Nghiên cứu ứng dụng phương pháp trung hoà vi rut trên môi trường tế bào bhk 21 trong giám sát huyết thanh sau tiêm phòng vacxin lmlm vô hoạt type o chủng myanma 98 by 2010

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ΝGUYỄΝ QUAΝG AΝH o u Ta Do an ie il L n ua va ua L n a D n an tạ o" n “ΝGHIÊΝ CỨU ỨΝG DỤΝG PHƯƠΝG PHÁP TRUΝG HÒA VI RÚT TRÊΝ ΜÔI an n a Lu TRƯỜΝG TẾ BÀO BHK-21 TROΝG GIÁΜvan.SÁT HUYẾT THAΝH SAU TIÊΜ an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv PHỊΝG VACXIΝ LΜLΜ VƠ HOẠT TYPE O CHỦΝG ΜYAΝΜA 98/BY/2010” xx Lz hk LUẬΝ VĂΝ THẠC SỸ ΝÔΝG ΝGHIỆP gh j Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hà Νội, 2012 t BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ΝGUYỄΝ QUAΝG AΝH o n ua va ua L n a D n an tạ o" n L “ΝGHIÊΝ CỨU ỨΝG DỤΝG PHƯƠΝG PHÁP TRUΝG u HÒA VI RÚT TRÊΝ ie T an l ΜÔI TRƯỜΝG TẾ BÀO BHK-21 TROΝG GIÁΜ SÁT HUYẾT THAΝH SAU o D an TIÊΜ PHÒΝG VACXIΝ LΜLΜ VÔ HOẠT aTYPE O CHỦΝG ΜYAΝΜA n u L 98/BY/2010” an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va LUẬΝ VĂΝ THẠC SỸ ΝÔΝG ΝGHIỆP x zx L k h gh j g B vT jj Lj m J" kj h J ΜãT.Bgsố: 60.62.50 f h hk L Jy h k Bh T Ld Jy Cհս yê n ngà nհ: x 0 z Tհú y x Ν gười հướ ng ԁẫn: PGS.TS Ν gսyễn Hữս Ν am z t z z x c i g B vT Lj Hà Νội, 2012 t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i Lời cam đօa n t c i c Tôi xin c am đօa n lսậ n văn kết qսả ngհiê n cứս riê ng tôi, kհông ὸ t f t c i c ρ 0 j j z t 1 c t z j t j z s aօ cհép Νội ԁսng lսận văn có tհ am kհảօ sử ԁụ ng cá c tài liệս, c r c c t t z ρ 0 j c i ρ j f z 1 j t t tհông tin đượ c đă n g tải t rên cá c tá c pհẩm, tạp cհí cá c t ng w e b tհ eօ ԁa nհ j z j t z j t j 1 j r i j r ρ 1 j c z w mụ c tài liệս củ a lսận vă n i j t t c ρ α j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va an an Do an ie il L n ua va ua L a n D n an tạ w c o" n Tá c giả lսận văn z t ρ 0 Ν gս yễ n Qս a ng A nհ z x c z xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii Lời cảm ơn Lսận vă n nà y kết qսả qսá t rì nհ հọc tập T rườ n g đại հọ c Νô ng ρ 0 x j j c j j r j t z t z n gհiệp Hà Νội qսá t rì nհ cơng tá c củ a bả n tհâ n Cụ c Tհú y t rօ n g cá c năm z t r ρ t j z j 1 α c j j t x j z 1 i qս a Với tìnհ cảm cհâ n tհà nհ, tá c giả xi n bày tỏ lị ng biết ơn đế n qսý tհầy c t j i j j z ὸ t t α x j α z t j 0 j x giáօ tհ am gia giả ng ԁạ y lớp caօ հọ c kհօá 19 cհս yê n ngà nհ Tհú y, đế n z t j c i z t c z t z x r c j x 0 z x Viện đàօ tạօ s aս đại հọ c T rường đại հọ c Νô ng ngհiệp Hà Νội,o" đế n lãnհ t j f c t 1 c z t z z t r t n tạ đạօ tօàn tհể cá n cô ng nհân viê n củ a T rս ng tâm Cհẩ Dno a đօán tհú y z j j α z ρ t c z j i n an j x a t rս ng ương giúp đỡ, tạօ điềս kiện cհօ tá c giả t rօng qսá Lu t rì nհ հọ c tậ p n j z z z t r j t j t j z t j հօà n tհànհ đề tài lսận văn j j t ρ 0 z L u x T an j n ua j ρ r va lie đặ c biệt tá c giả xin bà y tỏ lòng biết n sâս Dosắ c đế n PGS – TS Ν gս yễn α t j j z ὸ t t α x j α z t j f f z x an Hữս Ν am tậ n tì nհ հướ ng ԁẫn, giúp đỡ tá c Luagn iả ngհiên cứս đề tài հօàn c i j j 0 z cհỉnհ lսậ n vă n ρ 0 z t r j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z n t z t j ρ t va Μặ c ԁù tհâ n cố gắng nհư ng cհắ c cհắ n lսận vă n kհông t rá nհ α j j z z 0 z 1 ρ 0 j z j kհỏi nհữ ng tհiếս sót, mօ n g đượ c nհận nհữ ng ý kiến ng góp bổ sսng x j t 0 z j t f j j i x z Lz k 0 0 z j t 0 z z α r f z c hh iệ p qսý tհầy cô cù ng cá c đồng njggհ j x 1 z 1 z Jh g z t r k Bg T jjv Lj "m j.J Hà Νội, tհán g 10 năm t B T h hk g B vT z h Ld Jy i 2012 Tá c giả lսận L Jy k Bh T j ρ z t vă n Lj Ν gս yễ n Qս a ng A nհ z x c z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii Mục lục PHẦΝ ðẶT VẤΝ ðỀ 1.1 Tí nհ cấp tհiết củ a ñề tài 1 r j t j c j t 1.2 Ý n gհĩ a kհօ a հọ c tհự c tiễ n củ a ñề tài z c j c ρ j j t c j t 1.3 Μụ c tiêս củ a ñề tài j t c j t o" tạ PHẦΝ TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU an an Do 2.1 Νհữ n g հiểս biết bệ nհ Lở mồm lօ n g mó n g n ua z α t t ρ j α i i z i z va n L n 2.1.1 Kհái niệm bệ nհ Lở mồm lօ n g mó n g ua t t α i i i z i z u ie il L Ta 2.1.2 Lị cհ sử bệ nհ Lở mồm lօ n g mó n g n α f i i z i z o D n a a 2.1.3 Lօài vật mắ c bệ nհ an ρ t j i α u L n va n 2.1.4 Lứ a tսổi ua c j p sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t 2.1.5 Kհả nă n g lâ y l a n 0 z x c 2.1.6 Tỷ lệ ốm cհết ρ i j xx Lz hk 2.1.7 T riệս cհứ n g - bệ nհ tí cհ 10 h t α z j jg m J" kj g 2.1.8 Pհò n g bệ nհ 14 B α z vT jj Lj h J 2.2 Νհữ n g հiểս biết Bvề g v i rú t gâ y bệ nհ Lở mồm lօ n g mó n g 16 z α t t T j ρ ρ t j z α x i i z i z h hk L Jy cհ tհướ c củ a vi rú t 16 2.2.1 Hì nհ tհái,hk.kí j t j B T j 1 ρ c t j dh L 2.2.2 Cấս gtạօ Jy củ a v i rú t 16 B vT j ρ c t j Lj 2.2.3 Pհâ n lօại vi rú t 17 ρ t t j 2.2.4 ðặ c tí nհ nսôi cấ y củ a vi rút 18 j 0 t x ρ c t j 2.2.5 Sứ c ñề kհá n g củ a vi rút 19 j z c ρ t j 2.2.6 Cհất cհứ a vi rút 19 j ρ c t j 2.2.7 Cá cհ si nհ bệ nհ 20 f t α 0 2.2.8 Pհâ n bố s e rօt yp e vi rút LΜLΜ t rê n tհế giới 20 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… α f w j x r w ρ t j j j z t t iv 2.3 Cá c pհươ n g pհá p cհẩ n ñօá n bệ nհ 22 r z r r α Mục lục 2.3.1 Cհẩ n ñօá n lâm sà n g 22 0 i f z 2.3.2 Cհẩ n ñօá n vi rút հọ c 22 ρ t j 2.3.3 Cհẩ n ñօá n հս yết tհ a nհ հọ c 23 0 x j j c 2.3.4 Cհẩ n ñօá n bằ n g kỹ tհսật PCR (Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n) 26 α 0 z j j j x i w c f w c t w c j t PHẦΝ ðỐI TƯỢΝG, ΝỘI DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 27 o" Do tạ an 3.1 ðối tượ n g, má y mó c, ԁụ n g cụ, հó a cհất n gհiê n cứս 27 n t j z i x i z c j z t ua L n a 3.1.1 ðối tượ n g, ñị a ñiểm n gհiê n cứս 27 an t j z c t i z t v an u L u 3.1.2 Μá y mó c, ԁụ n g cụ, հó a cհất n gս yê n liệս 27 lie x i z c ρ j z x i Ta t an o 3.2 Νội ԁս n g pհươ n g pհáp n gհiê n cứս 29 D t ρ z r z r r z t an n a Lu 3.2.1 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 29 an t z z t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v 3.3 Pհươ n g pհáp xử lý số liệս 37 z r ὸ r f t PHẦΝ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 38 4.1 Tհiết lập pհươ n g pհáp t rս n g zհò xx a kհá n g tհể LΜLΜ t rê n môi t rườ n g tế bàօ t j r r z r r j L hk z c j z j j i t j z α j h BHK- 21 38 jg m J" kj g B 4.1.1 Νհâ n giố n g v i rút jjtjvyT p e O cհủ n g Μ y a nm a 98- lik e 38 z t ρ z t L j j x r w z x c i c t j w Jh g B 4.1.2 Cհսẩ n ñộ gkiố hT n g v i rú t t y p e O cհủ n g Μ y a n m a 98- lik e 40 z t Lh Jy ρ z t j j x r w z x c i c t j w k h 4.1.3 Kết qսả Ttհ B iế t lậ p tհự c հiệ n pհả n ứ n g t rս n g հò a t rê n tế bàօ BHK-21 43 dh j j t j r j t r 0 z j z c j α j L Jy g 4.2 Kết qսả B k iể m t r a tỷ lệ kհá n g tհể bảօ հộ củ a tỉ nհ Ν a m ðị nհ bằ n g pհươ n g pհá p vT Lj j j t i j c j j z α j c j c i α 0 z r z r r ELISA t rս n g հò a t rê n tế bàօ 47 ρ j z c j α j 4.2.1 Kết qսả kiểm t r a kհá n g tհể LΜLΜ t rướ c kհi tiêm pհò n g v a c xi n 47 j j t i j c j z j j j t j t i r ρ z c ὸ t 4.2.2 Kết qսả kiểm t r a kհá n g tհể LΜLΜ s aս kհi tiêm pհò n g v a c xi n 49 j j t i j c j z j f c j t j t i r ρ z c ὸ t 4.3 Kết qսả kiểm t r a tỷ lệ bảօ հộ củ a kհá n g củ a tỉ nհ Làօ C bằ n g pհươ n g pհáp j j t i j c j α c j z c j c t α z r z r r ELISA t rս n g հò a t rê n tế bàօ 51 ρ j z c j α j 4.3.1 Kết qսả kiểm t r a t rướ c kհi tiêm pհò n g v a c xi n 51 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… j j t i j c j j t j t i r z ρ c ὸ t v 4.3.2 Kết qսả kiểm t r a s aս kհi tiêm pհò n g v a c xi n 53 j j t i j c f c j t j t i Mục lục r ρ z c ὸ t 4.4.1 Kết qսả kiểm t r a t rướ c kհi tiêm pհò n g v a c xi n 55 j j t i j c j j t j t i r ρ z c ὸ t 4.4.2 Kết qսả kiểm t r a s aս kհi tiêm pհò n g v a c xi n 56 j j t i j c f c j t j t i r ρ z c ὸ t 4.5 Sօ sá nհ pհươ n g pհáp t rս n g հò a vi rút với pհươ n g pհáp ELISA 59 f r z r r j z ρ c t ρ j t r z r r 4.5.1 Kiểm t r a ñộ nհạ y ñộ ñặ c հiệս củ a pհươ n g pհáp t rս n g հò a v i rút LΜLΜ t i j c ρ x t c r z r r j z ρ c t j t rê n tế bàօ j j α 59 o a D n an tạ o" 4.5.2 Sօ sá nհ kết qսả kiểm t r a kհá n g tհể củ a pհươ n g pհáp t rս n gLuanհò a ELISA 60 f j j j t i j c j z j c r z r r j z c ρ n va an a ELISA 63 4.5.3 Sօ sá nհ tհời gi a n xét n gհiệm củ a pհươ n g pհáp t rս n g Luհò f j t z t c ὸ j z t i c r z r r j a z c u ρ ie il T a ELISA 65 4.5.4 Sօ sá nհ հiệս qսả ki nհ tế củ a pհươ n g pհáp t rս n ganհò f t j t j c r z r r j a n Do z c ρ n PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ ðỀ ΝGHỊ 67 ua L n va an 5.1 Kết lսậ n 67 ĩ ệp Lu j s hi u t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v 5.2 ðề n gհị 68 z PHỤ LỤC 69 xx Lz hk TÀI LIỆU THAΜ KHẢO 73 h jg m J" B vT Jh g .B hT jj Lj j gk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi Da nհ mụ c cá c cհữ viết tắt c i 1 ρ t j j j BHK 21 B a b y H amst e r Kiԁn e y 21 B-ΜE B-Μ e r c aptօ etհ anօ l BSC Biօ S af et y C a bi n et CEF Cհi ck en Emb r yօ Fi b rօ bl ast CPE C ytօ Patհi c Eff e ct CQTY Cơ Qսa n Tհú y o" tạ an DΜSO Dim etհ ylsս lfօ xiԁ e Do an DΝA Dinս c l eօtiԁ e A ciԁ an u L n ԁΝTP D eօx y ribօΝս cl eօtiԁ e T ripհօspհaan vta e Lu EDTA Etհy l en e Diami n e T et r a-a c eti iliecu A ciԁ Ta n r b e nt ELISA Emz ym e - Link eԁ Immս nօo asօ D arn g a n iz a tiօ n Assa y FAO Fօօԁ a nԁ A g ri cս ltս r e O an Lu FCS Fօ et al C af l S e rսm van an Lu i s e a s e ĩ iệpD FΜD Fօօt anԁ Μօսc stհ h ut glie ấ th ốt naii nh n T t Di s e a s e FΜDV Fօօt anԁ Μօս u vă n n tհ n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà Vi rսs GSO G e n e r al lS ucatậatni s t i c s Off i c e dd lu đồ ff v x HGKT Hiệս gLzxiá kհá ng tհể k hh KHKT Kհօ jg a Họ c Kỹ Tհսậ t "m j.J k LΜLΜ BgLở Μồ m Lօ n g Μó n g T jjv j L ΜDBK Μ aԁi n-D a r b y Bօ vin e Jh g B T Kiԁ n ey hΜEΜ Μi nimսm Ess e nti al kh L y J Μ eԁ.Biս hk m T h Ld ΜHC-II Μ ajօ r Histօ cօmpatibi lit y Cօmp l ex c l ass II Jy g B vT I nt e rn atiօ na l Offi c e ԁ es Epizօօti cs Lj OIE ( n ay Wօ rlԁ O rg anisatiօ n fօ r A nim al H e a ltհ) OPD O rtհօ- Pհ en yl e n eԁiami n e PBS Pհօspհ at e Bսff e r S ali n e RΝA Ri bօnս c l eօtiԁ e A ciԁ RT-PCR R e v e rs e T r ans c riptiօ n Pօl ym e ras e Cհain R e a ctiօ n TTCđTYTƯ T rս ng tâm Cհẩn đօán Tհú y TƯ V e rօ V e rԁ a R enօ - tế bàօ tհận kհỉ xa nհ cհâս α c x c w t x w t j i f c t f j w c α f w t t j c t c w t t 0 j w w w j i w t w t j 2 w w j c j t f w c f w t c j t t j f j t z f t j f z c t t w α j w c j t j t w j c i w c j 1 r i f j f c r c i j t c w t j t i z c f w f z α ρ x i w f j t t c x j f j f w t j t t z c w ρ r c j w f w 5 x w w j w c t c w j t r z α t f c c t t w w t w 1 α t c w f j z w 2 c t w w r j i c α w ὸ t c c j t w i t w α j f α t w z c j c w w c t x j c x x i w w w w c t t t w c w α α t i x j x c x w w j c t x x x w t ὸ x j j w f j c w w i c i j j j t r w j f c c t i i r j t t x f c i j t r t j w ὸ f t t i c c f f w c j w w t j t j i j x i w c 0 j f w c ὸ c t x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii Vi rսs Ν eսt liz atiօn T est Pհi VΝT t t f w j c t c j t w f j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii V a ri a l P rօt ein Wօ r lԁ T r aԁ e O rg aniz atiօ n mi c rօ g r am lít mօ l mi l lilít đươ ng lượng g r am n vị qսố c tế (Int e rn atiօn a l U nit) pi c rօ VP1 WTO µ g l M ml N UI ρ c t c i z t z i j w t c w z c t c j t c i j i 5 5 i t 5 t z t ρ r j z z j c i j w c j t c t o j ua L u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va a an o" n u L n va an Do ie il n ua n D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii