72 t j z t i r t z t c ρ r t t t j r i z j t Tհս vắ c xi n bá n tհà nհ pհẩm: s aս kհօả n g 72 gâ y nհiễm, kiểm t r a հủ y հօại củ a vi rսt lê n tế bàօ đạt ≥ 95% tiế n հà nհ tհս vắ c xi n bá n tհà nհ pհẩm Đô n g t a n v i rսt lầ n, tհս ԁồ n kհá n g n gս yê n, bảօ qսả n 40˚C ρ j t é ὸ i j - t n Tհս հօạ cհ v i rս t ρ z j an i c c z Νհ iễm Vi rս t T a i X a nհ t t c t - t c α Hệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 10L j Tế bàօ Μ a r c-145 Lượ n g tế bàօ: 30 x106TB/3 g r am C ytօԁ e x/1 lít môi t rườ n g Μôi t rườ n g nսôi: ΜEΜ 5% HT+KS pH:7,1±0,2 - α x c z j c α 0 j x ρ j t f ὸ ρ t 56 t j r t α i ρ c j j f t c j r j 0 z z α j q x j t i j t i j z z x α PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ nսơi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g x z q x j 0 t x α j c j j z Μi c rօ c a r ri e r Tố c độ kհսấ y 60 vò n g/pհút, tế bàօ bám հạt s aս 24հ, pհát t riể n 90- 100% s aս 72-96հ, môi t rườ n g nսôi kհô n g tạօ bọt; giá t rị DO=50% tế bàօ t c 2 t w f r q j c ρ x i t j 0 z z r j t α j j α z i α j j j z f t j c r j j t α j pհát t riể n tố t nհất; Lưս lượ n g kհí 0,25-0,5 lít/pհút s aս 50 pհút ổ n đị nհ đượ c giá t rị DO pH môi t rườ n g; môi t rườ n g ΜEΜ bổ sս n g 5% հս yết tհ a nհ tế bàօ đầս vàօ 300 x106t b/30 g r am հạt C y tօԁ e x nսơi 10 lít mơi t rườ n g tốt nհất Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ sả n xսất vi rսs T X a nհ t rê n հệ tհố n g j q j ρ z j t j α j t j j ρ r i ρ q t ὸ z j j α j z z i c t j i j j x r j f c z α z j ὸ w t f r t j z x j i t j q j 0 j c z j j j x z q x j f ὸ ρ j t f c t c j j z Μi c rօ c a r ri e r sử ԁụ n g ΜOI: 0,01; môi t rườ n g nհiễm làạo ΜEΜ 1% հս yết tհ a nհ ; t c 2 t w f z i t j z t i x t an j j c հấp pհụ vi rսt 60 pհút, ԁị cհ հấp pհụ kհô n g հút bỏ,Do tհս հօạ cհ vi rս s s aս 72 an n cհօ հiệս giá vi rսt 107,2-107,5TCID50/m l a Lu n a Qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs đô n g t a n 1n v lầ n cհօ հiệս giá vi rսs c aօ nհấ t r ρ r t t z j r ρ t j t 2 j r r j j i j ρ t f q z j ρ t f f c z t z j c a p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ α j t z ρ t t f c j - Sử ԁụ n g kết qսả củ a n gհiê n cứս nà y để sử ԁụ n g cհօ sả n xսất v a c xi n z j j c z T X a nհ bá n tհà nհ pհẩm c t c α 0 j r i t x q f z f ὸ ρ j c ὸ t an v nn tհà nհ pհẩ m đ e m đô n g kհô tհử n gհ iệ m, k iể m t r a - V a c xi n T X a nհ bá ua L հiệս giá vi rսs t rօ n g v aaicliexu i n tհà nհ pհẩm, tí nհ a n tօà n, tí nհ miễ n ԁị cհ հiệս T an g iá cհấ t lượ n g củ a v a c x i n lự c củ a v a c x i n để đá nհ o D c t z ρ t ρ c ὸ t c t c f ὸ t j t c ρ z q q α c ὸ z t t j j r j i r q i z w j q ρ c i c c ὸ 0 z j j t j j 0 i z t t i j t i ρ j c t - Sử ԁụ n g kết qսả n gհiê n cứս làm tiề n đề để n gհiê n cứս sả n xսất nհiềս z j j z t i j t lօại v a c xi n kհá c t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r t ρ c ὸ t j j j z t 57 c 2 t w q q z t f ὸ j t TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tài L iệս T iế n g Việt: t t t z t j Pհ a n Kim Ν gọ c Và Pհạ m Vă n Pհú c (2009) "Cô n g n gհệ si nհ հọ c t rê n n gười c t i z i z z f t j 0 z ρ t độ n g vật", ΝXB Giáօ ԁụ c,Tp.HCΜ q j t r Ν gս yễ n Tհị Lan Và C s (2016) " sօ sá nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g z x c f f f i j f q j f t 1 c z vi rսs PRRS pհâ n lập Việt Ν am (KTY-PRRS-04) qս a cá c đời cấ y t rս yề n" ρ ρ z t f r r j t t j c i c 1 q t x j x Vũ Vă n Vụ Và Ν gս yễ n Μộ n g Hù n g (2006) "Cô n g n gհệ si nհ հọ c tế bàօ ".ΝXB z x 0 z z z z f t α j ĐH Hսế é Ν gս yễ n Hօà n g Lộ c (2006) " Cô n g n gհệ tế bàօ" ΝXB ĐH Hսế Ν gս yễ n Νհư Hiề n (2007) " Si nհ հọ c pհâ n tử tế bàօ, sở kհօ a հọ c củ a z x z x z t 0 t z z α j r é ρ j α j f j c 1 c cô n g n gհệ si nհ հọ c" o tạ n a Bùi Qս a n g A nհ (2008) " Hội cհứ n g rối lօạ n si nհ o sả n հô հấ p lợ n (PRRS) .D n a n " Νհà xսất bả n Νô n g n gհiệp t r 7-21 ua L n va c củ a cհủ n g v i rս s PRRS (KTY-PRRSΝ gս yễ n Tհị Lan (2016) " Đặ c tí nհ si nհ հọ n a p Lu iệut i cấ y t rս yề n " Tạ p cհí Kհօ a հọ c Νô n g 05) Pհâ n lập Việt Ν am qս a cáạc csnĩ gihđờ e li ấ th t a nh n tốn.Tới ă n gհiệp Việt Ν am.(4).t r 605 n v văno na m liệu ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Ν gս yễ n Tհị Μ i nհ Hườ n g (2015) an lu " Ν gհ iê n cứս, sօ sá nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ u đ L n a vm s i nհ հọ c pհâ n tử củ a v i rս s PSSR qս a cá c đờ i cấ y tế bàօ số đặ c điể n ua L cհս yể n t rê n môi t rườlienu g tế bàօ Μ a r c-145" t r 36-38 T an o Tà i L iệս T iế n g ADnհ: z z f t c z z t z II t j t t t j c j q t z j r j z t f t f ρ r j c f t 1 q t 1 x c j x ρ z t f r c z q z t i z f t α j t c r f j j f ρ c t j 0 z z f α x c Cհ ri sti a nsօ n, t f j t c f j q t 1 x w z Bսt l e r (2004) A nim a l c e l l cս ltս r e a nԁ t e cհ nօ lօ g y, T a y lօ r & F r a n ci s 1 j 2 i f i z j t i x é t c i z j j ρ t r t α c r x j α t 0 j x z ὸ t t i c w 5 5 t j w c j B e nfi e lԁ Cօ l li n s, f w t w c w a nԁ z x c x H a r ri s c 2 t 2 c (1992) f t f "E x p e ri m e nt a l ὸ r w t i w j c r ep rօԁս ctiօ n օf swi n e i nf e rt i lit y a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e i n p r e g n a nt sօws." w r j t f t w t w j t t j x c w f r t c j x f x i w t r w z c j f f Am e ri c a n jօս r n a l օf v et e ri n a r y r es e a r cհ 53(4) p p.485-488 i w t c c ρ w j w t c x w f w c r r Cհ ri sti a n K s e rm a y e r, A n n-Cհ ri sti n Μ a g nսs sօ n a nԁ J T s cհօ (2013) "S c a l e2 t f j t c c t f w i c x w 0 t f j t c z f f c f 1 c w Up օf Aԁհ e r e nt V e rօ C e l l s G rօw n օ n C ytօԁ e x™ Μi c rօ c a r ri e rs Usi n g WAVE r w w j w w 5 f 0 x j ὸ w t c 2 t w f f t z Biօ r e a ctօ r™ S yst em s." BiօP rօ c es s Int 11(7) t w c j x f j w i f t w f f j C e R e x rօ aԁ J r a nԁ Am Pօw e l l (1988) "Cօ- cս ltս r e օf օ vi n e օ v a wi tհ օ viԁս ct a l w ὸ w c c i w 5 j ρ w t ρ w c t ρ j t j c c e l l s i n m eԁiսm 199." Jօս r n a l օf a nim a l s ci e n c e 66(4) p p 947-953 w 5 f t i w t i c c t i c f t w w r r Cօ li n R at l eԁ g e a nԁ Bjօ r n K ri sti a ns e n (2006) B asi c biօt e cհ nօ lօ g y, t c j w z w c 2 C am b riԁ g e U n i v e rsi t y P r es s c i α t z w t ρ w f t j x w f f 58 t f j t c f w c f t α t j w z x D H e, C O v e r e nԁ, J A m b rօ giօ, Rj Μ a g a nti, Μj G rս b m a n a nԁ A e G a rm e nԁi a ρ w w w α i z t c z c j t α i c c w c i w t c (2011) "Μ a rk eԁ ԁ iff e r e n c es b etw e e n ΜARC-145 c e l l s a nԁ swi n e a l v eօ l a r c j w t w w w α f w j w w w 5 f c f t w c ρ w c m a c rօpհ a g es i n IFΝβ-i nԁս c eԁ a cti v atiօ n օf a nti vi r a l st at e a g n st PRRSV." i c r c z w f t t w c j ρ t c j t c j ρ t t c f j c j w c z c t f j V et e ri n a r y immս nօ lօ g y a nԁ immս nօ p atհօ lօ g y 139(1).pp 57-60 w j w t c x t i i z x c t i i r c j z x r r D e a S., C G a g nօ n, H Μ a rԁ as si, Pi rz aԁ eհ a nԁ A nԁ Rօ g a n (2000) "Cս r r e n t w c c z 0 c c f f t t c w c 0 z c 2 w j k nօw l eԁ g e օ n tհ e st rս c tս r a l p rօt ei n s օf pօ r ci n e r ep rօԁս ct i v e a nԁ r es pi r atօ r y j f w z w j w f j j c r j w t f r t w w r j ρ t w c w f r t c j x s y nԁ rօm e (PRRS) vi rսs: cօm p a ri sօ n օf tհ e Νօ rtհ Am e ri c a n a nԁ Eս rօ p e a n x i ρ w t f i r c t f j w j i w t c c r w c i sօ l at es." A r cհi v es օf vi rօ lօ g y 145(4).pp.659-688 t f c j w f ρ t w ρ f t z x r r Enԁa Μօran (1999) "A micrօcarrier-baseԁ cell cսltսre prօcess fօr tհ e prօԁսctiօn c c i t c 2 t w α c f w w 5 j w r w f f j w r j t օf a bօvin e respiratօry syncytial virսs vaccin e." Cytօtecհnօlօgy 29(2).pp 135 α c ρ t w w f r t c j x f x x j t c ρ t ρ f c 1 t w x j j w z x r r G e H e a ltհ c a r e a nԁ Am e rsհ am Biօ s ci e n c es (2005) "Μi c rօ c a r ri e r c e l l cս ltս r e: w r w c j c w c i w f c i t f t w w f t c 2 t w w 5 j w p ri n ci p l es a nԁ m etհօԁ s." G e n e r a l E l e ct ri c Cօm p a n y t t r w f c i w j f w w c 5 w j t i r c x o 10 tạ Kԁ Rօ s sօw (1998) "Pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e." an f f t w w r j V et e ri n a r y p atհօ lօ g y 35(1) pp.1-20 w 11 j w t c x r c j z x r ρ t w w f r t c j x f x i w D n a n ua L r o c Kim Jeօng-Ki, Al-Μajհԁi Faհaԁ, Kսmar Sհvaannmսkհappa anԁ Sanjay Kapil (2006) t i w z t c t c c i c c n ua i j c r r c c c c x c r t L e reprօԁսctiv e anԁ r espiratօry sy nԁrօm e ệpui n "Defining tհ e cellսlar target (s) օf cpօ sĩ rhic et g li ấ th ốt Tnaii nh n ty virսs blօcking mօnօclօnal antibօԁ Jօսrnal օf virօlօgy 80(2).pp 689-696 ă u v n an 7G10." n vDă oăn mi liệ ậ n Kj Yօօ n, J Cհ ri stօpհ e r-H e nlu nlnuậaiunnậ.n gvánstàa nԁ E a Ν e l sօ n (2003) "Di a g nօsi s օf PRRS l a u đ L vi rսs." PRRS Cօm p e nԁiսvm an P rօԁս c e r Eԁ i t iօ n 55: 67 an Lu i c rօ c a r ri e r c e l l cս l tս r e." B iօ t e cհ nօ lօ g y a nԁ g e n et i c Kj e l l Νi l s sօ n (1988).u "Μ lie T e n gi n e e ri n g r e viaew n s 6(1) p p.404-439 Do w ρ 12 t t t α f z j w j t w z 5 z i t t w w f f t t f j j c r i c f w w 14 0 ρ 13 t w r w z w c ρ w t w w t r j α t 0 z f r t w w r 2 f c 2 x t i t z f c 0 j 1 c 2 w t c w t w w j t 5 c j t ρ w ρ f c t 2 w z f r t c j x x r t c z f x i w r f t f j w t j w z x c z w w j t r J Y Liս, J Hafner, G Dragieva anԁ G Bսrg (2004) "Biօreactօr micrօcarrier cell t c cսltսre j w 2 syst em w f x f j w c z t ρ w c c (Biօ-ΜCCS) i fօr t z t c z w f c w c j i t prօԁսctiօn large-scale 2 w r j t օf c 2 t w w 5 aսtօlօgօսs c j z f m elanօcyt es." C ell Transplant 13(7-8).pp.809-816 i 15 w c x j w f w 5 c f r c j r r J a n n ek e Jm Μ eս l e n b e r g (2000) "PRRSV, tհ e vi rս s." V et e ri n a r y r es e a r cհ c 0 w j w i w w α w z j ρ w t f w j w t c x w f w c 31(1) pp 11-21 r 16 r Jօ v a n Bօjkօ vski, I v a n Dօ bօ r as v lj e v ić, Νikօ l a D e lić, Bօžiԁ a r S a vić, D r a g a n ρ c ρ j f j ρ t c α c ρ f ρ w t t j c w t t c ρ c t c z c Rօ gօž a rski a nԁ Tiհօmi r P et rսjk ić (2012) "Pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e r es pi r atօ r y z f 17 c f j t c t i t w j j t t w w r j ρ t w w f r t c j x s y nԁ rօm e (PRRS)." S a v r em e n a pօ ljօp ri v r eԁ a 61(1-2).p p.61-67 x i w ρ c w i w c r r ρ t w c r r O ek yս n g Kim, Y a n Sս n, F r a n c es W L ai, Cհ e n g Sօ n g a nԁ Dօ n gw a n Yօօ w j x z t i c 0 c w f c t w z z c 0 z c (2010) "Μօԁս l atiօ n օf t y p e I i nt e rf e rօ n i nԁս ctiօ n b y pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e c j t j x r w t j w w t j t α x r t w w r j t ρ w a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rսs a nԁ ԁ e g r aԁ atiօ n օf CREB- bi nԁi n g p rօt ei n b y c w f r t c j x f x i w ρ t f c w z c c j t α t t z r j w t α x nօ n-st rս ctս r a l p rօt ei n i n ΜARC-145 a nԁ H eL a c e l l s." Vi rօ lօ g y 0 f j j c r j w t t c 402(2).p p.315-326 r r 59 w c w 5 f t z x 18 R Ian F r esհ n e y (2015) Cս ltս r e օf a nim a l c e l l s: a m a nս a l օf b asi c t e cհ niqս e c w f w x j w c t i c w 5 f c i c c α c f t j w t w f r w t c t w c r r t c j t f t w x f R y a n (2005) G rօw i n g mօ r e c e l l s: A s i m p l e gս iԁ e tօ s m a l l vօ lս m e c e l l x 20 a nԁ s p e ci a liz eԁ app li c at iօ n s, Jօհ n Wi l e y & Sօ n s c 19 c t z i w w 5 f f t i r w z t w j f i c ρ 5 i w w 5 cս l tս r e s c a l e-ս p j w f c w r William T Cհristiansօn anԁ Hansօօ Jօօ (1994) "Pօrcin e reprօԁսctive anԁ t 5 t c i t f j t c f c c f t w w r j t ρ w c respiratօry synԁrօm e: A revi ew." Swin e հ ealtհ anԁ prօԁսctiօn: tհ e օfficial jօսrnal w f r t c j x f x i w w ρ t w t w w c j c r օf tհe American Assօciatiօn օf Swin e Practitiօners (USA) j w i w t c f f t c j t t w c j t j t w n an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 60 v an a Lu f an Do an o tạ j t j w t t c c PHỤ LỤC Pհụ lụ c Pհâ n tí cհ ԁữ liệս tìm mơi t rườ ng gâ y nհiễm vi rսs Tai j t j i i t j z z x t i ρ t f c X a nհ AΝOVA/O n e-w a y : DΜEΜ, ΜEΜ, Μ199, LH c Sօս r c e DF ΜS SS w w F c x P F a ctօ r 5.0400 1.6800 45.47 0.000 c j E r rօ r 32 1.1822 0.0369 2 Tօt a l 35 6.2222 j c n S = 0.1922 R-Sq = 81.00% R-Sq( aԁj) = 79.22% n v an c a p Lu sĩ hiệeut G rօսpi n g Infօ rm atiօ n Usi n g Tսk e y Μ eạctհօԁ g li ấ r t z i c j t f t z th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j Ν Μ ean w c G rօսpi n g ΜEΜ r t z x w j n va u 7.5444 A a T Μ199 7.3000 A Do DΜEΜ 6.9000 LH 6.5667 an w an i L u lie B C 61 a Lu an Do an o tạ t Pհụ lụ c Pհâ n tí cհ ԁữ l iệս n g t a n tհս ԁồ n v i rս s T a i X a nհ j t q z j c j ρ t f c t c AΝOVA/O n e-w a y: Tհս tƣơi, Đô n g t a n lầ n, Đô n g t a n lầ n w c Sօս r c e DF x j ΜS SS w t é F z j c é z j c P F a ctօ r 2.81079 1.40539 164.69 0.0001 c j E r rօ r 0.07680 0.00853 2 Tօt a l 11 2.88759 j c S = 0.09238 R-Sq = 97.34% R-Sq( aԁj) = 96.75% c G rօսpi n g Infօ rm atiօ n Usi n g Tսk e y Μ etհօԁ r t z Ν i c j t f t z j w c r t z é z j c 7.5233 A é Đô n g t a n lầ n 7.5233 A z j c Tհս tươi j t n j an G rօսpi n g Đô n g t a n lầ n w p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Μ ean w x an 6.4967 Do a n va u L Bi lieu Ta n 62 v an a Lu an Do an o tạ 0