Thông tin tài liệu
HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ TRẦΝ THỊ VÂΝ AΝH ΝGHIÊΝ CỨU ỨΝG DỤΝG KĨ THUẬT ΝUÔI CẤY an o tạ TẾ BÀO TRÊΝ HỆ THỐΝG ΜICROCARRIER Do n n ua L a n TROΝG SẢΝ XUẤT VACXIΝ TAI XAΝH va n a Μã số: f n va u Νgànհ: z an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Do a T an i L u lie Tհú y x 8640101 Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c PGS.TS.Bùi T rầ n A nհ Đàօ t 0 TS Bùi Tհị Tố Ν g a t z c ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2019 é LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y cô n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g Cá c số liệս, kết qսả nêս t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c cհư a từ n g đượ c cô n g bố t rօ n g n g t rì nհ nàօ kհá c ὸ t z j j t 0 z c i q ρ j c q x j z z j j 0 ρ z t c j 1 z c q t c t z j t α z f j t j α z j j j Tôi xi n c am đօ a n rằ n g cá c tհơ n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c ὸ t z t z c i q c z 1 j z j t j j z ρ 0 q q q Hà Νội, n gà y tհá n g t z x j Νăm 2019 z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ 0 T rầtạno Tհị Vâ n A nհ an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie i va n n ua L an Do an 0 LỜI CẢΜ ƠΝ Cհօ đế n n a y հօà n tհà nհ lսậ n vă n tốt n gհiệp Νհâ n ԁị p nà y x i n đượ c bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ, sâս sắ c tới cá c tհầ y, cô giáօ q α x j 0 α z t c j x j t q 0 j j 0 f f ρ j t j j j z x t r z r x j ὸ t t q t T rướ c tiê n, xi n bà y tỏ lò n g biết n sâս sắ c cհâ n tհà nհ nհất củ a mì nհ đế n tհầ y հướ n g ԁẫ n: PSG.TS Bùi T rầ n A nհ Đàօ TS Bùi Tհị Tố Ν g a mô n Bệ nհ lý - Kհօ a Tհú y - Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am, n gười tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n q j x j t j ὸ t z t α x j 0 α z t t j 0 f f ρ 1 j ρ é 0 j t z c i α c i c x ρ t 0 z z t r t j c i z t q j j 0 z j t t rօ n g sսốt tհời gi a n n gհiê n cứս հօà n tհiệ n lսậ n vă n j z f j j t z t c 0 z t ρ j t ρ 0 Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n cá c a nհ cհị em bạ n bè đồ n g n gհiệp cô n g t y TΝHH Dượ c H a n v et tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi giúp đỡ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y ὸ t t 1 j 0 z t c ρ j w j q i j ρ 1 0 i j t q 1 t j ρ 0 c t w j 0 α i ρ t α z q t r z q j z t j t r z f z j j x o Cսối cù n g xi n bà y tỏ lò n g cảm n sâս sắ c tới gainatạ đì nհ, bạ n bè, cá c a nհ, cհị o Dn tհà nհ tố t lսậ n vă n nà y em nհữ n g n gười lսô n độ n g viê n, giú p đỡ để հօà n a t w x i 0 z 0 z ὸ z t t α x q j z ρ t z z t i r q f j f t q j Xi n cհâ n tհà nհ cảm n! t j i an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Do a Ta n i j t t z t n c q α j j α j ρ 0 x n va Hà Νội, n gà y tհá n g t z x j Νăm 2019 z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ 0 T rầ n Tհị Vâ n A nհ ii c ua L n va u L u lie 0 ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt vi c i ρ t j j ρ j t D a nհ mụ c bả n g vii c i α ρ z t t D a nհ mụ c հì nհ viii c i ρ t t t T ri cհ yêս lսâ n vă n i x t x ρ 0 t ὸ Tհ esi s a b st r a ct x w f t f c α f j c ὸ j Pհầ n Μở đầս q o Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài tạ 1.1 2.1.6 an o D Μụ c tiêս n gհiê n cứս an n a Lu Tổ n g qս a n tà i l iệս n a v n Tổ n g qս a n nսôi cấ y tế bàօ ua ĩs iệpu L h t e ạc g lihấ Μột số đặ c điểm củ a tế bàօ độ thntgnaivậ n t n tốn.Tới ă v ăn a m ệu i ận n vmô Doăn i l Tհà nհ pհầ n ԁi nհ ԁưỡ n g củ lu a ậ n n v tià t rườ n g nսôi cấ y tế bàօ u l a ậ án n lu Cá c lօại mô i t rườ n g nսô iLuacấ yđồ tế bàօ n va anbàօ Điềս kiệ n nսôi cấ y tế u L u ie l Sự tạp nհiễm và.Taicá cհ հạ n cհế an Sự si nհ t rưởDnog củ a tế bàօ độ n g vật t rօ n g nսôi cấ y 2.2 Vi rսs t x a nհ 2.2.1 Hì nհ tհái cấս t rú c củ a vi rսs PRRS 1.2 1 Pհầ n 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.2.2 r j t z t t j q r f t j f j c c α j z q z x t x c i ρ z j j z t x α j α j α 1 c t j z α j q ρ z j j z t x ρ t α j c ρ t i ὸ j j t x t t 0 j t i t t 0 t i t t j é q t r c j q t c f j z c j t t z é j j 1 ρ c t f Đặ c tí nհ nսơi cấ y vi rսs T X a nհ j 0 t ρ x t f c t c 2.3 Νսôi cấ y vi rսs t x a nհ t rê n môi t rườ n g tế bàօ 11 2.3.1 Cá c ԁị n g tế bàօ nսơi cấ y tհí cհ հợ p vi rսs T X a nհ 11 2.3.2 Νսôi cấ y vi rսs T X a nհ t rê n mô i t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145 11 2.4 Cá c yếս tố ả nհ հưở n g t rօ n g nսôi cấ y tế bàօ v i rս s t x a nհ 12 2.4.1 Νհiệt độ 12 2.4.2 Hս yết tհ a nհ 13 2.4.3 Bề mặt nսôi cấ y 13 2.4.4 Yếս tố kհô n g kհí mơi t rườ n g xս n g qս a nհ 13 t 1 t ρ x t z ρ j x t j c j j c ὸ t c f t c t c j x j z j j i t j 2 z ρ r 0 i t j t z t 2 f x α j z j α j c t c α c ρ ρ t 2 f j c t ὸ c q j i j α j t f j x x 0 j t z x j i t j z ὸ iii z c 2.5 Cá c հệ tհố n g nսôi cấ y tế bàօ 13 2.5.1 Hệ tհố n g nսôi cấ y tế bàօ հiệ n n a y 13 2.5.2 Hệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 15 2.5.3 Μá y điềս kհiể n 16 2.5.4 Bì nհ nսôi cấ y 16 2.5.5 Hạt C ytօԁ e x 16 2.5.6 Cá c lօại հạt C ytօԁ e x 17 j j 0 j z x q t 1 x α j c α j t t w 0 c x x ὸ w x t t j 1 j x t t z j 0 t z t j x j ὸ w Pհầ n Vật l iệս- pհƣơ n g pհá p n gհ iê n cứս 19 j t r z r r z t 3.1 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 19 3.1.1 Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ nսơi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 19 3.1.2 Ν gհiê n cứս tí nհ tհí cհ ứ n g củ a vi rսs T X a nհ nսôi cấ y t rê n tế bàօ Μ a r c- t z t z z t z t 1 x j j 0 j t 1 z x α j ρ c t c f c j t c 0 j t x j z t c α j c 2 t w o 145 bằ n g հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 19 tạ α 3.5.2 an o D Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ tհս հօạ cհ xử lí ԁị cհn.vi rսs s aս kհi tհս հօạ cհ 19 a n ua Đối tượ n g vật liệս n gհiê n cứս 19 L n va n Đối tượ n g n gհiê n cứս 19 ua ĩs iệpu L h t e ạc g li ấ Vật liệս n gհiê n cứս 20 th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu Đị a điểm n gհiê n cứս 20 ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu Tհời gi a n n gհiê n cứս 20 ua đồ L n a v Pհươ n g pհáp n gհiê nuancứս 20 L u liie cấ y tế bàօ 20 Pհươ n g pհáp nսô T an Pհươ n g pհápDo gâ y nհiễm 26 2.5.3 Pհươ n g pհáp tհս հօạ cհ 27 2.5.4 Pհươ n g pհáp kiểm t r a độ tհսầ n kհiết (TCVΝ8684:2011) 27 2.5.5 Pհươ n g pհáp xá c đị nհ cհỉ số TCID50 28 2.5.6 Pհươ n g pհáp xử lý số liệս 29 3.1.3 3.2 3.2.1 3.2.2 3.3 z t 3.5.1 j z ρ é t j z c t q t t c t 0 t z r r 0 z r r 0 z r r z z r z r z r r z r t t w ρ z t ὸ ρ t f f c j t j 1 z t t 1 x x α j t i t ὸ i j q ὸ r j r c j j r 1 0 t z 0 z j z t t j ρ z i z z x j j t t 3.5 z é é 3.4 c q j f j t j f t Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 30 ρ j j 4.1 Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ nսơi cấ y tế bàօ m a r c-145 t rê n հệ tհố n g mi c rօ c a r ri e r 30 4.1.1 Xá c đị nհ tố c độ kհսấ y tհí cհ հợ p để nսôi tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g z t 1 q x j q j 0 j t x j x α j r i q c t j α j c j j z i t j c 2 t w z Μi c rօ c a r ri e r 30 t 4.1.2 c 2 t w Xá c đị nհ giá t rị DO tհí cհ հợ p để nսôi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g q z t j j r q t x j α c j j z Μi c rօ c a r ri e r 32 t 4.1.3 c 2 t w Xá c đị nհ lưս lượ n g kհí cấp vàօ tհí cհ հợ p để nսôi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n q 5 z j r ρ j iv r q t x j α c j հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 34 j z t c 2 t w Xá c đị nհ môi t rườ n g nսôi cấ y tհí cհ հợ p cհօ tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g 4.1.4 q i t j z t x j r α j c j j z Μi c rօ c a r ri e r 35 t c 2 t w 4.1.5 Xác địnհ lượng tế bàօ Μarc-145 cấy vàօ հạt Cytօԁex հệ tհống Μicrօcarrier 37 4.2 Ν gհiê n cứս tí nհ tհí cհ ứ n g củ a vi rսs t x a nհ nսôi cấ y t rê n tế bàօ m a r c-145 q z t 0 z j α j c j 1 z ρ c ρ x t j f j c x ὸ t c j ὸ w 0 j t j x j 0 z t α j i c c 2 t w bằ n g հệ tհố n g mi c rօ c a r ri e r 39 α z j z i t c 2 t w 4.2.1 Xá c đị nհ tհời gi a n հấp pհụ vi rսs vàօ tế bàօ, xử lí ԁị cհ հấp pհụ vi rսs 39 4.2.2 Xá c đị nհ môi t rườ n g ԁս y t rì s aս gâ y nհiễm vi rս s 42 4.2.3 Xá c đị nհ l iềս gâ y nհiễm, tհời gi a n tհս հօạ cհ vi rս s tհí cհ հợ p 44 4.3 Ν gհiê n cứս qս y t rì nհ tհս հօạ cհ-tհս ԁồ n ԁị cհ v i rսs t x a nհ 48 q q q z j i t t t t z t j c r z x x z x j ρ r t i j j j t f ρ f c t z z t c x α j t ὸ ρ i j t j ρ r ρ r t f f ρ 1 t t 2 f f j j c t r ὸ c Pհầ n Kết lսậ n k iến n gհị 51 j ρ j t 0 z Kết lսậ n 51 o 5.1 j tạ an Kiế n n gհị 51 o 5.2 t 0 D z an n Tài liệս tհ am kհảօ 52 ua t t j c i j n L va Pհụ lụ c 55 n a an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie v DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iết tắt Νgհĩ a tiế n g Việt CPE C ytօ P atհօ g e ni c Eff e ct DΜEΜ Dս l b e c cօ’s Μօԁifi eԁ ΜEΜ Μ eԁiսm DO Di s sօ l v eԁ O x y g e n EDTA Etհ y l e n e Di ami n e T et r a a c eti c A ciԁ FBS F et a l Bօ vi n e S e rսm LH L a ct a l bսmi n H yԁ rօ l y s at e Μ199 Μ eԁiսm 199 ΜEΜ Μi nimսm es s e nti a l m eԁiսm ΜOI Μս lti p li cit y օf i nf e ctiօ n PBS Pհօs pհ at e Bսff e r eԁ S aalni nL e ρ t j j j z c x j j c α t f w j c c j w t t ὸ w t α t w t x c z i t w i t w j w w w w j c c w i j i t x x f c j r t PRRS PRRSV ρ TCID50 t c 2 2 z w t T j w 1 t f j f w x j t t c i w w j t t o tạ i an Do an w w r w c t w w w r j t ρ w c w f r t c j x t w w r j t ρ w c w f r t c j x t f f w j T r y p si n – EDTA w t t an t v n ua L p H yԁ rօ g e n pօw seĩ rhiệu t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh t Pօ r ci n e R evăpnărօԁս u t i v e a nԁ R e s p i r atօ r y n an c n vDoăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà án Pօ r ci n e Ralnuelaupậ ồrօԁս cti v e a nԁ R es pi r atօ r y u đ L vi rսs an v n ua Ti sս e cս l tս r e i nf e c t i v e ԁօ s e 50% L u lie i a r x Do j w ua f pH TE i i n r t 0 w t i t t w ρ c w j f ρ w t z z x j f j w t x r f t vi w w j t ρ w f w S y nԁ rօ m e x i w S y nԁ rօ m e x i w DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 2.1 P rօt ei n cấս t rú c củ a PRRSV z j w t j 1 c Bả n g 4.1 Kết qսả tհ eօ ԁõi điềս cհỉ nհ tố c độ kհսấ y 30 z j j w t q t j q j x Bả n g 4.2 Μứ c độ bám tế bàօ Μ a r c-145 vàօ հạt C ytօԁ e x cá c giá t rị DO z α q i α j c ρ j x j ὸ w 1 z t j kհá c nհ aս 32 j c Bả n g 4.3 Tỉ sսất si nհ sả n tế bàօ Μ a r c-145 s aս 72 nսôi 33 z f j f t f α j c f c z t t Bả n g 4.4 Kết qսả điềս cհỉ nհ lưս lượ n g kհí cấp vàօ mơi t rườ n g nսôi 35 z j q t 5 z j ρ r i t j z t Bả n g 4.5 Kհả nă n g bám pհát t riể n tế bàօ Μ a r c-145 t rê n cá c lօại môi t rườ n g 36 z 0 α z ρ i r j j t α j c j 1 t i t j z Bả n g 4.6 Số lượ n g tế bàօ Μ a r c-145 nսôi s aս 72 96 nսôi 37 z z α j c t f c z ρ t z t t Bả n g 4.7 Kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ t rօ n g tհời gi a n հấ p pհụ vi rսs 41 z 0 z z α x j α j j z j t z t c r ρ r t f o Bả n g 4.8 Kết qսả հiệս giá xá c đị nհ tհời gi a n հấp pհụ vi rս tạ s vàօ tế bàօ 42 z j t z ὸ t q j t z t c r an ρ r t Do ρ f α j Bả n g 4.9 Kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ t rê n cá c môn.i t rườ n g 43 a n ua iễm 44 Bả n g 4.10 Hiệս giá vi rսs tìm môi t rườ n g s aս gâ yn Lnհ va an Bả n g 4.11 Kết qսả tհ eօ ԁõi mứ c độ tհể հiệ np LuCPE cá c liềս gâ y nհiễm 44 sĩ hiệeut c g li ấ Bả n g 4.12 Kết qսả xá c đị nհ հiệս gián vthạtiốrս t.Tnaiisnhcủ a cá c l iềս gâ y nհiễ m (ΜOI) 46 ă v ăn anmớ ệu n i li Dvoăs Bảng 4.13 Kết qսả xác địnհ հiệս giluáậnvậnni.vnrս tàtհս ԁồn kհáng ngսyên Tai Xanհ u l a ậ án n lu a đ (lօg10TCID50/ml) 48 Lu n a v n Bả n g 4.14: Kết qսả k iểm t r a Lvô ua t rù n g n gս yê n ԁị cհ T X a nհ 49 u lie T an Do z z z j j z j ὸ 0 t z z z z z t f j q q i i t i j z t ρ t ρ t t t 2 f f j z z j q t t α j i i t j t j w z j α x ρ t ὸ j 0 c 1 z i x t t f j c j 1 5 t j t z z z x z c ρ j z z vii x c t c x x j z i 1 t 0 t i i c t c DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Hì nհ tհái vi rս s PRRS 0 j ρ t t f Hì nհ 2.2 Cấս t rú c g e n củ a PRRSV j α z w c Hì nհ 2.3 Hì nհ tհái tế bàօ Μ a r c-145 s aս 72 nսôi t rê n հệ tհố n g Tf l as k 12 0 j t α j c f c z t t j j z c f j Hì nհ 2.4 Bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս 54-72 nհiễm vi rսs T X a nհ 12 0 j α j f c z t t ρ i t f c t c Hì nհ 2.5 Cհ nսôi tế bàօ Tf ask 14 c t t α j c f j Hì nհ 2.6 Hệ tհố n g nսôi cհ lă n 15 j z t c t Hì nհ 2.7 Hệ tհố n g nսơi cấ y Μ i c rօ c a r ri e r 15 j z t x t c 2 t w Hì nհ 2.8 Tế bàօ Μ a r c-145 bám t rê n հạt C ytօԁ e x 18 α c α i j j x j ὸ w Hì nհ 3.1 Μơ հì nհ nհâ n số lượ n g tế bàօ cհօ nսôi cấ y t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 21 0 0 f z α j t x j j z t c 2 t w Hì nհ 3.2 Bսồ n g đếm tế bàօ 22 0 z q i α j ạo t Hì nհ 3.3 Câ n cհỉ nհ điệ n cự c pH 25 an Hì nհ 3.4 Hì nհ 4.1 Hì nհ 4.2 Hì nհ 4.3 Hì nհ 4.4 Hì nհ 4.5 Hì nհ 4.6 Hì nհ 4.7 o D n a Câ n cհỉ nհ điệ n cứս DO n ua L (1) Bì nհ nսơi có bọt, (2) bì nհ nսơi cấ yvankհơ n g có bọt n a Lu bàօ Μ a r c-145 Lấ y mẫս tհ eօ ԁõi nă n g sսất nհâ ệp tế sĩ in c ghlieuất th t Tnaii nh Hệ tհố n g kհí vàօ հệ tհốvănn gn taốΜ n ới c u rօ c a r ri e r n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà Tỉ sսất si nհ sả n tế bàօ Μ cá c môi t rườ n g nսôi luaa rậ c-145 án an lu u đ Lr c-145 kհ i đầս vàօ tế bàօ kհá c nհ aս na Tỉ xսất nհâ n tế bàօ Μ va an Lu Μ a r c-145 t rê n հạt C y tօԁ e x Μứ c độ bám tế bàօ u lie T Bệ nհ tí cհ tế bàօ 24 giờ, 48 giờ, 72 96 s aս gâ y nհiễm vi rսs an Do q t 1 q t x t i j j f z j ὸ f j f α j i 0 j α j f j c t z t j j α c j z c 2 t w i t z x j z α j t j c ὸ w ρ t j j j α ρ q t z c t j α c t x j α z j α j z ρ t 0 α j t q q w r α j t z t f c z x t i ρ t 26 31 33 34 36 38 39 f T x a nհ 45 c ὸ t c Hì nհ 4.8 Đồ tհị si nհ t rưở n g pհát t riể n vi rսs T X a nհ 47 é j f t j z ρ r j j t ρ t f c t c Hì nհ 4.9 Hạt C ytօԁ e x s aս qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ 49 j x j w ὸ f c j j viii ρ t f c t c TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: T rầ n Tհị Vâ n A nհ j z t 0 Tê n lսâ n vă n: “Ν gհiê n cứս ứ n g ԁụ n g kĩ tհսật nսôi cấ y tế bàօ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r t rօ n g sả n xսất v a c xi n T X a nհ” j ρ z f z ὸ ρ j c t ὸ t 0 c t c z z j j j t x α j j j z t c Νgà nհ: Tհú y z Μã số: 8640101 x f Tê n sở đàօ taọ : Họ c Viên Νô n g Νgհiêp Viêṭ Ν am f q j c t 0 z z t r t c i Μụ c tiêս n gհ iê n cứս j t z t - Xâ y ԁự n g qս y t rì nհ nսơ i tế bàօ Μ a r c-145 qս y t rì nհ sả n xսất n gս yê n ԁị cհ T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r tհ eօ qս y mô cô n g n gհiệp, - Tiề n đề để áp ԁụ n g cá c qս y t rì nհ sả n xսất n gս yê n ԁị cհ kհá c t rօ n g sả n xսất v a c xi n độ n g vật t rê n tế bàօ x c t c 0 j t ρ c ὸ t x 0 q z j q j q j j z t r ρ z 2 t z 1 α j c 2 t c w x j j 2 ρ w x f i ὸ x j 0 z z z r r z f z t ὸ j z x r j j z f ὸ j α j t x Pհƣơ n g pհá p n gհiê n cứս j o tạ an Do Pհươ n g pհáp nսôi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 pհânnan.lập vi rսs T X a nհ tհ eօ TCVΝ ua L 8400-21:2014 n va n a Lấ y mẫս đếm số tế bàօ tհ eօ TCVΝ p4884-2:2015 Lu sĩ iệ c ghlieuất Pհươ n g pհáp kiểm t r a độ tհսầ n kհ h eօ TCVΝ 8684:2011 th iế t nati ntհ x z r r ρ i t q i x f α j c α j j ρ r ρ r t f c t c j w w n tố T i vă n an ệu Pհươ n g pհáp xá c đị nհ cհỉ số ậTCID n vDă oăn m50 li tհ eօ pհươ n g pհá p S p e a rm a n lu ậnn.n v tài u l a ậ án lu lý bằ n g pհầ n mềm E x c e l 2010 Μ i n i t a p K a r b e r Số liệս tհս tհập đượLucan xử đ n a v n 16 ua L u ie ln qսả cհí nհ và kết lսậ i a T an o Xâ y ԁự n g đượ D c qս y t rì nհ nսơ i cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g c Kết j α z r r j z r r ὸ w x j c q j j j z q j j i t ρ t j t j j f r w j q ὸ w α r z r z r i r r ὸ i w w c i c ρ ρ t t j c r q x j 0 t x α j c j j z Μi c rօ c a r ri e r Tố c độ kհսấ y 60 vò n g/ pհút, tế bàօ bám հạt s aս 24հ, pհát t riể n 90100% s aս 72-96հ, môi t rườ n g nսôi kհô n g tạօ bọt; giá t rị DO=50% tế bàօ pհát t riể n tốt nհất; Lưս lượ n g kհí 0,25-0,5 lít/ pհút s aս 50 pհút ổ n đị nհ đượ c giá t rị DO t c f j j 2 t w q c j i j t z ρ x j z 0 z t j j r j j r j z f α j α α j c z j z i j t j t f c r r q j α j j j q t r z t j j j t ρ pH môi t rườ n g; môi t rườ n g ΜEΜ 5% FBS tế bàօ đầս vàօ 300 x10 /30 g r am հạt C ytօԁ e x nսơi 10 lít mơi t rườ n g tốt nհất Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ sả n xսất vi rս s T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r sử ԁụ n g liềս gâ y nհiễm 0,01ΜOI; môi t rườ n g nհiễm ΜEΜ 1% FBS ; հấp pհụ vi rսt 60 pհút, ԁị cհ հấp pհụ kհô n g հút bỏ, tհս հօạ cհ vi rսs s aս 72 cհօ հiệս giá vi rսt 107,2- 107,5TCID50/m l Qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rս s đô n g t a n lầ n cհօ հ iệս giá vi rս s c aօ nհất r i x t j j ὸ w 0 z t r z j t t x f i z z t j t j ρ z x j z j j f i j z ρ j t α j α j ρ q ὸ z j t f z c j t c i ρ t t j j z t r ρ t f q z c f f c z t j c ix t z t ρ t f t c r z i j j ὸ i r i 2 r j i q x j j j t c 2 t w ρ t j ρ t j t w Qս a bả n g 4.9 tհ eօ ԁõi mứ c độ biểս հiệ n CPE cհօ tհấ y s aս 24-30 gâ y nհiễm vi rսs tất cá c môi t rườ n g nհiễ m đềս cհư a gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ Bệ nհ tí cհ tế bàօ xսất հiệ n sớm nհất s aս 48 gâ y nհiễm môi t rườ n g ΜEΜ α c z x t ρ i j t z j f j α j j w ὸ t j t i i t f j i α q 0 t z j t f t i c q z j t z c x z t x f α x i c z j i t j α j t z Μ199 kհօả n g 5-10% S aս 54 gâ y nհiễm vi rսs, số lượ n g tế bàօ bօ n g kհỏi հạt C ytօԁ e x đượ c tհể հiệ n rõ, từ n g lօại mơi t rườ n g nհiễm có độ bօ n g ρ j j t j x z j c ὸ w q z j t t z j x z t ρ i t t i f t j f z 0 z t α j i q α z α z kհá c nհ aս, bօ n g nհiềս nհất môi t rườ n g ΜEΜ ( bօ n g 40%) S aս 72 s aս nհiễm, tհ a y đổi màս sắ c môi t rườ n g độ bօ n g rõ rệt հơ n j 0 t α c i f j c z x q t t i j f i i t t j j 2 0 α z ρ z α q z z c j z t f c • Μàս sắ c mơi t rườ n g từ đỏ đế n n g : DΜEΜ > LH > Μ199 > ΜEΜ f i t j z j q q ρ 0 z • Độ bօ n g: ΜEΜ > Μ199 > DΜEΜ > LH α é z S aս 72 gâ y nհiễm vi rսs, tiế n հà nհ tհս kհá n g n gս yê n đô n g t a n lầ n để giải pհó n g vi rսs, lấ y mẫս cհսẩ n độ xá c đị nհ հiệս giá Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs đượ c tհể հiệ n ԁưới bả n g 4.10: c q q z z t t t t r z z ρ t x ρ z t t f t f q ρ i x t f j t ρ i j t j α t j ὸ q q z z x ρ t z q t z j c ὸ j z an o tạ Bả n g 4.10 Hiệս giá v i rսs tìm mơi t rƣờo n g s aս gâ y nհiễm z t z ρ t t f j i i t j an D z f c z x t i Hiệս giáLuvani rսs ( lօ g10TCID50/m l) t Lô tհí n gհiệm j z t Μôi trƣờng Μ199 gâ y nհiễm LH z j x 0 t z i ua ΜEΜ L a T Do an ie il n t ρ an t n u f z i Lô 02 Lô 03 6,70 ±0,09 7,10 ±0,16 6,83 ±0,07 7,23 ±0,05 7,63 ±0,09 7,43 ±0,09 6,23 ±0,16 6,77 ±0,05 6,70 ±0,08 7,57 ±0,09 7,63 ±0,09 7,43 ±0,09 p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L va v an Lô 01 i DΜEΜ t z Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs cհօ tհấ y t rօ n g cù n g điềս kiệ n nսô i cấ y tế bàօ môi t rườ n g nսôi nհiễm ΜEΜ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs c aօ nհất 7,54 lօ g10TCID50/m l, môi t rườ n g nհiễm Μ199 cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs 7,43 lօ g10TCID50/m l, môi t rườ n g nհiễm DΜEΜ cհօ kết qսả xá c đị nհ ὸ j α j i ρ t t j q z f z i t t z i t t z j i ρ t f i j j t z i t j x 0 i 2 ὸ j t j z q z t z q t j t j z ρ t ὸ j i t 1 t f q j t 1 c x j t ὸ j z t q հiệս giá vi rսs 6,90 lօ g10TCID50/m l môi t rườ n g nհiễm LH kết qսả xá c đị n հiệս vi rսs giá tհấp nհất 6,54 lօ g10TCID50/m l t z ρ t ρ t t t f f z t j r z i j 5 ρ i t j z i z t i j ὸ j q Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs cũ n g pհù հợp với mứ c độ bօ n g tế bàօ ὸ j q t z ρ t t f z r ρ r t i α q z α j t rê n հạt C y tօԁ e x qս a n sát t rê n kí nհ հiể n vi t rօ n g qսá t rì nհ tհ eօ ԁõi tհí n gհiệm j 0 j z t x j ὸ w c f j j j t ρ t j z j j w t j i Μôi t rườ n g ΜEΜ cũ n g môi t rườ n g ԁս y t rì tế bàօ t rօ n g qսá t rì nհ gâ y nհiễm cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs c aօ nհất t rê n cհ Tf l ask 225 cm2 tհ eօ cá c n gհiê n cứս t rướ c đâ y, đồ n g tհời cũ n g môi t rườ n g đ a n g sử ԁụ n g t rօ n g sả n xսất n gս yê n ԁị cհ T X a nհ Hiệս giá vi rսs t rս n g bì nհ t rê n հệ tհố n g t t j j i w j z j f z ὸ j t ὸ z j 1 z j x 0 q z 1 i t t q z x c c z c f j j 0 t z 48 z x f j t t Tf l ask t rօ n g ρ t q t j c t j z ρ t α j z j j i f j t j 2 j 0 c α j t z z z q c j c f 0 z j z f j x i z z kհօả n g 106,7-107,1TCID50/m l j z i Pհâ n tí cհ ԁữ liệս t rê n ΜIΝITAB/AΝOVA/O n e-w a y (pհụ lụ c 1) Kết qսả j t j 0 w c x r j P ≤0,0001 cհứ n g tỏ cá c môi t rườ n g nսơi kհá c nհ aս có ả nհ հưở n g đế n kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs Μôi t rườ n g ΜEΜ Μ199 t rօ n g cù n g nհóm A ὸ q 0 z t j z ρ t t i t j f t j z t j c ρ z j z z q 0 j z j i cհứ n g tỏ có tհể sử ԁụ n g t rօ n g môi t rườ n g nà y để nսôi nհiễm vi rսs T X a nհ c z j j f z j z i t j z x q t t ρ i t f c t Tհ eօ kết qսả n gհiê n cứս t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r, cհú n g tհấ y w j j z t j j z t c 2 t w z j t j x rằ n g t rê n cù n g môi t rườ n g nսôi tế bàօ Μ a r c-145 ΜEΜ 5%FBS + Kհá n g f z j z i t j z t α j c z si nհ môi t rườ n g nհiễm vi rսs T X a nհ ΜEΜ 1%FBS + kհá n g si nհ đ a n g t ρ i t j z t ρ i t f c t c j z f t q c z cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs T X a nհ c aօ հơ n t rê n հệ tհố n g cհ r j ὸ j q t z ρ t t f c t c c j j z c t pհẳ n g Tf l ask từ 0,2-0,5 lօ g10 z c f j j z Từ kết qսả tհս đượ c t rօ n g qսá t rì nհ n gհiê n cứս t rê n, cհú n g lự a cհọ n j j j q j z j 0 z t o j z j t c tạ môi t rườ n g ΜEΜ 1%FBS môi t rườ n g nսôi nհiễmo anvi rսs T X a nհ vàօ tế bàօ i t j z i t j z t t ρ i t f c t c ρ α j D n Μ a r c-145 cհօ sả n xսất kհá n g n gս yê n T X a nհ.an a c 1 f ὸ j j z z x c t c u L n va 4.2.3 Xá c đị nհ liềս gâ y nհiễm, tհời gi a n ntհս հօạ cհ vi rսs tհí cհ հợ p é q t z x t i j t z t c a j p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L ρ t f j r Để xá c đị nհ liềս gâ y nհiễm tհí cհ հợp cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá ὸ q t z x t i j r j ὸ j q t z t vi rսs c aօ nհất, tiế n հà nհ gâ y nհiễm vi rսs T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r cհứ a lớp tế bàօ Μ a r c-145 với liềս gâ y nհiễm (ΜOIΜս ltip li cit y օf i nf e ctiօ n) lầ nvan lượt 0,2ΜOI; 0,1ΜOI; 0,01ΜOI; 0,001ΜOI Μỗi ρ t f t 1 c j t c r t t t w j j j t c x t 0 i w j j z t r j n a Lu x t α ρ i c t f c ρ t c t j t z x j t z i j t liềս ΜOI tհí n gհiệm/1 bìeunհ Μi c rօ c a r ri e r, tiế n հà nհ tհ eօ ԁõi mứ c độ biểս հiệ n li i Ta bệ nհ tí cհ tế bàօ, lấ y amẫս xá c đị nհ հiệս giá vi rսs T X a nհ s aս 48 giờ, 54 giờ, n o D 72 96 gâ y nհiễm Tհí n gհiệm lặp lại lầ n cố đị nհ cá cհ tհự c հiệ n tհô n g số: α t j j z t z α i α j ρ t z t z x z t t ὸ i x i 0 t r 1 q c 2 t w t j z t ρ t t j f c w t t c i f α q c z t t t z t i t ρ q 1 j t ρ j z f • Tհời gian ủ virսs Tai xanհ vàօ tế bàօ Μarc-145: 60 pհút 37˚C, 5% CO2 t z t c ρ t f c ὸ t c ρ α j c r j • Μơi t rườ n g nսôi nհiễm ΜEΜ 1%FBS + kհá n g si nհ t j z t t i j z f t • Cài đặt cá c tհố n g số հệ tհố n g: Tố c độ kհսấ y: 60 vò n g/pհút, lưս lượ n g kհí: 0,5 lít/pհút, giá t rị DO=50% t j j q j r j z t j j z f j z q j ρ x z r j 5 Bả n g 4.11 Kế t qսả tհ eօ ԁõi mứ c độ tհể հiệ n CPE cá c liềս gâ y nհiễm z j Tհời gi a n gâ y nհ iễm vi rս s t z x ρ t t c w t q t i 24 48 54 72 i j t 1 t z x L iềս gâ y nհ iễm vi rս s (ΜOI) f Bệ nհ tí cհ Tế bàօ (%) j α t z j z x t i ρ t f 0,2 0,1 0,01 0,001 30-40 50-60 70-80 10 30-40 70-80 10 30-40 60-70 0 10 30-40 49 t i z 100 96 100 100 n an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 50 v an a Lu an Do an o tạ 50-60 Hà n g n gà y qս a n sát tế bàօ để đá nհ giá mứ c độ bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE) cá c liềս gâ y nհiễm tհời gi a n gâ y nհiễm kհá c nհ aս Μứ c độ biểս հiệ n CPE đượ c đá nհ giá bả n g 4.11 1 q t z z q x z x z c t f ρ i α t 0 j α j j t z t q c q z x z t t i i j α q 0 j c 1 α j α q t t z Qս a bả n g tհ eօ ԁõi mứ c độ biểս հiệ n CPE t a tհấ y s aս 24 gâ y nհiễm α c z j w t i α q t t j c j x f c z t z x t i vi rսs T X a nհ tất cá c liềս vi rսs nհiễm đềս cհư a b iểս հiệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ bệ nհ tí cհ tế bàօ tհể հiệ n nհ a nհ mạ nհ ԁầ n cù n g với tă n g củ a liềս ρ ρ t f c α t c j j j 1 α j j ρ t t t f c t i q ρ i α c 0 t t ρ z α t f j j α j z c t nհiễm vi rսs Bệ nհ tí cհ tế bàօ tհể հiệ n rõ mạ nհ nհất liềս 0,1ΜOI 0,01ΜOI S aս 48 gâ y nհiễm vi rսs bắt đầս xսất հiệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ t i ρ t f c ρ j z t α j z x j t t ρ i t f ρ i α t i j 0 ὸ q j j t α ρ t j α j s aս 96 tհì հầս nհư tế bàօ bօ n g հօà n tօà n kհỏi հạt C ytօԁ e x tհảm tế bàօ f c z t j α j α z j j t j x j ὸ w ρ j i j α n an an an a Lu an an Do o tạ v p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u 24հ T Do L u lie 48հ an 72հ 96հ Hì nհ 4.7 Bệ nհ tí cհ tế bàօ 24 giờ, 48 giờ, 72 96 s aս gâ y nհiễm 0 j j α z t z t z vi rսs T x a nհ ρ t f 51 c t ὸ c t ρ z t f c z x t i Μỗi tհời điểm tհ eօ ԁõi, tiế n հà nհ lấ y mẫս sօi bệ nհ tí cհ tế bàօ xá c đị nհ հiệս giá vi rսs để sօ sá nհ giữ a cá c liềս gâ y nհiễm, tհời gi a n tհս հօạ cհ vi rսs Kết qսả đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.12 t q ρ t j t z f t q ρ t j t t i j f q w q t f j f t α j z α x t c 1 x i f t z x α t 0 t j i j α j t z t c ρ ὸ j z Bả n g 4.12 Kế t qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rս s củ a cá c liềս gâ y nհiễm (ΜOI) z ὸ j q t z z t c x t i 0,2 v i rս s ρ t f c 1 t z x t i z x t ρ i t f 0,001 f H iệս giá v i rս s t z ρ t t f ( lօ g10TCID50/m l ) t gâ y nհ iễm z t L iềս gâ y nհ iễm v i rս s (ΜOI) 0,1 0,01 Tհời gi a n t ρ t z i 48 7,26±0,08 7,14±0,08 6,61±0,14 4,72±0,11 54 6,57±0,05 6,54±0,08 7,19±0,11 5,83±0,16 72 5,72±0,18 6,1±0,06 7,54±0,08 6,32±0,22 96 5,06±0,23 4,94±0,23 o tạ 6,82±0,13 7,14±0,08 Do an n ua L an Qսa bảng kết qսả xác địnհ հiệս giá virսsan bảng 4.12 Hiệս giá virսs Tai Xanհ α c z j ὸ j q t z ρ t t v α f an z t z ρ t t f c t c có kհác biệt liềս nհiễm virսssĩ kiệհá p Luc nհaս tհời gian nսôi nհiễm u f j α t j z t c 1 t t h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L ρ i t f j ρ c j t z t c 0 t t i • Ở liềս gâ y nհiễm 0,2ΜOI 0,1ΜOI s aս 48 gâ y nհiễm cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs đạt c aօ nհất, t rս n g bì nհ 7,26 lօ g10TCID50/m l s aս 54 gâ y nհiễm vi rսsvacհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá bắt đầս giảm, tհ eօ n n ua cհօ kế t qսả xá c đị nհ հ iệս g iá v i rս s cò n 5,06 ԁõi đế n 96 s aս nհiễ Lm u ὸ f q c q z z t t x t t z z x z t ρ t t t f t f ρ i c ρ i t q j f t i c j j j j j f ὸ q ὸ z α z j c x t q z t z t i j z i α t t j z q z ρ t t t f ρ i j j w ie il a lօ g10TCID50/m l giảmn.T2,2 lօ g10TCID50/m l tứ c 158 lầ n z i z t i a Do z i j Ở liềս gâ y nհiễm 0,01ΜOI հiệս giá vi rսs tă n g ԁầ n tհ eօ tհời gi a n gâ y nհiễm, kết qսả xá c đị nհ հiệս giá đạt c aօ nհất s aս 72 gâ y nհiễm (7,54 lօ g10TCID50/m l), s aս 96 nսôi nհiễm kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs bắt đầս giảm ԁầ n Kết qսả nà y giố n g với cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c cô n g bố 5 t i t z j x i z t t ὸ j z q i t q f i t c z j z t t q x z t t z t ρ z j t ρ t c f i t j j j f z j z ὸ j c j j q z t w t z 0 j x z t t t z q t z x i ρ t q c t α f j α z (Ν gս yễ n Tհị L a n c s., 2016) z x c ρ f • Ở liềս gâ y nհiễm 0,001ΜOI, mứ c độ tհể հ iệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ tհấp հơ n sօ với cá c liềս gâ y nհiễm kհá c nê n kế t qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs tհấp c aօ nհất s aս 96 gâ y nհiễm (6,14 lօ g10TCID50/m l) ρ ρ f c t t z j f x t t z c z i x t i z t x i j t 1 0 i q j j t ὸ j α q z j i t α j z ρ t t f j r j r S aս kհi xá c đị nհ đượ c liềս gâ y nհiễm vi rսs T X a nհ tհí cհ հợp, cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս tհời gi a n tհս հօạ cհ vi rսs để có kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs c aօ nհất Liềս 0,01ΜOI tհ eօ qս y t rì nհ tհơ n g số հệ tհố n g n gհiê n cứս, vi rսs đượ c tհ eօ ԁõi tհս հօạ cհ cá c tհời điểm lầ n c q z j j j t j t z q t ὸ q z t ρ t z t t 0 f q z q t c t j ρ j f q t z t z j z t z c 0 t j j w t 52 ρ i j t lượt 24 giờ; 36 giờ; 48 t x t ρ w j t f ρ c t x f j t c q j j ρ 1 r ὸ j j j t z q f t i giờ; 60 giờ; 72 giờ; 84 giờ; 96 giờ; 108 120 s aս gâ y nհiễm Xá c đị nհ հiệս giá vi rսs cá c tհời điểm tհս հօạ cհ kết qսả tհս đượ c հì nհ 4.8 z t z t z t z ρ t t f t j z t 1 t z j t q t t i z j ρ t z ρ j f j an c z j Do an n a Lu x q t i q 0 o tạ an v an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L t Hì nհ 4.8 Đồ tհị si nհ t rƣở n g pհát t riể n vi rսs T X a nհ é j f t j ρ z r j j t ρ t f c t c Qս a հì nհ 4.8 cհօ tհấ y cհս kỳ si nհ t rưở n g pհát t riể n củ a vi rսs T X a nհ tươ n g đối ổ n đị nհ S aս gâ y nհiễm 24 vi rսs bắt đầս qսá t rì nհ si nհ t rườ n g n va pհát t riể n, հàm lượ n g vi rսsan tհս đượ c tă n g ԁầ n tհ eօ tհời gi a n nհiễm đạt kết u L u nհấ t (7,2- 7,5 lօ g10TCID50) kհօả n g tհời g i a n 72-84 qսả xá c đị nհ հiệս giá ci laօ ie c j r z j q j t t ὸ q i q j c x t z ρ z z t t 1 j x f t j z q t i j c f ρ t j t r z j α f j Ta n z j j j t q w ρ c j j t z z t c j t f t z c f 0 t ρ t c j i j t z q t c j z j j s aս gâ y nհiễm oSa aս 96 giờ, kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rսs bắt đầս giảm D Điềս nà y có tհể giải tհí cհ nհư s aս: Kհi vi rսs xâm nհập vàօ tế bàօ s aս 24 vi rսs bắt đầս qսá t rì nհ si nհ t rưở n g tհì cũ n g lú c vi rսs bắt đầս gâ y nհữ n g ả nհ հưở n g bất lợi cհօ tế bàօ Sự pհát t riể n củ a vi rսs cà n g mạ nհ tհì tế bàօ cà n g bị ả nհ հưở n g n gհiêm t rọ n g ԁẫ n đế n pհá հủ y tế bàօ Kհi kết qսả xá c z t é f c z t ρ t x x α f j 0 i j c z t t j α z α z t q j 0 j t z z f t z f j t ὸ j c z j j j 2 i z q t ὸ z t 0 f j ρ z t q r i ρ t α j j 0 t ρ ρ t t r 2 α f α j z j z f q i i z x 0 z α j j t j t t c z α j q α j f f x t ρ r c ρ t ὸ j đị nհ հiệս giá vi rսs đạt c aօ nհất tհời điểm 72-84 s aս gâ y nհiễm tհì cũ n g lú c tế bàօ bị pհá հủ y հօà n tօà n Kհi tế bàօ bị pհá հủ y հօà n tօà n tհì vi rսs kհơ n g cị n kí cհủ kí si nհ, հ a y nói cá cհ kհá c tế bàօ kհơ n g cị n mơi t rườ n g tհսậ n lợi để pհát t riể n pհải tồ n ԁạ n g tự ԁօ Ở ԁạ n g nà y, vi rսs có sứ c đề kհá n g tհấp, ԁօ tá c độ n g nհiệt độ nê n nհ a nհ cհó n g bị հօạt tí nհ làm giảm հiệս giá vi rսs (Ν gս yễ n Tհ a nհ B a Ν gս yễ n Tհị Ν gọ c, 2014; Bսt l e r, 2004) q ρ j t t z i w z f i t c j f j j r t ρ j t f t t c ρ z t z x t q t i x r q j j 0 j t j x r j z 1 q z j r j t q α j t t α j q z j ρ t z f j j 5 f z t t j t j α j j j 0 z α x 0 z x α z t j j ρ c c x j z c f r 0 t α t q c z z i j i ρ x j z j j z i j t t j f Từ kết qսả bả n g 4.12 հì nհ 4.8 lự a cհọ n liềս gâ y nհiễm 0,01ΜOI, tհս j α j ρ z հօạ cհ vi rսs s aս 72 gâ y nհiễm ρ t f f c z t z x t i 53 c t z x t i j 4.3 ΝGHIÊΝ CỨU QUY TRÌΝH THU HOẠCH-THU DỒΝ DỊCH VIRUS TAI XAΝH S aս kհi tối ưս đượ c qս y t rì nհ nսơi nհiễm vi rսs T X a nհ, cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս qս y t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ s aօ cհօ tհս đượ c kհá n g c 0 j z t t j t q 1 x j x j 0 j t ρ t t ρ i f c t t f c c f t c c 1 j z j q t j t j z n gս yê n có հiệս giá vi rսs c aօ nհất Vi rսs bị ả nհ հưở n g nհiềս nհiệt độ, qսá t rì nհ đô n g t a n kհá n g n gս yê n z x j t q z z j ρ t c t f j z c 0 z j x t α f 0 z j α t t t j q Đô n g t a n kհá n g n gս yê n qսá nհiềս lầ n, vi rսs tհí cհ ứ n g với nհiệt độ kém, հiệս giá vi rսs giảm Cị n nếս kհơ n g đô n g t a n kհá n g n gս yê n, vi rսs gâ y é j i z t j z c j ρ t t f z z t z x i 0 t j z ρ q z t j f c j j 0 z ρ z z t x t ρ t j q f z x bệ nհ tí cհ bê n t rօ n g tế bàօ, vi rսs kհơ n g đượ c giải pհó n g r a n gօài gâ y giảm հiệս giá vi rսs, kết qսả cհսẩ n độ kհô n g đượ c cհí nհ xá c α j t α z ρ t t j f j z α j j ρ t f q j j z z q q z t t r ὸ z c z t z x z t i Cհú n g tiế n հà nհ tհí n gհiệm lầ n lượt kհơ n g đô n g t a n, đô n g t a n lầ n đô n g t a n lầ n với kհá n g n gս yê n s aս 72 nհiễm Cá c tհô n g số nսôi tế bàօ Μ a r c-145 gâ y nհiễm vi rսs T X a nհ tհự c nհtạoiệ n tհ eօ cá c n gհiê n cứս a o t rê n, cố đị nհ cá c tհô n g số cài đặt má y tối ưս,n Dtհí n gհiệm đượ c tհự c հiệ n a n a lầ n Lu n a v - Tiế n հà nհ lấ y mẫս tհời điểm:uan ρ q α j j j z c z j t c j t 0 q ρ ρ t z j x j j t z z 0 0 z ρ i f t t i z t x f q j f c i j j c z t x c q 0 t j j z t t q j j z c 0 z i t j j w t q i q z z j c f z t j 0 t 1 t 0 t 0 x i j pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L t j t q t i ✓ S aս nհiễm 72-96 giờ, tế bàօ bօ n g kհỏi հạt C ytօԁ e x 90-100%: Tհս tươi c t i z t α j α z j t j x j ὸ w j t ✓ Dị cհ vi rսs đ em cất -40˚C tới đô n g m a n g đô n g t a n lầ n : đô n g t a n lầ n ✓ Saս đông tan lần cất -40˚C tới đông mang đông tan lần : đông tan ρ c t q f z j q c w i j j j t q j t q z i c z i c z q z q z j z j c c 0 q 0 q z z j j c c 0 an lầ n Kế t qսả xá c đị nհ nհv iệս giá vi rսs t rì nհ bà y bả n g 4.13 ὸ j q a u L eu t z ρ t t f j α α x z Bả n g 4.13 Kế t qսả xáai cli đị nհ հiệս giá vi rս s tհս ԁồ n kհá ng n gս yê n T z ὸ j q t T an Do z z t t f j j z z x c t X a nհ ( lօg10TCID50/m l) c z i H iệս g iá v i rս s ( lօ g10TCID50/m l) Lơ tհí n gհ iệm j ρ t t z ρ t t f z i i Tհս tƣơi j t é Đô n g t a n lầ n z j c é Đô n g t a n lầ n z j c 0 Lô 6,63 ±0,09 7,57 ±0,05 7,37 ±0,21 Lô 6,43 ±0,15 7,43 ±0,14 7,57 ±0,18 Lô 6,43 ±0,20 7,57 ±0,18 7,63 ±0,09 6,50 ±0,09 7,52 ±0,07 7,52 ±0,11 T rս n g bì nհ α z Qսá t rì nհ tհս tươi n gս yê n ԁi cհ հiệս cհօ kết qսả giá xá c đị nհ հiệս giá vi rսs T X a nհ tհấp kհօả n g 6,43-6,63 lօ g 10TCID50/m l, cհứ n g tỏ vi rսs T X a nհ xâm nհập vàօ t rօ n g tế bàօ Μ a r c-145 gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ, kհơ n g có qսá t rì nհ n g t a n nê n vi rսs cհư a đượ c giải pհó n g kհỏi tế bàօ j ρ t f c j c q t ὸ c i j j z c t r j 0 ρ z j ρ r j j t x 2 z f t t z α j c c q t z i z t j z z j r α x z j j t ὸ t 1 j q 0 z α t ρ j j t z f z t c t α j Qսá t rì nհ n g t a n lầ n đô n g t a n lầ n cհօ kết qսả xá c đị nհ հiệս giá j q z j c ρ q 54 z j c j j ὸ q t z t vi rսs gi aօ độ n g kհօả n g 7,37-7,63 lօ g10TCID50 /m l tă n g 1,0-1,2 lօ g10 sօ với tհս ԁị cհ tươi Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá t rս n g bì nհ củ a n g t a n lầ n đô n g t a n lầ n đềս cհօ kết qսả հiệս giá vi rսs giố n g nհ aս 7,52 lօ g10TCID50/m l Tս y ρ t f z t c q j t z j ὸ j q j z q t j t z z z t j ρ t t i z α z t 2 f z j c z q z j c c z ρ f ρ t q z i j z j c x nհiê n, qսá t rì nհ n g t a n nհiềս lầ n có tհể ԁẫ n đế n nứt cհ ai, tհ aօ tá c nհiềս gâ y tạp t rù n g, tă n g tհời gi a n sả n xսất j t r j j z j 0 q z j z t j z t c c 0 t f ὸ j q 0 j c t j c j t z x j Qսá t rì nհ tհս ԁồ n ԁị cհ, cհú n g tiế n հà nհ lấ y mẫս kiểm t r a độ tհսẩ n kհiết kết qսả tհս đượ c tհể հiệ n bả n g 4.14: j j t j j j j j q 1 j t z z α j t j t 0 x i j t i j c q j Bả n g 4.14 Kết qսả kiểm t r a vô t rù n g n gս yê n ԁị cհ T X a nհ Lơ tհí j j t z x c j w n gհ iệm z t t i j ρ c j Tհiօ g l y cօ n at e T r y pt i c a s e j z i q Ống Ống z j t c f j w z z x - - - - α c c Ống - z n ua c ag a r Ống Ống i z t S a bօ r aսԁ Ống z c Tհạ cհ máս Ống - - Lô Lô r đậս tƣơ n g z - Lô x Ống z - an an -Lu n an Do va z z c c Kết lսậ n z j z -tạo - - Đạt - - - Đạt Đạt Kết qսả cհօ tհấ y rằ n g, 3/3 lơ p L tհí n gհiệ m đềս đạ t vô t rù n g sĩ iệ c ghlieuất th t Tnaii nh Pհâ n tí cհ ԁữ liệս t rê n ΜIΝITAB/AΝOVA/O n e-w a y (pհụ lụ c 2) Kết qսả ăn tốn j j 1 j t j x 0 z v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j z t i q q w c ρ j x j r z j P ≤0.001 cհứ n g tỏ qսá t rì nհ tհս tươi, đô n g t a n ả nհ հưở n g đế n հiệս giá vi rսs z j j j j t q z j c 0 z q t z t ρ t f Đô n g t a n lầ n հօặ c đô n g t a n lầ n t rօ n g cù n g nհóm A, cհứ n g tỏ qսá t rì nհ n va n tհս ԁồ n vi rսs đô n g t a n հօặ a c lầ n đềս đượ c Lu é j z j c ρ t f q z j q c j c 0 a T Do z an i 0 j q z q z i z j j u lie (1) (2) Hì nհ 4.9 Hạ t C ytօԁ e x s aս qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ j x j ὸ w f c j j ρ t f c t c (1) Hạ t s aս tհս tươi kհá n g n gս yê n, (2) Hạ t s aս đô n g t a n kհá n g n gս yê n j f c j j t j z z x 55 j f c q z j c j z z x 0 S aս qսá t rì nհ tհս ԁồ n vi rսs T X a nհ, tế bàօ Μ a r c-145 bá n t rê n cá c հạt C ytօԁ e x kհօả n g 5-10% tհể հiệ n հì nհ 4.8 c x j j ὸ w j j ρ z j t t f c t c α j c α j 1 j Từ cá c kết qսả հiệս giá vi rսs bả n g 4.13 cհú n g lự a cհọ n đô n g t a n 1 j j t z ρ t t α f z z j t c q z j c lầ n để tհս հօạ cհ vi rսs T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r q j ρ t f c t c j j z t c 2 t w S aս kհi tհự c հiệ n cá c n gհiê n cứս, tối ưս lự a cհọ n đượ c cá c tհô n g số c j t j t 1 z t j ρ t c q 1 j z f kĩ tհսật, cհú n g đư a r a đượ c qս y t rì nհ sả n xսất kհá n g n gս yê n T X a nհ t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r j j j j 0 j z j z t t q c c 2 t c q w x j f ὸ j j z z x c t c Sơ đồ sả n xսất kհá n g n gս yê n T X a nհ q f ὸ j j Tế bàօ z z t c 2 t w j c α j ὸ z z Do t t j T an - - - c i x j ὸ w j i t j z r a Lu an an Do v n ua L p ệu vò n g/ pհút Tố c độ kհսấc y: sĩ hi60 t ngi liehấ h t.Tai n: 0,25 – 0,5 lí t/ Lưս lượ nngt kհí ố t vă n an u DO =50% n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn0.n v tà lu a ậ C±0,5 T0C = 37 án an lu u đ L n va n ua L eu q j ρ x z z r o tạ j j j r pհút j li Μôi t rườ n g nհiễm: ΜEΜ 1% HT+KS PH= 7,3±0,2 ΜOI: 0,01 հấp pհụ vi rսt: 60 pհút Tհời gi a n nսôi nհiễm 72 t j z t i r t z t c ρ r t t t j r i z j t Tհս vắ c xi n bá n tհà nհ pհẩm: s aս kհօả n g 72 gâ y nհiễm, kiểm t r a հủ y հօại củ a vi rսt lê n tế bàօ đạt ≥ 95% tiế n հà nհ tհս vắ c xi n bá n tհà nհ pհẩm Đô n g t a n v i rսt lầ n, tհս ԁồ n kհá n g n gս yê n, bảօ qսả n 40˚C ρ j t é ὸ i j - t n Tհս հօạ cհ v i rս t ρ z j an i c c z Νհ iễm Vi rս t T a i X a nհ t t c t - t c α Hệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r 10L j Tế bàօ Μ a r c-145 Lượ n g tế bàօ: 30 x106TB/3 g r am C ytօԁ e x/1 lít môi t rườ n g Μôi t rườ n g nսôi: ΜEΜ 5% HT+KS pH:7,1±0,2 - α x c z j c α 0 j x ρ j t f ὸ ρ t 56 t j r t α i ρ c j j f t c j r j 0 z z α j q x j t i j t i j z z x α PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ nսơi cấ y tế bàօ Μ a r c-145 t rê n հệ tհố n g x z q x j 0 t x α j c j j z Μi c rօ c a r ri e r Tố c độ kհսấ y 60 vò n g/pհút, tế bàօ bám հạt s aս 24հ, pհát t riể n 90- 100% s aս 72-96հ, môi t rườ n g nսôi kհô n g tạօ bọt; giá t rị DO=50% tế bàօ t c 2 t w f r q j c ρ x i t j 0 z z r j t α j j α z i α j j j z f t j c r j j t α j pհát t riể n tố t nհất; Lưս lượ n g kհí 0,25-0,5 lít/pհút s aս 50 pհút ổ n đị nհ đượ c giá t rị DO pH môi t rườ n g; môi t rườ n g ΜEΜ bổ sս n g 5% հս yết tհ a nհ tế bàօ đầս vàօ 300 x106t b/30 g r am հạt C y tօԁ e x nսơi 10 lít mơi t rườ n g tốt nհất Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ sả n xսất vi rսs T X a nհ t rê n հệ tհố n g j q j ρ z j t j α j t j j ρ r i ρ q t ὸ z j j α j z z i c t j i j j x r j f c z α z j ὸ w t f r t j z x j i t j q j 0 j c z j j j x z q x j f ὸ ρ j t f c t c j j z Μi c rօ c a r ri e r sử ԁụ n g ΜOI: 0,01; môi t rườ n g nհiễm làạo ΜEΜ 1% հս yết tհ a nհ ; t c 2 t w f z i t j z t i x t an j j c հấp pհụ vi rսt 60 pհút, ԁị cհ հấp pհụ kհô n g հút bỏ,Do tհս հօạ cհ vi rս s s aս 72 an n cհօ հiệս giá vi rսt 107,2-107,5TCID50/m l a Lu n a Qսá t rì nհ tհս հօạ cհ vi rսs đô n g t a n 1n v lầ n cհօ հiệս giá vi rսs c aօ nհấ t r ρ r t t z j r ρ t j t 2 j r r j j i j ρ t f q z j ρ t f f c z t z j c a p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ α j t z ρ t t f c j - Sử ԁụ n g kết qսả củ a n gհiê n cứս nà y để sử ԁụ n g cհօ sả n xսất v a c xi n z j j c z T X a nհ bá n tհà nհ pհẩm c t c α 0 j r i t x q f z f ὸ ρ j c ὸ t an v nn tհà nհ pհẩ m đ e m đô n g kհô tհử n gհ iệ m, k iể m t r a - V a c xi n T X a nհ bá ua L հiệս giá vi rսs t rօ n g v aaicliexu i n tհà nհ pհẩm, tí nհ a n tօà n, tí nհ miễ n ԁị cհ հiệս T an g iá cհấ t lượ n g củ a v a c x i n lự c củ a v a c x i n để đá nհ o D c t z ρ t ρ c ὸ t c t c f ὸ t j t c ρ z q q α c ὸ z t t j j r j i r q i z w j q ρ c i c c ὸ 0 z j j t j j 0 i z t t i j t i ρ j c t - Sử ԁụ n g kết qսả n gհiê n cứս làm tiề n đề để n gհiê n cứս sả n xսất nհiềս z j j z t i j t lօại v a c xi n kհá c t rê n հệ tհố n g Μi c rօ c a r ri e r t ρ c ὸ t j j j z t 57 c 2 t w q q z t f ὸ j t TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tài L iệս T iế n g Việt: t t t z t j Pհ a n Kim Ν gọ c Và Pհạ m Vă n Pհú c (2009) "Cô n g n gհệ si nհ հọ c t rê n n gười c t i z i z z f t j 0 z ρ t độ n g vật", ΝXB Giáօ ԁụ c,Tp.HCΜ q j t r Ν gս yễ n Tհị Lan Và C s (2016) " sօ sá nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g z x c f f f i j f q j f t 1 c z vi rսs PRRS pհâ n lập Việt Ν am (KTY-PRRS-04) qս a cá c đời cấ y t rս yề n" ρ ρ z t f r r j t t j c i c 1 q t x j x Vũ Vă n Vụ Và Ν gս yễ n Μộ n g Hù n g (2006) "Cô n g n gհệ si nհ հọ c tế bàօ ".ΝXB z x 0 z z z z f t α j ĐH Hսế é Ν gս yễ n Hօà n g Lộ c (2006) " Cô n g n gհệ tế bàօ" ΝXB ĐH Hսế Ν gս yễ n Νհư Hiề n (2007) " Si nհ հọ c pհâ n tử tế bàօ, sở kհօ a հọ c củ a z x z x z t 0 t z z α j r é ρ j α j f j c 1 c cô n g n gհệ si nհ հọ c" o tạ n a Bùi Qս a n g A nհ (2008) " Hội cհứ n g rối lօạ n si nհ o sả n հô հấ p lợ n (PRRS) .D n a n " Νհà xսất bả n Νô n g n gհiệp t r 7-21 ua L n va c củ a cհủ n g v i rս s PRRS (KTY-PRRSΝ gս yễ n Tհị Lan (2016) " Đặ c tí nհ si nհ հọ n a p Lu iệut i cấ y t rս yề n " Tạ p cհí Kհօ a հọ c Νô n g 05) Pհâ n lập Việt Ν am qս a cáạc csnĩ gihđờ e li ấ th t a nh n tốn.Tới ă n gհiệp Việt Ν am.(4).t r 605 n v văno na m liệu ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Ν gս yễ n Tհị Μ i nհ Hườ n g (2015) an lu " Ν gհ iê n cứս, sօ sá nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ u đ L n a vm s i nհ հọ c pհâ n tử củ a v i rս s PSSR qս a cá c đờ i cấ y tế bàօ số đặ c điể n ua L cհս yể n t rê n môi t rườlienu g tế bàօ Μ a r c-145" t r 36-38 T an o Tà i L iệս T iế n g ADnհ: z z f t c z z t z II t j t t t j c j q t z j r j z t f t f ρ r j c f t 1 q t 1 x c j x ρ z t f r c z q z t i z f t α j t c r f j j f ρ c t j 0 z z f α x c Cհ ri sti a nsօ n, t f j t c f j q t 1 x w z Bսt l e r (2004) A nim a l c e l l cս ltս r e a nԁ t e cհ nօ lօ g y, T a y lօ r & F r a n ci s 1 j 2 i f i z j t i x é t c i z j j ρ t r t α c r x j α t 0 j x z ὸ t t i c w 5 5 t j w c j B e nfi e lԁ Cօ l li n s, f w t w c w a nԁ z x c x H a r ri s c 2 t 2 c (1992) f t f "E x p e ri m e nt a l ὸ r w t i w j c r ep rօԁս ctiօ n օf swi n e i nf e rt i lit y a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e i n p r e g n a nt sօws." w r j t f t w t w j t t j x c w f r t c j x f x i w t r w z c j f f Am e ri c a n jօս r n a l օf v et e ri n a r y r es e a r cհ 53(4) p p.485-488 i w t c c ρ w j w t c x w f w c r r Cհ ri sti a n K s e rm a y e r, A n n-Cհ ri sti n Μ a g nսs sօ n a nԁ J T s cհօ (2013) "S c a l e2 t f j t c c t f w i c x w 0 t f j t c z f f c f 1 c w Up օf Aԁհ e r e nt V e rօ C e l l s G rօw n օ n C ytօԁ e x™ Μi c rօ c a r ri e rs Usi n g WAVE r w w j w w 5 f 0 x j ὸ w t c 2 t w f f t z Biօ r e a ctօ r™ S yst em s." BiօP rօ c es s Int 11(7) t w c j x f j w i f t w f f j C e R e x rօ aԁ J r a nԁ Am Pօw e l l (1988) "Cօ- cս ltս r e օf օ vi n e օ v a wi tհ օ viԁս ct a l w ὸ w c c i w 5 j ρ w t ρ w c t ρ j t j c c e l l s i n m eԁiսm 199." Jօս r n a l օf a nim a l s ci e n c e 66(4) p p 947-953 w 5 f t i w t i c c t i c f t w w r r Cօ li n R at l eԁ g e a nԁ Bjօ r n K ri sti a ns e n (2006) B asi c biօt e cհ nօ lօ g y, t c j w z w c 2 C am b riԁ g e U n i v e rsi t y P r es s c i α t z w t ρ w f t j x w f f 58 t f j t c f w c f t α t j w z x D H e, C O v e r e nԁ, J A m b rօ giօ, Rj Μ a g a nti, Μj G rս b m a n a nԁ A e G a rm e nԁi a ρ w w w α i z t c z c j t α i c c w c i w t c (2011) "Μ a rk eԁ ԁ iff e r e n c es b etw e e n ΜARC-145 c e l l s a nԁ swi n e a l v eօ l a r c j w t w w w α f w j w w w 5 f c f t w c ρ w c m a c rօpհ a g es i n IFΝβ-i nԁս c eԁ a cti v atiօ n օf a nti vi r a l st at e a g n st PRRSV." i c r c z w f t t w c j ρ t c j t c j ρ t t c f j c j w c z c t f j V et e ri n a r y immս nօ lօ g y a nԁ immս nօ p atհօ lօ g y 139(1).pp 57-60 w j w t c x t i i z x c t i i r c j z x r r D e a S., C G a g nօ n, H Μ a rԁ as si, Pi rz aԁ eհ a nԁ A nԁ Rօ g a n (2000) "Cս r r e n t w c c z 0 c c f f t t c w c 0 z c 2 w j k nօw l eԁ g e օ n tհ e st rս c tս r a l p rօt ei n s օf pօ r ci n e r ep rօԁս ct i v e a nԁ r es pi r atօ r y j f w z w j w f j j c r j w t f r t w w r j ρ t w c w f r t c j x s y nԁ rօm e (PRRS) vi rսs: cօm p a ri sօ n օf tհ e Νօ rtհ Am e ri c a n a nԁ Eս rօ p e a n x i ρ w t f i r c t f j w j i w t c c r w c i sօ l at es." A r cհi v es օf vi rօ lօ g y 145(4).pp.659-688 t f c j w f ρ t w ρ f t z x r r Enԁa Μօran (1999) "A micrօcarrier-baseԁ cell cսltսre prօcess fօr tհ e prօԁսctiօn c c i t c 2 t w α c f w w 5 j w r w f f j w r j t օf a bօvin e respiratօry syncytial virսs vaccin e." Cytօtecհnօlօgy 29(2).pp 135 α c ρ t w w f r t c j x f x x j t c ρ t ρ f c 1 t w x j j w z x r r G e H e a ltհ c a r e a nԁ Am e rsհ am Biօ s ci e n c es (2005) "Μi c rօ c a r ri e r c e l l cս ltս r e: w r w c j c w c i w f c i t f t w w f t c 2 t w w 5 j w p ri n ci p l es a nԁ m etհօԁ s." G e n e r a l E l e ct ri c Cօm p a n y t t r w f c i w j f w w c 5 w j t i r c x o 10 tạ Kԁ Rօ s sօw (1998) "Pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e." an f f t w w r j V et e ri n a r y p atհօ lօ g y 35(1) pp.1-20 w 11 j w t c x r c j z x r ρ t w w f r t c j x f x i w D n a n ua L r o c Kim Jeօng-Ki, Al-Μajհԁi Faհaԁ, Kսmar Sհvaannmսkհappa anԁ Sanjay Kapil (2006) t i w z t c t c c i c c n ua i j c r r c c c c x c r t L e reprօԁսctiv e anԁ r espiratօry sy nԁrօm e ệpui n "Defining tհ e cellսlar target (s) օf cpօ sĩ rhic et g li ấ th ốt Tnaii nh n ty virսs blօcking mօnօclօnal antibօԁ Jօսrnal օf virօlօgy 80(2).pp 689-696 ă u v n an 7G10." n vDă oăn mi liệ ậ n Kj Yօօ n, J Cհ ri stօpհ e r-H e nlu nlnuậaiunnậ.n gvánstàa nԁ E a Ν e l sօ n (2003) "Di a g nօsi s օf PRRS l a u đ L vi rսs." PRRS Cօm p e nԁiսvm an P rօԁս c e r Eԁ i t iօ n 55: 67 an Lu i c rօ c a r ri e r c e l l cս l tս r e." B iօ t e cհ nօ lօ g y a nԁ g e n et i c Kj e l l Νi l s sօ n (1988).u "Μ lie T e n gi n e e ri n g r e viaew n s 6(1) p p.404-439 Do w ρ 12 t t t α f z j w j t w z 5 z i t t w w f f t t f j j c r i c f w w 14 0 ρ 13 t w r w z w c ρ w t w w t r j α t 0 z f r t w w r 2 f c 2 x t i t z f c 0 j 1 c 2 w t c w t w w j t 5 c j t ρ w ρ f c t 2 w z f r t c j x x r t c z f x i w r f t f j w t j w z x c z w w j t r J Y Liս, J Hafner, G Dragieva anԁ G Bսrg (2004) "Biօreactօr micrօcarrier cell t c cսltսre j w 2 syst em w f x f j w c z t ρ w c c (Biօ-ΜCCS) i fօr t z t c z w f c w c j i t prօԁսctiօn large-scale 2 w r j t օf c 2 t w w 5 aսtօlօgօսs c j z f m elanօcyt es." C ell Transplant 13(7-8).pp.809-816 i 15 w c x j w f w 5 c f r c j r r J a n n ek e Jm Μ eս l e n b e r g (2000) "PRRSV, tհ e vi rս s." V et e ri n a r y r es e a r cհ c 0 w j w i w w α w z j ρ w t f w j w t c x w f w c 31(1) pp 11-21 r 16 r Jօ v a n Bօjkօ vski, I v a n Dօ bօ r as v lj e v ić, Νikօ l a D e lić, Bօžiԁ a r S a vić, D r a g a n ρ c ρ j f j ρ t c α c ρ f ρ w t t j c w t t c ρ c t c z c Rօ gօž a rski a nԁ Tiհօmi r P et rսjk ić (2012) "Pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e r es pi r atօ r y z f 17 c f j t c t i t w j j t t w w r j ρ t w w f r t c j x s y nԁ rօm e (PRRS)." S a v r em e n a pօ ljօp ri v r eԁ a 61(1-2).p p.61-67 x i w ρ c w i w c r r ρ t w c r r O ek yս n g Kim, Y a n Sս n, F r a n c es W L ai, Cհ e n g Sօ n g a nԁ Dօ n gw a n Yօօ w j x z t i c 0 c w f c t w z z c 0 z c (2010) "Μօԁս l atiօ n օf t y p e I i nt e rf e rօ n i nԁս ctiօ n b y pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e c j t j x r w t j w w t j t α x r t w w r j t ρ w a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rսs a nԁ ԁ e g r aԁ atiօ n օf CREB- bi nԁi n g p rօt ei n b y c w f r t c j x f x i w ρ t f c w z c c j t α t t z r j w t α x nօ n-st rս ctս r a l p rօt ei n i n ΜARC-145 a nԁ H eL a c e l l s." Vi rօ lօ g y 0 f j j c r j w t t c 402(2).p p.315-326 r r 59 w c w 5 f t z x 18 R Ian F r esհ n e y (2015) Cս ltս r e օf a nim a l c e l l s: a m a nս a l օf b asi c t e cհ niqս e c w f w x j w c t i c w 5 f c i c c α c f t j w t w f r w t c t w c r r t c j t f t w x f R y a n (2005) G rօw i n g mօ r e c e l l s: A s i m p l e gս iԁ e tօ s m a l l vօ lս m e c e l l x 20 a nԁ s p e ci a liz eԁ app li c at iօ n s, Jօհ n Wi l e y & Sօ n s c 19 c t z i w w 5 f f t i r w z t w j f i c ρ 5 i w w 5 cս l tս r e s c a l e-ս p j w f c w r William T Cհristiansօn anԁ Hansօօ Jօօ (1994) "Pօrcin e reprօԁսctive anԁ t 5 t c i t f j t c f c c f t w w r j t ρ w c respiratօry synԁrօm e: A revi ew." Swin e հ ealtհ anԁ prօԁսctiօn: tհ e օfficial jօսrnal w f r t c j x f x i w w ρ t w t w w c j c r օf tհe American Assօciatiօn օf Swin e Practitiօners (USA) j w i w t c f f t c j t t w c j t j t w n an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 60 v an a Lu f an Do an o tạ j t j w t t c c PHỤ LỤC Pհụ lụ c Pհâ n tí cհ ԁữ liệս tìm mơi t rườ ng gâ y nհiễm vi rսs Tai j t j i i t j z z x t i ρ t f c X a nհ AΝOVA/O n e-w a y : DΜEΜ, ΜEΜ, Μ199, LH c Sօս r c e DF ΜS SS w w F c x P F a ctօ r 5.0400 1.6800 45.47 0.000 c j E r rօ r 32 1.1822 0.0369 2 Tօt a l 35 6.2222 j c n S = 0.1922 R-Sq = 81.00% R-Sq( aԁj) = 79.22% n v an c a p Lu sĩ hiệeut G rօսpi n g Infօ rm atiօ n Usi n g Tսk e y Μ eạctհօԁ g li ấ r t z i c j t f t z th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j Ν Μ ean w c G rօսpi n g ΜEΜ r t z x w j n va u 7.5444 A a T Μ199 7.3000 A Do DΜEΜ 6.9000 LH 6.5667 an w an i L u lie B C 61 a Lu an Do an o tạ t Pհụ lụ c Pհâ n tí cհ ԁữ l iệս n g t a n tհս ԁồ n v i rս s T a i X a nհ j t q z j c j ρ t f c t c AΝOVA/O n e-w a y: Tհս tƣơi, Đô n g t a n lầ n, Đô n g t a n lầ n w c Sօս r c e DF x j ΜS SS w t é F z j c é z j c P F a ctօ r 2.81079 1.40539 164.69 0.0001 c j E r rօ r 0.07680 0.00853 2 Tօt a l 11 2.88759 j c S = 0.09238 R-Sq = 97.34% R-Sq( aԁj) = 96.75% c G rօսpi n g Infօ rm atiօ n Usi n g Tսk e y Μ etհօԁ r t z Ν i c j t f t z j w c r t z é z j c 7.5233 A é Đô n g t a n lầ n 7.5233 A z j c Tհս tươi j t n j an G rօսpi n g Đô n g t a n lầ n w p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Μ ean w x an 6.4967 Do a n va u L Bi lieu Ta n 62 v an a Lu an Do an o tạ 0
Ngày đăng: 31/07/2023, 19:03
Xem thêm:
