Đánh giá hiệu quả can thiệp cộng đồng phòng, chống nhiễm sán lá gan nhỏ của người dân tại thị trấn rạng đông, huyện nghĩa hưng, tỉnh nam định năm 2009 2012

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG LƢƠNG THỊ PHƢƠNG LAN H P ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CAN THIỆP CỘNG ĐỒNG PHÕNG, CHỐNG NHIỄM SÁN LÁ GAN NHỎ CỦA NGƢỜI DÂN TẠI THỊ TRẤN RẠNG ĐÔNG, HUYỆN NGHĨA HƢNG, U TỈNH NAM ĐỊNH NĂM 2009 - 2012 Chuyên ngành: Y tế công cộng H Mã số: 62.72.03.01 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Nguyễn Văn Đề PGS.TS Trần Hữu Bích HÀ NỘI – 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thực Các số liệu, kết luận án trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Tác giả H P Lƣơng Thị Phƣơng Lan H U ii LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận văn tiến sĩ Y tế công cộng này, nhận nhiều giúp đỡ từ lãnh đạo Bộ Y tế, lãnh đạo Cục An tồn thực phẩm, thầy giáo, gia đình, bạn bè đồng nghiệp Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới lãnh đạo Bộ Y tế, lãnh đạo Cục An toàn thực phẩm nơi công tác bạn đồng nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ trình thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, thầy cô giáo khoa, phòng liên quan Trường Đại học Y tế Công cộng Đại học Y Hà Nội H P truyền thụ kiến thức, tạo điều kiện thuận lợi, chia sẻ kinh nghiệm cho tơi suốt q trình học tập thực luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới GS TS Nguyễn Văn Đề PGS.TS Trần Hữu Bích người thầy tâm huyết tận tình hướng dẫn, động viên, dành nhiều thời gian trao đổi định hướng cho trình thực luận án U Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Chi cục An toàn vệ sinh thực phẩm tỉnh Nam Định; Trung tâm y tế dự phòng huyện Nghĩa Hưng, tỉnh Nam Định; Ủy ban nhân dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hưng, tỉnh Nam Định; Trạm Y tế thị trấn H Rạng Đông; ban, ngành, đoàn thể trường học địa bàn thị trấn Rạng Đông; Các cán y tế thị trấn Rạng Đông; Các cộng tác viên y tế thôn bản; người dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hưng, tỉnh Nam Định giúp đỡ tạo điều kiện cho tiến hành nghiên cứu Cuối cùng, xin dành tình u thương, lịng thành kính biết ơn bố mẹ, chồng, con, anh, chị em gia đình bạn bè chia sẻ, động viên tơi suốt trình học tập iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CDC Trung tâm phòng, chống bệnh tật Clonorchis sinensis C.sinensis CSHQ Chỉ số hiệu EPG (Eggs per gram): Số trứng trung bình gam phân NHFPC (National and Uỷ ban kế hoạch hoá gia đình sức khoẻ Health Family Planning Commission) quốc gia Opisthorchis viverrini O viverrini PCR (Polymerase Chain Reaction) Kỹ thuật nhân ADN đặc hiệu Tỉ lệ khỏi bệnh TLKB THPT Trung học phổ thông THCS Trung học sở TNCSHCM Thanh niên cộng sản Hồ Chí Minh TTGDSK Truyền thơng giáo dục sức khoẻ U H P Sán gan nhỏ SLGN WHO (World Health Organization) H Tổ chức Y tế giới iv MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ x DANH MỤC HÌNH xi ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử bệnh sán gan nhỏ .4 H P 1.2 Đặc điểm ký sinh trùng học sán gan nhỏ .4 1.2.1 Hình thể sán gan nhỏ .4 1.2.2 Chu kỳ phát triển sán gan nhỏ 1.2.3 Xác định thành phần loài sán gan nhỏ 1.3 Chẩn đốn, điều trị dự phịng bệnh sán gan nhỏ .8 1.3.1 Chẩn đoán lâm sàng bệnh sán gan nhỏ 1.3.2 Chẩn đoán cận lâm sàng bệnh sán gan nhỏ 1.3.3 Điều trị sán gan nhỏ U 1.3.4 Nguyên tắc phòng bệnh sán gan nhỏ 1.4 Các nghiên cứu tỉ lệ nhiễm sán gan nhỏ ngƣời .10 1.4.1 Các nghiên cứu tỉ lệ nhiễm sán gan nhỏ ngƣời giới 10 1.4.2 Các nghiên cứu tỉ lệ nhiễm sán gan nhỏ ngƣời Việt Nam 12 1.5 Các nghiên cứu tỉ lệ nhiễm ấu trùng sán gan nhỏ cá nƣớc .15 1.6 Các nghiên cứu yếu tố liên quan đến nhiễm sán gan nhỏ .17 1.7 Các nghiên cứu biện pháp, mơ hình phịng, chống sán gan nhỏ 25 1.8 Khung lý thuyết nghiên cứu 37 H Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 40 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 40 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu .40 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 40 2.3 Thiết kế nghiên cứu 40 v 2.4 Cỡ mẫu phƣơng pháp chọn mẫu 41 2.4.1 Tiêu chuẩn chọn mẫu cỡ mẫu 41 2.4.2 Chọn mẫu nghiên cứu .42 2.5 Các biến số số nghiên cứu 43 2.6 Các khái niệm, thƣớc đo, tiêu chuẩn đánh giá .50 2.6.1 Các khái niệm 50 2.6.2 Các thƣớc đo, tiêu chuẩn đánh giá 50 2.7 Các hoạt động can thiệp nhằm giảm nguy nhiễm sán gan nhỏ .52 2.7.1 Xây dựng mô hình lồng ghép phịng, chống nhiễm sán gan nhỏ dựa vào cộng đồng thị trấn Rạng Đông .52 2.7.2 Các hoạt động can thiệp truyền thơng, giáo dục sức khoẻ phịng, chống sán gan nhỏ 53 H P 2.7.3 Phát điều trị ngƣời nhiễm sán gan nhỏ praziquantel .55 2.8 Vật liệu kỹ thuật nghiên cứu .55 2.9 Phƣơng pháp thu thập số liệu 55 2.9.1 Số liệu thu thập qua mẫu phân xét nghiệm phân .55 2.9.2 Số liệu qua vấn .56 2.9.3 Số liệu xác định loài sán trƣởng thành ngƣời, ấu trùng sán cá nƣớc 56 2.10 Qui trình thu thập số liệu 57 U 2.10.1 Chuẩn bị cho nghiên cứu thực địa 57 2.10.2 Các bƣớc tiến hành thu thập số liệu thực địa 58 2.11 Quản lý, phân tích, sử dụng số liệu 59 2.11.1 Nhập số liệu 59 2.11.2 Kế hoạch làm số liệu .60 2.11.3 Phân tích số liệu 60 2.11.4 Xử lý số liệu 60 2.11.5 Quản lý số liệu sử dụng kết nghiên cứu 61 2.12 Đạo đức nghiên cứu 61 H Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 62 3.1 Đặc điểm chung đối tƣợng nghiên cứu .62 3.2 Tỉ lệ nhiễm loài sán gan nhỏ ngƣời cá nƣớc nuôi thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định trƣớc can thiệp 63 3.1.1 Tỉ lệ nhiễm sán gan nhỏ ngƣời 63 3.1.2 Tỉ lệ nhiễm ấu trùng sán gan nhỏ loài cá nƣớc 64 vi 3.1.3 Xác định loài sán gan nhỏ ngƣời hình thái học, sinh học phân tử 65 3.1.4 Xác định ấu trùng sán cá nƣớc hình thái sinh học phân tử 69 3.2 Thực trạng kiến thức, thái độ, thực hành phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ số yếu tố liên quan đến nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định .71 3.2.1 Thực trạng kiến thức, thái độ thực hành phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân trƣớc can thiệp 71 3.2.2 Một số yếu tố liên quan đến phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân trƣớc can thiệp 81 3.3 Hiệu can thiệp cộng đồng phòng, chống sán gan nhỏ ngƣời dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định sau hai năm can thiệp 87 3.3.1 Xây dựng mơ hình can thiệp lồng ghép hoạt động phòng, chống nhiễm H P sán gan nhỏ dựa vào cộng đồng 87 3.3.2 Hiệu can thiệp truyền thông, giáo dục sức khoẻ phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ sau hai năm can thiệp .91 3.3.3 Hiệu điều trị praziquantel sau hai năm can thiệp .95 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 96 4.1 Tỉ lệ nhiễm loài sán gan nhỏ ngƣời cá nƣớc nuôi thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định 96 U 4.1.1 Tỉ lệ nhiễm sán gan nhỏ ngƣời 96 4.1.2 Tỉ lệ nhiễm ấu trùng sán gan nhỏ cá nƣớc nuôi thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định 101 4.1.3 Loài sán gan nhỏ ký sinh ngƣời dân thị trấn Rạng Đơng 104 4.1.4 Lồi ấu trùng sán gan nhỏ ký sinh cá nƣớc nuôi thị trấn Rạng Đông .106 4.2 Thực trạng kiến thức, thái độ, thực hành phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ số yếu tố liên quan đến nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định 107 4.2.1 Thực trạng kiến thức, thái độ, thực hành phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân trƣớc can thiệp 107 4.2.2 Một số yếu tố liên quan đến nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định trƣớc can thiệp 112 4.3 Hiệu can thiệp cộng đồng phòng, chống sán gan nhỏ ngƣời dân thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định sau năm can thiệp 115 H vii 4.3.1 Hiệu can thiệp truyền thơng, giáo dục sức khoẻ phịng, chống nhiễm sán gan nhỏ sau năm can thiệp .115 4.3.2 Hiệu điều trị praziquantel sau hai năm can thiệp 119 4.3.3 Sự phù hợp, khả trì tính bền vững mơ hình can thiệp lồng ghép hoạt động phòng, chống nhiễm sán gan nhỏ dựa vào cộng đồng thị trấn Rạng Đông 122 4.4 Ƣu điểm, hạn chế hoc kinh nghiệm nghiên cứu 129 4.4.1 Ƣu điểm nghiên cứu .129 4.4.2 Hạn chế nghiên cứu 131 4.4.3 Bài học kinh nghiệm từ nghiên cứu 132 KẾT LUẬN 134 KHUYẾN NGHỊ 136 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ ĐƢỢC CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO Phụ lục 1: Bộ phiếu vấn Phụ lục Phƣơng pháp đánh giá kiến thức, thái độ, thực hành Phụ lục Phƣơng pháp xét nghiệm Kato– Katz Phụ lục Định loại sán gan nhỏ ngƣời ấu trùng nang H P U Phụ lục Vật liệu kỹ thuật phân loại ấu trùng sán cá nƣớc Phụ lục 6: Tài liệu truyền thông dùng can thiệp cộng đồng Phụ lục 7: Hoạt động can thiệp thông qua kênh truyền thông trực tiếp Phụ lục 8: Biểu đồ grantt hoạt động can thiệp truyền thông giáo dục sức khoẻ hàng năm H viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Chiến lƣợc dự phịng kiểm sốt bệnh sán gan nhỏ 25 Bảng 1.2 Các nghiên cứu phác đồ thuốc điều trị sán gan nhỏ 29 Bảng 2.1 Các biến số số nghiên cứu 43 Bảng 2.2 Hƣớng dẫn phân loại cƣờng độ nhiễm sán gan nhỏ theo WHO 50 Bảng 3.1 Thông tin chung đối tƣợng nghiên cứu trƣớc can thiệp 62 Bảng 3.2 Tỉ lệ nhiễm sán gan nhỏ theo tuổi, giới, nghề nghiệp học vấn 63 Bảng 3.3 Kích thƣớc hình thái nội quan sán gan nhỏ C Sinensis 66 H P Bảng 3.4 Danh mục mẫu sán gan nhỏ trƣởng thành thu nhận ngƣời thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định sử dụng giám định phân tử 67 Bảng 3.5 So sánh nucleotid điểm có sai khác chuỗi gen cox1 Clonorchis spp nghiên cứu với C sinensis chủng Trung Quốc Hàn Quốc.69 Bảng 3.6 Tỉ lệ ngƣời dân có biết bệnh SLGN theo giới, học vấn nghề nghiệp 72 Bảng 3.7 Tỉ lệ hiểu biết phòng, chống sán gan nhỏ ngƣời dân 74 U Bảng 3.8 Thái độ ngƣời dân với việc phòng, chống bệnh sán gan nhỏ .76 Bảng 3.9 Thực hành ăn gỏi cá sử dụng chung dụng cụ chế biến thức ăn sống H thức ăn chín theo nhóm tuổi, giới, nghề nghiệp, trình độ học vấn 78 Bảng 3.10 Tỉ lệ sử dụng phân tƣơi ngƣời gia súc để bón ruộng, ni cá 79 Bảng 3.11 Thực hành ngƣời dân nghi ngờ bị bệnh sán gan nhỏ .80 Bảng 3.12 Mối liên quan kiến thức, thái độ, thực hành phịng, chống sán gan nhỏ với giới tính, trình độ học vấn, nghề nghiệp đối tƣợng nghiên cứu 81 Bảng 3.13 Mối liên quan kiến thức với thực hành phòng, chống SLGN 84 Bảng 3.14 Mối liên quan yếu tố cá nhân, kiến thức, thái độ phòng, chống sán gan nhỏ tình trạng nhiễm sán gan nhỏ ngƣời dân 85 Bảng 3.15 Phân tích mối liên quan hành vi nguy nhiễm SLGN với tình trạng nhiễm sán gan nhỏ 86 Bảng 3.16 Kết đào tạo nhân lực cho cơng tác phịng, chống sán gan nhỏ 88 ix Bảng 3.17 Hoạt động can thiệp thông qua kênh truyền thông gián tiếp thị trấn Rạng Đông, tỉnh Nam Định 90 Bảng 3.18 Hiểu biết ngƣời dân phòng, chống SLGN trƣớc sau can thiệp 91 Bảng 3.19 Thái độ ngƣời dân phòng, chống SLGN trƣớc sau can thiệp 92 Bảng 3.20 Thực hành ngƣời dân số biện pháp nhằm phòng, chống sán gan nhỏ trƣớc sau can thiệp 94 Bảng 3.21 Tỉ lệ trứng sán gan nhỏ sau điều trị thuốc praziquantel .95 Bảng 3.22 Tỉ lệ giảm trứng sán gan nhỏ sau điều trị thuốc praziquantel .95 H P H U Phụ lục 4: ĐỊNH LOẠI SÁN LÁ GAN NHỎ Ở NGƢỜI VÀ ẤU TRÙNG NANG (METACERCARIA) THU THẬP ĐƢỢC Ở CÁ BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ (PCR) (1) ĐỊNH LOẠI SÁN LÁ GAN NHỎ Ở NGƢỜI Đối tƣợng: Các mẫu SLGN đƣợc thu thập bệnh nhân nhiễm sán qua điều trị praziquantel chƣơng trình can thiệp thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định Phƣơng pháp sinh học phân tử (PCR) định loài SLGN ngƣời - Tách chiết ADN tổng số: ADN tổng số đƣợc tách chiết hoá chất Genomic-Tip Kit H P ADNeasy (QIAGEN Inc.) theo qui trình nhà sản xuất Mô tả rút gọn nhƣ sau: mẫu vật bảo quản cồn 70% đƣợc lấy cho cồn bay hết ly tâm chân khơng, sau rửa nhiều lần PBS Mẫu vật đƣợc nghiền kỹ xử lý với dung môi Kit, hấp phụ lên màng ly chiết ADN theo qui trình tách chiết Hàm lƣợng ADN sử dụng khoảng 100-150 nanogram cho phản ứng U PCR có dung lƣợng 50 microlit - Chọn mồi cho phản ứng PCR Gen cox1 (cytochrome oxidase 1) gen ty thể đƣợc chọn làm đích nghiên H cứu Cặp mồi (primer) dùng nhân ADN đích phản ứng PCR đƣợc chọn sở trình tự bảo tồn gen có Ngân hàng Gen tài liệu xuất - Quy trình phản ứng PCR ADN đích đƣợc nhân PCR tiêu chuẩn với hoá chất PCR Master Mix Kit (Promega) Chu trình nhiệt PCR máy Perkin-Elmer (Perkin-Elmer Inc., Mỹ) gồm bƣớc nhƣ sau: 940C/5 phút chu kỳ; 35 chu kỳ 940C/1 phút, 500C/1 phút 720C/1 phút; chu kỳ cuối kéo dài 10 phút 720C Sản phẩm PCR đƣợc tinh chế hoá chất QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN Inc.) đƣợc dịng hố vào vector có tên gọi pCR2.1 pCR 2.1 (TOPO) hoá chất TA-cloning Kit (Invitrogen Inc.) Vector pCR2.1 tiếp nhận sản phẩm PCR đƣợc chuyển nạp vào dòng tế bào IVNF’ chọn lọc khuẩn lạc theo phƣơng pháp kháng sinh thị màu (SAMBROOK VÀ RUSSELL, 2001) ADN plasmid có chứa PCR đƣợc tách chiết với hoá chất QIAprep Spin Plasmid Extraction Kit (QIAGEN Inc.) Trình tự nucleotid ADN plasmid chứa sản phẩm PCR tái tổ hợp đƣợc giải trình máy tự động ABI 3100 (ABI 3100 automated sequencer) hãng Perkin-Elmer (Mỹ) Chuỗi nucleotid đƣợc xử lý chƣơng trình SeqEd1.3; sau so sánh sử dụng chƣơng trình AsemblyLIGN 1.9 MacVector 6.5.3 (Oxford Molecular Inc.) Thành phần acid amin đƣợc thu nhận cách sử dụng mã hệ gen ty thể sán dẹt ngân hàng gen thơng qua chƣơng trình GENDOC 2.5 Trong phân tích phả hệ, tất chuỗi chủng chọn lọc H P có chủng Việt Nam đƣợc xếp theo chƣơng trình GENDOC 2.5, sau đƣợc đƣa vào phân tích phả hệ chƣơng trình MEGA 2.1 thành phần nucleotid acid amin, sử dụng hệ số tiến hoá thấp ME (minimum evolution index) (Kuma cs, 2001) - Phương pháp xử lý nucleotid/ chuỗi acid amin ứng dụng sinh-tin học U xử lý kết Giải trình nucleotid sau dịng hoá, từ ADN plasmid tái tổ hợp, đƣợc thực máy giải trình tự động (ABI 3100 automated sequencer), xử lý H phần mềm đƣợc cung cấp SeqEd 1.0.3; AssemblyLIGN 1.0.9c nhằm thu nhận chuỗi chung, sau xử lý hệ chƣơng trình MacVector 6.5.3 (Oxford Molecular Group) Giám định chuỗi ADN (gen chẩn đốn) truy nhập Ngân hàng Gen chƣơng trình BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) (ALTSCHUL VÀ CS, 1997) Sự đồng hay nhiều chuỗi) đƣợc thu nhận qua so sánh đa chuỗi (multiple alignment) chƣơng trình ClustalW bố trí sẵn hệ chƣơng trình MacVector 6.5.3 (Oxford Molecular Group) Tra cứu so sánh sử dụng phần mềm có Trung tâm sinh-tin học quốc tế (NCBI = National Centre for Biotechnology Information/USA có (http://ww.ncbi.nlm.nih.gov) sử dụng số chƣơng trình đặc hiệu có ExPASy (http://expasy.ch) Sự sai khác nucleotid acid amin dƣới 5% biến đổi nội loài (Interspecific differences) 5% trở lên biến đổi ngoại loài (Intraspecific differences) (2) ĐỊNH LOÀI ẤU TRÙNG NANG (METACERCARIA) THU THẬP ĐƢỢC Ở CÁ Đối tƣợng: Mẫu ký sinh trùng sử dụng định loại sinh học phân tử ấu trùng nang (metacercaria) thu thập đƣợc cá nuôi thị trấn Rạng Đông, huyện Nghĩa Hƣng, tỉnh Nam Định Phƣơng pháp sinh học phân tử (PCR): định loại ấu trùng nang (metacercaria) thu thập đƣợc cá Tách chiết ADN tổng số ADN tổng số đƣợc tách chiết hố chất Genomic-Tip Kit (QIAGEN Inc.) theo qui trình nhà sản xuất Mô tả rút gọn nhƣ sau: mẫu vật bảo quản H P cồn 70% đƣợc lấy cho cồn bay hết ly tâm chân khơng, sau rửa nhiều lần PBS Mẫu vật đƣợc nghiền kỹ xử lý với dung môi Kit, hấp phụ lên màng ly chiết ADN theo qui trình tách chiết Hàm lƣợng ADN sử dụng cho phản ứng PCR (50 microlit) khoảng 150 nanogam Thiết kế tổng hợp mồi PCR U Gen cox1 (cytochrome oxidase 1) gen ty thể đƣợc chọn làm đích nghiên cứu Cặp mồi (primer) dùng nhân ADN đích phản ứng PCR (polymerase chain reaction), đƣợc thiết kế sở trình tự bảo tồn gen cox1 có H Ngân hàng Gen, 5'TTTTTTGGGCATCCTGAGGTTTAT3', bao gồm mồi mồi xuôi: ngƣợc: JB3F: JB4.5R: 5'TAAAGAAAGAACATAATGAAAATG3', Các trình tự tƣơng ứng với đoạn ADN nghiên cứu từ số quần thể thuộc họ Opisthorchiidae giống Paragonimus đƣợc công bố [4] đăng ký Ngân hàng Gen (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)đƣợc sử dụng để so sánh đối chiếu chạy PCR, giải trình tự chọn chuỗi so sánh ADN đích đƣợc nhân PCR tiêu chuẩn với hoá chất PCR Master Mix Kit (Promega) Chu trình nhiệt PCR máy Perkin-Elmer (Perkin-Elmer Inc., Mỹ) gồm bƣớc nhƣ sau: 940C - phút chu kỳ; 35 chu kỳ 940C - phút, 500C - phút 720C - phút; chu kỳ cuối kéo dài 10 phút 720C Sản phẩm PCR đƣợc tinh chế hoá chất QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN Inc.) đƣợc dịng hố vào vector pCR2.1 hoá chất TA-cloning Kit (Invitrogen Inc.) Vector pCR2.1 tiếp nhận sản phẩm PCR đƣợc chuyển nạp vào dòng tế bào IVN F’ chọn lọc khuẩn lạc theo phƣơng pháp kháng sinh thị màu (SAMBROOK RUSSELL, 2001) ADN plasmid có chứa PCR đƣợc tách chiết với hoá chất QIAprep Spin Plasmid Extraction Kit (QIAGEN Inc.) Chuỗi ADN đƣợc giải trình tự máy giải trình tự động ABI 377 PRISM (Perkin- Elmer) thực với số lƣợng nhiều plasmid tái tổ hợp nhằm thu đƣợc kết xác Sắp xếp, đối chiếu trình tự tƣơng ứng đoạn gen hệ chƣơng trình máy tính AsemblyLIGN 1.9 MacVector 6.5.3 (Oxford Molecular Inc.) Trình tự axit amin đƣợc dịch mã theo bảng mã di truyền mt-DNA số 21 sán dẹt (platyhelminth mtDNA genetic code) giới thiệu H P Ngân hàng Gen Các chuỗi cox1 Clonorchis sp Việt Nam đƣợc so sánh với loài Trung Quốc Triều Tiên H U Phụ lục VẬT LIỆU VÀ KỸ THUẬT PHÂN LOẠI ẤU TRÙNG SÁN LÁ TRONG CÁ NGỌT Quan sát ấu trùng sán (metacercaria) - Để phân loại đƣợc metacercaria dựa vào đặc điểm hình thái thu riêng ấu trùng có hình dạng tƣơng tự vào đĩa petri nhỏ - Chuyển metacercaria sang lam kính, nhỏ giọt glycerine + lactic acid (1:1), đậy lam men quan sát hình thái chi tiết dƣới kính hiển vi có độ phóng đại lớn (10x40 trở lên) - Phân loại metacercaria dựa vào đặc điểm hình dạng kích thƣớc Những dấu hiệu phân loại quan trọng là: H P + Dạng ấu trùng ấu trùng; + Các giác bám, kích thƣớc giác kích cỡ ấu trùng; + Hình dạng kiểu tuyến tiết; + Cơ quan sinh sản Phá nang metacercaria U - Ép học: Đôi ép nhẹ nang metacercaria dƣới lam men với nƣớc nƣớc muối sinh lý làm vỡ đƣợc ngan metacercaria Một kỹ thuật khác mà làm làm vỡ nang với đầu kim nhỏ thao tác dƣới kính hiển vi H - Tiêu nang dung dịch dày: Phƣơng pháp Li ctv (2004): + Chuẩn bị dung dịch dày nhƣ sau: Trong dung dịch nƣớc muối đệm phosphate pH 8,0 thêm: Trypsin 10 milligrams/100ml; Muối mật 10 milligrams/100ml; Để dung dịch dày nhiệt độ phòng 30 phút, hút metacercaria cho vào dịch đặt tủ ấm 5% CO2 37oC Metacercaria phá nang vịng 10 đến 90 phút Quy trình cố định nhuộm Cố định Metacercaria: a) Để nghiên cứu hình thái học nên đƣợc cố định formalin 5% nóng (hơ formalin gần sơi bỏ ngồi, dùng pipet hút metacercaria với nƣớc nƣớc muối sinh lý (càng tốt) cho trực tiếp vào formalin dung dịch cịn nóng Nếu nên thao tác buồng hút phịng có thơng gió hoạc bên ngồi (Formalin 5%: phần formaldehyde 95 phần nƣớc) b) Để nghiên cứu phân tử DNA, cố định dung dịch cồn 70oC Cố định sán trƣởng thành metacercaria thoát khỏi nang - Làm phẳng nhẹ dƣới lamen trƣớc cho vào dung dịch cố định formaline nóng 5% Sau đặt trùng lên lam kính, đậy lamen rút nƣớc vừa phải bên dƣới H P lamen cách đặt miếng giấy giấy thấm vào mép lamen, nƣớc tự động rút ngấm qua giấy Không ép mạnh Dùng pipet lấy formalin nóng 5% nhỏ vào bên mép lamen bên dƣới có trùng, formalin nhanh chóng chảy dƣới lamen cố định trùng Cẩn thận nhấc lamen lên rửa trùng pipet dung dịch cố định formalin H U Phụ lục TÀI LIỆU TRUYỀN THÔNG DÙNG TRONG CAN THIỆP CỘNG ĐỒNG H P H U H P H U H P H U H P H U H P H U H P H U PHỤ LỤC HOẠT ĐỘNG CAN THIỆP THÔNG QUA KÊNH TRUYỀN THÔNG TRỰC TIẾP Số Nội dung Đơn vị tính lƣợng lƣợt ngƣời 54 lƣợt ngƣời 83 lƣợt ngƣời 42 lƣợt ngƣời 5.769 Tập huấn kiến thức kỹ truyền thông cho thành viên ban đạo liên ngành ATVSTP thị trấn Tập huấn cho cán trạm y tế thị trấn: 01 buổi/quý x năm x ngƣời (do 01 cán trạm y tế chuyển công tác) Tập huấn cho cán y tế thôn: 01 buổi/ quý x năm x 12 H P ngƣời Tập huấn lãnh đạo ban, ngành, đoàn thể tham gia chƣơng trình can thiệp: 01 buổi/ quý x năm x ngƣời Lồng ghép chủ đề phịng chống SLGN vào sinh hoạt tổ chức đồn thể địa bàn thị trấn Rạng Đông U Hội Nơng dân thị trấn có lồng ghép nội dung phịng, chống SLGN định kỳ: 01 buổi/ quý x năm x 875 hội viên H Hội Phụ nữ thị trấn có lồng ghép nội dung phịng, chống SLGN định kỳ: 01 buổi/quý x năm x 1806 hội viên lƣợt ngƣời 10.458 Hội Ngƣời cao tuổi thị trấn có lồng ghép nội dung phòng, chống SLGN định kỳ: 01 buổi/ quý x năm x 792 hội viên Đoàn TNCSHCM có lồng ghép nội dung phịng, chống SLGN định kỳ: 01 buổi/ quý x năm x 92 đoàn viên lƣợt ngƣời 5.536 lƣợt ngƣời 635 Buổi 12 Tuyên truyền, phổ biến cho học sinh phụ huynh học sinh nguyên nhân, tác hại cách phòng, chống SLGN vào dịp khai giảng bế giảng năm học 01 trƣờng tiểu học, 01 trƣờng THCS, 01 trƣờng THPT Số Nội dung Đơn vị tính lƣợng Buổi lƣợt ngƣời 1.360 địa thị trấn: buổi/năm x 03 trƣờng x năm Họp Ban đạo liên ngành vệ sinh an toàn thực phẩm thị trấn có lồng ghép nội dung triển khai đánh giá kết hoạt động can thiệp phòng chống SLGN: 01 buổi/ quý x năm Thăm tƣ vấn hộ gia đình phịng chống bệnh SLGN H P H U H P U H Phụ lục Biểu đồ Grantt hoạt đông can thiệp truyền thông giáo dục sức khoẻ hàng năm