Xác nhận phương pháp xét nghiệm hóa sinh trên hệ thống máy cobas pro tại bệnh viện nhi trung ương

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG THẾ THỊ THÙY PHƯƠNG H P XÁC NHẬN PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM HÓA SINH TRÊN HỆ THỐNG MÁY COBAS PRO TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG U H LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 HÀ NỘI, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG THẾ THỊ THÙY PHƯƠNG H P XÁC NHẬN PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM HÓA SINH TRÊN HỆ THỐNG MÁY COBAS PRO TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG U H LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 Hướng dẫn khoa học: TS Trần Thị Chi Mai HÀ NỘI, 2022 i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS.BS Trần Thị Chi Mai, Trưởng khoa Hóa sinh Bệnh viện Nhi trung ương; Ths Đặng Thị Hà, giảng viên trường Đại học Y tế Công Cộng dành nhiều thời gian giúp đỡ, dày công rèn luyện cho ngày trưởng thành học tập sống Hơn tất cô dạy cho phương pháp nghiên cứu khoa học, tài sản quý tơi có giúp ích cho tơi chặng đường Tôi xin trân trọng cám ơn: H P - Đảng ủy, Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo sau Đại học trường Đại học Y tế cơng cộng - Đảng ủy, Ban Giám đốc, phịng Quản lý đào tạo Bệnh viện Nhi trung ương Tôi xin trân trọng cảm ơn GS, PGS, TS hội đồng chấm luận U văn tốt nghiệp, thầy cho nhiều ý kiến quý báu đầy kinh nghiệm giúp tơi hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể anh chị khoa Hóa sinh – H Bệnh viện Nhi Trung ương tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn tới bố mẹ, chồng con, anh chị em, bạn bè đồng nghiệp người thân động viên giúp đỡ suốt trình học tập làm luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Thế Thị Thùy Phương ii MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chương TỔNG QUAN 1.1 Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp 1.2 So sánh phương pháp 1.3 Các phương pháp thống kê sử dụng phân tích liệu so sánh phương pháp 16 1.4 Máy phân tích hố sinh tự động 18 H P 1.5 Các nghiên cứu và ngoài nước xác nhận phương pháp 23 Chương 26 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.2 Thời gian thu thập số liệu địa điểm nghiên cứu U 2.3 Thiết kế nghiên cứu 2.4 Cỡ mẫu cách chọn mẫu 2.5 Các biến số H 2.6 Phương pháp nghiên cứu 26 26 26 27 27 2.7 Phương pháp phân tích số liệu 33 2.8 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 33 2.9 Sai số biện pháp khắc phục sai số 33 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1 Kết xác nhận phương pháp 35 3.2 Kết so sánh phương pháp 43 Chương 4: BÀN LUẬN 61 Chương 5: KẾT LUẬN 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ALT : Alanin transaminase AST : Aspart transaminase CI : Confidence interval - Khoảng tin cậy CLSI : Clinical and Laboratory Standards institute -Viện tiêu chuẩn lâm sàng và xét nghiệm CRP : C- reaction protein H P CV : Coefficient of Variation – Hệ số biến thiên DF : Bậc tự Fe : Sắt MS : Bình phương trung bình QC : Quality control – Nội kiểm RE : Random error – Sai sỗ ngẫu nhiên SD : Standard Deviation – Độ lệch chuẩn SE : System error – Sai số hệ thống SR: SS SWL TE TG U H : Độ lệch chuẩn lần chạy : Tổng bình phương : Độ lệch chuẩn lần chạy : Total error – Sai số tổng : Triglycerid UVL : Upper verification limit - Giới hạn xác minh VB : Phương sai lần chạy Vw : Phương sai lần chạy XN : Xét nghiệm бR : Độ lệch chuẩn ngắn hạn nhà sản xuất бWR : Độ lệch chuẩn ngày nhà sản xuất iv DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Tổng hợp kết thực nghiệm thu dưới dạng bảng 35 Bảng 3.2 Kết đánh giá độ chụm ngắn hạn máy Cobas Pro 37 Bảng 3.3 Kết đánh giá độ chụm dài hạn máy Cobas Pro 38 Bảng 3.4 Kết giới hạn xác minh với độ lệch chuẩn lần chạy xét nghiệm ALT mức QC1 máy Cobas pro 39 Bảng 3.5 Kết giới hạn xác minh với độ lệch chuẩn lần chạy xét nghiệm ALT và xét nghiệm Ure, CRP mức QC1 máy Cobas pro 40 Bảng 3.6 Kết độ lệch chuẩn tương đối xét nghiệm Ure mức QC1 máy H P Cobas pro 40 Bảng 3.7 Cách đánh giá độ đúng cho xét nghiệm Glucose 41 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ đúng xét nghiệm hóa sinh 42 Bảng Kết so sánh khác biệt mẫu bệnh nhân hai máy phương pháp đồ thị khác biệt U 49 Bảng 10 Kết phân tích hồi quy Passing -Bablok so sánh mẫu bệnh phẩm hai máy H 59 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đồ thị khác biệt (Difference plot) Hình 1.2 Đồ thị so sánh (Comparison plot) 12 13 Hình 1.3 Đồ thị “Method decision chart” Er ror! Bookmark not defined Hình 3.1 Cách xác định giới hạn Grubbs cho xét nghiệm Glucose Hình 3.2 Ước tính độ chụm phân tích phương sai chiều 36 37 Hình 3.4 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Glucose mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 44 Hình 3.5 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Cholesterol mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 44 Hình 3.6 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Triglycerid mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 45 Hình 3.7 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN AST mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 45 Hình 3.8 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN ALT mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 46 H P U Hình 3.9 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Ure mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 46 Hình 3.10 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Creatinin mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 47 Hình 3.11 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Protein toàn phần mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 47 Hình 3.12 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Albumin mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 48 Hình 3.13 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN CRP mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 48 Hình 3.14 Biểu đồ khác biệt so sánh kết XN Fe mẫu bệnh phẩm chạy hai máy 49 Hình 3.15: Biểu đồ Passing- Bablock so sánh kết XN Glucose chạy máy hoá sinh 52 H vi TÓM TẮT NGHIÊN CỨU Xác nhận phương pháp xét nghiệm cần tiến hành trước đưa thiết bị mới, kỹ thuật xét nghiệm mới vào sử dụng nhằm xác nhận tiêu chuẩn kỹ thuật mà nhà sản xuất công bố là đúng điều kiện phịng xét nghiệm Khoa Hóa sinh, Bệnh viện Nhi Trung ương mới lắp đặt thêm hệ thống máy hóa sinh miễn dịch Cobas Pro Roche, đồng thời Khoa triển khai hệ thống phân tích hóa sinh tự động AU5800 trước đó, đề tài này thực với hai mục tiêu: 1) Áp dụng hướng dẫn EP15 A3 CLSI để xác nhận phương pháp xét nghiệm hóa sinh thường quy hệ thống máy CobasPro Bệnh viện Nhi Trung ương; 2) So sánh độ tương đồng kết xét nghiệm hóa sinh thường quy hệ thống CobasPro và H P AU5800 Bệnh viện Nhi Trung ương Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm phòng xét nghiệm với chất liệu nghiên cứu là mẫu chứng Biorad và 40 mẫu huyết tương thừa bệnh nhân Nghiên cứu lựa chọn xét nghiệm thường quy chỉ định lâm sàng bao gồm: Ure, Creatinin, AST, ALT, Cholesterol, U Triglycerid, Albumin, Glucose, Protein toàn phần, Sắt và CRP Tiến hành thực nghiệm đánh giá độ chụm, độ đúng và thực nghiệm so sánh độ tương đồng kết xét nghiệm hai hệ thống máy theo hướng dẫn CLSI Số liệu H thu thập và xử lý excel và phần mềm Method validator Philip Marquez Kết nghiên cứu: Độ chụm và độ đúng tất xét nghiệm chấp nhận Kết so sánh phương pháp số chỉ số hai máy Cobas Pro AU5800 là khơng tương đồng, nhiên có mối tương quan tốt kết xét nghiệm tất chỉ số nghiên cứu hai máy Kết luận và khuyến nghị: Phương pháp định lượng Ure, Creatinin, AST, ALT, Cholesterol, Triglycerid, Albumin, Glucose, Protein toàn phần, Sắt và CRP máy Cobas Pro là xác, tin cậy; áp dụng thực hành thường quy phòng xét nghiệm ĐẶT VẤN ĐỀ Xác nhận phương pháp xét nghiệm (verification) là khẳng định kiểm tra chứng khách quan chứng minh phương pháp xét nghiệm đáp ứng yêu cầu đặt Kết xác nhận phương pháp bao gồm đánh giá nhiều đặc tính kỹ thuật phương pháp, đặc biệt là độ chụm, độ đúng Xác nhận phương pháp phân tích là phần khơng thể thiếu muốn có kết đáng tin cậy(1,2) Việc xác nhận phương pháp xét nghiệm cần tiến hành trước đưa thiết bị mới, kỹ thuật xét nghiệm mới vào sử dụng nhằm xác nhận tiêu chuẩn kỹ thuật mà nhà sản xuất công bố là đúng điều kiện phòng xét nghiệm(2,3) Đây là đòi hỏi bắt buộc cho hệ thống phòng xét nghiệm H P để cơng nhận ISO 15189(2) Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng và Xét nghiệm Hoa Kỳ (Clinical and Laboratory Standards Institute – CLSI) xây dựng hướng dẫn EP 15A3 xác nhận độ đúng và độ chụm, với mục tiêu cung cấp quy trình đơn giản nghiêm ngặt, áp dụng phịng xét nghiệm khác trang thiết bị, kỹ thuật, nguồn lực(4) Khoa Hóa sinh, Bệnh viện Nhi Trung ương mới lắp U đặt thêm hệ thống máy hóa sinh miễn dịch Cobas Pro Roche nhằm tăng suất xét nghiệm phục vụ nhu cầu chẩn đoán và điều trị cho người bệnh Để khẳng định kết xét nghiệm máy Cobas Pro xác, tin cậy công bố H nhà sản xuất; cần phải xác nhận xem phương pháp xét nghiệm hệ thống máy này trước đưa vào sử dụng thường quy So sánh phương pháp tiến hành phòng xét nghiệm hoá sinh lâm sàng để đánh giá mức độ tương đồng hai phương pháp phân tích So sánh phương pháp tiến hành bất cứ nào phương pháp mới xem xét để thay cho phương pháp thời hai nhiều hai máy xét nghiệm sử dụng để thực xét nghiệm thời điểm khác ngày, hai máy xét nghiệm sử dụng đồng thời để thực xét nghiệm nhằm tăng cơng suất xét nghiệm.(5) Như vậy, phịng xét nghiệm có nhiều máy và quy trình xét nghiệm khác cần tiến hành so sánh kết xét nghiệm để đảm bảo tương đồng xét nghiệm hệ thống Việc so sánh đặc biệt quan trọng với phịng xét nghiệm có lượng mẫu lớn, đòi hỏi phải sử dụng đồng thời nhiều máy hóa sinh khác thời điểm Hiện tại, Khoa Hóa sinh Bệnh viện Nhi Trung ương triển khai hệ thống phân tích hóa sinh tự động AU5800 trước đó, việc so sánh kết xét nghiệm hóa sinh máy Cobas Pro với hệ thống AU 5800 là việc làm cần thiết, đảm bảo cung cấp kết xét nghiệm nhanh chóng và tin cậy, giúp so sánh kết riêng biệt với khoảng tham chiếu thích hợp với giá trị ngưỡng mà không cần quan tâm thực xét nghiệm máy nào H P H U 82 PHỤ LỤC II: KHOẢNG TUYẾN TÍNH CỦA CÁC XÉT NGHIỆM Khoảng tuyến tính Xét nghiệm Albumin 15-60 (g/L) Cholesterol 0.5-18 (mmol/L) Creatinin 5-2200 (umol/L) H P CRP 0.2-480 (g/dL) Fe 2-179 (umol/L) U Glucose (mmol/L) AST (U/L) ALT (U/L) Protein (g/L) Triglycerid H 0.6-45 3-1000 3-500 30-120 0.1-11.3 (mmol/L) Ure (mg/dL) 0.8-50 83 PHỤ LỤC III: BỘ CÔNG CỤ NGHIÊN CỨU Biểu mẫu thu thập số liệu đánh giá độ chụm, độ Chất phân tích: QC1: Ngày tháng năm: QC2: Ngày Số lần lặp lại 5 5 QC3: QC1 H P U H QC2 QC3 84 Biểu mẫu thu thập số liệu so sánh phương pháp Phương Ngày tháng năm Nhân viên XN pháp: Chất phân tích Đơn vị Mẫu Máy AU 5800 Cobas Pro H P U H 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Ngày thực 85 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 H P 29 30 31 32 33 U 34 35 36 H 37 38 39 40 86 H P H U 87 H P H U 88 H P H U 89 H P H U 90 H P H U 91 H P H U 92 H P H U 93 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG Biểu mẫu BIÊN BẢN GIẢI TRÌNH CHỈNH SỬA CÁC GĨP Ý LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Họ tên học viên: Thế Thị Thùy Phương Tên đề tài: Xác nhận phương pháp xét nghiệm hóa sinh hệ thống máy Cobas Pro bệnh viện Nhi trung ương T T Nội dung góp ý Phần giải trình học viên (Liệt kê nội dung góp ý theo thứ tự phần đề cương/luận văn) (Nêu rõ chỉnh sửa nào, phần nào, trang Nếu khơng chỉnh sửa,giải thích lý khơng chỉnh sửa) U …… Tên đề tài luận văn … H P Định hướng chuyên ngành luận văn Tóm tắt NC H Tóm tắt NC chưa đầy đủ, cần chỉnh Học viên chỉnh sửa lại tóm tắt theo góp sửa cho bao hàm hết nội dung ý Bảng danh mục viết tắt nên xếp Học viên bổ sung thêm và xếp theo theo A,B,C Bổ sung thêm nhiều thứ tự A, B,C bảng danh mục viết danh mục viết tắt sử dụng tắt luận văn mà chưa có bảng Chỉnh format danh mục bảng, Học viên format danh mục bảng và danh mục hình thành kiểu chữ đứng hình theo kiểu chữ đứng Đặt vấn đề 94 … Mục tiêu nghiên cứu Học viên cân nhắc cách viết trực Học viên sửa lại nội dung mục tiếp vào mục tiêu nghiên cứu tiêu 1: Xác nhận độ chụm, độ đúng 11 chỉ số xét nghiệm hóa sinh hệ thống mục tiêu máy Cobas Pro bệnh viện Nhi trung ương theo hướng dẫn CLSI EP15 A3 (trang 3) Tổng quan mục tiêu cần bổ sung Học viên bổ sung thêm tổng quan cho cho phù hợp mục tiêu Đối tượng và phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu: cắt ngang H P Đây là NC mô tả cắt ngang Học viên xin không chỉnh sửa điểm này sau trao đổi xin ý kiến giảng viên hướng dẫn Mục 2.1 sửa thành vật liệu và thiết Học viên sửa lại(trang 26) bị sử dụng nghiện cứu U Chuyển sơ đồ nghiên cứu xác Sơ đồ nghiên cứu giúp cụ thể hóa khung nhận PP mục 2.5.2.1 vào khung lý thuyết Học viên vẽ chi tiết sơ đồ lý thuyết nghiên cứu báo cáo (Trang 29) H Bổ sung mục phương pháp thu Học viên thập số liệu 2.2(trang26) bổ sung mục Bảng biến số: Chuyển sang phụ lục, Học viên chuyển bảng biến số sang viết ngắn gọn PPNC phần phụ lục, PPNC học viên trình bày cụ thể quy trình thực theo hướng dẫn CLSI Phương pháp phân tích số liệu cần Học viên viết chi tiết mục 2.6 viết chi tiết (trang 30) Sai số, khắc phục sai số viết thành Học viên sửa lại thành hạn chế hạn chế nghiên cứu nghiên cứu Kết nghiên cứu 95 Cơng thức tính tốn đưa phân Học viên trình bày phần phân tích số liệu tích số liệu, phần kết học viên muốn mơ tả cách thức tính tốn với biến số nghiên cứu Tại không so sánh với nhà sản Kết độ chụm, độ đúng học viên có so xuất sánh với nhà sản xuất để đưa kết luận Cần có biểu đồ mơ tả khoảng tuyến Học viên bổ sung mơ tả khoảng tính xét nghiệm tuyến tính xét nghiệm phụ lục II Xem lại phần nhận xét dưới Học viên rà soát chỉnh sửa nhận xét bảng dưới bảng Bảng trang 39 sai với nhận xét H P Học viên sửa lại nhận xét bảng trang 39 Các nội dung trang 48 – 51 Các bảng kết là tóm tắt và diễn giải là dạng hình phần biểu đồ Đây là nghiên cứu so sánh text phương pháp nên cách biểu diễn kết cần thể trực quan biểu đồ Học Khơng trình bày bảng số liệu và viên xin ý kiến giáo viên hướng dẫn là biểu đồ cho nội dung/kết cần để lại số biểu đồ minh họa NC, học viên cần bỏ tất biểu (nếu là tất cả) đồ từ trang 46 – 51 và từ trang 5358 trùng lặp kết bảng Bàn luận … Kết luận … U H 10 Khuyến nghị 11 Tài liệu tham khảo Rà sốt lại theo đúng quy định 12 Cơng cụ nghiên cứu Học viên rà soát lại TLTK theo quy định nhà trường 96 13 Các góp ý khác Ngày 12 tháng năm 2023 Học viên (ký ghi rõ họ tên) Thế Thị Thùy Phương Xác nhận GVHD Xác nhận GVHD Xác nhận GVHT (nếu có) (nếu có) (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) H P (ký ghi rõ họ tên) U TS TRẦN THỊ CHI MAI ThS ĐẶNG THỊ NGA Y kiến thành viên hội đồng/chủ tịch hội đồng (Nếu phân công): H Ngày 01 tháng năm 2023 Đại diện hội đồng (ký ghi rõ họ tên)