Đánh giá giá trị sử dụng và khả năng phản ứng chéo của xét nghiệm định lượng hcv core antigen (hcvcag) trong các đơn vị máu tại viện huyết học truyền máu trung ương năm 2022

BỘ GIÁO DỤC VÀĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN THỊ THANH DUNG ĐÁNH GIÁ GIÁ TRỊ SỬ DỤNG VÀ KHẢ NĂNG H P PHẢN ỨNG CHÉO CỦA XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG HCV CORE ANTIGEN TRONG CÁC ĐƠN VỊ MÁU TẠI VIỆN HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU TRUNG ƯƠNG NĂM 2022 U H LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 HÀ NỘI, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG THANH NGUYỄN THỊ THANH DUNG ĐÁNH GIÁ GIÁ TRỊ SỬ DỤNG VÀ KHẢ NĂNG H P PHẢN ỨNG CHÉO CỦA XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG HCV CORE ANTIGEN TRONG CÁC ĐƠN VỊ MÁU TẠI VIỆN HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU TRUNG ƯƠNG NĂM 2022 U H LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS BẠCH KHÁNH HOÀ HÀ NỘI, 2022 i LỜI CẢM ƠN Tơi xin bảy tỏ lịng biết ơn tới Ban Giám hiệu, Phịng quản lý đào tạo, thầy giáo, cán Trung tâm xét nghiệm Trường Đại học Y tế cơng cộng tận tình giảng dạy, giúp đỡ, truyền đạt cho kiến thức kinh nghiệm liên quan đến chuyên ngành Kỹ thuật xét nghiệm Y học Với tất tình cảm sâu sắc nhất, tơi bày tỏ lịng biết ơn tới PGS.TS Bạch Khánh Hồ, ThS.Phạm Quốc Thành ln nhiệt tình, tận tâm giúp đỡ, bảo tạo điều kiện để tơi hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện Huyết học – Truyền máu Trung H P ương, Ban Giám đốc Trung tâm máu Quốc gia, Khoa Xét nghiệm sàng lọc máu khoa phòng Trung tâm máu Quốc gia nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học tập triển khai nghiên cứu bệnh viện Tôi xin trân trọng cảm ơn người hiến máu tình nguyện hiến U đơn vị máu cho người bệnh cho số liệu quý giá để hồn thành nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn tới tất bạn bè, đồng nghiệp gia đình ln giành H tình cảm, động viên, giúp đỡ sống trình học tập vừa qua Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2023 Nguyễn Thị Thanh Dung ii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ .v TÓM TẮT NGHIÊN CỨU vi ĐẶT VẤN ĐỀ vi MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bệnh lý viêm gan C H P 1.2 Các phương pháp xét nghiệm phát có mặt virus viêm gan C 1.3 Xác nhận giá trị sử dụng xét nghiệm định lượng HCVcAg 13 1.4 Các nghiên cứu đánh giá xét nghiệm HCVcAg 17 1.5 Giới thiệu sở thực tập 22 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .24 2.1 Đối tượng nghiên cứu .24 U 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 2.3 Thiết kế nghiên cứu .24 H 2.4 Chọn mẫu nghiên cứu .27 2.5 Phương pháp thu thập số liệu 29 2.6 Các biến số nghiên cứu 29 2.7 Quy trình kỹ thuật, kiểm sốt chất lượng, tiêu chuẩn đánh giá 29 2.8 Phương pháp phân tích số liệu 32 2.9 Các sai số cách hạn chế sai số 32 2.10 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 33 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Đánh giá xác nhận phương pháp xét nghiệm HCVcAg 33 3.2 Đánh giá khả phản ứng chéo xét nghiệm HCVcAg 38 CHƯƠNG BÀN LUẬN .40 4.1 Đánh giá giá trị sử dụng xét nghiệm HCVcAg 40 iii 4.2 Đánh giá khả nhiễm chéo xét nghiệm HCVcAg .44 4.3 Hạn chế nghiên cứu 47 KẾT LUẬN 49 KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC .63 H P H U iv DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC TỪ VIẾT TẮT Anti-HCV Xét nghiệm phát kháng thể kháng HCV ARN Axit Ribonucleic (Ribonucleic Acid) CDC Trung tâm kiểm soát dịch bệnh Hoa Kỳ (Centers for Disease Control and Prevention) CLIA Kỹ thuật miễn dịch hoá phát quang (Chemiluminescent Immunoassay) CLSI Viện tiêu chuẩn lâm sàng xét nghiệm Hoa kỳ (Clinical and Laboratory Standards Institute) ECLIA Kỹ thuật miễn dịch điện hoá phát quang (Electrochemiluminescence H P Immunoassay) ELISA Kỹ thuật miễn dịch gắn men (Enzyme Immunosobent Assays) HBV Virus viêm gan B (Hepatitis B Virus) HCV Virus viêm gan C (Hepatitis C virus) HCVcAg Kháng nguyên lõi virus viêm gan C (HCV core antigen) HIV Virus gây suy giảm miễn dịch người (Human Immunodeficiency U Virus) HIVAgAb Kháng nguyên-kháng thể HIV (HIV Antigen Antibody) HTLV Virus gây bệnh tế bào T người (Human T-lymphotropic virus): KTC Khoảng tin cậy NHM Người hiến máu NAT Xét nghiệm axit nucleic (Nucleic acid Amplification Technology) PCR Phản ứng khuếch đại gen (Polymerase Chain Reaction) UTR Vùng không dịch mã (Untranslated Region) (+) Dương tính (-) Âm tính H v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh virus viêm gan C kính hiển vi điện tử (12) .4 Hình 1.2 Các dấu ấn huyết viêm gan C cấp hồi phục (19) Hình 1.3 Các dấu ấn huyết viêm gan C mạn tính (19) Hình 1.4 Độ nhạy xét nghiệm HCVcAg 12 DANH MỤC SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ H P 0.2Sơ đồ 2.1 Sơ đồ nghiên cứu theo mục tiêu 25 0.3Sơ đồ 2.2 Sơ đồ nghiên cứu theo mục tiêu 26 0.1Biểu đồ 3.1 Mối liên quan nồng độ HCVcAg nồng độ HCV-ARN 36 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU U Bảng 3.1 Thông tin số lần hiến máu, giới tính, nhóm tuổi, nhóm máu đối tượng nghiên cứu 33 H Bảng 3.2 Kết định lượng HCV-ARN theo khoảng giá trị định lượng 34 Bảng 3.3 Kết định lượng HCVcAg mẫu âm tính với HCV-ARN 35 Bảng 3.4 Kết định lượng HCVcAg mẫu dương tính với HCV-ARN 35 Bảng 3.5 Kết định lượng HCVcAg theo nồng độ HCV-ARN 35 Bảng 3.6 Độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị dự đốn âm tính, giá trị dự đốn 37 Bảng 3.7 Kết xét nghiệm HCVcAg mẫu 38 Bảng 3.8 Kết xét nghiệm HCVcAg với mẫu có Triglyceride ≥ 2000 mg/dL Hemoglobin ≥ 1000 .38 Bảng 3.9 Đánh giá thời gian thực xét nghiệm HCVcAg so với thời gian thực xét nghiệm HCV-ARN anti-HCV 39 vi TÓM TẮT NGHIÊN CỨU Nhiễm virus viêm gan C nguyên nhân gây nguy hại tới sức khoẻ người dân toàn giới Trong nhiều năm qua, việc chẩn đoán nhiễm HCV thường dựa vào xét nghiệm anti-HCVkháng thể HCV (anti-HCV) Xét nghiệm antiHCV sử dụng khơng đủ hiệu giai đoạn cửa sổ kéo dài 45 đến 68 ngày, xét nghiệm không phân biệt người bệnh bị nhiễm cấp, mạn hay nhiễm HCV hồi phục Việc định lượng HCV-ARN cần thiết để phát nhiễm HCV cấp, nhiễm HCV hoạt động giúp theo dõi điều trị Tuy nhiên, kỹ thuật định lượng HCV-ARN đòi hỏi trang thiết bị đại, trình độ tay nghề cao, giá thành đắt nên thực trung tâm y tế lớn Xét nghiệm định lượng HCVcAg với trang thiết bị đơn giản, thao tác nhanh sử dụng thay xét nghiệm HCV-ARN chẩn đoán sớm, xác định theo dõi điều trị HCV mạn tính Vì vậy, nghiên cứu: “Đánh giá giá trị sử dụng khả phản ứng chéo xét nghiệm định lượng HCV-core antigen đơn vị máu Viện Huyết học - Truyền máu Trung Ương năm 2022” thực với mục tiêu Thứ nhất, xác định giá trị sử dụng xét nghiệm định lượng HCVcAg chẩn đoán Viêm gan C Thứ hai, đánh giá khả phản ứng chéo xét nghiệm định lượng HCVcAg mẫu H P U dương tính với số tác nhân lây truyền (HBV, HIV, giang mai), mẫu có trigrycerid hemoglobin cao Nghiên cứu mơ tả cắt ngang Mẫu đánh giá lấy từ NHM gồm: 147 mẫu HCV-ARN(+), 50 mẫu HCV-ARN(-), 20 mẫu cho nhóm có HCV-ARN từ 15-1000 IU/mL, >1000-3000 IU/mL >3000 IU/mL 50 mẫu âm tính với HCV-ARN dương tính với yếu tố HIV(+), HBsAg(+), giang H mai(+), mẫu có nồng độ triglyceride hemoglobin cao Tất mẫu sau xét nghiệm HCVcAg Kết nghiên cứu cho thấy độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị dự đốn âm tính giá trị dự đốn dương tính xét nghiệm HCVcAg mẫu máu NHM 96,6% (95% KTC: 92,3 - 98,5), 100% (95% KTC: 92,9 – 100), 90,9% (95% KTC: 80,4 - 96,1) 100% (95% KTC: 97,4 - 100) Xét nghiệm HCVcAg có khả phát mẫu có nồng độ HCV-ARN > 3000 IU/mL Xét nghiệm HCVcAg khơng phản ứng dương tính giả mẫu âm tính với HCV-ARN dương tính với yếu tố HIV(+), HBsAg(+), giang mai(+), mẫu có có triglyceride ≥ 2000mg/dL mẫu có hemoglobin ≥ 1000 mg/dL ĐẶT VẤN ĐỀ Nhiễm virus viêm gan C vấn đề ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khoẻ người dân toàn giới Đặc điểm bệnh nhiễm HCV thời gian ủ bệnh dài, triệu chứng lâm sàng thường không rõ ràng, tỷ lệ nhiễm mạn tính cao virus viêm gan C lại chưa có vắc xin phịng ngừa Bên cạnh khả tiếp cận với xét nghiệm điều trị bệnh virus viêm gan C gặp nhiều khó khăn đặc biệt nước phát triển yếu tố chi phí (1-4) Các xét nghiệm phát kháng thể HCV công cụ sử dụng phổ biến để xác định tình trạng nhiễm HCV Nhưng giới hạn kỹ thuật, trường hợp viêm gan H P virus cấp giai đoạn sớm, người suy giảm miễn dịch xét nghiệm khơng có khả phát Xét nghiệm HCV-ARN với độ nhạy cao, kết đáng tin cậy có khả khắc phục nhược điểm kỹ thuật huyết học đòi hỏi kỹ thuật phức tạp, cần đầu tư thiết bị nhân lực đào tạo Do xét nghiệm HCV-ARN áp dụng sở chuyên khoa phổ biến rộng rãi U cộng đồng (5) điều gây nên khó khăn cho người bệnh tiếp cận với chẩn đoán HCV cộng đồng Vào năm 2021, Bộ Y tế khuyến nghị sử dụng xét nghiệm HCVcAg thay H xét nghiệm HCV-ARN chẩn đoán theo dõi điều trị bệnh virus viêm gan C (5) Bên cạnh đó, xét nghiệm HCVcAg phát nhiễm HCV sớm, muộn sau xét nghiệm HCV-ARN khoảng 5-7 ngày (6) sớm nhiều so với xét nghiệm anti-HCV, lựa chọn phù hợp cho sở triển khai xét nghiệm sinh học phân tử (NAT) sàng lọc HCV đảm bảo an toàn truyền máu (40) Trên giới Việt Nam có nhiều nghiên thực để đánh giá hiệu xét nghiệm HCVcAg so sánh với kỹ thuật định lượng HCV-ARN Đối tượng nghiên cứu đánh giá đa số tập trung nhóm có nguy nhiễm HCV cao người chạy thận nhân tạo, người tiêm chích ma tuý, người đồng nhiễm HCV HIV, người bệnh điều trị bệnh virus viêm gan C Hiện nay, chưa có nhiều nghiên cứu thực đối tượng có nguy nhiễm HCV thấp cộng đồng người hiến máu tình nguyện (7) Vì vậy, với mong muốn cung cấp chứng khoa học để lựa chọn kỹ thuật xét nghiệm phù hợp thay kỹ thuật sinh học phân tử sàng lọc máu sở có nguồn lực hạn chế, nghiên cứu “Đánh giá giá trị sử dụng khả phản ứng chéo xét nghiệm định lượng HCV Core Antigen đơn vị máu Viện Huyết học - Truyền máu Trung Ương năm 2022” thực H P H U 78 Phụ lục Đặc điểm xét nghiệm mẫu có Triglyceride cao (>2000 mg/dL) Xét nghiệm Triglyceride TT Mã mẫu Kết định lượng Giá trị trung bình (mg/dL) (mg/dL) TG.01 2158 TG.02 2341 TG.03 2298 TG.04 2987 TG.05 H P 2873 2158,0 ± 361,41 TG.06 TG.07 TG.08 TG.09 10 2718 2306 U H TG.10 2587 2206 3194 79 Phụ lục 10 Đặc điểm xét nghiệm mẫu có hemoglobin cao (>1000 mg/dL) Xét nghiệm Hemoglobin Mã mẫu Kết xét nghiệm Giá trị trung bình hemoglobin (mg/dL) mg/dL Mẫu 1521 Mẫu 1200 Mẫu 3000 Mẫu 2040 Mẫu 1700 H P 1150,0 ± 674,03 Mẫu 1150 Mẫu 3000 U Mẫu 1250 Mẫu 1900 H Mẫu 10 1800 80 H P H U 81 H P H U 82 H P H U 83 H P H U 84 H P H U 85 H P H U 86 H P H U 87 H P H U 88 H P H U 89 H P H U 90 H P H U 91 H P H U 92 H P H U