BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP NGUYỄN THỊ THỈNH NGHIÊN CỨU ĐỊNH DANH LOÀI HOA TRỨNG GÀ YÊN TỬ (MAGNOLIA SP.) BẰNG CHỈ THỊ HÌNH THÁI VÀ ADN MÃ VẠCH CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS VŨ ĐÌNH DUY PGS.TS VŨ QUANG NAM Hà Nội - 2021 i LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học TS Vũ Đình Duy PGS TS Vũ Quang Nam Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Nếu nội dung nghiên cứu trùng lặp với công trình cơng bố, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tuân thủ kết luận đánh giá luận văn Hội đồng khoa học Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Người thực Nguyễn Thị Thỉnh ii LỜI CẢM ƠN Đề tài nghiên cứu thực phịng thí nghiệm Viện Sinh thái Nhiệt đới, Trung tâm Nhiệt đới Việt – Nga Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, trường Đại học Lâm nghiệp Qua đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo Viện tạo điều kiện để công việc chuyên môn đề tài tiến hành thuận lợi Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Đình Duy PGS.TS Vũ Quang Nam, hai người thầy tận tình hướng dẫn tơi q trình hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn góp ý, dẫn, chia sẻ kinh nghiệm cán nghiên cứu thuộc Viện Sinh thái Nhiệt đới, Trung tâm Nhiệt đới Việt – Nga Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, trường Đại học Lâm nghiệp giúp đỡ tơi nhiều q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn cán sở đào tạo Sau đại học trường Đại học Lâm nghiệp tận tâm truyền đạt kiến thức cho tơi suốt khóa học Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy cô làm việc giảng dạy Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ q trình học tập Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình người thân bên tôi, động lực để vượt qua khó khăn để hồn thành luận văn Luận văn hỗ trợ kinh phí đề tài mã số GUST.STS.ĐT2019 – ST01 106.03-2017.16 Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Học viên Nguyễn Thị Thỉnh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN………………………………………………………………………………ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT……………………………………………… ……….vi DANH MỤC CÁC BẢNG………………………………………………………… ……vii DANH MỤC CÁC HÌNH……………………………………………………………… viii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Đặc điểm hình thái vị trí phân loại loài thuộc chi Ngọc lan (Magnolia L.) 1.1.1 Đặc điểm hình thái loài thuộc chi Ngọc lan (Magnolia L.) 1.1.2 Phân họ Ngọc lan (Magnolioideae) được phân loại theo hai tông 1.2 Tổng quan mã vạch ADN (DNA barcodes) 1.2.1 Giới thiệu mã vạch ADN 1.2.2 Các đặc điểm trình tự mã vạch ADN 1.2.3 Một số vùng gen được sử dụng làm mã vạch ADN thực vật 1.3 Ứng dụng mã vạch ADN nghiên cứu di truyền tiến hóa loài chi Magnolia 12 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Phương pháp khảo sát thực địa thu thập mẫu vật 15 2.2 Địa điểm thực nghiên cứu 16 2.3 Hóa chất thiết bị sử dụng nghiên cứu 17 2.3.1 Hóa chất 17 2.3.2 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 17 2.4 Phương pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm 17 2.4.1 Sơ đồ nghiên cứu 17 iv 2.4.2 Tách chiết ADN tổng số 18 2.4.3 Định lượng ADN tổng số 18 2.4.4 Trình tự mồi 19 2.4.5 Nhân dịng đoạn gen đích kỹ thuật PCR 20 2.4.6 Phương pháp điện di ADN gel agrose 1,5% 20 2.4.7 Giải trình tự nucleotide 21 2.4.8 Hiệu chỉnh trình tự nucleotide 21 2.4.9 Phân tích mối quan hệ di truyền- xây dựng phát sinh chủng loại 21 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Nghiên cứu phân tích giám định đặc điểm hình thái sinh học lồi hoa Trứng gà yên tử 23 3.2 Phân tích trình tự nucleotide đoạn gen lục lạp (matK) gen nhân (ITS-rDNA) loài Hoa trứng gà yên tử 28 3.2.1 Kết tách chiết ADN tổng số loài hoa Trứng gà yên tử 28 3.2.2 Nhân trình tự ADN đích vùng gen matK ITS- rDNA loài Hoa trứng gà yên tử 30 3.2.3 Xác định trình tự nucleotide đăng ký Genbank vùng gen matK ITS- rDNA loài Hoa trứng gà yên tử 31 3.2.4 Các đặc điểm ADN loài Hoa trứng gà yên tử dựa trình tự nucleotide vùng gen matK ITS-rDNA 33 3.3 Khả giám định vùng gen nghiên cứu loài chi Magnolia 34 3.3.1 Mức độ tương đồng khoảng cách di truyền loài nghiên cứu với số loài chi Magnolia dựa trình tự nucleotide vùng gen matK ITS- rDNA 34 3.3.2 Mối quan hệ di truyền loài nghiên cứu với số loài chi Magnolia dựa trình tự nucleotide vùng gen matK ITS-rDNA 36 v KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 DANH MỤC CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT TT Chữ viết tắt Giải nghĩa ADN Deoxyribonucleic Acid matK Gen maturase K ITS-rDNA Genbank ML NCBI OD Mật độ quang học (Optical Density) PCR Polymerase Chain Reaction bp 10 BLAST 11 rbcL 12 CBOL 13 ITSF Cặp mồi xuôi 14 ITSR Cặp mồi ngược 15 TAE Tris Acetate EDTA Vùng đệm mã (Internal Transcribed Spacer) Ngân hàng liệu gen quốc tế Maximum Likelihood National Center for Biotechnology Information Cặp bazơ (base pair) Basic Local Alignment Search Tool Gen ribulose-bisphosphat carboxylase Consortium for the Barcode of Life vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Bảng ký hiệu 19 mẫu Hoa trứng gà yên tử sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.2 Trình tự cặp mồi dùng nghiên cứu 19 Bảng 2.3 Danh sách loài/thứ chi Magnolia GenBank sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 3.1 Một số đặc điểm so sánh loài nghiên cứu với loài gần 23 Bảng 3.2 Độ hàm lượng ADN 19 mẫu Hoa trứng gà yên tử .29 Bảng 3.3 Thành phần base (%) vùng gen matK ITS-rDNA loài nghiên cứu 34 Bảng 3.4 Thống kê đặc điểm ADN loài Hoa trứng gà yên tử dựa trình tự nucleotide vùng gen matK ITS-rDNA 35 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ cấu trúc tổng quát vùng rDNA thực vật (a) Vị trí nhiễm sắc thể vùng rDNA (b) Cấu tạo vùng Intron, Exon liền kề [62] 10 Hình 1.2 Hệ gen lục lạp hồn chỉnh lồi Magnolia zenii [54] 11 Hình 2.1 Hình ảnh Hoa Quả lồi Hoa trứng gà yên tử (Magnolia sp.) [Ảnh: Vũ Quang Nam] 16 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 18 Hình 2.3 Hiển thị kết giải trình tự qua phần mềm BioEdit 21 Hình 3.1 Vỏ thân lồi Hoa trứng gà yên tử 25 Hình 3.2 Lá lồi Hoa trứng gà n tử 25 Hình 3.3 Nụ hoa loài Hoa trứng gà yên tử 26 Hình 3.4 Hoa lồi Hoa trứng gà yên tử 26 Hình 3.5 Quả Hạt lồi Hoa trứng gà yên tử 26 Hình 3.6 Cành mang nhuỵ hoa hoa lồi Dạ hợp hồng kơng (M championii) 27 Hình 3.7 Tiêu gốc lồi M bawangensis 27 Hình 3.8 Tiêu gốc loài M shangsiensis 27 Hình 3.9 Kết điện di DNA tổng số 19 mẫu Hoa trứng gà yên tử gel agarose 1% 28 Hình 3.10 Sản phẩm PCR số mẫu Hoa trứng gà yên tử phân tích với cặp mồi ITS- rDNA điện di gel agarose 1,5% (M: Marker phân tử 100bp; 1-19: ký hiệu mẫu) 30 Hình 3.11 Sản phẩm PCR số mẫu Hoa trứng gà yên tử phân tích với cặp mồi matK điện di gel agarose 1,5% (M: Marker phân tử 100bp; 1-19: ký hiệu mẫu) 30 Hình 3.12 Mối quan hệ họ hàng mẫu nghiên cứu với loài chi lấy Genbank sở phân tích trình tự nucleotide vùng gen ITS- ix rDNA phương pháp Maximum Likelihood (ML) Các số nhánh tượng trưng cho hỗ trợ bootstrap Loài Elmerrillia tsiampacca (DQ499098) xem loài ngồi nhóm (outgroup) 38 Hình 3.13 Mối quan hệ họ hàng mẫu nghiên cứu với loài chi lấy Genbank sở phân tích trình tự nucleotide vùng gen matK phương pháp Maximum Likelihood (ML) Các số nhánh tượng trưng cho hỗ trợ bootstrap Loài Kmeria septentrionalis (AB055540) xem lồi ngồi nhóm (outgroup) 40 Phụ lục 04 Khoảng cách di truyền mẫu nghiên cứu loài chi lấy Genbank sở phân tích vùng gen ITS-rDNA 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 VQN Magnolia championii MN990501 0.004 - M albosericea MN990548 0.010 0.006 - M bidoupensis MN990552 0.016 0.012 0.018 - M coco MN990540 0.006 0.002 0.008 0.014 - M hodgsonii MN990515 0.024 0.024 0.026 0.024 0.026 - M delavayi MN990502 0.016 0.012 0.014 0.016 0.014 0.020 - M nitida MN990568 0.030 0.030 0.036 0.030 0.032 0.030 0.028 - M wilsonii MN990549 0.022 0.022 0.028 0.026 0.024 0.030 0.024 0.016 - 10 M kobus MN990563 0.028 0.032 0.034 0.036 0.034 0.028 0.030 0.030 0.018 - 11 M cathcartii MN990497 0.024 0.024 0.030 0.028 0.026 0.028 0.026 0.022 0.010 0.008 - 12 M olia stellata MN990565 0.028 0.032 0.034 0.036 0.034 0.028 0.030 0.030 0.018 0.000 0.008 - 13 M sieboldii MN990511 0.022 0.022 0.028 0.026 0.024 0.030 0.024 0.016 0.004 0.018 0.010 0.018 - 14 M sinica MN990512 0.038 0.038 0.044 0.034 0.040 0.038 0.036 0.008 0.020 0.034 0.026 0.034 0.020 - 15 M dawsoniana MN990550 0.034 0.034 0.036 0.038 0.036 0.030 0.032 0.032 0.020 0.008 0.012 0.008 0.020 0.036 - 16 M tripetala MN990535 0.028 0.028 0.034 0.028 0.030 0.032 0.030 0.026 0.014 0.020 0.012 0.020 0.014 0.026 0.022 - 17 M officinalis MN990499 0.024 0.024 0.030 0.028 0.026 0.024 0.022 0.018 0.010 0.016 0.008 0.016 0.010 0.022 0.018 0.008 - 18 M amoena MN990551 0.034 0.034 0.036 0.038 0.036 0.030 0.032 0.036 0.024 0.010 0.014 0.010 0.024 0.040 0.014 0.026 0.022 - 19 M biondii MN990524 0.034 0.034 0.036 0.038 0.036 0.030 0.032 0.036 0.024 0.010 0.014 0.010 0.024 0.040 0.014 0.026 0.022 0.000 - 20 M acuminata MN990523 0.032 0.032 0.034 0.036 0.034 0.028 0.026 0.026 0.018 0.018 0.018 0.018 0.018 0.030 0.020 0.024 0.016 0.024 0.024 - 21 M salicifolia MN990517 0.032 0.032 0.034 0.036 0.034 0.028 0.030 0.030 0.018 0.004 0.008 0.004 0.018 0.034 0.008 0.020 0.016 0.010 0.010 0.018 - 22 M obovata MN990498 0.030 0.030 0.032 0.034 0.032 0.024 0.024 0.030 0.022 0.020 0.020 0.020 0.022 0.030 0.022 0.020 0.012 0.022 0.022 0.020 0.020 - 23 M lotungensis MN990513 0.028 0.032 0.038 0.032 0.034 0.032 0.030 0.002 0.018 0.028 0.024 0.028 0.018 0.010 0.034 0.028 0.020 0.038 0.038 0.028 0.032 0.032 - 24 M omeiensis MN990567 0.036 0.040 0.044 0.040 0.042 0.036 0.038 0.014 0.026 0.028 0.028 0.028 0.022 0.018 0.034 0.032 0.024 0.038 0.038 0.028 0.032 0.032 0.012 - 25 M aromatica MN990504 0.030 0.030 0.032 0.034 0.032 0.022 0.024 0.020 0.016 0.014 0.014 0.014 0.016 0.024 0.016 0.018 0.010 0.020 0.020 0.014 0.014 0.014 0.022 0.022 - 26 M macrophylla MN990529 0.028 0.028 0.034 0.032 0.030 0.036 0.030 0.014 0.014 0.024 0.016 0.024 0.014 0.018 0.026 0.020 0.016 0.030 0.030 0.024 0.024 0.028 0.016 0.020 0.018 - 27 M odora MN990509 28 M kwangtungensis MN990543 0.026 0.026 0.028 0.030 0.028 0.022 0.024 0.028 0.016 0.010 0.010 0.010 0.016 0.032 0.014 0.018 0.014 0.012 0.012 0.018 0.010 0.014 0.030 0.030 0.012 0.022 - 0.026 0.026 0.032 0.030 0.028 0.026 0.024 0.016 0.012 0.018 0.010 0.018 0.012 0.020 0.020 0.014 0.006 0.024 0.024 0.018 0.018 0.018 0.018 0.022 0.004 0.014 0.016 - 29 M chevalieri MN990544 0.026 0.026 0.032 0.030 0.028 0.026 0.024 0.016 0.012 0.018 0.010 0.018 0.012 0.020 0.020 0.014 0.006 0.024 0.024 0.018 0.018 0.018 0.018 0.022 0.004 0.014 0.016 0.000 - 30 M martini MN990507 0.024 0.024 0.026 0.028 0.026 0.020 0.022 0.022 0.014 0.008 0.008 0.008 0.014 0.030 0.012 0.016 0.012 0.014 0.014 0.016 0.008 0.016 0.024 0.028 0.010 0.020 0.006 0.014 0.014 - 31 M ernestii MN990566 0.024 0.028 0.030 0.032 0.030 0.024 0.026 0.026 0.018 0.008 0.012 0.008 0.018 0.034 0.016 0.020 0.016 0.018 0.018 0.020 0.012 0.020 0.024 0.028 0.014 0.024 0.010 0.018 0.018 0.004 - 32 M denudata MN990546 0.034 0.034 0.036 0.038 0.036 0.030 0.032 0.032 0.020 0.006 0.010 0.006 0.020 0.036 0.006 0.022 0.018 0.012 0.012 0.020 0.006 0.022 0.034 0.034 0.016 0.026 0.012 0.020 0.020 0.010 0.014 - 33 M insignis MN990505 0.028 0.028 0.034 0.032 0.030 0.028 0.026 0.018 0.014 0.020 0.012 0.020 0.014 0.022 0.022 0.016 0.008 0.026 0.026 0.020 0.020 0.020 0.020 0.024 0.006 0.016 0.018 0.002 0.002 0.016 0.020 0.022 - 34 M kachirachirai MN990569 0.038 0.042 0.044 0.038 0.044 0.038 0.036 0.020 0.032 0.030 0.030 0.030 0.032 0.016 0.038 0.034 0.030 0.036 0.036 0.034 0.030 0.032 0.018 0.022 0.028 0.026 0.028 0.028 0.028 0.030 0.030 0.036 0.030 - 35 M mexicana MN990530 0.048 0.053 0.059 0.048 0.055 0.050 0.050 0.036 0.040 0.042 0.042 0.042 0.040 0.032 0.050 0.046 0.042 0.048 0.048 0.042 0.046 0.042 0.034 0.038 0.040 0.038 0.040 0.040 0.040 0.042 0.042 0.048 0.042 0.028 - 36 M laevifolia MN990510 0.028 0.028 0.030 0.032 0.030 0.024 0.026 0.026 0.018 0.012 0.012 0.012 0.018 0.034 0.016 0.020 0.016 0.018 0.018 0.020 0.012 0.020 0.028 0.028 0.014 0.024 0.006 0.018 0.018 0.004 0.008 0.014 0.020 0.034 0.046 - 37 M montana MN990542 0.032 0.032 0.034 0.036 0.034 0.030 0.030 0.032 0.020 0.014 0.014 0.014 0.020 0.036 0.018 0.022 0.018 0.020 0.020 0.022 0.014 0.018 0.034 0.034 0.016 0.026 0.008 0.020 0.020 0.010 0.014 0.016 0.022 0.036 0.046 0.010 - 38 M champaca MN990539 39 M guatemalensis MN990556 0.032 0.032 0.034 0.036 0.034 0.030 0.030 0.032 0.020 0.014 0.014 0.014 0.020 0.036 0.018 0.022 0.018 0.020 0.020 0.022 0.014 0.018 0.034 0.034 0.016 0.026 0.008 0.020 0.020 0.010 0.014 0.016 0.022 0.036 0.046 0.010 0.000 - 0.046 0.046 0.052 0.046 0.048 0.042 0.044 0.024 0.036 0.038 0.030 0.038 0.036 0.032 0.042 0.038 0.030 0.044 0.044 0.042 0.034 0.040 0.026 0.034 0.032 0.022 0.036 0.028 0.028 0.030 0.034 0.040 0.030 0.028 0.044 0.034 0.040 0.040 - 40 M decidua MN990519 0.038 0.038 0.040 0.042 0.040 0.032 0.032 0.036 0.032 0.026 0.030 0.026 0.032 0.040 0.032 0.030 0.026 0.032 0.032 0.030 0.030 0.026 0.034 0.030 0.016 0.034 0.024 0.020 0.020 0.026 0.022 0.032 0.022 0.036 0.048 0.026 0.032 0.032 0.048 - 41 M dodecapetala MN990526 0.053 0.057 0.063 0.048 0.059 0.061 0.059 0.042 0.042 0.049 0.044 0.049 0.042 0.038 0.057 0.048 0.049 0.055 0.055 0.057 0.053 0.055 0.040 0.044 0.051 0.036 0.044 0.046 0.046 0.049 0.049 0.055 0.049 0.034 0.026 0.047 0.053 0.053 0.046 0.055 - - Phụ lục 05 So sánh trình tự Nucleotide lồi nghiên cứu trình tự tham chiếu Genbank dựa gen matK Phụ lục 06 Khoảng cách di truyền mẫu nghiên cứu loài chi lấy Genbank sở phân tích vùng gen matK 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 VQN Magnolia championii MN990574 0.000 M albosericea AF123464 0.004 0.004 M bidoupensis MN990624 0.000 0.000 0.004 M coco MN990612 0.000 0.000 0.004 0.000 M hodgsonii MN990587 0.000 0.000 0.004 0.000 0.000 M delavayi AF548651 0.004 0.004 0.005 0.004 0.004 0.004 M nitida MN990640 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 0.005 M wilsonii AB055527 0.011 0.011 0.012 0.011 0.011 0.011 0.007 0.002 10 M kobus MN894554 0.012 0.012 0.013 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 11 M cathcartii AF123473 0.012 0.012 0.011 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.007 12 M stellata MN990637 0.012 0.012 0.013 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.000 0.007 13 M sieboldii AB055526 0.013 0.013 0.015 0.013 0.013 0.013 0.010 0.005 0.005 0.009 0.009 0.009 14 M sinica AF123479 0.012 0.012 0.011 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.007 0.005 0.007 0.009 15 M dawsoniana AY008987 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 0.005 0.007 0.010 0.006 0.011 0.006 0.012 0.011 16 M tripetala AF548649 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.009 17 M officinalis AY009001 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 18 M amoena MN990623 0.012 0.012 0.013 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.000 0.007 0.000 0.009 0.007 0.006 0.005 0.005 19 M biondii AY008986 0.012 0.012 0.013 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.000 0.007 0.000 0.009 0.007 0.006 0.005 0.005 0.000 20 M acuminata MN990595 0.013 0.013 0.015 0.013 0.013 0.013 0.010 0.005 0.007 0.006 0.009 0.006 0.010 0.006 0.010 0.006 0.006 0.006 0.006 21 M salicifolia MN990589 0.011 0.011 0.012 0.011 0.011 0.011 0.007 0.002 0.005 0.001 0.006 0.001 0.007 0.006 0.005 0.004 0.004 0.001 0.001 0.005 22 M obovata MN990571 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.000 0.005 0.005 0.006 0.004 23 M lotungensis AF123475 0.013 0.013 0.012 0.013 0.013 0.013 0.010 0.005 0.007 0.009 0.006 0.009 0.010 0.006 0.012 0.006 0.006 0.009 0.009 0.010 0.007 0.006 24 M omeiensis AF123476 0.010 0.010 0.009 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.002 0.005 0.006 0.002 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.004 25 M aromatica MT876216 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 0.005 0.000 0.002 0.004 0.004 0.004 0.005 0.004 0.007 0.001 0.001 0.004 0.004 0.005 0.002 0.001 0.005 0.001 26 M dealbata AY009008 0.015 0.015 0.016 0.015 0.015 0.015 0.011 0.006 0.009 0.010 0.010 0.010 0.011 0.010 0.013 0.007 0.007 0.010 0.010 0.011 0.009 0.007 0.011 0.007 0.006 27 M odora AF123470 0.012 0.012 0.011 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.007 0.002 0.007 0.009 0.005 0.011 0.005 0.005 0.007 0.007 0.009 0.006 0.005 0.006 0.002 0.004 0.010 28 M kwangtungensis MN990615 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 0.005 0.000 0.002 0.004 0.004 0.004 0.005 0.004 0.007 0.001 0.001 0.004 0.004 0.005 0.002 0.001 0.005 0.001 0.000 0.006 0.004 29 M chevalieri MN990616 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 0.005 0.000 0.002 0.004 0.004 0.004 0.005 0.004 0.007 0.001 0.001 0.004 0.004 0.005 0.002 0.001 0.005 0.001 0.000 0.006 0.004 0.000 30 M martini NC054188 0.011 0.011 0.012 0.011 0.011 0.011 0.007 0.002 0.005 0.006 0.004 0.006 0.007 0.006 0.010 0.004 0.004 0.006 0.006 0.007 0.005 0.004 0.007 0.004 0.002 0.006 0.004 0.002 0.002 31 M ernestii MN897729 0.011 0.011 0.012 0.011 0.011 0.011 0.007 0.002 0.005 0.006 0.004 0.006 0.007 0.006 0.010 0.004 0.004 0.006 0.006 0.007 0.005 0.004 0.007 0.004 0.002 0.006 0.004 0.002 0.002 0.000 32 M denudata MN990618 0.012 0.012 0.013 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.002 0.007 0.002 0.009 0.007 0.006 0.005 0.005 0.002 0.002 0.006 0.001 0.005 0.009 0.005 0.004 0.010 0.007 0.004 0.004 0.006 0.006 33 M insignis MT654128 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.006 0.002 0.001 0.005 0.005 0.001 0.001 0.001 0.001 0.005 34 M kachirachirai MN990641 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.006 0.002 0.001 0.007 0.005 0.001 0.001 0.004 0.004 0.005 0.002 35 M mexicana MN700657 0.011 0.011 0.012 0.011 0.011 0.011 0.007 0.002 0.005 0.006 0.006 0.006 0.007 0.006 0.010 0.004 0.004 0.006 0.006 0.007 0.005 0.004 0.007 0.004 0.002 0.009 0.006 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.004 36 M laevifolia MF583748 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.002 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.006 0.002 0.001 0.007 0.002 0.001 0.001 0.001 0.001 0.005 0.002 0.002 0.004 37 M montana MN990614 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.002 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.006 0.002 0.001 0.007 0.002 0.001 0.001 0.001 0.001 0.005 0.002 0.002 0.004 0.000 38 M champaca AB623273 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.002 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.006 0.002 0.001 0.007 0.002 0.001 0.001 0.001 0.001 0.005 0.002 0.002 0.004 0.000 0.000 39 M guatemalensis MN990628 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 0.005 0.007 0.010 0.011 0.011 0.011 0.012 0.006 0.007 0.009 0.009 0.011 0.011 0.007 0.010 0.009 0.012 0.009 0.007 0.013 0.011 0.007 0.007 0.010 0.010 0.011 0.009 0.009 0.010 0.009 0.009 0.009 40 M decidua MN990591 0.010 0.010 0.011 0.010 0.010 0.010 0.006 0.001 0.004 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.009 0.002 0.002 0.005 0.005 0.006 0.004 0.002 0.006 0.002 0.001 0.007 0.005 0.001 0.001 0.004 0.004 0.005 0.002 0.002 0.004 0.002 0.002 0.002 0.009 41 M dodecapetala MN990598 0.012 0.012 0.013 0.012 0.012 0.012 0.009 0.004 0.006 0.007 0.007 0.007 0.009 0.007 0.011 0.005 0.005 0.007 0.007 0.009 0.006 0.005 0.009 0.005 0.004 0.010 0.007 0.004 0.004 0.006 0.006 0.007 0.005 0.005 0.001 0.005 0.005 0.005 0.011 0.005 41