Tổng hợp xanh nano bạc từ dịch chiết lá trà xanh (camellia sinensis) và thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm

TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: TỔNG HỢP XANH NANO BẠC TỪ DỊCH CHIẾT LÁ TRÀ XANH (CAMELLIA SINENSIS) VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2020 TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: TỔNG HỢP XANH NANO BẠC TỪ DỊCH CHIẾT LÁ TRÀ XANH (CAMELLIA SINENSIS) VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2020 LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS , Phó Trưởng khoa Dược Trường Đại học Lạc Hồng quan tâm theo dõi, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành đề tài nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ThS tận tình giúp đỡ, dạy bảo truyền đạt cho em kiến thức quý báu suốt thời gian em thực đề tài Em xin cảm ơn quý thầy mơn Dược liệu, Hóa hữu cơ, Hóa dược, Vi sinh, Hóa phân tích – Kiểm nghiệm giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để em hồn nghiệm khảo sát có đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè tạo điều kiện vật chất lẫn tinh thần để em thực tốt đề tài Tuy nhiên, với vốn kiến thức hạn chế nên tránh khỏi thiếu sót xảy q trình thực hiện, em mong nhận lời nhận xét, đóng góp ý q thầy, để đề tài hồn thiện Xin chân thành cảm ơn Sinh viên thực i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH ẢNH v DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hạt nano kim loại 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Tính chất đặc trưng hạt nano kim loại 1.1.3 Các phương pháp chế tạo 1.1.3.1 Phương pháp phân tán (top-down) 1.1.3.2 Phương pháp ngưng tụ (bottom-up) 1.2 Tổng quan bạc nano bạc 1.2.1 Giới thiệu kim loại bạc 1.2.2 Tính chất hạt nano bạc 1.2.3 Hoạt tính kháng khuẩn nano bạc 1.2.4 Hoạt tính kháng viêm nano bạc 1.2.5 Ứng dụng nano bạc 10 1.3 Tổng quan chất bảo quản 12 1.3.1 Chất bảo vệ Polyvinylpyrrolidon (PVP) 12 1.3.2 Vai trò Cetyl trimetylamoium bromua (CTAB) 13 1.4 Tổng quan trà xanh 14 1.4.1 Đặc điểm chung 14 1.4.2 Thành phần hóa học 14 1.4.3 Tác dụng dược lý 14 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ii 1.5 Tình hình nghiên cứu 15 1.5.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 15 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Dụng cụ thí nghiệm, thiết bị 18 2.1.3 Hóa chất 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3 Xây dựng quy trình tổng hợp xanh nano bạc từ cao dược liệu 20 2.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu 20 2.3.2 Tổng hợp dung dịch nano bạc 21 2.3.3 Ổn định dung dịch nano bạc 22 2.4 Phương pháp khảo sát yếu tố ảnh hưởng tới tổng hợp nano bạc 23 2.4.1 Khảo sát tỉ lệ bạc nitrat/PVP tổng hợp nano bạc 23 2.4.2 Khảo sát nồng độ dịch chiết tổng hợp nano bạc 23 2.4.3 Khảo sát nồng độ bạc nitrat tổng hợp nano bạc 23 2.4.4 Khảo sát thời gian tổng hợp nano bạc 24 2.4.5 Khảo sát nhiệt độ tổng hợp nano bạc 24 2.4.6 Khảo sát thể tích PVP tổng hợp nano bạc 24 2.4.7 Khảo sát tỉ lệ dịch chiết/bạc nitrat tổng hợp nano bạc 24 2.4.8 Khảo sát ảnh hưởng CTAB tổng hợp nano bạc 25 2.5 Các phương pháp phân tích hóa lý 25 2.5.1 Máy quang phổ hấp thu (UV-Vis) 25 2.5.2 Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 25 2.5.3 Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn 25 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an iii CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 27 3.1 Chiết xuất dược liệu 27 3.2 Kết khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình tạo nano bạc 27 3.2.1 Khảo sát tỉ lệ bạc nitrat/PVP theo khối lượng tổng hợp nano bạc 27 3.2.2 Khảo sát nồng độ dịch chiết tổng hợp nano bạc 29 3.2.3 Khảo sát nồng độ bạc nitrat AgNO3 30 3.2.4 Khảo sát thời gian tổng hợp nano bạc 32 3.2.5 Khảo sát nhiệt độ tổng hợp nano bạc 33 3.2.6 Khảo sát thể tích PVP tổng hợp nano bạc 34 3.2.7 Khảo sát tỉ lệ dịch chiết/bạc nitrat tổng hợp nano bạc 36 3.2.8 Khảo sát ảnh hưởng CTAB tổng hợp nano bạc 37 3.2.9 Tổng hợp hệ nano bạc hoàn chỉnh 39 3.2.10 Kết chụp TEM 40 3.2.11 Độ ổn định hệ nano bạc 41 3.3 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn 42 3.3.1 Phương pháp Kirby Bauer 42 3.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu 43 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 4.1 Kết luận 45 4.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt CTAB Cetyl trimetylamoium bromua DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power IC50 The half Inhibitory Concentration Nồng độ tối thiểu ức chế 50% MIC Minimum Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu Tiêu chuẩn sở TCCS SDS Sodium dodecyl sulfate SEM Scanning Electron Microscop Kính hiển vi điện tử quét TEM Transmission Electron Microscopy Kính hiển vi điện tử truyền qua UV-Vis Ultraviolet Visible Phổ tử ngoại - khả kiến XRD X-ray diffraction Nhiễu xạ tia X Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Phương pháp top-down bottom-up Hình 1.2 Sản phẩm kem nghệ Thái Dương nano bạc 11 Hình 1.3 Sản phẩm trang kháng khuẩn nano bạc 12 Hình 1.4 Sự phức hợp PVP hạt nano bạc 13 Hình 1.5 Một số hợp chất có trà xanh 15 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình thực nghiệm 19 Hình 2.2 Sơ đồ tổng hợp nano bạc từ dịch chiết trà xanh 21 Hình 2.3 Sơ đồ tổng hợp nano bạc từ dịch chiết trà xanh có mặt chất bảo vệ 22 Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo PVP 23 Hình 3.1 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo tỷ lệ AgNO3 / PVP 28 Hình 3.2 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo tỷ lệ AgNO3 / PVP 28 Hình 3.3 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo nồng độ dịch chiết 29 Hình 3.4 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo nồng độ dịch chiết 30 Hình 3.5 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo nồng độ bạc nitrat 31 Hình 3.6 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo nồng độ bạc nitrat 31 Hình 3.7 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo thời gian 32 Hình 3.8 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo thời gian 33 Hình 3.9 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo nhiệt độ 34 Hình 3.10 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo nhiệt độ 34 Hình 3.11 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo thể tích PVP 35 Hình 3.12 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo thể tích PVP 35 Hình 3.13 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo tỉ lệ dịch chiết/ bạc nitrat 36 Hình 3.14 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo tỉ lệ dịch chiết/ bạc nitrat 37 Hình 3.15 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo khảo sát thể tích CTAB 38 Hình 3.16 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo khảo sát thể tích CTAB 38 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an vi Hình 3.17 Mẫu nano bạc tổng hợp ngày 25/04/2020 39 Hình 3.18 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp ngày 25/04/2020 40 Hình 3.19 Kết đo TEM mẫu nano bạc 40 Hình 3.20 Phổ UV- Vis mẫu nano chụp ngày 24/07/2020 41 Hình 3.21 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm nano bạc 42 Hình 3.22 Kết xác định MIC 43 Hình 3.23 Kết xác định MIC penicilin G 44 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách hóa chất sử dụng 18 Bảng 3.1 Điều kiện kết khảo sát tỉ lệ bạc nitrat/PVP theo khối lượng tổng hợp nano bạc 27 Bảng 3.2 Điều kiện kết khảo sát nồng độ dịch chiết tổng hợp nano bạc 29 Bảng 3.3 Điều kiện kết khảo sát nồng độ bạc nitrat tổng hợp nano bạc 31 Bảng 3.4 Điều kiện kết khảo sát thời gian tổng hợp nano bạc 32 Bảng 3.5 Điều kiện kết khảo sát nhiệt độ tổng hợp nano bạc 33 Bảng 3.6 Điều kiện kết khảo sát thể tích PVP tổng hợp nano bạc 35 Bảng 3.7 Điều kiện kết khảo sát tỉ lệ dịch chiết/AgNO3 tổng hợp nano bạc 36 Bảng 3.8 Điều kiện kết khảo sát thể tích CTAB tổng hợp nano bạc 38 Bảng 3.9 Thông số tổng hợp hệ nano bạc hoàn chỉnh 39 Bảng 3.10 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm mẫu nano bạc nồng độ 100% 43 Bảng 3.11 Kết xác định giá trị MIC 44 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 35 STT Nồng độ Thời gian Thể tích Nồng độ Bước sóng Độ hấp AgNO3 (phút) PVP (ml) dịch chiết λ (nm) thu (Amax) 10 441 1,196 20 435 0,96 435 0,66 0,01 M 15 phút 30 0,01% 40 430 0,54 50 428 0,43 Bảng 3.6 Điều kiện kết khảo sát thể tích PVP tổng hợp nano bạc Hình 3.11 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo thể tích PVP Hình 3.12 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo thể tích PVP Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 36 Nhận xét: độ hấp thu mẫu nano khảo sát từ 428 – 441 nm, từ kết đo UV-Vis ta nhận xét tăng thể tích PVP độ hấp thu giảm Amax = 1,196 Kích thước hạt giảm nhận thấy bước sóng giảm Giải thích: lượng nano tạo tăng thể tích PVP giảm dần, thể tích PVP cịn dư lại sau phản ứng kết thúc có tác dụng pha lỗng dung dịch mẫu Từ mật độ nano bạc dung dịch giảm, dẫn đến giảm độ hấp thu Vì chọn 20 ml thể tích PVP tối ưu 3.2.7 Khảo sát tỉ lệ dịch chiết/bạc nitrat tổng hợp nano bạc Khảo sát điều kiện thời gian phản ứng 15 phút, nhiệt độ khảo sát 40 ℃, thể tích PVP 20 ml.Tiến hành thí nghiệm với thơng số trình bày Bảng 3.7 STT Nồng độ Thời gian Tỉ lệ dịch Nồng độ AgNO3 (phút) chiết/bạc nitrat dịch chiết Bước Độ hấp sóng λ thu (nm) (Amax) 1/1 430 2,60 1/2 428 2,265 430 1,472 0,01 M 15 phút 1/4 0,01% 1/6 428 1,326 1/8 426 0,833 Bảng 3.7 Điều kiện kết khảo sát tỉ lệ dịch chiết/AgNO3 tổng hợp nano bạc Hình 3.13 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo tỉ lệ dịch chiết/ bạc nitrat Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 37 Hình 3.14 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo tỉ lệ dịch chiết/ bạc nitrat Nhận xét: tỉ lệ dịch chiết / bạc nitrat lớn số lượng nanno bạc tạo nhiều Độ hấp thu cực đại khoảng 426 – 430 nm, Amax = 2,60 Giải thích: thể tích dịch chiết/bạc nitrat cao, lượng nano tổng hợp nhiều Khả va chạm hạt nano tăng lên, dễ kết tụ lại với làm giảm độ hấp thu Vì vậy, chọn tỉ lệ dịch chiết / bạc nitrat 1/6 điều kiện tối ưu 3.2.8 Khảo sát ảnh hưởng CTAB tổng hợp nano bạc Tiến hành thí nghiệm loại trừ tất yêu tố ảnh hưởng bất lợi Nhiệm vụ CTAB khảo sát cuối nhằm mục đích bảo vệ hệ nano điều chỉnh hình dáng hạt nano kim loại bạc Khảo sát điều kiện thời gian phản ứng 15 phút, nhiệt độ khảo sát 40 ℃, thể tích dịch chiết ml, Thay đổi thể tích CTAB (2,5 µL, µL, 10 µL, 15 µL, 20 µL) Tiến hành thí nghiệm với thơng số trình bày Bảng 3.8 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 38 STT Nồng độ Thời gian Thể tích Nồng độ AgNO3 (phút) CTAB (µL) dịch chiết Bước Độ hấp sóng λ thu (nm) (Amax) 2.5 432 0,96 432 1,12 432 0,98 0,01 M 15 phút 10 0,01% 15 432 1,16 20 432 1,09 Bảng 3.8 Điều kiện kết khảo sát thể tích CTAB tổng hợp nano bạc Hình 3.15 Mẫu dung dịch nano bạc tổng hợp theo khảo sát thể tích CTAB Hình 3.16 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp theo khảo sát thể tích CTAB Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 39 Nhận xét: thể tích CTAB tăng lên, ta nhận thấy lượng nano bạc tạo nhiều hơn, đồng thời làm độ hấp thu giảm Giải thích: tác dụng hoạt động bề mặt CTAB mà lượng nano bạc tạo nhiều, thời điểm mà lượng nano bạc tạo với mật độ dày đặc chúng dễ va chạm với nhau, dẫn đến kết tụ lại Bên cạnh đó, điều kiện bảo quản, nhận thấy thể tích µL mẫu giữ độ bền cao so với mẫu cịn lại Vì chọn thể tích CTAB tối ưu µL 3.2.9 Tổng hợp hệ nano bạc hoàn chỉnh Từ khảo sát thực Rút thông số tối ưu để tổng hợp hệ nano bạc hoàn chỉnh Bảng 3.9 Bảng 3.9 Thơng số tổng hợp hệ nano bạc hồn chỉnh Dịch chiết Bạc nitrat (AgNO3) PVP CTAB Thể tích ml ml 20 ml µL Nồng độ 0,01% 0,01 M 1% 1% Hình 3.17 Mẫu nano bạc tổng hợp ngày 25/04/2020 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 40 Hình 3.18 Phổ UV-Vis mẫu nano bạc tổng hợp ngày 25/04/2020 Mẫu nano có bước sóng hấp thu bước sóng λ = 432 nm, độ hấp thu Amax = 0.976 3.2.10 Kết chụp TEM Kích thước trung bình: 44 nm ± 10 Tần suất xuất (lần) 36 38 40 41 43 44 47 48 49 54 Kích thước (nm) Hình 3.19 Kết đo TEM mẫu nano bạc Nhận xét: ảnh TEM cho thấy hạt nano bạc có dạng hình tựa cầu đa giác, hạt phân bố dung dịch Sử dụng phần mềm Image Tool 3.0 để đo kích thước hạt, kết hạt nano bạc có kích thước khoảng từ 36 đến 54 nm kích thước trung bình khoảng 44 ± 10 nm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 41 3.2.11 Độ ổn định hệ nano bạc Bảo quản điều kiện thông thường từ ngày 25/05/2020, mẫu nano bền, giữ trạng thái tính chất ban đầu Hình 3.20 Phổ UV- Vis mẫu nano chụp ngày 24/07/2020 Mẫu nano có bước sóng hấp thu bước sóng λ = 431 nm, độ hấp thu Amax = 0.976 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 42 3.3 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn 3.3.1 Phương pháp Kirby Bauer Hình 3.21 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm nano bạc Chú thích: A : mẫu nano bạc nồng độ 100% B : mẫu nano bạc nồng độ 50% C : mẫu nano bạc nồng độ 25% D : mẫu chứng nước Thực cấy khuẩn đĩa thạch NA, ủ điều kiện nhiệt độ 37 24 tiếng Kết thu được trình bày Bảng 3.10 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 43 Bảng 3.10 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm mẫu nano bạc nồng độ 100% Tên vi khuẩn Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) Staphylococcus aureus 10 Pseudomonas aeruginosa 11 Samonella typhirium 10 Tên vi nấm Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) Candida albicans 10 Nhận xét: kết đo đường kính vịng vơ khuẩn cho thấy mẫu nano bạc từ dịch chiết trà xanh có khả ức chế chủng vi khuẩn chủng vi nấm Vòng kháng khuẩn lớn 11 mm chủng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, chủng vi khuẩn lại Staphylococcus aureus, Samonella typhirium 10 mm chủng vi nấm Candida albicans 10 mm 3.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu Hình 3.22 Kết xác định MIC Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 44 Hình 3.23 Kết xác định MIC penicilin G Giá trị MIC nano bạc Giá trị MIC penicilin G (mg/L) (mg/L) Staphylococcus aureus 47,4 0,3 Pseudomonas aeruginosa 47,4 24000 Salmonella 47,4 4,2 Candida albicans 47,4 Tên vi khuẩn vi nấm Bảng 3.11 Kết xác định giá trị MIC Nhận xét: Cả chủng vi khuẩn chủng vi nấm có ống nghiệm thứ 5, nồng độ 20% nồng độ thấp ức chế phát triển vi khuẩn vi nấm với giá trị MIC 47,4 mg/L So sánh với MIC penicillin G cho thấy hiệu lực kháng khuẩn mẫu nano bạc mạnh chủng Pseudomonas aeruginosa Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 45 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau thời gian nghiên cứu, đề tài tổng hợp thành công nano bạc phương pháp tổng hợp xanh từ dịch chiết trà xanh, hợp chất polyphenol có trà đóng vai trị vừa chất khử, vừa chất bảo vệ trình tổng hợp Khi phân tích phổ UV-Vis cho thấy hạt nano bạc tạo thành có đỉnh hấp thu khoảng bước sóng 425-440 nm Phân tích ảnh TEM, hạt nano bạc có dạng hình tựa cầu hình đa giác phân bố dung dịch Kích thước hạt nano bạc tổng hợp từ dịch chiết trà xanh 44 ± 10 nm Kết thử hoạt tính kháng khuẩn cho thấy dung dịch nano bạc tổng hợp từ dược liệu trà xanh có hoạt tính kháng lại chủng vi khuẩn chủng vi nấm thử nghiệm Giá trị MIC mẫu nano bạc tổng hợp từ dịch chiết trà xanh chủng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa 47,4 mg/L, Staphylococcus aureus 47,4 mg/L, Samonella typhirium 47,4 mg/L Đối với chủng vi nấm Candida albicans 47,4 mg/L Khi so sánh với giá trị MIC penicilin G chủng vi khuẩn chủng vi nấm cho thấy hiệu lực kháng khuẩn mẫu nano bạc mạnh chủng Pseudomonas aeruginosa 4.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu sử dụng nguồn dịch chiết từ trà xanh việc mở rộng sử dụng thân cành để nghiên cứu Khảo sát thêm số yếu tố tốc độ khuấy, độ pH để tối ưu hóa quy trình tổng hợp nano bạc Nghiên cứu, phát triển số chế phẩm từ nano bạc dùng da, phối trộn vào dạng thuốc mỡ, kiểm tra hoạt tính sinh học tính kích ứng sản phẩm da nhạy cảm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Cao Văn Dư, Ngơ Hồng Minh cộng (2011), ''Nghiên cứu chế tạo vật liệu nano bạc môi trường glycerin sản phẩm ứng dụng'', Báo cáo nghiên cứu khoa học, Khoa Dược, Đại học Lạc Hồng [2] Nguyễn Đức Nghĩa (2007), Hóa Học Nano: Công nghệ vật liệu nguồn, NXB Khoa Học Tự Nhiên Công Nghệ [3] Nguyễn Thế Hữu, Trần Quang Hải cộng (2018), "Nghiên cứu tổng hợp dung dịch hạt Nano bạc sử dụng tác nhân khử đường Glucose NaBH4", Tạp chí Khoa học Công nghệ - Đại học Công nghiệp Hà Nội, 45, tr 82-85 [4] Nguyễn Thị Thanh Bình, Vũ Đức Lợi cộng (2016), ''Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng dược phẩm'', Tạp chí Khoa học ĐHQGHN [5] Trần Thị Thu Hương, Đặng Đình Kim cộng (2016), "Ảnh hưởng vật liệu nano Bạc lên sinh trưởng bèo Lemna sp.", Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 14(2), tr 305-312 [6] Trương Văn Tân (2009), Khoa học Cơng nghệ Nano, NXB Tri Thức [7] Vũ Đình Cự, Nguyễn Xuân Chánh (2004), Công nghệ nano điều khiển đến phân tử nguyên tử, NXB Khoa học Kỹ thuật Tiếng Anh [8] Ahluwalia, et al (2018), ''Nano silver particle synthesis using Swertia paniculata herbal extract and its antimicrobial activity'' Microbial Pathogenesis 114: p 402408 [9] Alan Lansdown (2006), “Silver in health care: antimicrobial effects and safety in use” Current Problems in Dermatology, 33: p 17-34 [10] Deepa, et al (2016), "Green synthesized silver nanoparticles" Journal of Chemical and Pharmaceutical Research 8(1): p 411-419 [11] Gini George, Jeya Jothi (2015), "In vitro screening of antibacterial and antifungal activity of Marsilea quadrifolia (Marsileaceae) Linn extract" American Journal of Phytomedicine and Clinical Therapeutics 3(4): p 313-329 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an [12] Hamid Reza Ghorbani (2017), "Biosynthesis of nanosilver particles using extract of Salmonella typhirium" Arabian Journal of Chemistry 10(2): p 1699-1702 [13] Jose Ruben Morones, et al (2005), "The bactericidal effect of silver nanoparticles" Nanotechnology 16(10): p 2346-2353 [14] Jun Sung Kim, et al (2007), "Antimicrobial effects of silver nanoparticles" Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine 3(1): p 95-101 [15] Karla Chaloupka, et al (2010), ''Nanosilver as a new generation of nanoproduct in biomedical applications'' Trends Biotechnol 28(1): p 580-588 [16] Monalisha Rath, et al (2014), “Synthesis of silver nano particles from plant extract and its application in cancer treatment: a review” International journal of plant, animal and environmental sciences 4(3): p 137-145 [17] Ramezan Ali Ataee, et al (2014), "Determination of vancomycin minimum inhibitory concentration for ceftazidime resistant Streptococcus pneumoniae in Iran" [18] Shahid Ullad Khan, et al (2018), "Nanosilver: new ageless and versatile biomedical therapeutic scaffold" International Journal of Nanomedicine 13: p 733762 [19] Shana Kelley, Ted Sargent (2012), Introduction to Nanotechnology: The New Science of Small, The Great Courses [20] Shani Raj, et al (2018), ''Green synthesis and characterization of silver nanoparticles using Enicostemma axillare (Lam.) leaf extract'' Biochemical and Biophysical Research Communications 503(4): p 2814-2819 [21] Susan W P Wijnhoven, et al (2009), "Nano-silver - A review of available data and knowledge gaps in human and environmental risk assessment" Nanotoxicology 3(2): p 109-138 [22] Tikam Chand Dakal, et al (2016) "Mechanistic basis of antimicrobial actions of silver nanoparticles" Frontiers in Microbiology 7: p 1-15 [23] Washington Luiz Olani, et al (2015), "Development of a nanocomposite of polypropylene with biocide action from silver nanoparticles" Journal of Applied Polymer Science 132(29): p 148 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an [24] Singh, B N., Rawat, A K S., Bhagat, R M., & Singh, B R (2015) Black tea: Phytochemicals, cancer chemoprevention, and clinical studies Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 57(7), 1394–1410 doi:10.1080/10408398.2014.994700 [25] Darvesh, A S., & Bishayee, A (2013) Chemopreventive and Therapeutic Potential of Tea Polyphenols in Hepatocellular Cancer Nutrition and Cancer, 65(3), 329–344 doi:10.1080/01635581.2013.767367 [26] PVP Protective Mechanism of Ultrafine Silver Powder Synthesized by Chemical Reduction Processes Zongtao Zhang, Bin Zhao, and Liming Hu Technical Institute of Chemistry and Physics, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, P.R China Các báo internet [27] https://www.academia.edu/3887758/TONG_QUAN_TRA_XANH truy cập vào ngày 26/01/2020 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn