Nghiên cứu một số yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng, phát triển cây lan trầm tím (dendrobium nestor) nuôi cấy mô

NGHIÊN Cứu MỌ I SĨ Ư TĨ MƠI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG ĐÉN SỤ SINH TRƯỞNG, PHÁT TRĨÉN CÂY LAN TRẦM TÍM (Dendrohium nestor) NCƠI CÁY MƠ CHÂU THÁI HIN' Khóa luận đệ trình để Tap ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Công Nghệ Sinh Học Giảng viên hướng dẫn: TS Từ Bích Thuỷ TRƯỜNG ĐH NGUYỀN TẤT THÀNH TRUNG TÂM THÔNG TIN-THƯ VIỆN LỊQOlbH /w Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2017 LỜI CẢM ƠN Đâu tiên, xin cảm ơn sâu sác đến bố mẹ người sinh thành, dưỡng dục nuôi dạy nên người Người luón theo dõi chặn đường, bước chân đi, luôn ủng hộ tữ vật chất lẫn tinh thần suốt q trình học tập Suốt đời ln nhớ tới cỏr.g ơn to lớn cùa bố mẹ Em xin chân thành cảm ơn TS Tư Bích Thuỹ Phó Trưởng Khoa giảng dạy tận tình bảo hướng dẫn cho em h.-ir thành khoá luận Em xin gởi lời cảm ơn chân thành đen lắt quý thầy cô trường Khoa Nơng Nghiệp Cơng Nghệ Cao Và Cóng Nghệ Sinh Học giảng dạy tận nhiệt tình bảo em suốt - nãm học vừa qua, trang bị cho em kiến thức thật bổ ích học hỏi nhiều kinh nghiệm giúp em có niềm tin, hiểu biết làm hành trang để bước vào đời Sau cảm ơn người bạn thân lớp ln gắn bó, chia kiến thức học vui buồn học tập suốt trình học tập Sinh viên thực CHÂU THÁI HUY TÓM TẮT Đê tài: “ Nghiên cứu số yếu to mói trường ảnh hưởng lên sinh trưửng, phát triển lan Trầm tím ( bendrohíum nestor) nuôi cấy mô” thực từ tháng 2/2017 đến 7/2017 Phóng thí nghiệm Cóng Nghệ Sinh Học Thực vật 2, Khoa Nông Nghiệp Công Nghệ Cao Vá Cóng Nghệ Sinh Học trường Đại Học Nguyễn Tất Thành số 2374 Quốc lộ 1, phường Trung Mỹ Tây, quận 12 thành phố Hồ Chí Minh ( Trung tâm Cơng Nghệ Sinh Học phố Hổ Chí Minh) với mục tiêu xác định mơi trường thích họp để nhân nhanh giống lan Trầm tím in vitro Đề tài có nội dụng: Ảnh hưởng loại môi trường khoáng đến sinh trưởng phát triển lan Trầm tím gieo từ hạt để ni cấy: Ấnh hưởng nồng độ đường glucose lên sinh trưởng, phát triển lan Trầm tím i?: :>o: -Ánh hưởng cùa nồng độ nước dừa lên sinh trưởng, phát triển lan Trầm tím h: vitro; Anh hưởng nồng độ than hoạt tính lên sinh trưởng, phát triển lan Trầm tím in vitro; Ảnh hưởng nông độ BA đến khả tạo chồi lan Trầm tím in vitro; Anh hưởng tỳ' lệ nông độ BA NAA lên khả sinh trưởng phát triển vưon thân lan Trầm tím in vitro; Ảnh hưởng nồng độ NAA lên tạo rễ nhanh cho lan Trầm tím in vitro Các thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên theo kiểu yếu tố thay đổi, lần lặp lại Kết đạt được: Mơi trường khống thích hợp để gieo hạt lan Trầm tím mơi trường MS Nồng độ đường glucose thích hợp cho sinh trưởng phát triển lan Trầm tím in vitro 30 g/1 Nồng độ nước dừa thích họp cho sinh trưởng phát triển lan Trầm tím in vitro 150 ml/1 Không nên bổ sung than hoạt tính vào mơi trường ni cấy in vitro lan Trầm tím Nồng độ BA thích họp đề tạo chồi cày lan Trầm tím in vitro mg/1 BA Tỷ lệ nồng độ BA NAA thích hợp cho sinh trưởng phát triển vưom thân lan Trầm tím in vitro 1/0,3 mg/1 Nồng độ NAA thích hợp để lan Trầm tím ìn vitro tạo rễ nhanh mg/1 NAA iii MỤC LỤC BÌA LĨT i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC BẢNG vii DANH SÁCH CÁC HÌNH viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu yêu cầu 2.1 Mục tiêu 2.2 Yêu cầu Chương TỔNG QUAN .3 Giới thiệu 1.1 Phân loại 1.2 Đặc điểm thực vật học chi lan Hoàng Thảo 1.2.1 Rễ 1.2.2 Thân 1.2.3 Lá 1.2.4 Hoa 1.2.5 Qủa .7 1.3 Các yếu tố ngoại cảnh ảnh hưởng đến chi lan Hoàng Thảo 1.3.1 Nhiệt độ 1.3.2 Ẩm độ x 8 1.3.3 Ánh sáng 1.3.4 Giá thể : 1.3.5 Mùa nghi 10 1.4 Đặc điểm hình thái lan Trầm Tím 10 iv 1.5 Giá trị kinh tế lan I rẩm 'l im 11 1.6 Các phương pháp nhân gióng lan ỉ lỗng thảo Trầm Tím 12 1.6.1 Phương pháp truyền thống 12 1.6.2 Phương pháp nhân giống bàng ni cấy mó tế bào thực vật 14 Giới thiệu nuôi cấy mô tế bào thực vật 14 2.1 Khái niệm 14 2.2 Lịch sử phát triển nuôi cấymô té bào thực vải 14 2.3 Tình hình phát triển cơngnghệ nuôi cấy-ỏ tế bào thực vật Việt Nam từ năm 1960 đến 17 2.4 Những thành tựu công nghệ nuôi —ỏ tế bào thực vật Việt Nam 17 2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến nhân giỏng vitro 18 2.5.1 Mầu cấy 18 2.5.2 Môi trường nuôi cấy 19 2.5.3 Điều kiện nuôi cấy 21 2.6 Các chất điều hồ sinh trưởng ni cấy mô thực vật 21 2.7 Những vấn đề thường gặp nuôi cay in vitro 26 2.7.1 Tính bất định mặt di truyền 26 2.7.2 Sự nhiễm vi khuẩn nấm 26 2.7.3 Sự hoá nâu .27 2.7.4 Hiện tượng thuỷ tinh thể .28 2.8 Những hạn chế nghiên cứu trước cần thiết phải thực đề tài 28 2.9 Những vấn đề cần phải tiếp tục nghiên cứu 29 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIỀN cứu 30 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 30 2.2 Các thiết bị, hóa chất phục vụ nghiên cứu 30 2.3 Nội dung nghiên cứu 30 2.4 Phương pháp nghiên cứu ? 31 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hường loại mơi trường khống ‘ĂMS, MS, !6VW,VW đến sinh trưởng, phát triển cày lan Trầm tím gieo từ hạt để ni cấy 39 V 3.2 Thí nghiệm 2: Ánh hường nồng độ dường glucose lên sinh trưởng phát triến lan Trầm Tím in vitro 40 3.3 Thí ngiệm 3: Ảnh hưởng nóng độ nước dừa lên sinh trưởng phát triển lan Trầm Tím in vitro 42 3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ than hoạt lính lên sinh trường phát triển cùa lan Trầm Tím in vitro 44 3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng nồng độ BA đến khà tạo chồi lan Trầm Tím in vitro 46 3.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng tỷ lệ nồng độ Ba vả NAA lên khả sinh trưởng phát triển vươn thân lanTrầm Tím ỉn Vitro 48 3.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng nồng độ NAA lên tạo rễ nhanh cho lan Trầm Tím in vitro 50 KẾT LƯẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 3.1: Ảnh hưởng loại mói trương khống !/zMS, MS, '/2VW,VW đến sinh trường, phát triển lan Trầm tím gieo tư hạt đế nuôi cấy 39 Bảng 3.2: Ảnh hưởng nồng độ đương glucose sinh trưởng phát triển lan Trầm Tím in vitro 90 ngày sau cấy 41 Bảng 3.3: Ảnh hưởng nồng độ nước dừa lên sinh trường phát triển lan Trầm Tím in vitro 90 ngày sau cấy 43 Bảng 3.4: Ảnh hưởng nồng độ than hoạt tánh lẽn sinh trưởng phát triển lan Trầm Tím in vitro 90 ngày sau cấy 45 Bảng 3.5: Ảnh hưởng nồng độ BA đen khả tạo chồi lan Trầm tím in vitro 90 ngày sau cấy 47 Bảng 3.6: Ảnh hưởng tỷ lệ nồng độ BA XAA lên khả sinh trường phát triển vươn thân lan Trầm Tím in vitro 90 ngày sau cấy 49 Bảng 3.7: Ảnh hưởng nồng độ NAA lên tạo rễ nhanh cho lan Trầm Tím in vitro sau 60 ngày ni cấy 51 vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 1.1 Lan Hồng thảo Trầm tím Hình 1.2 Hình ảnh lan Già hạc (Dendrobium anosmurrì), lan Sơng Hồng (Dendrobium parishii) lan Trầm Tím (Denảrobium nestor) Hình 1.3 Hình ảnh lan Trầm tím chưa hoa xà trái lan Trầm tím 11 Hình 3.1 Ảnh hưởng loại mơi trường khoáng '/1MS, MS, /2VW,VW đến sinh trưởng, phát triển lan Trầm tím gieo tứ hại để ni cấy 40 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ đường glucose sinh trưởng vả phát triển lan Trầm Tím in vitro (90 NSC) .42 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ nước dừa lẽn sinh trưởng phát triển cầy lan Trầm Tím in vitro (90 NSC) 44 Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ than hoạt tính ỉén sinh trưởng phát triển lan Trầm Tím in vitro (90 NSC) 46 Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tạo chồi lan Trầm Tím in vitro (90 NSC) .48 Hình 3.6 Ảnh hưởng tỷ lệ nồng độ BA NAA lên khả sinh trưởng phát triển vươn thân lan Trầm Tím in vitro (90 NSC) 50 Hình 3.7 Ảnh hưởng nồng độ NAA lên tạo rễ nhanh cho lan Trầm Tím in vitro (60 NSC) 52 viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIÉT TẮT Tên Viết Tắt Tén đầy đù MS Môi trường Murashige & Skoog- 1926 VW Vacin & Went - 1949 BA N6 - Benzyladenin NAA Naphthaleneacetic acid NT Nghiệm thức NSC Ngày sau cấy NST Ngày sau trông ANOVA Analysis of Variance cv Coeficien of variance LSD Least significant difference IAA Indolyl acetic acid IBA Indolyl butyric acid TB Trung bình 2.4 -D Acid 2,4 - Diclorophenoxy acetic Cs Cộng Ctv Cộng tác viên NCM Ni cấy mơ NCMTBTV Ni cấy mị tể bào thực vật ĐC Đối chửng THT Than hoạt tính MTN Mịi trường ix MỞ ĐẦƯ Tính cấp thiết đề tài Lan Trầm Tím Ic-ại hoa phong lan quý Việt Nam Lan Trầm Tím có mùi thơm nhẹ nhàng dễ chị- hương trầm, có lẽ mà người ta gắn cho tên “ trầm”, loại hoa lan ưa chuộng Hiện Lan Trầm Tím nói chung vả loại lan nói riêng xem trồng đem lại hiệu kinh tế cao Do có nhiều nhà vườn mạnh dạn đầu tư chuyển đổi cấu trồng từ lúa hoa màu sang trồng lan Hiệu kinh tế cao gấp lần so với lúa Vì nhu cầu lan Trầm Tím thị trường cao việc nhân giong biện pháp thông thường chậm nên nuôi cấy mô phương pháp thích hợp để nhân nhanh giống thời gian ngắn, tạo thật nhiều đồng nhất, bệnh, ổn định mặt di truyền không phụ thuộc vào thời tiết Xuất phát từ vấn đề trên, thực đề tài: (Nghiên cứu số yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sinh trưởng, phát triển lan Trầm Tím (Dendrobium nestor) ni cấy mô) Mục tiêu yêu cầu Mục tiêu: Xác định nồng độ yếu tố có ảnh hưởng như: nồng độ mơi trường khống, nồng độ đường, nồng độ nước dừa, nồng độ BA, nồng độ NAA thích hợp ni cấy mơ lan Trầm Tím u cầu: Xác định mơi trường khống thích hợp để gieo hạt lan Trầm tím in vitro Xác định nồng độ đường glucose thích hợp cho sinh trưởng, phát triển lan Trầm tím in vitro Chiều cao ANH HUONG CUA NONG DO NUOC [jil- DEN CHIEU CAO CAY LAN TRAM TIM The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 V5 Number of Observations Read 15 Number of Observations Usee 15 ANH HUONG CUA NONG DO NUOC DUA DEN C-:=- CAO CAY LAN TRAM TIM The ANOVA Procedi_-e Dependent Variable: \ Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 6.79682667 1.67670667 180.55 F 6.70682667 1.67670667 180.55 F 6.26637333 1.55159333 234.38 F 6.20637333 1.55159333 234.38 F 4.83733333 1.20933333 82.45 c.eeei 10 0.14666667 0.01466667 Source Model Error Corrected Total R-Square 0.970572 Source Root MSE 0.121106 Coeff Var 3.881603 DF T 4.98400000 14 N Mean 3.120000 Anova ss Mean Square F Value Pr > F 4.83733333 1.20933333 82.45 F 13.43238095 2.23873016 391.78 F 13.43238095 2.23873016 391.78 F 19.885714-29 3.30095238 462.13 F 12.17066667 3.04266667 414.91 F 12.17066667 3.04266667 414.91 F 7.45733333 1.86433333 233.04 F 7.45733333 1.86433333 233.04