Nghiên cứu bào chế cao khô rau má (centella asiatica apiaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGUYỄN THỊ ANH PHƢƠNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO KHÔ RAU MÁ (Centella asiatica, Apiaceae) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS THẠCH TRẦN MINH UYÊN CẦN THƠ - 2018 LỜI CẢM ƠN Con xin cám ơn pa mẹ sinh con, ni dƣỡng dạy dỗ để có đƣợc ngày hơm Cám ơn pa mẹ ln chỗ dựa vững cho con, bên yêu thƣơng Cám ơn Mụp ln u thƣơng Hai, có chuyện Hai biết ln có đồng minh, u thƣơng ủng hộ vơ điều kiện Con yêu gia đình nhiều! Em xin cám ơn Thầy TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, trƣởng Liên mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất, trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ Cám ơn Thầy ngày hơm ủng hộ em nộp đơn làm đề tài, khơng có động viên Thầy, em khơng thể có điều tuyệt vời hơm Cám ơn Thầy lịng nhiệt huyết Thầy dành cho nghề, quan tâm Thầy dành cho chúng em Em xin chân thành cảm ơn Cơ ThS Thạch Trần Minh Un tận tình hƣớng dẫn, động viên tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Đƣợc trở thành học trị Cơ, đƣợc Cơ dìu dắt dạy dỗ điều kỳ diệu mà em may mắn có đƣợc quãng đời sinh viên Cám ơn Cơ tất cả! Trong q trình thực đề tài em cịn nhận đƣợc nhiều giúp đỡ, quan tâm thầy cô Liên môn Dƣợc liệu – Dƣợc cổ truyền – Thực vật: Cô ThS Nguyễn Ngọc Quỳnh, Thầy ThS Lê Thanh Vĩnh Tuyên, Cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài, Chị Ngô Thị Kim Hƣơng, Chị Nguyễn Vũ Phƣơng Lan Em xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn với quý thầy cô Em xin cảm ơn Liên môn Quản lý Dƣợc – Công nghiệp Dƣợc – Bào chế, mơn Hóa Dƣợc, Liên mơn Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm – Độc Chất tạo điều kiện giúp đỡ trang thiết bị, máy móc trình thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến Cô ThS Nguyễn Thị Linh Tuyền, Cô ThS Nguyễn Ngọc Nhã Thảo, Thầy DS Nguyễn Mạnh Quân, Chị Bùi Thị Ngọc Hân, Anh Nguyễn Hữu Nhân, chị Nguyễn Thị Bích tạo điều kiện hƣớng dẫn cho em sử dụng máy móc phục vụ đề tài Em xin chân thành cảm ơn Cô TS Huỳnh Thị Mỹ Duyên, Thầy ThS Lâm Thanh Hùng, Thầy DS Huỳnh Trƣờng Hiệp tạo điều kiện thuận lợi cho em q trình nghiên cứu Em kính gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô hội đồng chấm luận văn dành thời gian đọc góp ý để luận văn em đƣợc hồn thiện Mình gởi lời cảm ơn đến bạn nhóm đề tài Dƣợc liệu, Hóa Dƣợc, Bào chế, Kiểm nghiệm, bạn Dƣợc khố 39, em Dƣợc khóa 40 41 ln ủng hộ giúp đỡ nhiệt tình cho để hồn thành đề tài Xin gửi lời cám ơn đặc biệt đến bạn Lý Khang Kỳ, Huỳnh Thiện An, Nguyễn Ngọc Trí, Hồng Anh Vũ, Nguyễn Nhật Tồn, Phạm Hồng Khang, cám ơn bạn ln bên ủng hộ giúp đỡ Cám ơn Mun Mun Cừu ln chiến đấu Cám ơn hai em Nguyễn Thành Duy K41, Nguyễn Phƣơng Anh K40 phụ giúp chị trình thực đề tài Cám ơn bác Tình Song tạo điều kiện nhiều trình thực đề tài Cám ơn Nguyễn Phan Thành Ln ln đó, ln ngƣời bên tới phút cuối Cám ơn ngƣời cho kí ức thật đẹp năm tháng cuối đời sinh viên Xin chân thành cảm ơn! LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan tất kết luận văn hồn tồn riêng tơi chƣa đƣợc cơng bố cơng trình Cần Thơ, ngày 15 tháng năm 2018 Sinh viên ký tên Nguyễn Thị Anh Phƣơng i MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN iii MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tổng quan Rau má 1.1.1 Vị trí phân loại lồi Centella asiatica (L.) Urban 1.1.2 Đặc điểm thực vật Rau má 1.1.3 Phân bố, sinh thái thu hái 1.1.4 Thành phần hoá học Rau má (Centella asiatica (L.) Urban) 1.1.5 Tác dụng công dụng Rau má .8 1.2 Tổng quan cao dƣợc liệu .10 1.2.1 Định nghĩa 10 1.2.2 Phân loại 10 1.2.3 Kỹ thuật bào chế cao 11 1.2.4 Quy trình điều chế 11 1.3 Tiêu chuẩn chất lƣợng cao khô theo quy định Dƣợc Điển Việt Nam 12 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .15 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu .15 2.1.1 Nguyên liệu 15 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 15 2.1.3 Trang thiết bị nghiên cứu .16 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 16 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 ii 2.2.1 Khảo sát điều kiện chiết xuất dƣợc liệu Rau má 18 2.2.2 Khảo sát điều kiện bào chế cao khô Rau má 20 2.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn cho cao khô Rau má theo DĐVN IV 22 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Khảo sát điều kiện chiết xuất dƣợc liệu Rau má 29 3.1.1 Khảo sát dung môi chiết xuất 29 3.1.2 Khảo sát nhiệt độ chiết xuất 30 3.1.3 Khảo sát số lần chiết xuất .31 3.2 Khảo sát điều kiện bào chế cao khô Rau má 32 3.2.1 Khảo sát loại tá dƣợc tỉ lệ cao R-tá dƣợc 32 3.2.2 Khảo sát thời gian sấy bán thành phẩm 33 3.3 Xây dựng tiêu chuẩn cho cao khô Rau má 35 3.3.1 Cảm quan (mùi vị, độ đồng màu sắc) 35 3.3.2 Định tính 35 3.3.3 Độ ẩm .37 3.3.4 pH 38 3.3.5 Cắn không tan nƣớc 38 3.3.6 Độ tro 39 3.3.7 Giới hạn kim loại nặng 40 3.3.8 Giới hạn nhiễm khuẩn 40 3.3.9 Bảo quản 41 CHƢƠNG BÀN LUẬN 43 4.1 Khảo sát điều kiện chiết xuất dƣợc liệu Rau má 43 4.1.1 Khảo sát dung môi chiết xuất 43 4.1.2 Khảo sát nhiệt độ chiết xuất 44 4.1.3 Khảo sát số lần chiết xuất .45 4.2 Khảo sát điều kiện bào chế cao khô Rau má 46 4.2.1 Khảo sát loại tá dƣợc tỉ lệ cao R-tá dƣợc 47 4.2.2 Khảo sát thời gian sấy bán thành phẩm 48 iii 4.3 Xây dựng tiêu chuẩn cho cao khô Rau má 49 4.3.1 Cảm quan (màu sắc, mùi vị độ đồng nhất) 49 4.3.2 Định tính 49 4.3.3 Độ ẩm .50 4.3.4 pH 50 4.3.5 Cắn không tan nƣớc 50 4.3.6 Độ tro 51 4.3.7 Giới hạn kim loại nặng 51 4.3.8 Giới hạn nhiễm khuẩn 51 4.3.9 Bảo quản 51 KẾT LUẬN .52 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Ý nghĩa Từ gốc DĐVN IV Dƣợc điển Việt Nam IV Dƣợc điển Việt Nam IV DĐVN V Dƣợc điển Việt Nam V Dƣợc điển Việt Nam V NXB Nhà xuất Nhà xuất SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng UV Ultraviolet Tử ngoại VS Thuốc thử vanilin – sulfuric Thuốc thử vanilin – sulfuric TD Tá dƣợc Tá dƣợc EtOH Ethanol Ethanol MeOH Methanol Methanol Glc Glucose Glucose Rha Rhamnose Rhamnose v DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các hoạt chất không thuộc nhóm chất triterpenoid, flavonoid tinh dầu có Rau má Bảng 2.1 Trang thiết bị dùng nghiên cứu .16 Bảng 2.2 Yêu cầu giới hạn nhiễm khuẩn 27 Bảng 2.3 Tiêu chuẩn dự kiến cao khô Rau má (Centella asiatica) 28 Bảng 3.1 Kết khảo sát loại tá dƣợc tỉ lệ cao R-tá dƣợc 32 Bảng 3.2 Sự thay đổi độ ẩm bán thành phẩm sau khoảng thời gian sấy 33 Bảng 3.3 Sự thay đổi thể chất độ ẩm cao khô sau tháng bảo quản .34 Bảng 3.4 Kết theo dõi độ ẩm cao khô Rau má sau bào chế sau thời gian bảo quản 01 tháng 37 Bảng 3.5 Kết đo pH dịch cao khô Rau má 1% nƣớc 38 Bảng 3.6 Kết tỉ lệ cắn không tan nƣớc 38 Bảng 3.7 Kết xác định tro toàn phần 39 Bảng 3.8 Kết xác định tro sulfat .39 Bảng 3.9 Kết thử nghiệm giới hạn nhiễm khuẩn 40 Bảng 3.10 Kết hệ thống tiêu chuẩn dự kiến cao khô Rau má 41 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Đặc điểm hình thái Rau má (Centella asiatica) Hình 3.1 Sắc ký đồ khảo sát dung môi chiết xuất 29 Hình 3.2 Sắc ký đồ khảo sát nhiệt độ chiết xuất .30 Hình 3.3 Sắc ký đồ khảo sát số lần chiết xuất 31 Hình 3.4 Cao khô Rau má .35 Hình 3.5 Phản ứng 1: cột bọt sau lắc (a), cột bọt sau lắc 60 phút (b) 35 Hình 3.6 Phản ứng 36 Hình 3.7 Sắc ký đồ so sánh cao khô với dịch chiết Rau má asiaticosid chuẩn 36 Hình 3.8 Kết thử nghiệm giới hạn kim loại nặng .40 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình bào chế xây dựng tiêu chuẩn cao khô Rau má 17