(Luận văn) nghiên cứu giám định một số loài giổi ăn hạt (michelia spp ) ở việt nam bằng chỉ thị hình thái và phân tử

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP TRẦN THỊ THU HIỀN lu an va NGHIÊN CỨU GIÁM ĐỊNH MỘT SỐ LOÀI GIỔI ĂN HẠT n (Micheliaspp.) Ở VIỆT NAM BẰNG CHỈ THỊ HÌNH THÁI tn to p ie gh VÀ PHÂN TỬ oa nl w d CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC lu 42 02 01 u nf va an M SỐ ll LUẬN VĂN THẠC SỸ CÔNG NGHỆ SINH HỌC oi m z at nh NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: z PGS TS VŨ QUANG NAM @ m co l gm PGS TS BÙI VĂN THẮNG an Lu n va Hà Nội – 2018 ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, hướng dẫn khoa học giảng viên PGS.TS Vũ Quang Nam PGS.TS Bùi Văn Thắng – Viện Công nghệ sinh học trường Đại học Lâm nghiệp Các nội dung nghiên cứu, kết nêu đề tài trung thực chưa công bố nghiên cứu khác Luận văn sử dụng thông tin, số liệu từ báo nguồn tài lu an liệu tác giả khác có trích dẫn thích nguồn gốc đầy đủ va n Nếu nội dung nghiên cứu trùng lặp với cơng trình nghiên tn to cứu khác cơng bố, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tuân thủ ie gh kết luận đánh giá luận văn hội đồng khoa học p N i g y th g d oa nl w Người cam đoan ll u nf va an lu oi m Trần Thị Thu Hiền z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN lu an n va p ie gh tn to Trong suốt trình học tập nghiên cứu trường Đại học Lâm nghiệp, thân l nh hội nhiều kiến thức qu báu nhận quan tâm, giúp đ từ phía nhà trường, gia đình bạn b đồng nghiệp Tơi xin gửi lời cảm n chân thành đến toàn th qu Thầy Cơ giáo trong, ngồi nhà trường, đến gia đình, bạn b đồng nghiệp ủng hộ, giúp đ , tạo điều kiện vật chất, tinh thần cho suốt thời gian vừa qua Luận văn tốt nghiệp hỗ trợ phư ng diện từ đề tài nghiên cứu khoa học c bản, tài trợ Quỹ Phát tri n khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED), giai đoạn 2017 – 2020, Mã số: 106.03– 2017.16 PGS.TS Vũ Quang Nam làm Chủ trì với tên “Nghiên cứu giám định loài Giổi hạt Việt Nam (Michelia spp.) bằ g phươ g ph p hì h thái, phân tử v si h th i” Tôi xin chân thành cảm n giúp đ qu báu đó! Tơi xin bày tỏ lòng biết n sâu sắc tới giáo viên hướng dẫn: PGS.TS Vũ Quang Nam PGS.TS Bùi Văn Thắng – Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp hướng dẫn, bảo tạo điều kiện thuận lợi giúp đ từ hình thành tưởng, q trình thực hồn thành đề tài nghiên cứu khoa học Đặc biệt, xin cảm n cô giáo Th.S Nguyễn Thị Hải Hà cô giáo Th.S Nguyễn Thị Th Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp trực tiếp hướng dẫn tơi thực thí nghiệm phân tử, phân tích số liệu đ luận văn hồn thành Mặc dù có nhiều cố gắng, đề tài nghiên cứu khoa học h n khơng tránh khỏi nh ng thiếu sót Kính mong nhận đóng góp kiến qu Thầy Cơ giáo, bạn b đồng nghiệp đ đề tài nghiên cứu khoa học tơi hồn thiện h n Tơi xin trân trọng cảm n! d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z @ l gm N i g y th g Học vi n m co an Lu Trần Thị Thu Hiền n va ac th si iii MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi lu an DANH MỤC CÁC HÌNH vii n va Đ T VẤN ĐỀ tn to Chƣơng TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU ie gh 1.1 Khái quát đối tượng nghiên cứu p Ng h Ng (Magnolioideae)……………………………………5 nl w h (Magnoliaceae) d oa 1.1.3 Chi iổi (Michelia L.) hạt (Michelia spp.) an lu Lo i iổi u nf va 1.2 Tổng quan DNA mã vạch (DNA barcode) 12 ll iới thiệu DNA ã vạ h 12 bả ủ trì h tự DNA ã vạ h…………………… 14 oi đặ điể m C z at nh M t số o us đượ sử dụ g tro g phươ g ph p DNA ã vạ h thự vật 16 1.3 Một số DNA mã vạch sử dụng nghiên cứu thực vật 19 z gm @ 1.4 Một số thành tựu nghiên cứu DNA mã vạch thực vật 24 l 1.5 Một số nghiên cứu loài Giổi ăn hạt 25 M t số ghiê ứu go i ướ …………………………………… 25 M t số ghiê ứu Việt N m co an Lu 26 n va ac th si iv Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Nội dung nghiên cứu 30 2.2 Vật liệu nghiên cứu 30 2.3 Hóa chất thiết bị sử dụng nghiên cứu 31 ó 2.3 hất 31 2.3.2 Các thiết bị sử dụ g tro g ghiê ứu 32 2.4 Phư ng pháp nghiên cứu 33 lu 2.4 hươ g ph p ghiê ứu hì h th i v vị trí ph 2.4 hươ g ph p ghiê ứu ph oại 33 tử 34 an Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 va n 3.1 Kết nghiên cứu giám định loài Giổi ăn hạt 39 oại v hệ thố g h thự vật hi iổi ………………………39 gh tn to 3.1.1 Về ph ie 3.1.2 Đặ trư g bả hì h th i ủ ủ p 3.1.3 Đặ điể hì h th i bả o i tro g hi iổi ………… 42 o i iổi hạt……………………42 nl w 3.1.4 Khóa tra phân loại cho m t số loài Giổi Việt Nam 52 d oa 3.2 Kết nghiên cứu giám định loài Giổi ăn hạt thị phân tử 53 đị h v ph hạt 53 tí h trì h tự u eotide ủ đoạ DNA ã vạ h 58 u nf 3.2.3 X y dự g o i iổi va an 3.2.2 X đị h đoạ DNA ã vạ h ủ lu 3.2.1 Kết x y ph t si h hủ g oại 67 ll oi m KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 71 z at nh Kết luận 71 Kiến nghị 72 z m co l gm @ TÀI LIỆU THAM KHẢO an Lu n va ac th si v DANH MỤC BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết đầy đủ Từ viết tắt lu an n va base pair CBOL Consortium for the Barcode of Life CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA Deoxyribonucleic acid EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid ITS Internal Transcribed Spacer kb kilobase NCBI National Centre for Biotechnology Information PCR Polymerase Chain Reaction PVP Polyvinyl pyrrolidone ie gh tn to Bp ribosome deoxyribonucleic acid p rDNA Ribonuclease d Rubilose – 1,5 – bisphosphate cacboxylase/oxygenase an lu RUBISCO oa nl Rnase Ribonucleic acid w RNA Sodium dodecyl sulphate TAE Tris – Acetic acid – EDTA TE Tris – Ethylenediaminetetraacetic acid UV Ultra Violet v/p vòng/phút VNTR Variable number tandem repeat RFLP Restriction Fragment Length Polymorphisms LSC Large single – copy region SSC Small single – copy region ll u nf va SDS oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC CÁC BẢNG T n bảng TT Trang lu an n va 2.1 Các mẫu Giổi ăn hạt Việt Nam nghiên cứu 30 2.2 Thành phần đệm tách A 31 2.3 Thành phần đệm tách B 32 2.4 Thành phần đệm TE (TE Buffer) 32 2.5 Trình tự thông tin cặp mồi nghiên cứu 36 2.6 Thành phần phản ứng PCR 36 2.7 Chu kỳ phản ứng PCR 37 3.1 Kết đo hàm lượng độ mẫu DNA tổng số 54 tn to 1.1 Phân bố số loài thuộc chi Giổi Việt Nam Trình tự nucleotide gen atpB – rbcL phân lập từ mẫu Giổi ăn hạt 59 p ie gh 3.2 61 d oa nl w Kết so sánh trình tự nucleotide đoạn gen atpB – rbcL 3.3 mẫu Giổi ăn hạt với trình tự nucoleotide gen atpB – rbcL lồi Michelia alba với mã số Genbank AB623323.1 62 Kết so sánh trình tự nucleotide đoạn gen trnH – psbA 3.5 mẫu Giổi ăn hạt nghiên cứu với trình tự nucoleotide gen trnH – psbA loài Magnolia insignis (KY921716.1) 63 ll u nf va an lu Trình tự nucleotide gen trnH – psbA phân lập từ mẫu Giổi ăn hạt 3.4 oi m z at nh z Kết so sánh trình tự nucleotide đoạn gen trnL intron mẫu Giổi ăn hạt với trình tự nucoleotide gen trnL intron loài 3.6 Michelia champaca (AY009041.1), Michelia baillonii gm @ 64 (AY009042.1), Magnolia laevifolia (MF583748.1) l So sánh trình tự nucleotide gen trnL – trnF mẫu Giổi ăn hạt nghiên cứu m co 3.7 66 an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC HÌNH TT 1.1 3.1A 3.1B Tên hình Trang Cây Giổi xanh rừng tự nhiên Kon Hà Nừng Gia Lai 10 Một phần Phylogeny hình thái th mối quan hệ phát sinh 41 loài Michelia Một phần Phylogeny phân tử (ndhF sequences) th 41 mối quan hệ phát sinh loài Michelia lu an 3.2 Cành mang hoa loài Giổi ăn hạt (Michelia tonkinensis) 42 3.3 Một số đặc trưng hình thái chi Michelia L 43 n va gh tn to 3.4A 44 Michelia L Một số đặc trưng hình thái vết sẹo loài thuộc chi 44 Michelia L p ie 3.4B Hình thái non chồi búp loài thuộc chi 3.5 3.6 Hình thái c quan sinh sản lồi thuộc chi Michelia 3.7 Hình thái lồi Giổi ăn hạt (Michelia tonkinensis A.Chev) Giản đồ phát sinh chồi cành syllepsis prolepsis nl w 45 d oa 46 an lu 49 Đặc m hình thái nhụy hoa số loài 53 ll u nf Giổi ăn hạt va 3.8 54 z at nh gel agarose 1% oi 3.10 DNA tổng số mẫu Giổi ăn hạt tách chiết điện di m 3.9 Sản phẩm PCR nhân đoạn gen atpB – rbcL điện di 55 z gel agarose 1% @ gel agarose 1% 56 m co l Sản phẩm PCR nhân đoạn gen trnL intron điện di gel agarose 1% 57 an Lu 3.12 Sản phẩm PCR nhân đoạn gen trnH – psb A điện di gm 3.11 n va ac th si viii 3.13 3.14 3.15 3.16 lu an 3.17 Sản phẩm PCR nhân đoạn gen trnL – trn F điện di 58 gel agarose 1% Cây phân loại dựa đoạn gen atpB – rbcL xây dựng 67 MEGA (phư ng pháp Neighbor – joining) Cây phân loại dựa đoạn gen trnH – psbA xây dựng 68 MEGA (phư ng pháp Neighbor – joining) Cây phân loại dựa đoạn gen trnL intron xây dựng 69 MEGA (phư ng pháp Neighbor – joining) Cây phân loại dựa đoạn gen trnL – trnF xây dựng 39 n va MEGA (phư ng pháp Neighbor – joining) p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Đ T VẤN ĐỀ Lí chọn đề tài Đất nước Việt Nam tiếng với nhiều hệ sinh thái môi trường sống đa dạng, thiên nhiên ưu đãi có khí hậu nhiệt đới nóng ẩm gió mùa, đất đai màu m , n i có điều kiện tự nhiên khí hậu thích hợp cho nhiều lồi cối phát tri n Một quốc gia có hệ thực vật vô phong phú mang lại nhiều giá trị kinh tế cao, có lồi Giổi ăn hạt, nh ng loài mang nhiều giá trị không nghiên cứu khoa học mà lu thực tiễn đời sống an Loài Giổi ăn hạt đề cập đến số tài liệu phân loại va n thực vật, thuốc, lâm đặc sản, Trong tài liệu đó, chúng gh tn to nhắc đến lồi có phân bố khu vực miền núi phía Bắc ie tỉnh: Hịa Bình, Phú Thọ, V nh Phúc, Tuyên Quang, Hà T nh số tỉnh p khác Việt Nam Loài Giổi ăn hạt nh ng loài nl w số c quan tổ chức nghiên cứu phát tri n bảo tồn như: Vườn d oa quốc gia Bến En (Thanh Hóa), Vườn quốc gia Xuân S n (Phú Thọ), Vườn an lu quốc gia Tam Đảo (V nh Phúc) hay Sở Khoa học Cơng nghệ tỉnh Hịa u nf va Bình, v.v… Từ nh ng nghiên cứu trên, cộng thêm thông tin từ tài liệu liên quan Giổi ăn hạt lồi có giá trị, có th dùng làm thuốc ll oi m gia vị, nghiên cứu, phát tri n Tuy nhiên, nh ng nghiên cứu z at nh hay phát tri n nguồn gen loài Giổi dừng lại quy mô hẹp, chưa đưa nh ng khuyến cáo c sở khoa học cần thiết cho việc bảo tồn z phát tri n nguồn gen quý loài quy mô rộng H n n a, hầu hết @ l gm nguồn hạt Giổi xuất phát từ số hộ gia đình số địa phư ng, m co mang tính tự phát, nhỏ lẻ đến từ thu gom lẻ tẻ số bà vùng núi cao; nhu cầu hạt Giổi ngày lớn an Lu Trong hầu hết tài liệu thống khơng thống thực n va ac th si 67 Michelia có trình tự gen atpB – rbcL, trnH – psbA, trnL intron trnL – trnF công bố ngân hàng Genbank (NCBI) Dựa vào đoạn trình tự nucleotide gen atpB – rbcL, trnH – psbA, trnL intron trnL – trnF, phư ng pháp Neighbor – joining (MEGA) xây dựng phát sinh tư ng ứng cho đoạn gen th mối quan hệ gi a loài nghiên cứu với số lồi cơng bố ngân hàng Genbank, sau: lu an n va p ie gh tn to d oa nl w u nf va an lu ll Hình 3.14 Cây phân loại dựa tr n đoạn gen atpB – rbcL xây dựng oi m MEGA (phƣơng pháp Neighbor – joining) z at nh Cây phát sinh xây dựng dựa trình tự nucleotide gen atpBrbcL (Hình 3.13) cho thấy mẫu Mi.t.HN, Mi.t.HB, Mi.t.TH, Mi.t.GL z gm @ (loài Michelia tonkinensis) mẫu Mi.c.GL (lồi Michelia citrata) phân nhóm với lồi Michelia alba (AB623323.1), có tỉ lệ nucleotide tư ng l m co đồng 100% Các loài Magnalia insignis (KY921716.1), Michelia odora (JX280398.1) phân nhóm riêng lồi Magnalia sieboldii an Lu (AB055575.1) nhóm Kết cho thấy đoạn trình tự gen atpB – n va ac th si 68 rbcL phân tích có chiều dài 399 nucleotide giống 100% gi a loài Michelia tonkinensis, Michelia citrata Michelia alba nên thị khơng có đặc trưng cho lồi lu an n va p ie gh tn to nl w oa Hình 3.15 Cây phân loại dựa tr n đoạn gen trnH – psbA xây dựng d MEGA (phƣơng pháp Neighbor – joining) lu va an Xây dựng phát sinh dựa trình tự nucleotide gen trnH – psbA u nf (Hình 3.14) cho thấy mẫu Mi.t.HN, Mi.t.HB, Mi.t.TH, Mi.t.GL (loài ll Michelia tonkinensis) phân nằm nhóm, giống 100% khác oi m z at nh biệt với lồi cịn lại Michelia citrata, Michelia alba, Magnolia insignis Magnolia utilis; loài khác nh u phân thành nhóm khác z Kết cho thấy đoạn trình tự gen trnH – psbA phân tích đặc trưng @ gm cho lồi nên có th sử dụng trình tự gen trnH – psbA làm trình tự DNA mã m co l vạch cho việc định danh lồi Michelia tonkinensis; cịn lồi Michelia citrata tiếp tục nghiên cứu thị với số mẫu nhiều h n có th đưa kết an Lu luận xác h n n va ac th si 69 lu Kết xây dựng phát sinh dựa trình tự nucleotide gen trnL an va intron (Hình 3.15) gen trnL – btrnF (Hình 3.16) n Hình 3.16 Cây phân loại dựa tr n đoạn gen trnL intron xây dựng to p ie gh tn MEGA (phƣơng pháp Neighbor – joining) d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh Hình 3.17 Cây phân loại dựa tr n đoạn gen trnL – trnF xây dựng MEGA (phƣơng pháp Neighbor – joining) z gm @ Kết cho thấy mẫu nghiên cứu Mi.t.HN, Mi.t.HB, Mi.t.TH Mi.t.GL thuộc loài Michelia tonkinensis Michelia citrata phân l m co thành nhóm với lồi Magnolia insignis Magnolia balansae Trình tự nucleotide gen trnL intron gen trnL – trnF có mức độ tư ng đồng cao gi a an Lu loài chi Michelia Magnolia n va ac th si 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1) Đã xác định phân loại, hệ thống học thực vật chi Giổi (Michelia L.) Mơ tả đặc m hình thái c loài chi Giổi, đặc biệt số đặc trưng c quan sinh sản hoa, hạt Giổi Xác định tên khoa học, tên đồng ngh a (synonym) loài Giổi ăn hạt xác định cung cấp thông tin thực vật học 02 loài Giổi mà hạt dùng làm gia vị, làm thuốc Việt Nam, là: loài Giổi ăn hạt (Michelia lu an tonkinensis) loài Giổi xanh to (Michelia citrata) n va 2) Đưa minh chứng có khác biệt hình thái gi a loài Giổi xanh tn to (Michelia mediocris) so với loài Giổi ăn hạt (Michelia tonkinensis) loài gh Giổi xanh to (Michelia citrata) nhụy dạng trụ dài, với nhiều noãn p ie rời, dạng trứng, khơng có cuống quả, khơng có eo thắt dạng “củ lạc” Từ w đó, Khóa tra phân loại cho 03 loài Michelia tonkinensis, Michelia citrata oa nl Michelia mediocris xây dựng d 3) Nhân xác định trình tự gen atpB – rbcL, trnH –psbA, lu va an trnL intron trnL – trnF mẫu Giổi ăn hạt Việt Nam thuộc lồi u nf Michelia tonkinensis lồi Michelia citrata Kích thước đoạn gen ll khác nhau: gen atpB – rbcL 399 bp, trnH – psbA 332 bp, trnL intron m oi 525 bp trnL – trnF 916bp Trình tự nucleotide gen trnH – psbA đặc z at nh trưng cho lồi, có khác biệt gi a loài chi Giổi Từ kết nghiên z cứu có th sử dụng trình tự gen trnH – psbA làm thị đ giám định loài/ gm @ loài Giổi ăn hạt Việt Nam l 4) Xây dựng phát sinh chủng loại dựa kết phân tích đoạn m co gen atpB – rbcL, trnH – psbA, trnL intron trnL – trnF, th mối an Lu quan hệ loài Giổi ăn hạt Việt Nam (Michelia tonkinensis Michelia n va ac th si 71 citrata) với số loài thuộc chi Michelia Magnolia công bố ngân hàng gen NCBI 5) Từ kết nghiên cứu giám định loài Giổi ăn hạt thị hình thái phân tử, bước đầu cung cấp c sở d liệu khoa học phục vụ cho công tác bảo tồn phát tri n loài/các loài Giổi ăn hạt Việt Nam Kiến Nghị 1) Tiếp tục có nh ng nghiên cứu nhằm hồn thiện, cung cấp cơng cụ xác việc giám định nhiều h n n a loài Giổi ăn hạt Việt lu Nam đặc m hình thái an n va 2) Tiếp tục nghiên cứu đ xác định thêm thị DNA mã vạch DNA mã vạch xác định ngân hàng gen quốc tế NCBI đ cung gh tn to phục vụ cho việc giám định lồi Giổi ăn hạt Đăng k mã số trình tự p ie cấp c sở d liệu trình tự DNA lồi Giổi ăn hạt Việt Nam w Bởi ngân hàng gen NCBI chưa có trình tự DNA mã vạch d oa nl cơng bố lồi Michelia tonkinensis Michelia citrata ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Tiến Bân (2003) D h ụ o i thự vật Việt N , NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Tiến Bân (2007), S h Đỏ Việt Nam, phần II – Thực vật NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ, Hà Nội, 268 – 276 Võ Văn Chi (2003); Từ điể thự vật thô g dụ g Tập (2), từ G – Z; NXB Khoa học kỹ thuật lu Phạm, Mỹ Chinh (2018)."Nghiên cứu thành phần hóa h c hoạt tính an sinh h c tinh dầu m t số b phận Giổi Xanh (Michelia mediocris va n Dandy) tỉnh Quảng Bình Trần Hoàng Dũng, Lưu Phư ng Nam, Huỳnh Văn Hiếu (2014), “Mã vạ h DNA v hướ g ghiê ứu ứ g dụ g Việt N ie gh tn to ”, Hội thảo quốc p tế: hợp tác khoa học cơng nghệ phát tri n bền v ng nông nghiệp nl w Lâm Đồng – Tây Nguyên Phạm Hoàng Hộ, (1991, 1999) Cây cỏ Việt Nam, tập –3 NXB trẻ, Tp d oa Bùi Văn Hư ng, Lưu Đàm Ngọc Anh, Nguyễn Thiên Tao, Từ Bảo Ngân (2014), Nghiê u nf va an lu Hồ Chí Minh ứu ph bố si h th i si h h v hiệ trạ g bảo tồ ll o i iổi chanh –Michelia citrata (noot & chalermglin) xã Tùng oi m ủ z at nh Vài, huyện quân Ba, tỉnh Hà Giang Tạp chí khoa học công nghệ ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ,Tập 30, Số 6S, – Nguyễn Tiến Hiệp, Nguyễn Trung Thành, Từ Bảo Ngân (2014), “Ghi z t số o i thu hi Mi he i L h Ng ” khu bảo tồn Bát l gm hậ @ m co Đại S n, huyện Quảng Bạ, tỉnh Hà Giang, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học tự nhiên & Công nghệ, tập 30, số ,61 – 70 an Lu Nguyễn Quang Hiếu, Nguyễn Tiến Hiệp, Từ Bảo Ngân, Nguyễn Sinh n va ac th si Khang, (2015), “ Kết nghiên cứu bướ đầu thành phần loài (M g o i e e Juss )” tỉnh Hà Giang đánh giá thu c h Ng tình trạng bảo tồn chúng, Hội nghị Khoa học toàn quốc lần thứ sáu Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Hà Nội,: 130 – 136 10 Triệu văn Hùng (2007) “L sản gỗ Việt N ” dự án hỗ trợ chuyên ngành lâm sản ngồi gỗ Việt Nam 11 Nguyễn Đình Hưng, Nguyễn Bá (1991 1995), Cấu tạo giải phẫu gỗ m t lu số đại diện h Ng c lan (magnoliaceae), h hồi (illiciaceae) ghi an đặ điểm phân loại Kết nghiên cứu khoa học công nghệ lâm va n nghiệp 1991 – 1995 – Tr.79 trưở g ủ iổi x ie gh tn to 12 Nguyễn Đức Kiên, Ngơ Văn Chính (2009); “Kết đ h gi si h h Re g trê hì h rừ g trồ g” Trung p tâm Nghiên cứu Giống rừng Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2008), Cơ sở di truyề h nl w 13 phân tử d oa tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội u nf va Hà Nội an lu 14 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 15 Vũ Quang Nam, Xia Nian – He (2010), “Bổ sung loài Michelia Fulva ll ” Tạp Chí sinh học, 32(2): 63 – 67 z at nh vật Việt N oi m Chang et B.L Chen (h M c Lan – Magonoliaceae Juss.) cho hệ thực 16 Vũ Quang Nam, Xia Nianhe, (2011), Bổ sung loài Michelia citrata z @ (Noot & Chalermglin) Q N Vu & N H Xia(h M c lan– Magnoliaceae l gm Juss.) cho hệ thực vật Việt Nam, Tạp chí sinh học, 33(4), 42 – 44 m co 17 Vũ Quang Nam, (2012) M t số dẫn liệu loài giổi hạt thu c h M c lan (Magnoliaceae) Việt Nam, Tạp chí nơng nghiệp phát tri n an Lu nông thôn, 3: 86 – 91 n va ac th si 18 Vũ Quang Nam (2014) Khóa tra phân loại: Minh chứng từ h Ng c lan Việt Nam Tạp chí Nơng nghiệp Phát tri n nông thôn, 11: 130 – 136.) 19 Vũ Quang Nam, Đào Ngọc Chư ng 2017 M t số loài giổi hạt (Michelia spp.) Việt Nam Kỷ yếu Hội thảo quốc gia Sinh thái Tài nguyên sinh vật, lần thứ Hà Nội, trang 283 – 288 20 Nguyễn Hồng Ngh a & cs (2010), h tí h đ dạng di truyền loài Giổi xươ g (Michelia baillonii (Pierre) Fin.et Gagnep) thị phân tử Rapd cpSSR, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam lu 21 Nhiều tác giả (2004), Cây thuố v đ ng vật làm thuốc Việt Nam, tập an I, NXB khoa học kỹ thuật – Hà Nội, 872 – 873 va n 22 Lê Đình Phư ng (2013), “Nghiên cứu m t số đặ điểm sinh vật h c kỹ to o i iổi (Michelia tonkinensis A.Chev)” vường quốc gia Bến Én, tỉnh Thanh Hóa, Luận văn thạc sỹ khoa học ie gh tn thuật gieo ươ p Lâm Nghiệp, trường đại học Lâm Nghiệp thự vật; NXB Đại học sư phạm oa nl w 23 Hoàng Thị Sản (2006); Phân oại h d 24 Bùi Văn Thắng, Nguyễn Thị Hải Hà, Vũ Quang Nam, Nguyễn Thế Đại, định m t số o i Nư an lu Phan Văn Quynh, Nguyễn Ngọc Ánh (2017) i u nf va Thanh Hóa dẫn liệu hình thái phân tử Tạp chí Khoa học ll Công nghệ Lâm nghiệp (Trường ĐHLN, tháng 2017), 3: – 17 Nguyễn Ngh a Thìn (2007), C oi m 25 phươ g ph p ghiê ứu thực vật, z at nh NXB Đại học Quốc gia Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG NƢỚC NGOÀI z Baharum, S.N (2012), “Application of 16s rDNA and cytochrome b gm @ 26 ribosomal markers in studies of lineage and fish populations structure l 27 m co of aquatic species”, Molecular biology reports, 39 (5), pp 5225 – 5232 Barcodes, P.P (2007), “Wanted: a barcode for plants”, Science, 318 an Lu (5848), pp 190 n va ac th si Bhargava, M and Sharma A (2013), “DNA barcoding in plants: 28 Evolution and applications of in silico approaches and resources”, Molecular phylogenetics and evolution, 67 (3), pp 631– 641 Brown, B., Emberson R.M., and Paterson A.M (1999), “Mitochondrial 29 COI and II provide useful markers for Wiseana (Lepidoptera: Hepialidae) species identification”, Bulletin of Entomological Research, 89 (04), pp 287 – 293 Burgess, K.S., Fazekas A.J., et al (2011), “Discriminating plant 30 lu species in a local temperate flora using the rbcL + matK DNA an barcode”, Methods in Ecology and Evolution, (4), pp 333 – 340 va n 31 Borsch T., Hilu K W., Quandt D., Wilde V., Neinhuis C., Barthlott to resolved phylogeny of basal angiosperms”, J Evol Biol (6), pp 558 – p ie gh tn W (2003), “Noncoding plastid trnT – trnF sequeces reveal a well Chen, B.L 1987 Four new species of Michelia from Yunnan, China nl w 32 576 d oa Acta Sci Nat Univ Sunyatseni 3: 86 – 91 Chase, M.W., Cowan R.S., et al (2007), “A proposal for a an lu 33 295 – 299 ll u nf va standardised protocol to barcode all land plants”, Taxon, 56 (2), pp Chase, M.W., Salamin N., et al (2005), “Land plants and DNA oi m 34 z at nh barcodes: short – term and long – term goals”, Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences, 360 (1462), @ Chen, S., Yao H., et al (2010), “Validation of the ITS2 region as a novel l gm 35 z pp 1889 – 1895 pp e8613 an Lu 36 m co DNA barcode for identifying medicinal plant species”, PloS one, (1), Chiou, S –J., Yen J –H., Fang C –L., Chen H –L., and Lin T –Y n va ac th si (2007), “Authentication of medicinal herbs using PCR – amplified ITS2 with specific primers”, Planta medica, 73 (13), pp 1421 – 1426 Clegg, M.T., Gaut B.S., Learn G.H., and Morton B.R (1994), “Rates 37 and patterns of chloroplast DNA evolution”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 91 (15), pp 6795 – 6801 Fazekas, A.J., Burgess K.S., et al (2008), “Multiple multilocus DNA 38 barcodes from the plastid genome discriminate plant species equally well”, PLoS One, (7), pp e2802 Fazekas, A.J., Kesanakurti P.R., et al (2009), “Are plant species lu 39 an inherently harder to discriminate than animal species using DNA va n barcoding markers?”, Molecular Ecology Resources, (s1), pp 130 – to gh tn 139 Ford, C.S., Ayres K.L., et al (2009), “Selection of candidate coding DNA barcoding regions for use on land plants”, Botanical Journal of p ie 40 nl w the Linnean Society, 159 (1), pp 1– 11 Group, C.P.W., Hollingsworth P.M., et al (2009), “A DNA barcode d oa 41 an lu for land plants”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 42 u nf va 106 (31), pp 12794 – 12797 Hebert, P.D., Cywinska A., and Ball S.L (2003), “Biological ll oi m identifications through DNA barcodes”, Proceedings of the Royal 43 z at nh Society of London B: Biological Sciences, 270 (1512), pp 313 – 321 Hebert, P.D., Ratnasingham S., and De Waard J.R (2003), “Barcoding z @ animal life: cytochrome c oxidase subunit divergences among l gm closely related species”, Proceedings of the Royal Society of London 44 m co B: Biological Sciences, 270 (Suppl 1), pp S96 – S99 Hollingsworth, M.L., Andra Clark A., et al (2009), “Selecting an Lu barcoding loci for plants: evaluation of seven candidate loci with n va ac th si species – level sampling in three divergent groups of land plants”, Molecular Ecology Resources, (2), pp 439 – 457 Hollingsworth, P.M (2007), “DNA barcoding: potential users”, 45 Genomics, Society and Policy, (2), pp 44 – 47 Hollingsworth, P.M (2011), “Refining the DNA barcode for land 46 plants”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 108 (49), pp 19451 – 19452 Hollingsworth, P.M., Graham S.W., and Little D.P (2011), “Choosing 47 lu and using a plant DNA barcode”, PloS one, (5), pp e19254 an 48 Hu, H.H (1940) & Cheng W.C (1951) Paramichelia and va n Paramanglietia, a new genus of Magnoliaceae Sunyatsenia 4: 142 – to gh tn 145; 1(3 – 4): 255 –256 Karp, A., Seberg O., and Buiatti M (1996), “Molecular techniques in the assessment of botanical diversity”, Annals of Botany, 78 (2), pp p ie 49 nl w 143 – 149 Kaur, S (2015), “DNA Barcoding and Its Applications”, International d oa 50 u nf 51 va – 604 an lu Journal of Engineering Research and General Science, (2), pp 602 Kolodner, R and Tewari K (1979), “Inverted repeats in chloroplast ll oi m DNA from higher plants”, Proceedings of the National Academy of 52 z at nh Sciences, 76 (1), pp 41 – 45 Kress, W.J and Erickson D.L (2007), “A two-locus global DNA z @ barcode for land plants: the coding rbcL gene complements the nonLahaye, R., Van Der Bank M., et al (2008), “DNA barcoding the m co 53 l gm coding trnH – psbA spacer region”, PLoS one, (6), pp e508 floras of biodiversity hotspots”, Proceedings of the National Academy an Lu of Sciences, 105 (8), pp 2923 – 2928 n va ac th si 54 Law, Y.H (1979) A new genus of Magnoliaceae from China Acta Phytotax Sin 17(4): 72-74 317 – 320 and Law, Y.W (1997) Woonyoungia Law - A new genus of Magnoliaceae from China Acta Phytotax Sin 17(4): 353 – 356 55 Lee, S.Y., Ng W.L., Mahat M.N., Nazre M., and Mohamed R (2016), “DNA Barcoding of the Endangered Aquilaria (Thymelaeaceae) and Its Application in Species Authentication of Agarwood Products Traded in the Market”, PloS one, 11 (4), pp e0154631 lu 56 Li, X., Yang Y., Henry R.J., Rossetto M., Wang Y., and Chen S (2015), an “Plant DNA barcoding: from gene to genome”, Biological Reviews, 90 va n (1), pp 157 – 166 Miwa, H., Odrzykoski I.J., et al (2009), “Adaptive evolution of rbcL gh in Conocephalum (Hepaticae, bryophytes)”, Gene, 441 (1), pp 169 – tn to 57 p ie Nicolalde – Morejón, F., Vergara – Silva F., González – Astorga J., nl w 58 175 d oa and Stevenson D.W (2010), “Ch r ter-based, population-level DNA spe ies of Z i L (Z i e e: Cy d es)” an lu barcoding in Mexi 59 u nf va Mitochondrial DNA, 21 (sup1), pp 51 – 59 Nicolalde – Morejón, F., Vergara – Silva F., González – Astorga J., ll oi m Stevenson D.W., Vovides A.P., and Sosa V (2011), “A h r ter- z at nh based approach in the Mexican cycads supports diverse multigene o bi tio s for DNA b r odi g”, Cladistics, 27 (2), pp 150 – 164 z Nooteboom, H P (1985, 1993) Notes on Magnoliaceae with a revision gm @ 60 of Pachylarnax and Elmerrillia and the Malesian species of Manglietia l 61 Ole S and Gitte P (2009), “ ow m co and Michelia Blumea 31: 65 – 121; pp 391 – 401 y o i does it t ke to DNA an Lu barcode a crocus?” PloS ONE 4(2), pp.4598 n va ac th si Pang, X., Liu C., et al (2012), “Utility of the trnH – psbA intergenic 62 spacer region and its combinations as plant DNA barcodes: a meta – analysis”, PLoS One, (11), pp e48833 Schoch, C.L., Seifert K.A., et al (2012), “Nuclear ribosomal internal 63 transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 109 (16), pp 6241 – 6246 Seifert, K.A (2009), “Progress towards DNA barcoding of fungi”, lu 64 an Molecular ecology resources, (s1), pp 83 – 89 va n 65 Shaw, J., Lickey E.B., Schilling E.E., and Small R.L (2007), to noncoding regions for phylogenetic studies in angiosperms: the tortoise and the hare III”, American journal of botany, 94 (3), pp 275 p ie gh tn “Comparison of whole chloroplast genome sequences to choose nl w – 288 Shen, Y –Y., Chen X., and Murphy R.W (2013), “Assessing DNA d oa 66 an lu barcoding as a tool for species identification and data quality control”, 67 u nf va PLoS One, (2), pp e57125 Suárez – Díaz, E and Anaya-Munoz V.H (2008), “History, ll oi m objectivity, and the construction of molecular phylogenies”, Studies in z at nh History and Philosophy of Science Part C: Studies in History and Philosophy of Biological and Biomedical Sciences, 39 (4), pp 451- @ Savolainen V., and Chase M W (2003), “ A decade of progress in l gm 68 z 468 69 m co plant molecular phylogenetics”, Trends Genet, (19), pp, 717 – 724 Taberlet, P., Coissac E., et al (2007), “Power and limitations of the an Lu chloroplast trnL (UAA) intron for plant DNA barcoding”, Nucleic n va ac th si acids research, 35 (3), pp14 70 V Q N., (2017), Michelia Plants of Việt Nam Lambert Academic Publishing, Germany, pp 80 Vijayan K, and Tsou C H (2010) “DNA barcoding in plants: 71 taxonomy in a new perspective” Current scence, vol 99, pp 1530 – 1540 72 Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., Duistermaat C H., Smulders(2009), “DNA barcoding discriminates the lu noxious invasive plants species, floating pennywort an (Hydrocotyleranunculoides L.f.), from non – invasive relative” va n Molecular Ecology Resources(9), pp.1086 – 1091 Van den Berg C., Higgins W E., Dressler R L., Whitten W M., Soto gh Arenas M A., Culham A., Chase M W (2000), “A phylogenetic tn to 73 p ie analysis of Laeliinae (Orchidaceae) base on sequence data from nuclear oa nl w internal trancribed spacers (ITS) of ribosomal DNA”, Lindleyana (15), pp 96114 d Wang, W., Wu Y., Yan Y., Ermakova M., Kerstetter R., and Messing an lu 74 e e f i y of qu ti u nf va J (2010), “DNA b r odi g of the Le o o ots” BMC Plant Biology, (10), pp 205 ll Xia N H., Liu Y H and Nooteboom H P,(2008), Magnoliaceae, Flora oi m 75 (St Louis) 7, 48 – 91 z Xingfeng Zhao, Yongpeng Ma, Weibang Sun, Xiangying Wen, ADN @ 76 z at nh of China, Science Press (Beijing) & Missouri Botanical Garden Press l gm Richard Milne (2012), “High Genetic Diversity ADN Low m co Differentiation of Michelia coriacea (Magnoliaceae), a Critically Endangered Endemic in Southeast Yunnan, China”, Int J Mol Sci an Lu 13, 4396 – 4411; doi:10.3390/ijms13044396 n va ac th si Yao, H., Song J., et al (2010), “Use of ITS2 region as the universal 77 DNA barcode for plants and animals”, PloS one, (10), pp.13102 Yu, J., Xue J.H., and Zhou S.L (2011), “New universal matK primers 78 for DNA barcoding angiosperms”, Journal of Systematics and Evolution, 49 (3), pp 176 – 181 79 Yong H L., Jinlan R., Shilin C., Jingyuan S., Kun L., Dong L and Hui Y.(18 December, 2010) “Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding technique”, Journal of Medicinal Plants Research Vol lu 4(24), pp 2706 – 2709 an Zhang X, Shen S, Wu F ADN Wang Y (2017), “Inferring Genetic 80 va n Variation ADN Demographic History of Michelia yunnanensis Franch to Zhang, X.H & H.N Xia 2007 Leaf architecture of subtribe 81 Markers”, Front Plant Sci 8:583 doi: 10.3389/fpls.2017.00583 p ie gh tn (Magnoliaceae) from Chloroplast ADN Sequences ADN Microsatellite nl w Micheliinae (Magnoliaceae) from China and its taxonomic significance d oa Acta Phytotax Sin 45(2): 167 – 190 Zhang, X.H & H.N Xia 2007 A karyomorphological study of the an lu 82 52 – 63 ll u nf va genera Michelia and Manglietia (Magnoliaceae) Caryologia 60(1-2): Zhang, Z.R., L.C Luo, D Wu & Z.Y Zhang 2009 Two genetically oi m 83 z at nh distinct units of Sinomanglietia glauca (Magnoliaceae) detected by chloroplast PCR – SSCP J Sys Evol 47(2): 110 – 114 z m co l gm @ an Lu n va ac th si