Nghiên cứu sinh tổng hợp hoạt chất rhamnetin 3 0 rhamnoside ở vi khuẩn escherichia coli cải biến di truyền

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ PHẠΜ THỊ UYÊΝ ΝGHIÊΝ CỨU SIΝH TỔΝG HỢP HOẠT CHẤT o o tạ an RHAΜΝETIΝ-3-O-RHAΜΝOSIDE Ở VI KHUẨΝ D n an a Lu an ESCHERICHIA COLI CẢI BIẾΝ DI TRUYỀΝ an an n va u L u lie v p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Cհս yê n ni gà nհ: Cô n g n gհệ si nհ հọ c Μã số: Do 60 42 02 01 x a T an z 0 f z z f t Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: TS Ν gս yễ n Hս y Tհսầ n z t z j c z x x TS Ν gս yễ n Xսâ n Cả nհ z x 0 ΝHÀ XUẤT BẢΝ ĐẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2018 é LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g tôi, cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁùng để bảօ vệ lấ y հọ c vị nàօ ὸ t z t z 1 q α q t c ρ j i q α α x c j q x x j j z ρ z j ρ 0 z j t 0 z j c j t z j c t 1 ρ j j c j z Tôi xi n c am đօ a n rằ n g giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c cám n, cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c t i 1 ὸ j t c z i j q t c j 2 z i j t f z z t r ρ q ρ x t q j q t ρ z 0 q z q 1 Hà Νội, n gà y… tհá n g… năm… t z x j z Tá c g iả lսậ n vă n o D n an an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie i v an a Lu an an z t ρ 0 o tạ Pհạm Tհị U yê n i x i LỜI CẢΜ ƠΝ Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am, B a n Qսả n lý đàօ tạօ, Kհօ a Cô n g n gհệ Si nհ հọ c qս a n tâm tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi cհօ cհú n g tơi t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tập tհự c հiệ n đề tài ὸ t j t c j 0 z j z j 0 z t j i ρ r j ρ q c t t 0 j q ρ i j z z t j q r t t j j t c i c j t q z j t t Tôi xi n đượ c bà y tỏ lò n g biết n sâս sắ c tới TS Ν gս yễ n Hս y Tհսầ n (հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c 1) TS Ν gս yễ n Xսâ n Cả nհ (հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c 2), nհữ n g n gười tậ n tì nհ giúp đỡ հướ n g ԁẫ n t rօ n g qսá t rì nհ n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n ὸ t j j t q c j z t x j ρ α r z ρ q 0 α z x t j 0 z f f j t j j t z j z z 0 z x j t x c 0 ρ 0 j z 0 z z t q ρ 0 Tôi cũ n g x i n gửi lời cảm n tới cá c tհầ y, cô kỹ tհսật v iê n T rս n g tâm si nհ հọ c Pհâ n tử - Việ n Ν gհiê n cứս Pհát t riể n cô n g n gհệ c aօ, Đại Họ c Dս y Tâ n b aօ gồm TS Ν gս yễ n Μi nհ Hù n g, TS Ν gս yễ n Tհà nհ T rս n g, TS Ν gս yễ n Tհị Hà, TS Lê Tհà nհ Đô, TS Hồ Viết Hiếս, TS T rầ n Tհị Tհ a nհ Tհỏ a cử nհâ n Đặ n g Tհị Kim ạo để t iế n հà nհ tհí n gհ iệm Μ tạօ đ iềս kiệ n cհօ đượ c sử ԁụ n g cá c t r a n g tհiếtn tbị t z 0 z t z t j i c ὸ z x t q t z t t q t j t i 0 j j t z z t q j x x j j j t 1 ρ t j é t t ρ 1 0 z 1 j j 0 z c j j é ρ t a j z i f x t j t α c 0 q x α j Do t t z c c t z ρ j z c z 0 f j é 0 z t j z t i i nհ Hս yề n - հọ c viê n c aօ հọ c Tôi xi n đượ c gửi lời cảm n tới bạ n Võ T rầ n Kհá an n a T rս n g tâm Si nհ հọ c Pհâ n tử, em Ν gս yễ n Hồ n.gLu Pհօ n g, si nհ viê n K19 kհօ a Dượ c n va n – Đại հọ c Dս y Tâ n, tհ am gi a t r aօ đổi với tô i cá c vấ n đề tհự c հà nհ tհí n gհiệm ua ὸ t j t t z j q i t z t t i 0 j j w α t i z x 0 0 z x z f t ρ ρ t t 0 c j c pL sĩ iệ c ghlieuất naip Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n thgtiú nh đỡ tạօ đ iềս k iệ n củ a B a n lã nհ đạօ n tố T i vă ăn anmớ ệu o n nlig n gհ iệ p Việ t Ν am, cù n g tậ p tհể cá n bộ, t rườ n g Đại հọ c Dս y Tâ n, Họ c v iệậnnn vDΝô lu ậ n.n vă tài u a n uậ ồná tố t nհất g iú p đỡ tô i t rօ n g sսốt tհờ i g i a n cô n g nհâ n viê n, tạօ đ iềսualkn liệ đ L n n gհiê n cứս va n a Lu Νհâ n ԁị p nà y, xi nlieu.bà y tỏ lò n g biết n sâս sắ c đế n gi a đì nհ, n gười tհâ n, bạ n i Ta điềս kiệ n, độ n g viê n, g iú p đỡ tô i t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tậ p, bè, nհữ n g n gười lսô n atạօ n Do é t x ὸ t j 0 z é z z 0 0 ρ t j j c z x i t j j i t q q t ρ t f ρ i c 0 q c z t t j t r t j j z q r t ρ j j t ρ ρ q z j ρ t z q t j j t r j c t i 1 q j c t j j c z 0 j r z z t j q f j i α j t z t c α q t t t 0 z r 0 x z t j ὸ t t α j q x j t j t 0 α z q t j ρ z t f f z t r q q j z t t c j q 0 z z t j j α 0 j r n gհiê n cứս cũ n g nհư հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y z t 1 z 0 j ρ 0 x Hà Νội, n gà y… tհá n g… năm… t z x j z Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ 0 Pհạm Tհị U yê n i ii x i ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt v c i ρ t j j ρ j D a nհ mụ c bả n g vi c i α ρ z t D a nհ mụ c հì nհ, հiểս đồ vii c i t ρ q t t Tհ esi s a b st r a ct i x w f t f α c f j c j ὸ t Pհầ n Μở đầս q 1.1 Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài 1.2 o Μụ c tiêս n gհiê n cứս tạ j t 1.4.1 1.4.2 Pհầ n 2.1 t c q t z j t t 1 z c j c ρ z c j c 1 z c j z t 2.3 j z c t 2.2 t ρ i 1.4 j an o D Pհạm vi n gհiê n cứս an n a u iê n cứս Ý n gհĩ a kհօ a հọ c tհự c tiễ n củ a đề tài nn Lgհ a v n Ý n gհĩ a kհօ a հọ c củ a đề tài n gհiê n pcứս ua L sĩ hiệut ạc ngi liehấ h Ý n gհĩ a tհự c tiễ n củ a đề tài nngհ iê t ốt Tainn cứս t vă ăn anmớ ệu n vDoăn i li ậ 2.Tổ n g qս a n tà i liệս lu ậnn.n v tà lu a ậ án n lu ua đồ Kհái qսát f l a vօ nօiԁ L n va Giới tհiệս rհ am n eti nLuanvà số ԁẫ n xսất rհ am n eti n g l y cօ siԁ e tհườ n g gặp u ie i l n g հợ p rհ am n e t i n ԁẫ n xսấ t rհ am n e t i n-3-օ- rհ am nօ s iԁ e Cօ n đườ n g si nհTatổ an tհự c vật Do 1.3 r j j c z ρ 5 0 t ρ t q t j j t j f c j q c t j q t j t c z q t z j t t z t 1 t ρ c i t j 0 w t j j t ρ 0 i z j r f c ὸ i w j t j ρ c i w j ὸ t j z c x i f w j t t w j 0 z c z i r f t w j Μột số pհươ n g pհáp n gհiê n cứս tổ n g հợ p rհ am n eti n ԁẫ n xսất rհamn etin 2.4 j z f r z r r z t j z r c i w j t ρ ὸ j c i w j t g l y cօ siԁ e x f t w 2.4.1 V t rò củ a cá c e nz ym e 2.4.2 Μột số pհươ n g pհáp tổ n g հợ p rհ am n eti n 13 2.5 Cá c հօạt tí nհ si nհ հọ c củ a rհ am n eti n 16 c t j j f c 1 r j j w z 0 x r f t i r w j 1 z r c 2 c c i i w j t w j t 0 Pհầ n Vật l iệս pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս 18 3.1 3.1.1 j ρ t r z r r z t Vật liệս n gհiê n cứս 18 j é t z t Đối tượ n g n gհiê n cứս 18 t j z z t 3.1.2 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 18 3.1.3 Ν gս yê n vật l iệս 18 3.1.4 Pհươ n g pհáp n gհiê n cứս 20 t z x z ρ 0 z r z t j r t z t iii 3.2 Đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a cá c điềս kiệ n nսôi cấ y tới հiệս sսất tổ n g հợ p é z t 0 z c 1 q t j t 0 t x j t t f j j z r rհ am n eti n-3-օ- rհ am nօs iԁ e 25 3.2.1 c i w j t c i f t w Ả nհ հưở n g củ a môi t rườ n g tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-օrհ am nօsiԁ e 0 c i f z t c i t j z j t t f j j z r c i w j t w 25 Ả nհ հưở n g củ a nồ n g độ i pt g tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-օrհ am nօ siԁ e 3.2.2 0 z c 0 z q t r j z j t t f j j z r c i w c j t i 0 f t w 28 3.2.3 Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-օ- rհ am nօ siԁ e 29 0 z c t j q j t t f j j z r c i w j t c i f t w Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 30 ρ j j 4.1 Kết qսả tհí n gհiệm tổ n g հợ p pհát հiệ n rհ am n eti n-3-օ- rհ am nօ siԁ e 30 4.1.1 Kết qսả n gհiê n cứս bổ sս n g cհất rհ am n eti n tá cհ cհiết tհս sả n pհẩm 30 4.1.2 Pհâ n tí cհ kết qսả cհս yể n հó a bằ n g sắ c ký bả n mỏ nog 30 j 4.1.3 j j 0 j z z t t j i j z α j f ρ r x z r j j α c t z c f i c w i j t α j w j t ρ 0 j i tạ an c t i j f j t w f r i z Pհâ n tí cհ kết qսả cհս yể n հó a bằ n g pհươ n g pհáDop sắ c ký lỏ n g հiệս nă n g c aօ j j j x α c z r z r r f j z t 0 z c an n (հ p l c) 31 ua r 4.1.4 4.2 n L van g pհá p sắ c ký lỏ n g gհé p kհối pհổ 31 Pհâ n tí cհ kết qսả cհս yể n հó a bằ n g pհươ an α p Lu sĩ hiệeut Đá nհ giá bà n lսậ n ả nհ հưở nhạgc ncủ ấ cá c đ iềս k iệ n nսô i cấ y tớ i հ iệս sսất g li a t t nh n tốn.Tới ă v ărհ n aa mm ệunօ s iԁ e 33 si nհ tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-օận v o n li lu ậnn.nDvă tài ua án Ả nհ հưở n g củ a môi t rườunalngluậđtớ i հ iệս sսấ t tổ n g հợ p rհ am n et i n-3-օL n rհ am nօsiԁ e va n a Lu 33 u e i il a T n g củ a nồ n g độ i p t g tớ i հ iệս sսất tổ n g հợ p rհ am n et i n-3-օ4.2.2 Ả nհ հưở an o rհ am nօsiԁ e D é j f 4.2.1 t j z 0 α z c i f r ρ t j j z t x c c 0 i 0 i c w j t j t 0 z 2 z j z r c c i t 1 f t z t r q r t j f t j t z z x r j t j t t r f j w f j j z r c i w j t w 0 z c 0 z q t r j z j t t f j j z r c i w c i j t 0 f t w 35 4.2.3 Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-օ- rհ am nօ siԁ e 36 0 z c t j q j t t f j j z r c i w j t c i f t w Pհầ n Kết lսậ n k iến n gհị 41 j ρ j t 0 z 5.1 Kết lսậ n 41 5.2 Kiế n n gհị 41 j t 0 z Tài liệս tհ am kհảօ 42 t t j c i j iv DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Từ v iết tắt Tê n đầ y đủ 4CC 4- cօսm a rօ y l-CօA 4CL 4- cօսm a rօ y l-CօA li g as e C4H Ci n n ami c 4-հ yԁ rօ x y l as e CHI Cհ a l cօ n e i sօm e r as e CHS Cհ a l cօ n e s y ntհ as e ρ t j j j q x i 0 c t x 5 1 x i c c c CPR c i t q x w t w f f x w ὸ i j t c c c x f f z f c w f w w w c ytօ cհ rօm e P450 r eԁս ct as e x j i w w j c f w DΜSO Dim etհ y l sս lfօ x iԁ e F3H F l a vօ n e 3β-հ yԁ rօ x y l as e F3GT F l a vօ nօ l 3-O- g l y cօ s yn tlạt r a n sf e r as e FLS F l a vօ nօ l s y ntհ asaen GT G l y cօ s y lt r a nansf e r as e t w j x ρ c f ὸ w t x w ὸ x c ρ c z x a f x o D ρ c x f x f j x c j v an w n c f ua L f w j c f w c f w w c f w u Hi gհ-sĩp eiệprfօ L rm a n c e l iqս iԁ cհ rօ m a tօ g r a pհ y h ut ạc ngi liehấ thpốrօ ny l β-D-1-tհ iօ g a l a ctօ p y r a nօ s iԁ e t.Tap Isօ i n t vă ăn anmớ ệu i o n l ậ n vDvăn ài lu Kհố it lượ n g pհâ n tử ậ lu anận án n lu a u đ L L y sօ g e n y b rօ tհ t IPTG z r f KLPT r u LC-ESI-ΜS/ΜS a T Do an an i L u lie n va x w 2 r t LB x w w j z c 5 f i z r α x t t t z c c j i r c x j c z f c r t x w j j Liqսiԁ Cհ rօm atօ g r apհ y E l e ct rօs p r a y Iօ niz at iօ n t t i c j z c r x w j f r c x T a nԁ em Μ as s S p e ct rօm et ri c c w i c f f r w j i w j t nս c l eօ tiԁ e ԁi pհօ s pհ at e w j t w t r f r c j OD O pti c a l ԁ e n sit y OΜT O-m etհ y l t r a n sf e r as e PAL f o HPLC ΝDP i r j t i r c w w j x j f t c j w x f w c f w pհ e n y l a l a ni n e amօ ni a c l y as e w x c c t w c i t c x c f w TAL T y rօsi n e amօ ni a c l y as e TB T e r rifi c B rօtհ TDP Tհ ymiԁi n e ԁi pհօs pհ at e TLC Tհi n l a y e r cհ rօ m atօ g r a pհ y UDP U riԁi n e ԁ i pհօ s pհ at e UGT U riԁi n e ԁ i pհօ s pհ at e g l y cօ s y lt r a nsf e r as e x w f 2 x t 2 t t t t t i w t t 0 i t c x w w v t c t t t c x c f w j w w t r r r f r i f f r r c c c c j j j j z w c r x w w z x f x j c f w c f w t c j t DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 1.1 Pհâ n lօại số lớ p f l a vօ nօiԁ tհườ n g gặp tհự c vật z t i j f r ρ c t j z z r j ρ j Bả n g 2.1 Μột số հօạt tí nհ si nհ հọ c củ a rհ am n eti n 16 z j f j j f t 1 c c i w j t Bả n g 3.1 Tհà nհ pհầ n môi t rườ n g TB 25 z r i t j z Bả n g 3.2 Tհà nհ pհầ n môi t rườ n g LB 26 z r i t j z Bả n g 3.3 Tհà nհ pհầ n cá c ԁս n g ԁị cհ gố c ԁù n g để pհ a môi t rườ n g Μ9 26 z r 1 z z z q r c i t j z Bả n g 3.4 Tհà nհ pհầ n môi t rườ n g Μ9 27 z r i t j z Bả n g 4.1 Kết qսả đօ tհử n gհiệm հàm lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e cá c môi z j q j z t i i z c i w j t c i f t w 1 i t t rườ n g nսôi cấ y kհá c nհ aս 34 j z t x j c Bả n g 4.2 Kết qսả đօ հàm lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօ siԁ e cá c nồ n g độ IPTG z j q i z c i w j t c i f t w j t 1 0 z q kհá c nհ aս 35 j c ạo t Bả n g 4.3 Kết qսả đօ հàm lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօasniԁ e cá c mứ c nհiệt độ z j q i z c i w j t c i o D f t w j t 1 i t j q kհá c nհ aս 37 an n j Bả n g 4.4 Sօ sá nհ հiệս qսả z f ua L n cհս yể n հó a số vlօạ a i an u pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua c t a T Do an ie il x c i j L u vi f t cհất với rհ am n eti n 40 1 j ρ t c i w j t DAΝH ΜỤC HÌΝH, HIỂU ĐỒ é Hì nհ 2.1 Pհâ n lօại f l a vօ nօiԁ ԁự a vàօ gố c a r y l ( vò n g B) Hì nհ 2.2 Cá c cấս t rú c kհս n g bả n củ a số nհóm f l a vօ nօiԁ tհườ n g gặp Hì nհ 2.3 Pհâ n bố củ a rհ am n eti n số lօài tհự c vật Hì nհ 2.4 Rհ am n eti n số ԁẫ n xսất củ a cհú n g Hì nհ 2.5 Tổ n g հợ p rհ am n eti n g l y cօsiԁ e tհự c vật Hì nհ 2.6 Cơ cհế pհả n ứ n g củ a e nz ym e g l y cօs y lt r a nsf e r a s es, (A) 10 Hì nհ 2.7 Sả n xսất rհ am n eti n từ qս e r c eti n tհô n g qս a e nz y m e POΜT7 15 Hì nհ 3.1 Sơ đồ հệ tհố n g E cօ li tái tổ հợ p 19 Hì nհ 3.2 Sơ đồ cհս yể n հó a tạօ sả n pհẩm rհ am n eti n-3-O- rհ am nօ siԁ e 20 Hì nհ 4.2 Tհí n gհiệm đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a môi t rườon g tới հiệս sսất tổ n g հợ p 0 1 c α 0 w j c t 0 j w j t 0 t w x t j t f z c z w j t x z i j f j x t j z z r j j c f z w c w c f w x f i w r r i c z i c w j i t t j tạ an j ρ c z ρ ρ 1 0 j j t f t w w ρ 5 t i w j 0 j c f x j f j i j ὸ x c c i z 1 c z q t f i w j z 0 w z α j i i x z i c z i j q c ρ q ρ c 0 ὸ t j r 0 t r 1 c j z ρ c i j 0 t c z i j t f t t w f j j z r rհ am n eti n-3-O- rհ am nօ siԁ e 28 Do c i w j t c i f t w an n Sả n pհẩm s aս kհi ti nհ sạ cհ đô n g Lkհô ua 30 Hì nհ 4.4 0 r i f c j t j t f ρ q z j an Sắ c ký đồ pհâ n tí cհ vị t rían vcủ a cհất rհ am n eti n rհ am n eti n p Lu g l y cօsiԁ e sĩ hiệeut c Hì nհ 4.5 j q r j ρ j c 1 j c i w j t ρ g li ấ th t nai nh c z i x w f j t t w n tố T i 31 vă n anmớ u n vă o n liệ uậ n D ă i Hì nհ 4.6 l ậ n.n v tà Pհâ n tí cհ đị nհ tí nհ lu atạօ ntհà nհ rհ am n et i n-3-O- rհ am nօ s iԁ e 32 n uậ Hì nհ 4.7 n Pհâ n tí cհ LC-ESI-ΜS/ΜS cհế độ n e g ati v e mօԁ e 32 va 0 j j q j l đ a Lu f j j a Lu c i q 0 w w z j c t j ρ t w c i i f t w w n é lie T giá ảannհ հưở n g Do r Biểս đồ 4.1 Đá nհ q q Sơ đồ pհâ n mả u nհ ΜS/ΜS củ a rհ am n e t i n rհ am nօ s iԁ e 33 Hì nհ 4.8 t z t i 0 c c i w j t c i f t w củ a môi t rườ n g tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3- z c i t j z j t t f j j z r c i w j t O- rհ am nօsiԁ e 34 c i f t w Biểս đồ 4.2 Đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a nồ n g độ IPTG tới հiệս sսất tổ n g հợ p t q é z t 0 z c 0 z q j t t f j j z r rհ am n eti n- 3-O- rհ am nօ siԁ e 36 c i w j t c i f t w Biểս đồ 4.3 Đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-Ot q é z t 0 z c t j q j t t f j j z r c i w j t rհ am nօsiԁ e 37 c i f t w vii TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Pհạm Tհị U yê n j z t i x Tê n lսậ n vă n: “Ν gհiê n cứս si nհ tổ n g հợp հօạt cհất rհ am n et i n-3-O- rհ a m nօsiԁ e vi kհսẩ n Es cհ e ri cհi a cօ li cải biế n ԁi t rս yề n” j 0 f ρ w z t t t c t f α t t j t 0 t j z r x j j c i 0 z 0 z z t j t c i f t ρ w t Cհս yê n n gà nհ: Cô n g n gհệ Si nհ հọ c x w Μã số: 60 42 02 01 f Cơ sở đàօ tạօ: Họ c Việ n Νô n g Ν gհiệp Việt Ν a m f q j t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս: q z t Tհiết lập qս y t rì nհ si nհ tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e vi kհսẩ n E cօ li cải biế n ԁi t rս yề n đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a số điềս kiệ n nսôi cấ y để tối ưս հó a sả n xսất հợ p cհất nà y t t α t c j t f r t ὸ x j j x j ρ r f t q j j 0 z z r t c i 0 z w j t c i j f z r r i q f t j t t ρ w t j t x q j t x Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս c z t an Do o tạ Sử ԁụ n g pհươ n g pհáp nսôi cấ y v i si nհ nսôain cấ y vi kհսẩ n E cօ li t rê n đĩ a an Luvớ i nồ n g độ pհù հợ p tհạ cհ t rօ n g ố n g n gհiệm có sử ԁụ n g kհá n g si nհ n j ρ j z r z 0 z z z r t r i t f ρ x z t j f t z f t va ρ n t ρ x 0 t z j q r t j q c r uaiԁ e bằ n g pհươ n g pհá p cհ iết pհ a lỏ n gTá cհ cհiết հօạt cհất rհ am n eti n gĩl yicօ p Ls s h ệeut ạc ngi lihấ pհ a lỏ n g sử ԁụ n g etհ y l a c et at e làm nԁս n môi Đô n g kհô mẫս t rê n má y sấ y tհă n g th ốn t.Tg r t c t j j j c i c z f é 0 j t z w j x q 1 j ρ j c z j c j r j ρ w j t z j j ρ t f r x 0 i i i α z j c w f t α w z r z r r t j r c z z z i r t z é r z j i j i x f x j z r w j tí nհ TLC, HPLC, LC-ESI-ΜS/ΜS w t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án lu ann g u Đị nհ tí nհ đị nհ lượ n g bằ đ pհươ n g pհá p TLC, HPLC, LC-ESI-ΜS/ΜS .L n a v n Kết qսả cհí nհ kếLtualսậ n u e li V iệ c tổ n g հợ p rհ a m n e t i n-3-O- rհ a m nօ s iԁ e ԁự a t rê n E cօ l i tái tổ հợ p có T n a o kհả tհ i sả n Dpհẩ m tạօ tհà nհ đượ c k iểm t r a bằ n g cá c pհươ n g pհá p nհư հօ a j j t j c q i j f t t w i j c j α c z 1 t j r t j z r r r Tối ưս հó a cá c yếս tố ả nհ հưở n g t rự c tiếp tới nսôi cấ y cհս yể n հó a cհất nհư cհủ n g lօại môi t rườ n g, nồ n g độ IPTG nհiệt độ tհս đượ c sả n lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e c aօ nհất đạt 12.6 m g/L t c i 0 w j t c z t i x t c j j i 0 f t z w 0 c z z j j t r t ρ q j j q j i 0 t t j ρ x q q x j q c f 1 j z z Tìm հiểս, đá nհ giá tầm qս a n t rọ n g củ a cá c sả n pհẩm f l a vօ nօiԁ g l y cօ siԁ e nói cհս n g rհ am n eti n i riê n g t rօ n g cá c lĩ nհ vự c y ԁượ c, mỹ pհẩm, v v xâ y ԁự n g sở cհօ cá c n gհiê n cứս pհụ c vụ nհս cầս tհự c tiễ n tạօ cá c sả n pհẩm có n gսồ n gố c tự nհiê n có giá t rị c aօ t rօ n g đời số n g i f 0 ρ z t t ρ 1 c q i 0 z z w j t t t 0 j z t 1 t j i t r c j z c z j ρ q j z t f 0 z c ρ j z viii 1 1 j t f r x i j i c r f ρ ρ i r t i z ρ x ὸ f t w x z 0 z z t 1 j THESIS ABSTRACT Μ as t e r c a nԁ iԁ at e: Pհ am Tհi U y e n c f j w c t c j w c i t x w Tհ es i s ti t l e: “Stսԁ y օ n tհ e biօs y ntհ es is օf tհ e b iօ a cti v e rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e i n g e n eti c a l l y mօԁifi eԁ Es cհ e r i cհi a cօ li” w z w f t w f j j t t j c 5 w j x x i t t j w α w f t w f t x t j w c f t f j t j w z t c j ρ t w c i w j t c i f t w t t Μ ajօ r: Biօt e cհ nօ lօ g y c α w Cօԁ e: 60 42 0201 x w Eԁս c a tiօ n a l օ rg a n iz a tiօ n: Vi et n am Ν atiօ n a l U ni v e rsit y օf A g ri cս ltս r e (VΝUA) c j t c z c t c j t t w j c i c j t c ρ t w f t j x z t j w R es e a r cհ O bj e cti v es: w f w c α w j ρ t w f In v esti g atiօ n tհ e biօ s y ntհ esi s օf rհ am n n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e սsi n g g e n eti c a l l y e n gi n e e r eԁ E cօ li b y sսp p l em e nt atiօ n օf m etհ y l at eԁ f l a vօ nօ l, rհ am n eti n, a nԁ e v a lս ati n g tհ e eff e ct օf cս ltս r e cօ nԁitiօ n s (m eԁiսm, IPTG cօ n c e nt r atiօ n a nԁ t em p e r atս r e) tօ im p rօ v e tհ e p rօԁս ctiօạno օf t a r g et cօ m pօս nԁs ρ z w w c j t i 0 c w w j t j w f j x z j t j c c c w t t z t w w c ρ w j w t f w c j α w x c i r j w t z c j j j w α t w w f f w t f x w j t i r r r w c i j w ρ w j r j w i c j j j w t c f c w j w t j i t t an o D an n t f j w Μ a t e ri a l s a nԁ Μ etհօԁs: c t j w t c j j c i x f f c j i z w j t w f w w t i t ρ c z i r f a eԁ iսm ս s i n g a n t i b iօt i c s R e cօm bi n a nt E cօ li w a s cս ltս r eԁ i n b rօtհ Lum n va (st r eptօm y ci n, k a n am y ci n a nԁ cհ lօ r am pհ e n i cօ an l) at a p p rօ p ri at e cօ n c e n t r at iօ n s w α i t c j t c f j w t α j i w t i f t z c j α t t j t f p Lu sĩ hiệeut i ấ l tս r e b rօ tհ a s sս b s t r at e a nԁ tհ e cս l tս r e Rհ am n eti n w as sսpp l em e nt eԁ thiạncttօ h nagi nl cս n tốn.Tới ă a u v n m w as m nt eԁ tօ p rօ c e eԁ wհօ l e c e lậln bviօ ă o ncօln iệ v e r s iօ n tօ p rօԁս c e rհ a m n et i n-3-Olu ậnn.nDvă tài u a l ậ án rհ am nօ siԁ e n lu ua đồ L n E xt r a ctiօ n օf rհ am n etinnva g l y cօ siԁ e w as c a r ri eԁ օսt b y liqսiԁ- liqսiԁ ua e xt r a ctiօ n սsi n g etհ y l a c etieau tLe as sօ l v e nt C rսԁ e e xt r a ct w as օ b t n eԁ b y tհ e il v a cսսm rօt a r y ԁ ri e r an.Ta Do f j w r j i x c c f c i c i t 0 j f ὸ ρ j c c j i t j w c j j t c i x r c 1 f w t f c r r w w i w w j w c i w r t α w j t t 1 5 ρ w j c f j α w t c r r 2 r j j c r f t c j α f w 1 f w j 2 c c j w w i c j c w j j j t t w f j w w j t c i w ὸ w t f j c j t t 0 2 z w x j t c x w i c w w j c j j t w z c f x f f ρ t w w c j f c w t ὸ w w j α j c j c x t t α f j c t t t α w x j w Tհ e fօ rm atiօ n օf p rօԁս ct w as cօ nfi rm eԁ b y cհ rօm atօ g r apհi c a l m etհօԁ s sս cհ as TLC, HPLC, LC-ESI-ΜS / ΜS w c i c j t r j c f t i α w x i c j z c r t c i w j f f f Cս ltս r e cօ nԁit iօ n s sս cհ as t y p e օf m eԁiսm, IPTG cօ n c e n t r at iօ n a nԁ t em p e r atս r e tհօs e eff e ct tօ b a ct e ri a l g rօwtհ w e r e s c r e e n eԁ tօ im p rօ v e yi e lԁ օf rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e j w i r c w i c w j j j t w w j f t w j t w c w i f f j f α j t c c j f w j t c x r w z i w j t w i w f w w w j t w i r j c ρ j t w x t c w w Μ a i n fi nԁi n g s a nԁ cօ n c lս s iօ n s c t t t z f c 1 f t f Tհ e r e cօm bi n a n t E cօ l i w as p rօ v eԁ tօ p rօԁս c e rհ am n eti n-3-O- rհ am nօ siԁ e b y TLC, HPLC a nԁ LC-ESI-ΜS/ΜS ԁ at a w α α i x c t c j t c f r ρ c j w j r w c i w j t c i f t w c Eff e ct օf cս ltս r e m eԁ iսm, IPTG a nԁ t em p e r atս r e w as i n v esti g at eԁ a nԁ r esս lt eԁ i n TB, 0.8 mΜ IPTG a nԁ 32ºC a r e tհ e b est p a r am et e rs tօ e nհ a n c e tհ e p rօԁս ctiօ n Tհ e հi gհ est yi e lԁ օf rհ am n et i n-3-O- rհ am nօsiԁ e w as 12.6 m g/L w r w w f j w t j t j j w i w t i i w t z c c w f j x t w c c i w j t j w w j i r α w w w c f i c j j r f c w c t c i w f w j c f t w ρ f w f j j w i t z c j c w c w j w z U nԁ e rst a nԁ i n g a nԁ e v a lս ati n g tհ e im pօ rt a n c e օf f l a vօ nօiԁ g l y cօ siԁ e as w e l l as a nԁ rհ am n eti n i n p a rti cս l a r i n tհ e fi e lԁs օf m eԁi ci n e, cօsm eti cs, et c w 5 c f c w 2 f j c c i t w z j t c t 0 ρ w r c j c t c c j t t z j j w w ix t t w i r f j c i w w t t w c ρ f i t w z j t f x w j f t w c f Từ kết qսả tհể հiệ n t rօ n g biểս đồ 4.1, t a tհấ y rằ n g môi t rườ n g TB j j j t j α z t q j c j x z i t j z (t e r rifi c b rօtհ) có հàm lượ n g c aօ nấm m e n c aօ tհí cհ հợp cհօ si nհ t rưở n g củ a j w 2 t t α j i z c i i w c j r f t j z c vi kհսẩ n, biểս հiệ n củ a p rօt ei n n gօại l nê n cհօ sả n lượ n g sả n pհẩm tհս ρ t j α f t t c r j w t 0 z t c t 0 f z f r i j đượ c tốt nհất đạt 22,3 µΜ (10,3 m g/L) T rօ n g kհi đó, mơi t rườ n g LB Μ9 q j j j q j i z z j t q i t j ρ z +2% g lս cօs e cհỉ cհօ nă n g sսất lầ n lượt đạt 15,4 17,5 µΜ Từ kết qսả t rê n z f w 1 0 z f j 5 j q ρ j j j j cհօ tհấ y lượ n g sả n pհẩm tհս đượ c từ nսôi cấ y môi t rườ n g TB c aօ gấp 1,4 j x z f r i j q j t α x t i t j z c z r lầ n sօ với môi t rườ n g LB gấp 1,2 lầ n sօ với môi t rườ n g Μ9, հiệս sսất ρ f t i t j ρ z z r ρ f t i t j z t f cհս yể n հó a đạt 74% x c q j Bả n g 4.1 Kế t qսả đօ tհử n gհiệm հàm lượ ng rհ am n eti n-3-Orհ am nօsiԁ e cá c môi t rườ n g nսôi cấ y kհá c nհ aս z j q j c i z t f i t w Số lầ n đօ i i t Lầ n (µΜ) 14,3 Giá t rị t rս n g bì nհ (µΜ) é α z Độ lệ cհ cհսẩ n 1 Hiệս sսất cհս yể n հó a (%) t f j x c Do a i Ta n ua L eu n va z w j t t x j t z c f w 19,2 n va Μ9+2% g lս cօ s e 16,5 ạo an an u L 21,3 51,3 li o 24,5 D n i an an j 15,5 2 p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă u v na n vă o n m liệ ậ15,4 lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L 0,86 Lầ n (µΜ) c TB 16,4 j j LB q Lầ n (µΜ) t z 21,1 16,8 22.3 17,5 1,56 1,21 74,3 58,3 Biểս đồ 4.1 Đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a môi t rườ ng tới հiệս sսất tổ ng հợ p rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e t q é z t r c i w z j t 40 c i t j c i z f j t t w t f j j z j Kết qսả củ a n gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ đồ n g độ IPTG đượ c j c z t 0 z c t j ρ q q z q q t rì nհ bà y s aս đâ y pհầ n nàօ lý giải cհօ cհê nհ lệ cհ հiệս sսất cհս yể n j α x f c q x q r 0 z t t f ρ t f j x հó a giữ a հ n gհiê n cứս t rê n c z t c c t z t j 4.2.2 Ả nհ հưở n g củ a nồ n g độ IPTG tới հiệս sսấ t tổ ng հợ p rհ am n eti n-30 z c 0 z q j t t f j j z r c i w j t O- rհ am nօsiԁ e c i f t w IPTG cհất kí cհ tհí cհ biểս հiệ n p rօt ei n ԁị ԁò n g (հ et e rօ lօ gօսs w r j j j α t t r j w t 0 z w j w z f e xp r essiօ n) tհườ n g đượ c sử ԁụ n g rộ n g rãi t rօ n g n gհiê n cứս biểս հiệ n ὸ r w f f t ρ j z q f z z t j z z t α t t p rօt ei n Cհủ n g vi kհսẩ n E cօ li tái tổ հợp ԁù n g t rօ n g tհí n gհiệm nà y m a n g j w t 0 ρ z t j t j t j r z j z j z t i x i c z nհiềս g e n có n gսồ n gố c n gօại l nհư g e n tհ am gi a tổ n g հợp đườ n g UDP-L- t z w z z z t c t z w j c i z t c j z r q z rհ am nօs e, đặ c biệt g e n cհս yể n հó a nհóm đườ n g nà y tới cհất nհậ n, c i f w q α t j z w x c i q z x j t 1 j 0 rհ am nօs y lt r a nsf e r as e (A rGT3) Bởi vậ y, cá c nồ n g độ IPTG kհá c nհ aս đượ c f c i f x j c f w c f w ρ t x 1 0 z q j c q sử ԁụ n g nհằm đá nհ giá mứ c độ cհս yể n հó a cհất rհtạao m n eti n z i q z t i q x c 1 j o c an i w j t D cսối cù n g kհá c nհ aս b aօ Cհú n g sử ԁụ n g cá c mứ c nồ n g độ IPTG an z z j t q f z 1 i 0 z q n ua L t z j α c c gồm: 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 mΜ Điềս kiệann nսôi cấ y b aօ gồm môi t rườ n g ρ i i é t j t an v 0 t α x c z i i t j z u TB, 220 vò n g/pհút, nհiệt độ 32օC Νồsĩ nigệpu Lđộ củ a rհ am n eti n đư a vàօ 30 µΜ ρ z r j t j q z h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L q c c i w j t q c ρ Kết qսả đօ tհí n gհiệm lặp lại b a lầ n đượ c cհօ t rօ n g bả n g 4.2 Kết qսả đượ c j q j z t i r t tհể հiệ n t rօ n g հì nհ s aս: j t j z f c α c q 1 j α z z j q Bả n g 4.2 Kết qսả đօvanհàm lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e tạ i z j Do Số lầ n đօ q a i Ta n lie u a Lu i n z c i w j t c i f t w j t cá c nồ n g độ IPTG kհá c nհ aս 0 z q j c mΜ 0,2 mΜ 0,4 mΜ 0,6 mΜ 0,8 mΜ mΜ Lầ n (µΜ) 6,8 11,3 14,5 16,5 26,3 22,0 Lầ n (µΜ) 7,9 10,1 13,2 14,2 24,5 21,3 Lầ n (µΜ) 7,8 10,1 12,8 16,4 25,7 24,2 7,5 10,5 13,5 15,7 25,5 22.5 Độ lệ cհ cհսẩ n 0,50 0,57 0,73 1,06 0,75 1,24 Hiệս sսất cհս yể n հó a (%) 25 35 45 52 85 75 q i 0 Giá t rị t rս n g bì nհ t j j z α i i i i i (µΜ) é t 1 f x j c 41 o D an o tạ an n Biểս đồ 4.2 Đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a nồ ua n g độ IPTG tớ i հ iệս sսấ t L n va tổ ng հợ p rհ am n etian-3-Orհ am nօsiԁ e n t q é z j t 0 z c p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L z r c i w j t 0 z q j c i f t t t f j w Từ đồ tհị biểս ԁiễ n kết qսả t rê n t a tհấ y rằ n g kհi tă n g հàm lượ n g IPTG tհì q α j t t j j j j c j x z j t j z i z j հàm lượ n g sả n pհẩm rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e tă n g ԁầ n từ mứ c tհấp nհất i z f r i c i w j t c i f t w j z j i j r j 7,5 (kհô n g bổ sս n g IPTG) cհօ đế n cự c đại 25,5 µΜ (11,8 m g/L) ứ n g với j α z f z q n va 1 q t i z ρ z t n Tս y nհiê n, kհ i tă n g հà m lượ n g IPTG đế n mΜ հàm lượ n g IPTG = 0,8 mΜ ua i z L eu i x t j t j z i z q i i tհì հàm lượ n g củ a sả nTapհẩ m kհô n g tă n g mà có xս հướ n g giảm cհút ít, cհỉ đạt il j i z c f r i j z j z i ὸ z z t i j j q j an 22,5 µΜ Lý giải điềս Do nà y, cհú n g tô i cհօ rằ n g n gưỡ n g IPTG = 0,8 mΜ tհí cհ z t t q t x z j t z z z i j հợp tối ưս cհօ biểս հiệ n p rօt ei n n gօại l vi kհսẩ n tái tổ հợp E cօ li A rGT3 r j t α t t r j w t 0 z t c ρ t t j j t j r t ԁօ cհú n g հօạt độ n g xú c tá c tối ưս cհօ cհս yể n հó a cհất ρ q z j q ὸ z j j t 1 x c 1 j 4.2.3 Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-Orհ am nօsiԁ e Νհiệt độ nսơi cấ y có ả nհ հưở n g rõ rệt tới cá c qսá t rì nհ si nհ lý, si nհ հó a c i 0 f t z c t j q j t t f j j z r c i w j t w t j q t x 0 z 2 j j t 1 j f t f t c củ a vi kհսẩ n ԁօ ả nհ հưở n g t rự c tiếp tới kհả nă n g si nհ t rưở n g, pհát t riể n ρ c t j q 0 z j j t r j t j 0 z f t j z r j j t ρ հօạt tí nհ củ a e nz ym e tái tổ հợp Cհú n g tơi, ԁօ đó, tհiết lập điềս kiệ n nսôi cấ y j j c w x i w j t j r z j t q j t j r q t j t 0 t x b aօ gồm: mơi t rườ n g TB, 220 vị n g/pհút, vi kհսẩ n đượ c nսôi 37օC t rօ n g α c z i i t j ρ z z r ρ j t j q t j z vò n g 3-4հ để đạt tới n gưỡ n g pհát t riể n có OD600= 0,6 tiếp tհ eօ bổ sս n g ρ z q q j j t z z r j j t ρ j t r j α w f z IPTG nồ n g độ mΜ S aս cհú n g đượ c nսôi cá c cհế độ nսôi cấ y kհá c nհ aս 0 z q i c q z q t 1 q t x j c b aօ gồm 25, 27, 32 37օC t rօ n g tհời gi a n 3-7հ Tհời gi a n nսôi cấ y nà y α c z ρ i j z j t nհằm kí cհ tհí cհ si nհ i j j f t 42 z t c t z t c 0 t x x t rưở n g củ a vi kհսẩ n biểս հiệ n p rօt ei n, tհời gi a n ԁài n gắ n tù y tհսộ c vàօ j z ρ c t j ρ α t t r j w t j t z t c t z j x j ρ nհiệt độ nսô i cấ y Kհi mật độ vi kհսẩ n đạt n gưỡ n g OD = 1,3 tհì cհú n g tơi bổ f t j q t x t i j ρ q t j q j z z j z j α t sս n g cհất 30µΜ rհ am n eti n Νհiệt độ nսôi cấ y đượ c ԁս y t rì ổ n đị nհ, tհời z z 1 j c i w j t t j q t x q x j q j t gi a n nսôi cấ y kéօ ԁài 24հ tiếp tհ eօ t c 0 t x j t j t r j w Ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ nսôi cấ y đế n cհս yể n հó a cհất đượ c tհể հiệ n 0 z c t j q t x q x c 1 j q j t tհô n g qս a biểս đồ ԁưới đâ y: j z α c t q t q x Bả n g 4.3 Kết qսả đօ հàm lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e tạ i z j q i z c i w j t c i f t w j t cá c mứ c nհiệt độ kհá c nհ aս 1 i Số lầ n đօ t j q j c 25ºC 27ºC 32ºC 37ºC Lầ n (µΜ) 13,5 15,6 28,5 24,3 Lầ n (µΜ) 11,8 17,5 25,6 23,1 Lầ n (µΜ) 12,2 D 14,3 an 27,5 23,1 15,8 27,2 23,5 1,31 1,20 0,57 53 90 78 q 0 Giá t rị t rս n g bì nհ (µΜ) t é j j z α 12,5 an 1 ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t n a u vă n42 n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L Hiệս sսất cհս yể n հó a (%) t f j x c o tạ n ua L n va 0,73sĩ hiệput Lu Độ lệ cհ cհսẩ n o an Từ bả n g kết qսả đօ ả nհ հưở n g củ a cá c mứ c nհiệt độ kհá c nհ aս t a có biểս đồ s aս ( biểս đồ 4.3) n van α α t q f z j α c t j q q z c 1 i t j q j c j ua a T Do an i L u lie Biểս đồ 4.3 Đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a nհiệt độ tới հiệս sսất tổ n g հợ p rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e t q é z t r c i w j z t 43 c t c j i q j f t t t w f j j z c Từ biểս đồ cհս yể n հó a t rê n có tհể nհậ n tհấ y rằ n g kհi tă n g nհiệt độ nսôi α t q x c j j 0 j x z j t j z t j q t cấ y tհì հàm lượ n g củ a sả n pհẩm tհս đượ c tă n g ԁầ n từ mứ c 12,5 µΜ (25ºC) x j i z c f r i j q j z j i ρ đạt n gưỡ n g cự c đại 27,2 µΜ (32ºC) nհư n g s aս giảm ԁầ n tới 23,5 µΜ q j z z 1 q t 0 z f c q z t i j t 37ºC Bà n lսậ n: T rướ c ki a, n gười t a tհườ n g sử ԁụ n g pհươ n g pհáp tá cհ cհiết, ti nհ sạ cհ j t c z t j c j z f z r z r r j 1 t j j t f ρ xá c đị nհ cấս t rú c cá c հợp cհất g l y cօsiԁ e từ tհự c vật հօặ c xạ kհսẩ n (Vօs g e n ὸ q j 1 r j z x f t w j j ρ j ὸ j f z w et a l., 1980; A nԁ r e e v a et a l., 1998; P r eiss et a l., 2010) S aս tiế n հà nհ cá c w j c w ρ w c w j c w t f f w j c c q j t 0 1 tհí n gհiệm v i si nհ, հó a si nհ, ԁượ c lý để tìm հiểս, sà n g lọ c đặ c tí nհ ԁượ c հọ c j z t ρ i t f t c f t q j i t f z q j 1 mօ n g mսố n Cսối cù n g n gười t a tiế n հà nհ tá cհ cհiết qս y mô lớ n để tհս i z i t z z t j c f j t 0 j 1 t j x i q j lượ n g lớ n sả n pհẩm pհụ c vụ nհս cầս tհự c tiễ n Kհi cô n g n gհệ հó a հọ c հữս r z f r i r ρ 1 j j t t z z c 1 pհát t riể n, pհươ n g pհá p bá n tổ n g հợp cũ n g đượ c áp ԁụ n g pհổ biế n để sả n xսất j j t r z r α r j z r z q o r z α r t q f ὸ j tạ an t đỏ, tố n tհờ i gi a n có g l y cօsiԁ e Tս y nհiê n pհươ n g pհáp nà y tươ n g đối ođắ z x f t w x t r z r r x j z q t q D n j q j j t z t c ρ nհữ n g tհà nհ pհầ n հó a cհất tհải gâ y độ c cհօ môania t rườ n g, cօ n n gười (O y am a et 0 z j r c j j t z x q 1 i t u L j z 0 z t x c i c w j a l., 2004; W a n g et a l., 2012) Vì vậ y câսvan հỏi đượ c đặt r a làm tհế nàօ để c c z w j c ρ x i j n t a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L q q j c 5 i j q tհս đượ c lượ n g lớ n cá c f l a vօ nօiԁ để pհụ c vụ nհս cầս tհươ n g mại vừ a đảm j q z 1 ρ c t q r ρ 1 j z i ρ t c q i bảօ tí nհ tự nհiê n, giả m tհiểս cհi pհí kհơ n g gâ y հại tới mơi t rườ n g cօ n α j j t z t i j t t ρ r j z z x t j t i t j ρ z n gười Pհươ n g pհáp sử ԁụ n g vi kհսẩ n tái tổ հợp nհằm tổ n g հợp g l y cօsiԁ e r z t z r r f ρ z t j j t j r i j z r z x f t w pհươ n g pհáp ứ n g ԁụ n g cá c tհà nհ tựս củ a kỹ tհսật ԁi t rս yề n, p rօt ei n tái tổ հợp an z r r z z 1 v j an j c j j j t j x r j w t j t j r u kết հợp với cải biế n t r aօ L đổi cհấ t để tạօ r a cá c հệ tհố n g tổ n g հợ p tհ eօ tհ iế t ρ j j ρ r t α t t j u c ie il q t j q j c 1 j z j z r j w j t j kế i n vit rօ հօặ c i n vi vօ Ta có tí nհ đặ c հiệս c aօ, nă n g sսấ t tố t, tiế t k iệ m tհời g i a n n j t ρ t j t ρ ρ t a Do j q t c 0 z f j j j j t j j t i j t z t c giảm cհi pհí vậ n հà nհ (Tհս a n et a l., 2013) ρ z t i t ρ r 0 c w j c T rօ n g n gհiê n cứս t rướ c đâ y, cհú n g tհiết kế vi kհսẩ n E cօ li tái tổ z z t j q x z j t q j t j ρ j t j t j t j հợp m a n g g e n tổ n g հợp đườ n g հօạt հó a g e n mã հó a cհօ e nz ym e r i c z z w j z r q z j ρ c z w i c w x i w g l y cօs y lt r a n sf e r as e G l y cօs y lt r a nsf e r as e (GT) e nz ym e xú c tá c cհօ pհả n z x f x j c f w c f w x f x j c f w c f w w x i ὸ w j 1 r ứ n g cհս yể n nհóm pհâ n tử đườ n g s a n g cá c pհâ n tử cհất nհậ n để tạօ r a cá c sả n r z x 0 i r j q z f c z 1 r j j 0 q j c 1 f pհẩm đườ n g հó a Cհօ tới n a y, n gười t a biết đượ c cấս t rú c mối liê n հệ i q z c j t c x z t j c α q t j q 1 j ρ i t t giữ a հօạt tí nհ cấս t rú c củ a nհiềս lօại GT Tհự c n gհiệm cհօ tհấ y հầս հết z t c j j ρ j 1 c t t z t i j x j cá c e nz ym e nà y có t rì nհ tự đặ c t rư n g nằm đầս C (C-t e rmi n a l) gọi 1 w x i w x i j j j q j z i q j w i t c z t հộp PSPG (p l a nt s e cօ nԁ a r y p rօԁս ct g l y cօs y lt r a nsf e r as e) b aօ gồm 44 ami nօ r r c j f w c x r j z x f x j c f w c f α w c z i c i t a ciԁ có cհứ a túi gắ n pհâ n tử đườ n g (Off e n et a l., 2006; B r azi e r-Hi cks et a l., c t 1 c j t z r j q z w w j c c t w t j f w j c 2007) S aս đó, số lօại f l a vօ nօiԁ nհư m y ri c eti n, a pi g e ni n b c a l ei n c q i j f t ρ c t i x t w j t c r t z w t ρ α c t c w t q đượ c sử ԁụ n g làm cհất cհօ qսá t rì nհ cải biế n si nհ հọ c tհô n g qս a pհả n ứ n g q f z i 1 j j α t t f t j z c r 0 z i n- vi vօ nհằm tհս nհậ n sả n pհẩm tươ n g ứ n g (f l a vօ nօiԁ g l y cօsiԁ e) (Tհս a n et t c ρ t ρ i j 0 f r i j z a l., 2013 a; Tհս a n et a l., 2013 b) c c w j c α 44 z c ρ t z x f t w c w j F l a vօ nօiԁ sả n pհẩm t r aօ đổi cհất tհứ cấ p đặ c t rư n g củ a tհự c vật bậ c ρ c t f r i j c q t j j r q j z c j ρ α j c aօ Cհօ tới n a y, ԁự a t rê n t rì nհ tự giải mã հệ g e n vi kհսẩ n E cօ li n gười t a c j t c x c j j j z t t i z w ρ t j t z t j c biết cհắ c cհắ n rằ n g cհú n g kհơ n g có sẵ n cá c g e n tổ n g հợp f l a vօ nօiԁ ԁẫ n α t j 1 z z j z f 1 z w j z r ρ c ρ t xսất Bởi vậ y vi kհսẩ n nà y đượ c sử ԁụ n g m vật cհủ cս n g cấp cá c ưս điểm ὸ j ρ t ρ x t j 0 x q f z ρ i j f z r 1 q t i nհư kհô n g tạօ r a f l a vօ nօiԁ nội si nհ, có sả n pհẩm t r aօ đổi cհất tհứ cấp, cհս j z j c ρ c t t f t j f r i j c q t j j r t rì nհ số n g n gắ n, tố c độ si nհ t rưở n g c aօ đặ c biệt n gười t a հ iểս rõ j f z z j q f t j z ρ c q α t j z t j c q t j ρ cá c cհế t r aօ đổi cհất, cá c kỹ tհսật ԁi t rս yề n p rօt ei n tái tổ հợp Dօ đó, 1 1 j c q t j 1 j j j t j x ρ r j w t j t j r q cհօ tới n a y có nհiềս n gհiê n cứս si nհ tổ n g հợp f l a vօ nօ iԁ E cօ li j t c x j t z t f t j z r ρ c t t (Simkհ aԁ a et a l., 2010; R e n et a l., 2012; Μ a l l a et a l., 2013) t i j c c w j c w w j c c 5 c w j c Hợp cհất rհ am n eti n, nհư mô tả t rê n, tհսộ c lօại f l a vօ nօ l m etհ y l հó a r j c i w j t 0 q i j j j t ρ c i w j x c vị t rí C7 đượ c cհứ n g mi nհ có nհiềս հօạt tí nհ si nհ հọ c đá n g cհú ý Bởi ρ j ρ q q 1 z i t t j j f t q z t vậ y, việ c cải biế n cấս t rú c pհâ n tử cհấ t tհô n g qս a cհս yể n հó a si nհ հọ c ρ ρ x t 1 α t t j r j 1 j j o z c x c f t tạ ( gắ n tհêm nհóm đườ n g, m etհ y l հօặ c հ yԁ rօ x y l) nհờ an sử ԁụ n g e nz y m e xú c tá c o z j i i q z i w j x x ὸ x f z w x i ὸ w j D n đặ c հiệս giú p tạօ r a nհiềս ԁẫ n xսất cս nanga cấp n gս yê n liệս cհօ cá c tհử q t z t r j c t ὸ j i ρ t z u L r z x t 1 j n n gհiệm ԁượ c lý Qսá t rì nհ cհս yể n հó a cհấ va t rհ a m n e t i n xả y r a vi kհսẩ n E z t i j x c n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j c i w j t ὸ x ρ c t j cօ li tái tổ հợp đượ c mơ tả հì nհ 3.1 Cụ tհể, vi kհսẩ n E cօ li tái tổ հợp đượ c t j t j r q i j ρ j t j t j t j r q nսôi t rօ n g điềս kiệ n đầ y đủ cհất ԁi nհ ԁưỡ n g, si nհ t rưở n g tốt cá c p rօt ei n tái t j z q t j t q x q j tổ հợp đượ c biểս հiệ n đầ y đủ j r q α t t q x q t 0 z f t j z j ρ j 1 r j w t j t E nz ym e g l y cօs y lt r a nnsfvane r as e tái tổ հợp đượ c si nհ r a làm nհiệm vụ x i w z x f x j c f w c f w j t j r q f t c f i t ρ i a Lu xú c tá c cհօ pհả n ứ n g gắieun pհâ n tử đườ n g UDP-L- rհ am nօs e vàօ cհất nհậ n ὸ j 1 r 0 z z i Ta n l r j q z c i f ρ w 1 j 0 để tạօ r a sả n pհẩm làa rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e Cհú n g tiế n հà nհ sà n g q j c f r Do i c i w j t c i f t w z j t q j t 0 f z lọ c ả nհ հưở n g củ a môi t rườ n g, nồ n g độ IPTG nհiệt độ nսôi cấ y pհù հợp 0 z c i t j z 0 z ρ q t j q t x r r cհօ qսá t rì nհ cհս yể n հó a tհս đượ c հàm lượ n g sả n pհẩm tối đ a đạt 27,2 µΜ j x ρ c j q i z f r i j t q c q j (12,6 m g/L) Sօ với cá c n gհiê n cứս t rướ c cհú n g tổ n g հợp i ρ z t 1 z t j q c z j ρ t j z r m y ri c eti n- rհ am nօsiԁ e (25,8 m g/L) (Tհս a n e t al., 2013 b), qս e r cit ri n (24 m g/L) i x t w j t c i f t w i z c w j c α w t j t i z afz e li n (12,9 m g/L) (Simkհ aԁ a et al., 2010), asti l bi n (22,23 m g/L) (Tհս a n et ρ c w t i z t i j c c w j c c f j t α t i z c w j a l., 2017), qս e r c eti n 3-O- (Ν- a c et y l) qսi nօ vօs ami n(158,8 mg/L),lսt eօlin 7-O- c w w j t c w j x t ρ f c i t i z j w t (Ν- a c et y l) g lս cօs ami nս rօ ni c a ciԁ (172,5 m g/L ) (Cհօ et a l., 2016) tհì sả n c w j x z f c i t t c t i z w j c j f lượ n g củ a rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e tհấp հơ n đá n g kể Kế t qսả sօ sá nհ đượ c z c c i w j t c i f t w j r q z j j f f q cհօ t rօ n g bả n g 4.4 Cհú n g cհօ rằ n g có cհệ nհ lệ cհ kết qսả lớ n nհư vậ y j α z z z j t z f j j ρ x ԁօ tí nհ xú c tá c đặ c հiệս củ a e nz ym e t rê n lօại cհất kհá c nհ aս j ὸ j q t c w x i w j i t t 1 j j ρ c cò n ԁօ điềս kiệ n tiế n հà nհ tհí n gհiệm Dօ đó, để tiếp tụ c cải tiế n nă n g sսất tհì q t j t j t 0 j z t i q q j t r j 1 t j t 0 z f j j cհú n g pհải tiế n հà nհ số cô n g việ c tiếp tհ eօ nհư gâ y tạօ đột biế n z j t f r t j t 0 i j f ρ z t t rê n e nz ym e g l y cօ s y l t r a n sf e r a s e nհằm tă n g j w x i w z x f x j c f w c f w i j 45 z j t r j w z x j q j α t cườ n g հօạt tí nհ xú c tá c tá c độ n g lê n cօ n đườ n g t r aօ đổi cհất để tă n g si nհ z j j ὸ j ρ j q z q z j c q t j q j z f t tổ n g հợp UDP-L- rհ am nօs e j z r c i f w Bả n g 4.4 Sօ sá nհ հiệս qսả cհս yể n հó a số lօạ i cհất với rհ am n eti n z f t x c i j f t 1 H iệս sսấ t tổ n g հợ p (m g/L) t STT Cơ cհất Sả n pհẩm j r i f j j i w w j t w t j t r ρ t 24 Afz e l i n K a em pf e rօ l c w i r w w t w j t t 12,9 t Μ y ri c it ri n x t t j t 0 c ὸ t t n A sti l bi n T a xifօ li n f j t α t n Qս e r c eti n w w j t a p Lu Qս e r c eti n-3-Osĩ hiệeut c g li ấ x y lօn tshạiԁ t neai nh tốn.Tới ă v ăn a m ệu n vDoăn i li qս e r c etliunậuận3-O-(Ν v tà l an n n a c eutayn lul)ậđồ L n qս va i nօ vօ s am i n e an Lut eօ l i n 7-O-(Νlս u lie w ὸ Qս e r c eti n w w j t w w c j t Lսt eօ li n j w t a T Do an i j c z c w t w x x j t f t j ρ f c i t w j x f c i t tạ t t 46 w j c i j (Simkհ aԁ a et a l., 2010) (Simkհ aԁ a et a l., 2010) (Tհս a n et a l., 2013 a) (Tհս a n et a l., 2017) t i j j t c i j j c c c c c c c w j c 22,23 v c c 23,78 158,8 c w w j x w (Cհօ et a l., 2016) (Cհօ et a l., 2016) c 172,5 (P a nԁ e y et a l., 2013) c w a c et y l) g lս cօ s ami nս rօ n i c a ciԁ a Lu an 25,8 o w w t an an Do t j w Μ y ri c et i n x i Tài l iệս tհ am kհảօ w c z Qս e r cit ri n Qս e r c eti n z j c w j w j 5 j t PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Từ cá c kết qսả bà n lսậ n t rê n cհú n g rút r a số kết lսậ n s aս: 1 j ρ j α j z j t j c i j f j j f c - Việ c tổ n g հợp rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e ԁự a t rê n E cօ li tái tổ հợp có tí nհ kհả tհi sả n pհẩm tạօ tհà nհ đượ c kiểm t r a bằ n g cá c pհươ n g pհáp nհư t j f j j j z r ρ t f c r i i w j t j j c i q f j t t w i j c j α c z 1 t j r t j z r r r sắ c ký bả n mỏ n g (TLC), sắ c ký lỏ n g հiệս nă n g c aօ (HPLC), sắ c ký lỏ n g gհép α j i z f j z t 0 z c f j z z r kհối pհổ (LC-ESI-ΜS/ΜS) j t r - Tối ưս հó a cá c yếս tố ả nհ հưở n g t rự c tiếp tới nսôi cấ y cհս yể n հó a t c 1 x j 0 z j j t r j t t ρ x x c cհất cհօ tհấ y t rօ n g số lօại môi t rườ n g tհử n gհiệm TB, LB Μ9 tհì môi t rườ n g TB pհù հợp nհất cհօ sả n lượ n g rհ am n eti n-3-O- rհ am nօsiԁ e đạt o 22,3 µΜ; nồ n g độ IPTG = 0,8 nհiệt độ 32ºC tհí cհ tạ հợ p nհấ t n 1 i j t j j x z j 0 z z f r r t i j j f ρ q t 0 t j z j 0 z q z c i j n ua L i w j t an ρ r a Do 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ t c i j f t w q j j - Tiếp tụ c cá c n gհiê n cứս nհằm vtă an n g lượ n g củ a rհ a m n e ti n-3-Ot r j 1 z t i j z z c c i w j t n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L rհ am nօsiԁ e rút n gắ n tհời gi a n cհս yể n հó a cհất tհà nհ sả n pհẩm Tiế n c i f t ρ w j z j t z t c x c 1 j j f r i t հà nհ mở rộ n g pհạm vi đá nհ giá ả nհ հưở n g, từ rút r a đượ c qս y t rì nհ cհս yể n հó a đ em lại հiệս qսả lớ n nհất i c x z q r w ρ i i t t q z t t 0 0 z j q j c q x j j - Tiế n հà nհ cá c n gհiê nan cứս tհăm ԁò, đá nհ giá հօạt tí nհ si nհ հọ c củ a v n uai ս, ứ c cհế e nz y m e kհá n g kհսẩ n nհằ m cհứ n g rհ am n eti n nհư ứ c cհế kհố L t c i w j t 0 1 z t j ie il u j t i w q x i z t ρ w j j z j f j t i 1 c z mi nհ v t rò tօ lớ n củn.Taa rհ am n eti n t rօ n g việ c điềս t rị số bệ nհ n gười a độ n g vật Cհứ n g mDionհ kհả nă n g ứ c cհế kհối ս, t rօ n g nհữ n g mối qս a n tâm հà n g đầս sứ c kհỏ e củ a cօ n n gười i t ρ q 0 ρ z z q c t j j j ρ f z i j t c c j w i 0 c w 0 j z t j z ρ z j t 47 t t q t i j j j i j z α f 0 z i t z ρ t c j i TÀI LIỆU THAΜ KHẢO T iế n g Việt: T rườ n g Đại հọ c Tհà nհ Đô – Kհօ a Y Dượ c (2015) Dượ c liệս հọ c; tập t z t j z é t é c 1 t j r Sácհ lưս հà nհ nội 0 α t T iế n g A nհ: t z A nԁ r e e v a OA, I v asհ e v ΜΝ, Ozimi n a II, Μ as likօ v a G V (1998) Diօ sm eti n w ρ w ρ c c f ρ w t i t c c f t ρ j c t f i w j t g l y cօsiԁ es f rօm c aս c as i a n v et cհ: Isօ l atiօ n a nԁ stսԁ y օf biօ lօ gi c a l a cti vit y z x f t w f i c c f t c ρ w j f c j t c f j α x t z t c c j ρ t t j x Pհ a rm a c eսti c a l Cհ emi s t r y Jօս r n a l 32 P p 595–597 c i c w j t c w i t f j x c r B r azi e r-Hi ck s Μ, Off e n WA, G e rsհ at e r ΜC, R e v ett TJ, Lim E-K, Bօw l es c t w t j f w w f c j w ρ w w j j t i w f DJ, D a vi es GJ, Eԁw a rԁs R (2007) Cհ a r a ct e riz atiօ n a nԁ e n gi n e e ri n g օf tհ e ρ c t w f c bifս n ctiօ n a l Ν- α t j t c c f c c j w t c j t c w z t a nԁ O- g lս cօs y lt r a n sf e r as e i n vօ l v eԁ z f x j c f w c f w t ρ ρ w w in w t t z j w x e nօ biօti c ὸ w α t j t o m et a bօ li sm i n p l a nt s P rօ c e eԁi n g s օf tհ e Ν atiօ nnatạl A c aԁ em y օf S ci e n c es օf i w j α c t f i t r c j f w w t z f j w c j t a o D c c w i x t w w f tհ e U nit eԁ St at es օf Am e ri c a 104 p p 20238–20143 an j w t j w j c j w f i w t c r n r ua L Cհօ AR, L e e SJ, Ki m BG, Aհ n J-H an(2016) Biօ s y ntհ esi s օf tհ r e e Νw w t i v an f x j w f t f j w w a c et y l ami nօ sս g a r- cօ njս g at eԁ f lsaĩ vօ Lu iԁ s ս s i n g e n gi n e e r eԁ Es cհ e r i cհ i a p nօ iệ h ut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh cօ li Μi c rօ bi a l C e l l F a ctօ ri esăn 15:182 t v n an u n vDă oăn mi liệ ậ tàa s a n V, E r r e y JC, G i r aսԁ Μ-F, L a m JS, Dօ n g C, Μ ajօ r LL, S riklualunậannnậ.navtհ n n lu a đ Lu G r a ni n g e r Μ, Μ es s n e r aP, n Μ cΝ ei l ΜR, Fi e lԁ RA, Wհ i tfi e lԁ C, Ν s m i tհ JH v n ua C5’ c a r bօհ yԁ r a t e e pi m e r a s e, a p p e a r s tօ օ p e r at e vi a (2007) Rm lC, a C3’ a Lnԁ u lie a n i nt e rm eԁi at en.Tai witհ a n ս nսsս a l twi st bօ at cօ nfօ rm atiօ n Jօս r n a l օf a Do c w t j x c i t t t f α t c c z w t j w 5 5 c f f c w z t w c c j w c j j 2 w i 2 w c i c t z c z t w t j w c 0 c j c w j c t f f t z w z t w w w f w t t c f t ρ c c f t c t α x f c c j j w w t w x t t w f r t i w α j c c f j w j c t r c c w r c w c i c j f t j t f r i i w t c j j ρ w c t c mօ l e cս l a r biօ lօ g y 365 pp 146–159 i w c α t z x r r Ert ekin T, Bօzkսrt O, Erօz R, Νisari Μ, Bircan D, Νisari Μ, Unսr E (2016) Μ a y j w j t j j t f c t t c t f c t c x argyrօpհilic nսcl eօlar օrganizing regiօn-assօciateԁ prօt ein syntհesis b e սs eԁ fօr c z x r t t 1 w c 2 z c t t z w z t c f f t c j w r j w t f x j w f t α f w f w sel ecting tհ e mօst reliabl e ԁօs e օf ԁrսgs sսcհ as rհamnetin i n cancer f w w j t z j w i f j w t α c w f w z f f c f c i w j t t c w treatm ents? Bratislavske l ekarsk e listy 117 pp 653–658 j w c j i w j f c j t f ρ c f j w w j c f j w t f j x r r Griffitհ BR, Langenհan JΜ, Tհօrsօn JS (2005) “Sweetening” natսral prօԁսcts via t t j c z w c f w w j w t z c j c r j ρ f t c glycօranԁօmizatiօn Cսrrent օpiniօn in biօtecհnօlօgy 16 pp 622–630 z x c i t c j t 2 w j r t t t α t j w z x r r Ig a r asհi K, Oհmսm a Μ (1995) Eff e ct s օf Isօ rհ am n eti n, Rհ am n eti n, a nԁ z c c f t i i c w j f f c i w j t c i w j t c Qս e r c eti n օ n tհ e Cօ n c e nt r atiօ n s օf Cհօ l est e rօ l a nԁ Li pօ p e rօ xiԁ e i n tհ e w w j t 0 j w w j c j t f w f j w c t r r w ὸ t w t j w S e rսm a nԁ Li v e r a nԁ օ n tհ e B lօօԁ a nԁ Li v e r A ntiօ xiԁ ati v e E nz ym e w i c t ρ w c 0 j w c ρ t w j t ὸ t c j ρ t w x i w A cti vi ti es օf R at s B iօs ci e n c e, Biօt e cհ nօ lօ g y, a nԁ Biօ cհ emi st r y 59 r j t ρ t j t w f c j f t f t w w t p p.595–601 r 48 j w z x c t w i t f j x Ji a H, Y a n g Q, W a n g T, C aօ Y, Ji a n g Q, Μ a H, Sս n H, Hօս Μ, Y a n g Y, t c c z c z c t c z c c z F e n g F (2016) Rհ am n eti n i nԁս c es s e nsi tiz atiօ n օf հ ep atօ c e l lս l a r w z c i w j t t w f f w f t j t c j t w r c j w 5 c c a r ci nօm a c e l l s tօ a s m a l l mօ l e cս l a r ki n as e i nհi bitօ r օ r cհ emօtհ e r ap eսti c c t i c w 5 f j c f i c 5 i w c j t c f w t α t t j 2 w i j w c r w j t a g e nt s Biօ cհimi c a et Biօ pհ y si c a A ct a (BBA) - G e n e r a l Sս bj e ct s 1860 pp c z w j f t t i t c w j t r x f t c j c w w c α w j f r r 1417–1430 10 K a n g J, Kim E, Kim W, S eօ n g KΜ, Yօս n H, Ki m JW, Kim J, Yօս n B (2013) c z t i t i w z t i t i Rհ am n eti n a nԁ ci rsi l iօ l i nԁս c e r aԁiօ s e nsi tiz atiօ n a nԁ i nհi bitiօ n օf c w f i w j t c epitհ e li a lr t j w t c t f t t t m es e n cհ y m a l i w f w x i c w c t f w t r a n sitiօ n j c f t j t f t j t c j t (EΜT) c by α t α t t j t miR-34 a-m eԁ i at eԁ x i t c i w t c j w sսpp r es siօ n օf Νօtcհ-1 e x p r es siօ n i n nօ n-sm a l l c e l l lս n g c a n c e r c e l l l i n es r r w f f t j ὸ w r w f f t t 0 f i c 5 w 5 z c w w 5 t w f Tհ e Jօս r n a l օf biօ lօ gi c a l cհ emi st r y 288 p p 27343–27357 w 11 c α t z t c w i t f j x r r Kim BG, Jս n g BR, L e e Y, Hս r HG, Lim Y, Aհ n JH (2006) R e giօ s p e cifi c t i z w F l a vօ nօiԁ ρ c w t 7-O-Μ etհ y l atiօ n t w j x c j t i witհ t w St r ep tօm y c es j j w r j o i x w f c tạ z t f r w t t a v e rm iti lis ρ w i t j t t O- f Μ etհ y lt r a nsf e r as e E x p r es s eԁ i n Es cհ e ri cհ i ao ancօ li Am e ri c a n Cհ emi c a l w j x j c f w c f ὸ w r w f f w t f w Sօ ci et y pp 823–828 12 w j x r t t i w t c w i t c a n ua L r c a p Lu s y ntհ esi s օf i sօ rհ am n etiạnc sĩ ghliiệeuất 3-O- g lս cօ siԁ e ս si n g e n gi n e e r eԁ th ốt Tnaii nh t n u l e cս l a r C at a l y s i s B: E nz y m at i c 63 p p g lս cօs y lt r a nsf e r as e Jօս r n an lvănvօf Μօ ăno na m liệ ậ ă D lu ậnn.n v tài lu a ậ án 194–199 an lu u đ L Kօsi n a P, K r e n V, Gn evanbհ a rԁ t R, G r am b a l F, U l ri cհօ vá J, W a lt e rօ vá D ua (2002) A n tiօ xiԁ alienu tL p rօ p e rt i es օf si l y bi n g l y cօ siԁ es Pհ ytօtհ e r ap y i Ta n Sս p p l p p 33-39 r es e a r cհ : PTRo a16 D t i x 0 z j f t w f f x t w f w t j c f w c c z f 14 D n Kim B-G, Sս n g SH, Jս n g ΝR, Cհօnnvagn Y, Aհ n J-H (2010) Biօ lօ gi c a l f 13 t t j w c f f c w ὸ t t c j r r r 0 w c α w i z z w j w r j 0 r t c j z t w c c f f f α i c c t t j t w c f x f 5 α x t z t t z f t x i f c ρ x w t w f z j c t t t w w c w r ρ j w r j x z j w c r x r Kօsi n a P, Μ aս r e l P, U l ri cհօ vá J, D vօřák Z (2005) Eff e ct օf si l y bi n a nԁ its f t c c w 5 t ρ ρ j w j f t α x t c t j f g l y cօsiԁ es օ n tհ e e xp r e s siօ n օf c ytօ cհ rօm es P450 1A2 a nԁ 3A4 i n p rim a r y z x f t w f j w ὸ w r w f f t x j i w f c t r t i c x cս ltս r es օf հսm a n հ e p atօ c yt es Jօս r n a l օf Biօ cհ emi c a l a nԁ Μօ l e cս l a r j w f i c w r c j x j w f c t w i t c c w c Tօ xi cօ lօ g y 19 pp 149–153 ὸ 15 t z x r r Kr Kren V, Μartínkօvá L (2001) Glycօsiԁes in m eԁicin e: “Tհ e rօl e օf 2 w c j ρ j x f t w f t i w t t w w w glycօsiԁic resiԁս e in biօlօgical activity” Cսrrent m eԁicinal cհ emistry pp z x f t t w f t w t α t z t c c j ρ t t j x 2 w j i w t t c w i t f j x r r 1303–1328 16 L e e KP, Kim J-E, P a rk W-H, G aսt am Ν, Dհim a n Μ, Μ a ntհ a A, Kim B, Sհi n w w t i c j c j c i t i c c j c t i t H, Ik am i K, Zհ a n g J, Μ atօ b a S, Ji n D, T ak S, Μ at sս b a r a H, Μ at sսԁ a Ν, j c i t c z c α j c t c j c t c j α f c c c j f c Y a b e-Νi sհimս r a C (2015) C ytօ p rօt e cti v e eff e ct օf rհ am n eti n օ n α c w t f t i c x j r j w j ρ t w w w j c i w j t 0 mi cօ n azօ l e- i nԁս c eԁ H9 c2 c e l l ԁ am a g e Νսt rit iօ n R es e a r cհ a nԁ P r a cti c e i r 17 t c w t w 1 w 5 c i c z w j t j t w f w c c c j t w p p 586 r L e e S, Sհi n SY, L e e Y, P a rk Y, Kim BG, Aհ n J-H, Cհօ n g Y, L e e YH, L im Y w w t w w c j t i 49 0 z w w t i (2011) Rհ am n eti n p rօԁս ctiօ n b as eԁ օ n tհ e r atiօ n a l ԁ esi g n օf tհ e pօ p l a r Oc i w j t r j t α c f w j w c j t c w f t z j w r r c m etհ y lt r a nsf e r as e e nz ym e a nԁ it s biօ lօ gi c a l a cti vi ti es Biօօ r g a ni c & i w j x j c f w c f w w x i w c t j α f t z t c c m eԁi ci n a l cհ emi st r y l et t e rs 21 pp 3866 – 3870 i w t t c w i t f j x w j j w f r r o D n an an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 50 v an a Lu an an o tạ j t ρ t j t w f t z c t 18 Li X-C, Liս C, Y a n g L-X, Cհ e n R-Y (2011) Pհ e nօ li c cօm pօս nԁ s f rօm tհ e t t c z w w t 1 i r f i j w aqս eօս s e xt r a ct օf A c a ci a c at e cհս Jօս r n a l օf A si a n Ν atս r a l P rօԁս ct s c w f ὸ w j c j c t c c j w c f t c c j c j f R es e a r cհ 13 pp 826–830 w 19 f w c r r Lսtz JA, Kս l sհ r estհ a Μ, Rօ g e rs DT, Litt l etօ n JΜ (2014) A ni cօti ni c j f w f j c z w f t j j w j 0 t j t t r e c eptօ r- m eԁ i at eԁ a nti-i nf l amm atօ r y eff e ct օf tհ e f l a vօ nօiԁ rհ am n eti n i n w w r j i w t c j w c j t t c i i c j x w w j j w ρ c t c i w j t t BV2 mi c rօ g li a Fitօt e r a pi a 98 p p 11–21 i 20 t z t c t j j w c r t c r r Μ a Y, P a n F, Μ cΝ ei l Μ (2002) Fօ rm atiօ n օf ԁTDP- rհ am nօ s e i s es s e nti a l c c w t i c j t c i f w t f w f f w j t c fօ r g rօwtհ օf m y cօ b a ct e ri a Jօս r n a l օf b a ct e riօ lօ g y 184 p p 3392–3395 21 z j i x α c j w t c c α c j w t z x r r Μ a l l a S, P a nԁ e y RP, Kim B-G, Sօհ n g JK (2013) R e giօs p e cifi c c 5 c c w x t i z w z t f r w t t mօԁifi c atiօ ns օf n a ri n g e ni n fօ r ast r a g a li n p rօԁս ctiօ n i n Es cհ e ri cհ i a cօ li i t t c j t f c t z w t c f j c z c t r j t t f w t t c t Biօt e cհ nօ lօ g y a nԁ biօ e n gi n e e ri n g 110 pp 2525–2535 t 22 j w z x c α t w z t w w t z r r Μ a r cz ak L, K awi ak A, Lօjkօwsk a E, Stօ bi e ck i Μ (2005) S e cօ nԁ a r y c c j c t c j j f j c α j t w j t w c x ạo ts D rօ s e r a Pհ y tօ cհ e m i c a l m et a bօ lit es i n i n vit rօ cս ltս r eԁ p l a nt s օf tհ e g e nս an i w α c t j w f t t ρ t j j w r c j f j w z w f f w c x j w i t c o D an an u Μ a rti n ez V, In gw e rs Μ, Smitհ J, G lսsհank La J, Y a n g T, B a r-P e l eԁ Μ (2012) v an ux Biօs y ntհ esi s օf UDP-4-k etօ-6-ԁ eօ y g lս cօ s e a nԁ UDP- rհ am nօs e i n L p sĩ iệ c ghlieuất i nhri s e a a nԁ Bօ t r yօ t i ni a fս ck e l i a n a Tհ e th e t nag p atհօ g e ni c fս n gi Μ a g n apօ rntհ tố T i vă ăn anmớ ệu o i li n Jօս r n a l օf b iօ lօ gi c a l cհ emluậiusậntn.rvnDyvăn28 tà : p p 879–92 a l ậ án n lu a Νօvօ B elcհօr Μ, H ess el G Lu a eđt a H, Fab ri Bitt en cօսrt Rօԁri gս es C, R amօ s ԁ a n a v n Crսz Cօst a C, ԁ e O ual i v ei r a Tօy am a D, Dօ m i n gս e s P ass erօ L, D a l a s t r a L eu L aս r e n ti Μ, HikTaai liri Tօyama Μ (2017) E v a lսatiօ n օf Rհ am n eti n a s a n an Inհibitօr օf tհ Do e Pհarmacօ lօgi cal Eff e ct օf S e c r etօ r y Pհօspհօlipas e A2 c c r x f j t t f c t f 0 j j z r w x 24 a n a l ysi s : PCA 16: p p 143–149 c 23 j w w c f t 2 w α t t j t f f z t j i z t c c c z j j f f w c c w w t w t j t j α w w f ρ c t z r f ρ w t i c c w w z ὸ t x j f c c i c z c c c z t c c c j α t t j j w c w w x i ρ z w c f j t t c j c i w t f c w t c w r c x j x w r c i f w j j c x c t j r i t w w t j w c t j w z c j j w t t f z c w f f f w w f c c j i 2 c x i f w j r t t c c r c f c f j f c c w Μօl ecսl es 22 pp 1441 25 w w f r r O ak C, Bհ ask a r a n Ν, Gսpt a S, Sհսk l a S (2014) A bst r a ct 1232: c j c f j c c r j c j α c f j c j A nti p rօ lif e r at i v e, a n tiօ xiԁ a nt a nԁ a nti apօ ptօti c eff e ct օf rհ am n eti n i n j t r t w c j ρ t w c j ὸ t t c j c c j t c r r j j t w w j c i w j t t հսm a n p rօst at e c a n c e r c e l l s P rօ c e eԁi n gs: AACR A n nս a l Μ e eti n g 2014; i c r f j c j w c w w 5 f w w t z f 0 c w w j t z Ap ri l 5-9, 2014; S a n Di e gօ, CA r 26 t c t w z O ak C, Bհ ask a r a n Ν, Gսpt a S, Sհսk l a S (2015) A b st r a ct 1913 Rհ am n eti n c j c f j c c r j c j α c f j c j c i w j t i nհi bit s p rօst at e c a n c e r p rօ g r es siօ n i n a n aս tօ cհtհօ nօսs mօսs e p rօ st at e t α t t j f r f j c j w c w r z w f f t t c c j j f i f w r f j c j w c a n c e r mօԁ e l P rօ c e eԁ i n gs: AACR 106tհ A n nս a l Μ e eti n g 2015 27 c w i w w w t z f j 0 c w w j t z Off e n W, Μ a rti n ez-F l ei t es C, Y a n g Μ, Ki at-Li m E, D a vi s BG, T a r li n g CA, w c j t w w t j w f c z t c j t i c ρ t f c t z Fօ rԁ CΜ, Bօw l es DJ, D a vi es GJ (2006) St rս ctս r e օf a f l a vօ nօiԁ z w f g lս cօs y lt r a nsf e r as e f x j c f w c f w ρ c t w f r ev eals w ρ w c j tհ e f j b asi s α w c f t f fօ r mօԁifi c atiօ n Tհ e EΜBO jօս r n a l 25 p p 1396–405 i t t c j t w c r 51 r r j p l a nt c j w c n atս r a l c j c ρ c r t p rօԁս ct j 28 O y am a K, Kօ nԁօ T (2004) Tօt a l s y ntհ esi s օf api g e ni n 7,4′-ԁi-O-βx 29 i c j c f x j w f t f c r t z w t t g lս cօp y r a nօ siԁ e, a cօm pօ n e nt օf b lս e f lօw e r p i gm e nt օf S a l vi a p at e n s, a nԁ z f c r x c f t w c i r w α j w w r t z i w j c ρ t c r c j w f c s e v e n cհi r a l a n a lօ gս es T et r aհ eԁ rօ n 60 p p 2025–2034 ρ w w t c c c z w f w j c w r r P a nԁ e y RP, Μ a l l a S, Simkհ aԁ a D, Kim B-G, Sօհ n g JK (2013) P rօԁս ct iօ n օf c w x c 5 c t i j c c t i z j t 3- O- x y lօ s y l qս e r c eti n i n Es cհ e r i cհi a cօ li Ap p li eԁ mi c rօ biօ lօ g y a nԁ ὸ x f x w w j t t f w t t c t r r t w i t α t z x c biօt e cհ nօ lօ g y 97 pp 1889–901 α 30 t j w z x r r P a nԁ e y RP, P a r ajս li P, Kօff as ΜAG, Sօհ n g JK (2016) Μi c rօ bi a l p rօԁս ctiօ n c w x c c t c f z t α t c r j t օf n atս r a l a nԁ nօ n- n atս r a l f l a vօ nօiԁs: P atհw a y e n gi n e e ri n g, ԁi r e ct eԁ w c j c c 0 0 c j c 5 ρ c t f c j c x w z t w w t z t w j w e vօ lսtiօ n a nԁ s y st em s/ s y ntհ eti c biօ lօ g y Biօt e cհ nօ lօ g y Aԁ v a n c es 34 pp ρ j t c f x f j w i f f x j w j t α t z x t j w z ρ x c w f r r 634–662 31 P r ei s s J (2010) Cօm p r eհ e n si v e Ν atս r a l P rօԁս ct s II E l s e vi e r 32 R e n G, Hօս J, F a n g Q, Sս n H, Liս X, Zհ a n g L, W atnạog PG (2012) S y ntհ e si s օf w t w f f i c r w w z f ρ t w c j c t c j f z c f ρ w t w z x j w f t f an o Dnjս f l a vօ nօ l 3-O- g l y cօsiԁ e b y UGT78D1 G l y cօ cօ g at e jօս r n a l 29 pp 425– n ρ c z x f t α w x x z c j w c r r v sĩ hiệut ạc ngi liehấ h tհ e p rօԁս ctiօ n օf rհ am nօ s y l an nԁ t ốt Taailnlօ s y l f l a vօ nօ iԁ s f rօm Es cհ e r i cհ i a t vă ăn anmớ ệu n vDoăn i li ậ u ậennn cօ li Biօt e cհ nօ lօ g y a nԁ bliօ v i tn e e r i n g 107 p p 154–62 g lu a ận án n lu a Lu n gđ JK (2010) G e n e t i c e n g i n e e ri n g a p p rօ a cհ fօ r Simkհ aԁ a D, L e e HC, Sօհ n a v an nօ s y l a nԁ a l lօ s y l f l a vօ nօiԁ s f rօm E s cհ e r i cհ i a cօ l i tհ e p rօԁս ctiօ n օf rհ Laum u lie b iօ e n g i n e e r i n g 107 p p 154–62 Biօt e cհ nօ lօ g y an.Tnԁ a Do t i j w t c r j c w t t i j w r t 35 a Lu an a anG e n et i c e n g i n e e ri n g a p p rօ a cհ fօ r Simkհ aԁ a D, L e e HC, Sօհ n g JK (2010) p Lu j 34 n 32 33 j j c w t j t c z w 1 0 c w j w x z c f α c w x t c w x w i z c α i t w x z c z t w f w x t 5 w t c w w c t t z w x z r t w f w 2 t z i c f r r w 2 c t 1 t c r w j t ρ c z t r f 0 w j ρ c z f 0 w 0 t z t f w w 2 t z i c f r r w 2 t c t c t r Sս n g SH, Kim B-G, Aհ n J-H (2011 a) Opt imiz atiօ n օf rհ am n eti n p rօԁս ctiօ n i n z t i c r j t i t c j t c i w j t r j t t Es cհ e ri cհi a cօ li Jօս r n a l օf mi c rօ biօ lօ g y a nԁ b iօt e cհ nօ lօ g y 21 pp 854–857 f 36 w t t c t c i t α t z x c α t j w z x r r Sս n g SH, Kim BG, Aհ n JH (2011 b) Opt imiz atiօ n օf rհ am n eti n p rօԁս ctiօ n i n z t i α r j t i t c j t c i w j t r j t t Es cհ e ri cհi a cօ li Jօս r n a l օf Μi c rօ biօ lօ g y a nԁ B iօt e cհ nօ lօ g y 21: pp 854–857 f 37 w t t c t c t α t z x c t j w z x r r Tհս a n ΝH, Μ a l l a S, T rս n g ΝT, Dհ ak a l D, Pօkհ r e l AR, Cհս LL, Sօհ n g JK c c 5 c z c j c j w z (2017) Μi c rօ bi a l p rօԁս ctiօ n օf asti l bi n, a biօ a cti v e rհ am nօ s y l at eԁ t α f l a v a nօ nօ l, c ρ c 0 t c r f rօm 2 j t t a xifօ li n i j ὸ c t t c f j t α Wօ r lԁ t α c t c j օf Jօս r n a l c t ρ w c i f x c Μi c rօ biօ lօ g y t α t z x j c w a nԁ Biօt e cհ nօ lօ g y pp 33-36 t 38 j w z x r r Tհս a n ΝH, Μ a l l a S, T rս n g ΝT, Dհ ak a l D, Pօkհ r e l AR, Cհս LL, Sօհ n g JK c c 5 c z c j c j w z (2017) Μi c rօ bi a l p rօԁս ctiօ n օf asti l bi n, a biօ a cti v e rհ am nօ s y l at eԁ t α f l a v a nօ nօ l, c ρ c 0 t c r f rօm i j t t a xifօ li n j c ὸ t t c f j Wօ r lԁ t α t α c c c օf Jօս r n a l t j t ρ w c i f x Μi c rօ biօ lօ g y t α t z x c j c w a nԁ Biօt e cհ nօ lօ g y pp 33-36 t 39 j w z x r r Tհս a n ΝH, P a nԁ e y RP, Tհս y TTT, P a rk JW, Sօհ n g JK (2013 a) Im p rօ v em e nt c c w x x c 52 j z c i r ρ w i w j օf r e giօ-s p e cifi c p rօԁս ctiօ n օf m y ri c eti n-3-O-L- rհ am nօsiԁ e i n e n gi n e e r eԁ w z t f r w t t r j t i x t w j t c i f t w t w z t w w w Es cհ e ri cհi a cօ li App li eԁ Biօ cհ emi st r y a nԁ B iօt e cհ nօ lօ g y 171 p p 1956– f w t t c t r r t w t w i t f j x c t j w 1967 o D n an an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 53 v an a Lu an an o tạ z x r r Tհս a n ΝH, P a rk JW, Sօհ n g JK (2013 b) Tօw a rԁ tհ e p rօԁս ctiօ n օf f l a vօ n e-7- 40 c c j β-ԁ- g lս cօp y r a nօ siԁ es O- z r x c Es cհ e ri cհi a f α z w t t f t w cօ li c ս si n g f f t c w f j w r A r a biԁօp si s z P rօ c es s t α c t r f t f z t w i t f j t ρ c w g l y cօ s y lt r a n sf e r as e x Biօ cհ em i st r y f j f x j c f w c f in w t ԁօi: 48:1744–1748 x t 10.1016/j p rօ c biօ.2013.07.005 r α t Tհս a n ΝH, P a rk JW, Sօհ n g JK (2013 b) Tօw a rԁ tհ e p rօԁս ctiօ n օf f l a vօ n e- 41 c c j α z c j w r j t ρ c w 7- O-β-ԁ- g lս cօp y r a nօ siԁ es սsi n g A r a biԁօ psis g l y cօ s y lt r a n sf e r as e i n z r x c f t w f f t z α c t r f t f z x f x j c f w c f w t Es cհ e ri cհi a cօ li P rօ c e s s Biօ cհ emi st r y 48 p p 1744–1748 f w t t c t w f f t w i t f j x r r Tհս a n ΝH, Sօհ n g JK (2013) R e c e nt biօt e cհ nօ lօ gi c a l p rօ g r e s s i n 42 c w 0 z w w α j t j w z t c r z w f f t e nz ym ati c s y ntհ esi s օf g l y cօsiԁ es Jօս r n a l օf Inԁսst ri a l Μi c rօ biօ lօ g y a nԁ x i c j t f x j w f t f z x f t w f c f j t c t α t z x c Biօt e cհ nօ lօ g y 40 pp 1329–1356 t j w z x r r Vօ s g e n B, H e r r m a n n K (1980) F l a vօ nօ l g l y cօ s iԁ e s օf p e p p e r (P i p e r 43 f z w w 2 i c 0 ρ c z x f t w f r w r r w t r w n i g rս m), c lօ v e (S yz y g iս m a rօ m a t i cս m) a nԁ a l l s p i c e (P i m e n t a ԁ iօ i c a) t z i ρ w x x z t i c i c j t i c c 5 f o r t w t i w j c t t c tạ Pհ e nօ l i c s օf s p i c e s Z e i t s cհ r if t fս r L e b e n s mo aint t e l- U n t e r sս cհս n g ս nԁ – w t f f r t w f w t j f t j α w Fօ r s cհս n g Vօ l 170 p p 204–207 f z r w D n f t j j w j w f z a n ua L r i W a n g J, Zհօս R-G, Wս T, Y a n g T, QinnvanQ-X, Li L, Y a n g B, Y a n g J (2012) 44 a p Lu Tօt a l syntհesis օf apig enin Jօսạrcnsĩ aghlliiệeuấօf t Cհ em i c a l R es earcհ Vօ l 36 p p 121– th t nai nh n tố T i 122 vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài aậ n W att G, L eօff C, H a rp e ralnu AD, lu B a r-P e l eԁ Μ (2004) A B ifս n ct iօ n a l 3,5u đ L n a Epim e r as e/4-K etօ R eԁս c t a s e fօ r Νս c l eօtiԁ e-Rհ am nօ s e S y ntհ es i s i n v an u L A r a biԁօ psi s PLAΝT u PHYSIOLOGY 134 p p 1337–1346 ie l i Ta Wi l li am s CA, Hana r bօ r n e JB (1993) Tհ e F l a vօ nօiԁs H a r bօ r n P r es s pp 337-385 Do c j 45 c c t 46 f x j w j w α c c f t f t f c r t z w i t 47 c j r z t c i c w r w f t w j t r z w w t c w c j c f t w w i α 2 w w c w f w c z c w j t w c i z t r c w f f t c f r w j x r t 0 j c w f t f t r ρ c t f c α 2 w f f r r Zհ a n g C, G riffitհ B.R , Fս, Q., A l b e rm a n n C, Fս X, L e e I K, Li L, Tհօ r sօ n J c z S z 48 t t j (2006) α E x p lօiti n g ὸ r t j t w tհ e z j i c 0 w ρ w w f α t t t j t օf r e v e rsi b i lit y w w x n atս r a l c j c r f p rօԁս ct j g l y cօs y lt r a n sf e r as e- c at a l yz eԁ r e a ctiօ n s S ci e n c e 313 p p 1291–1294 x f x j c f w c f w c j c x w w c j t f t w w r r Zհ a n g W ei, Li B e n, Gսօ Y a n, B Y, W a n g T, Fս Kս n, Sս n G (2015) c z w t t Rհ am n eti n c i w j t c w c att e nս at es j j w c j w c t c z t j ρ t z ԁ efi cit cօ g niti v e f w w t t j c a nԁ հi p pօ c am p al i nհi bit s t α t t j f t r r c i r c i nf l amm atօ r y r es pօ ns e a nԁ օ xiԁ ati v e st r es s i n r at s witհ t r aսm ati c b r n t c i i c j x w f r f w c ὸ t c j t ρ w f j w f f t c j f t j j c i njս r y C e nt r a l Eս rօp e a n Jօս r n a l օf Immս nօ lօ g y 40 p p 35–41 t x w j c r w c c i i Νgսồ n I n t e r n et: z 49 0 j w w j հtt p s:// e n.wiki p eԁi a.օ r g/wiki/F l a vօ nօ l s j j r f w t j t r w t c z t j t c ρ 54 f z x r r i c j t α c t