Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài lan kim tuyến (anoectochilus setaceus blume) nhằm bảo tồn nguồn dược liệu quý

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Phí Thị Cẩm Miện NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO LOÀI LAN KIM TUYẾN (ANOECTOCHILUS SETACEUS BLUME) NHẰM BẢO TỒN NGUỒN DƯỢC LIỆU QUÝ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Phí Thị Cẩm Miện NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO LOÀI LAN KIM TUYẾN (ANOECTOCHILUS SETACEUS BLUME) NHẰM BẢO TỒN NGUỒN DƯỢC LIỆU QUÝ Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Nguyễn Trung Thành LỜI CẢM ƠN Trong trình thực tập tốt nghiệp hoàn thành luận văn, em nhận giúp đỡ nhiều mặt cấp lãnh đạo, tập thể cá nhân Trước tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Trung Thành, thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt trình thực hồn thành luận văn Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy GS.TS Nguyễn Quang Thạch toàn thể tập thể cán phịng Cơng nghệ tế bào Thực vật, viện Sinh học Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện sở vật chất, chia sẻ kinh nghiệm quý báu để em hoàn thành tốt đề tài Cuối em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè cổ vũ, động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng 12 năm 2012 Học viên Phí Thị Cẩm Miện DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BAP 6-benzylaminopurin CT Công thức CV% Hệ số biến động (Correlation of Variance) ĐC Đối chứng IBA indol-3-acetic acid MS Murashige Skoog, 1962 LSD0,05 Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P - 0,5 (Leant Significant Difference) ND Nước dừa αNAA α-naphthylacetic acid MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Lan Kim tuyến 1.1.1 Đặc điểm hình thái 1.1.2 Đặc điểm phân bố 11 1.2 Nhân giống Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus) 13 1.2.1 Nhân giống hạt 13 1.2.2 Nhân giống 13 1.2.3 Phương pháp giâm 14 1.2.4 Nhân giống in vitro 14 1.2.4.1 Cơ sở khoa học nhân giống in vitro 14 1.2.4.2 Ý nghĩa nhân giống in vitro 15 1.2.4.3 Các phương thức nhân giống vơ tính 18 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy 18 1.3.1 Ảnh hưởng điều kiện khử trùng mẫu cấy 18 1.3 Ảnh hưởng thành phần hóa học 19 1.3 Ảnh hưởng yếu tố vật lý 23 1.3.4 Ảnh hưởng điều kiện 24 1.4 Quy trình sản xuất cấy mô 25 1.5 Tình hình nghiên cứu Lan Kim tuyến 26 1.5.1.Tình hình nghiên cứu giới 26 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 27 CHƯƠNG II: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 28 2.2 Mục tiêu nghiên cứu 28 2.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 29 2.4 Nội dung nghiên cứu 29 2.5 Phương pháp nghiên cứu 29 2.5.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 30 2.5.2 Phương pháp đánh giá kết xử lý số liệu 35 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Nghiên cứu phương pháp khử trùng mẫu xác định quan vào mẫu phù hợp cho việc nhân nhanh in vitro 39 3.1.1 Xác định chất khử trùng thích hợp 39 3.1.2 Xác định quan vào mẫu thích hợp để tạo mẫu tăng hệ số nhân chồi in vitro 42 3.1.2.1 Ảnh hưởng loại vật liệu đến tỷ lệ tạo mẫu 42 3.1.2.2 Ảnh hưởng quan vào mẫu đến hệ số nhân chồi in vitro 44 3.2 Nghiên cứu môi trường khởi động nhân nhanh thích hợp 45 3.2.1 Xác định mơi trường thích hợp cho ni cấy mô Lan Kim tuyến (A setaceus) 45 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nhóm chất điều hòa sinh trưởng riêng rẽ phối hợp đến phát sinh hình thái hệ số nhân 47 3.2.2.1 Ảnh hưởng nhóm chất Cytokinin đến phát sinh hình thái hệ số nhân 47 3.2.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng IBA αNAA đến phát sinh hình thái hệ số nhân Lan Kim tuyến (A setaceus) 50 3.2.2.3.Ảnh hưởng phối hợp nhóm chất auxin cytokinin đến phát sinh hình thái hệ số nhân 53 3.3 Nghiên cứu rễ tạo hoàn chỉnh 56 3.3.1 Ảnh hưởng môi trường (môi trường chất điều tiết sinh trưởng) đến rễ 56 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính đến rễ 58 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 4.1 Kết luận 67 4.2 Đề nghị 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 PHỤ LỤC 75 MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Từ xưa đến nay, lan biết đến loài hoa quý phái, hoa bậc vua chúa vương giả Lan phát vào năm 40 kỷ VIII, có 15.000 loại lan trồng khác trên giới Tại Việt Nam, hoa lan vơ đa dạng phong phú, có khoảng 1.000 loài hoa loại, chúng sinh sản vùng rừng, núi Cao Bằng, Lào Cai, Huế, Quy Nhơn, Đà Lạt, Pleiku, lan Việt Nam đẹp cao lại chứa đựng nhiều ý nghĩa, có nhiều quý có trước thấy mọc Việt Nam (như lan nữ hài Paphiopedilum delenati) Họ lan (Orchidaceae) số họ thực vật đa dạng Việt Nam, với tổng số khoảng 865 lồi thuộc 154 chi Thơng thường lan sử dụng làm cảnh Ngồi ra, có nhiều lồi lan cịn sử dụng làm thuốc Chi lan Kim tuyến Anoectochilus Việt Nam thống kê 12 lồi, có lồi lan Kim tuyến Anoectochilus setaceus Blume, tên khác Anoectochilus roxburghii Wall ex Lindl phân bố rộng hầu hết tỉnh nước, biết đến nhiều giá trị làm cảnh, mà giá trị làm thuốc Do bị thu hái nhiều để bán làm thuốc từ lâu, nên loài lan Kim tuyến bị đe dọa nghiêm trọng, bị tuyệt chủng ngồi tự nhiên khơng có biện pháp bảo tồn hữu hiệu Hiện nay, lan Kim tuyến cấp báo Nghị định 32/2006/NĐ-CP thuộc nhóm IA, nghiêm cấm khai thác sử dụng mục đích thương mại nhóm thực vật rừng nguy cấp EN A1a,c,d, sách đỏ Việt Nam 2007 Vì vậy, nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan Kim tuyến - Anoectochilus setaceus Blume triển khai cung cấp sở khoa học thực tiễn để tạo hàng loạt ổn định mặt di truyền nhằm bảo tồn phát triển loài dược liệu nguy cấp, quí Xuất phát từ sở đó, chúng tơi lựa chọn thực nghiên cứu đề tài:“Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) nhằm bảo tồn nguồn dược liệu quý” CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Lan Kim tuyến Chi lan Kim tuyến (Anoectochilus) gọi lan trang sức vẻ đẹp hấp dẫn nó, Carlvon Blume mô tả năm 1810 thuộc phân họ Orchidoideae Trên giới thống kê 51 loài Ở Việt Nam thống kê 12 lồi, loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) biết đến chủ yếu với công dụng làm thuốc Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) Đồng danh (Anoectochilus roxburghi Wall.) Họ: Phong lan (Orchidaceae) Bộ: Phong lan (Orchidales) Đây loài đơn thân, mọc đất, có thân rễ mọc dài; thân đất mọng nước có nhiều lơng mềm, mang - mọc xoè sát đất Lá hình trứng, gần trịn gốc, chóp nhọn có mũi ngắn, cỡ - x - cm, mặt màu nâu thẫm có vệt vàng màu hồng nhạt gân, mặt màu nâu nhạt Cuống dài - cm Cụm hoa dài 10 - 15 cm, mang - 10 hoa mọc thưa Lá bắc hình trứng, dài 8-10 mm, màu hồng Hoa thường màu trắng, dài 2,5 - cm; môi dài đến 1,5 cm, bên gốc mang - dải hẹp, chẻ đôi thành thuỳ hình thn trịn Bầu dài 13mm, có lông thưa Mùa hoa tháng 2, tháng Tái sinh chồi từ thân rễ hạt ít, sinh trưởng chậm Là loại ưa bóng, kỵ ánh sáng trực tiếp thường mọc tán rừng nguyên sinh, rừng rậm nhiệt đới độ cao 500 - 1600m Mọc rải rác vài ba đất ẩm, giàu mùn rụng Phân bố: Việt Nam: Lào Cai (Sapa), Hà Giang (Quản Bạ), Yên Bái, Vĩnh Phúc (Tam Đảo), Hà Tây (Mỹ Đức: Chùa Hương), Quảng Trị (Đồng Chè), Kontum (Đắc Tô: Đắc Uy), Gia Lai (Kbang: Kon Hà Nừng) Thế giới: Trung Quốc (Vân Nam, Quảng Đông), Ấn Độ, Lào, Inđônêxia,… Tác dụng dược lý: Lan Kim tuyến lồi thuốc đặc biệt có tác dụng tăng cường sức khoẻ, làm khí huyết lưu thơng, có tính kháng khuẩn, chữa bệnh viêm khí quản, viêm gan mãn tính, chữa suy nhược thần kinh Lồi lan dùng làm thuốc chữa bệnh trị lao phổi, phong thấp, đau nhức khớp xương, viêm dày mãn tính (Nguyễn Tiến Bân, Dương Đức Huyến) Trước đó, lan Kim tuyến (A setaceus) dược thảo quý giá, giúp bổ máu, dưỡng âm, chữa trị nóng phổi nóng gan (Tạ A Mộc Trần Kiến Đào, 1958) Hơn người ta phát khả phòng chống ung thư loại thảo dược Theo tài liệu nghiên cứu Trung Quốc công bố gần kỹ thuật sắc ký lỏng, sắc ký cột kỹ thuật quang phổ phân lập, xác định cấu trúc hố học thử hoạt tính sinh học số hợp chất có lồi lan Kim tuyến (Tạp chí “Sinh học thực vật tổng hợp Trung Quốc”, tập 48 số 3, tháng 3/2006, trang 359-363) Bằng kỹ thuật quang phổ xác định hợp chất hố học Các hợp chất có hoạt tính sinh học mạnh, có khả làm giảm gốc tự thể, nên có khả phịng bệnh tốt Đặc biệt có hai axít hữu phân lập Olenolic acid Ursolic acid có khả chống ung thư, giảm cholesterol máu, chống tăng huyết áp, kháng khuẩn… 1.1.1 Đặc điểm hình thái Lan Kim tuyến thảo, mọc đất, có thân rễ mọc dài; thân đất mọng nước, mang mọc xòe sát đất a Thân rễ Lan Kim tuyến thân rễ nằm ngang sát mặt đất, đơi nghiêng, bị dài Chiều dài thân rễ từ 5-12 cm, trung bình 7,87 cm Đường kính thân rễ từ 3-4 mm, trung bình 3,17 mm Số lóng thân rễ từ 3-7 lóng, trung bình 4,03 lóng Chiều dài lóng từ 1-6 cm, trung bình 1,99 cm Thân rễ thường có màu xanh trắng, đơi có màu nâu đỏ, thường nhẵn, khơng phủ lơng b Thân khí sinh Cây lan Kim tuyến có thân khí sinh thường mọc thẳng đứng mặt đất, mọc nghiêng Chiều dài thân khí sinh từ 4-8 cm, trung bình cm Đường kính thân khí sinh từ 3- mm, trung bình 3,08 cm Thân khí sinh mang nhiều lóng, lóng có chiều dài khác Số lóng thân khí sinh thay đổi từ 2-4 lóng, trung bình 2,87 Chiều dài lóng từ 1-4 cm, trung bình 2,23 cm Thân khí sinh thường mọng nước, nhẵn, khơng phủ lơng; thường có màu xanh trắng, đơi có màu hồng nhạt c Rễ Rễ lan Kim tuyến mọc từ mẫu thân rễ Đôi rễ hình thành từ thân khí sinh Rễ thường đâm thẳng xuống đất Thơng thường mẫu có rễ, đơi có vài rễ hình thành từ mấu thân rễ Số lượng kích thước rễ thay đổi tuỳ theo cá thể Số rễ thường từ - 10, trung bình 5,4 Chiều dài rễ thay đổi từ 0,5 - cm, rễ dài trung bình 6,07cm ngắn trung bình 1,22 cm, chiều dài trung bình rễ 3,82 cm d Lá Lá lan Kim tuyến mọc cách xoắn quanh thân, xoè mặt đất Lá hình trứng, gần trịn gốc, đầu nhọn có mũi ngắn, thường dài từ - cm, trung bình 4,03 cm rộng từ - cm, trung bình 3,12 cm Lá có màu nâu đỏ mặt phủ lông mịn nhung Hệ gân mạng lưới lông chim, thường có gân gốc Các gân thường có màu hồng mặt rõ Đôi gân có màu vàng nhạt Mặt có màu nâu đỏ nhạt, nhẵn với gân gốc rõ Các gân bên phía rìa rõ, gân ở mặt không rõ Cuống dài 0,6 - 1,2 cm, thường nhẵn có màu trắng xanh, đơi đỏ tía bẹ Bẹ rõ nhẵn Số thay đổi từ - 6, thông thường có Kích thước thay đổi, thường có kích thước khác rõ rệt e Hoa, Hoa lan Kim tuyến dạng cụm, dài 10 - 20 cm thân, mang - 10 hoa mọc thưa Lá bắc hình trứng, dài - 10 mm, màu hồng Các mảnh bao hoa dài khoảng mm; cánh môi màu trắng, dài đến 1,5 cm, bên gốc mang - dải hẹp, đầu chẻ đôi Mùa hoa tháng 10 - 12 Mùa chín tháng 12 - năm sau PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: CÁC MƠI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG CÁC THÍ NGHIỆM * Mơi trường KnudsonC (1965) Thành phần Đa lượng Lượng lấy 1l dung dịch mẹ (g) KCl 5,00 KH2PO4 5,00 MgSO4 2,44 NH4NO3 10,00 (NH4)2SO4 10,00 Ca(NO3)2 (Pha riêng) Vi lượng 1l môi trường sử dụng 50ml/l 4,82 (mg) 10ml/l MnSO4.H2O Sắt 568,00 (g) ml/l FeSO4.7H2O 5,00 * Môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Lượng lấy Thành phần Đa lượng 1l dung dịch mẹ (g) NH4NO3 33,00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 3,40 CaCl2 (Pha riêng) 6,60 Vi lượng 620,000 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H2O 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O 2,50 Sắt (g) FeSO4.7H2O 5,56 Na2EDTA 7,46 Vitamin (mg) Glycine 400 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridixine (B6) 100 Inositol 50ml/l (mg) H3BO3 Thiamine HCl (B1) 1l môi trường sử dụng 20 100 10ml/l ml/l 5ml/l Môi trờng Knudson cải tiến (Knud*) STT Tên dung dịch Thành phần Ammonium nitrate NH4NO3 K1 K2 1900 Magnesium sulfate MgSO4.7H2O 146.5 Postasium phosfate KH2PO4 170 Postasium chlorid KCl 300 Calcium chlorid CaCl2.2H2O 453 Postasium Iodide KI 0.75 Manganese sulfate MnSO4 4H2O Zinc sulfate 7H2O Molipdic acid (Na2).H2O K4 K5 600 Postasium nitrate KNO3 Boric acid H3BO4 K3 Hµm l−ỵng (mg/l) 3,0 10,0 2,0 0,25 Cupric sulfate.5H2O 0,025 Cobal chlorid 6H2O 0,025 Ferrous sulfate 27,8 Ethylene diamine tetra acetic acid 2Na.2H2O 37,3 Glycin 2,0 Thiamine.HCl 0,4 Myo inositol 100 Pyridoxine HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 PHỤ LỤC 2: BẢNG KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ Bảng 3.3 Ảnh hưởng quan vào mẫu đến hệ số nhân chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE TAOMAU FILE TN3S2 30/ 6/12 10:37 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 TAOMAU Ty le tao mau (%) LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CQ$ 7222.78 3611.39 ****** 0.000 * RESIDUAL 149596E-03 249327E-04 * TOTAL (CORRECTED) 7222.78 902.847 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE TN3S2 30/ 6/12 10:37 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 HSN LN DF He so nhan (Lan) SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CQ$ 9.38829 4.69414 306.58 0.000 * RESIDUAL 918669E-01 153112E-01 * TOTAL (CORRECTED) 9.48015 1.18502 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN3S2 30/ 6/12 10:37 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu cao TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CQ$ 581667 290833 45.52 0.000 * RESIDUAL 383334E-01 638890E-02 * TOTAL (CORRECTED) 620000 775000E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3S2 30/ 6/12 10:37 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT CQ$ CQ$ CHOI DINH CHOI NACH MAT DOT NOS 3 TAOMAU 33.3300 50.0000 100.000 HSN 2.11333 3.50000 4.61000 CHIEUCAO 2.58333 2.96667 3.20000 SE(N= 3) 0.288286E-02 0.714403E-01 0.461479E-01 5%LSD 6DF 0.997229E-02 0.247123 0.159633 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3S2 30/ 6/12 10:37 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TAOMAU HSN CHIEUCAO GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 61.110 3.4078 2.9167 STANDARD DEVIATION C OF V |CQ$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 30.047 0.49933E-02 0.0 0.0000 1.0886 0.12374 3.6 0.0000 0.27839 0.79931E-01 2.7 0.0004 | | | | Bảng 3.4: Ảnh hưởng môi trường đến khả nhân nhanh chồi, mắt đốt Lan Kim tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN4D 30/ 6/12 1: :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 SOCHOI So luong choi (choi/mau) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= MT$ 5.02927 2.51463 391.55 0.000 * RESIDUAL 385334E-01 642223E-02 * TOTAL (CORRECTED) 5.06780 633475 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOLA FILE TN4D 30/ 6/12 1: :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SOLA So la/choi LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= MT$ 9.47469 4.73734 ****** 0.000 * RESIDUAL 196012E-01 326687E-02 * TOTAL (CORRECTED) 9.49429 1.18679 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN4D 30/ 6/12 1: :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu cao TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= MT$ 7.59055 3.79528 ****** 0.000 * RESIDUAL 200006E-01 333344E-02 * TOTAL (CORRECTED) 7.61056 951319 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4D 30/ 6/12 1: :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT MT$ MT$ Knud* NOS SOCHOI 3.67000 SOLA 4.01667 CHIEUCAO 3.56667 MS Kundson C 3 2.11333 2.05667 1.55333 2.35333 1.33333 2.21667 SE(N= 3) 0.462682E-01 0.329993E-01 0.333339E-01 5%LSD 6DF 0.160049 0.114150 0.115307 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4D 30/ 6/12 1: :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI SOLA CHIEUCAO GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 2.6133 2.6411 2.3722 STANDARD DEVIATION C OF V |MT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.79591 0.80139E-01 3.1 0.0000 1.0894 0.57157E-01 2.2 0.0000 0.97536 0.57736E-01 2.4 0.0000 | | | | Bảng 3.5: Ảnh hưởng nhóm chất Cytokinin đến phát sinh hình thái hệ số nhân BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN5A3 30/ 6/12 14:41 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 SOCHOI So choi (choi/mau) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 29.8502 7.46256 831.64 0.000 * RESIDUAL 10 897333E-01 897333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 29.9400 2.13857 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SODOT FILE TN5A3 30/ 6/12 14:41 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SODOT So dot (dot/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 2.94997 737493 241.01 0.000 * RESIDUAL 10 306003E-01 306003E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.98057 212898 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN5A3 30/ 6/12 14:41 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu cao TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 1.60644 401610 183.11 0.000 * RESIDUAL 10 219333E-01 219333E-02 - * TOTAL (CORRECTED) 14 1.62837 116312 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5A3 30/ 6/12 14:41 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT ND$ ND$ 0,1 0,5 1,0 2,0 NOS 3 3 SOCHOI 1.22333 2.44333 3.94333 5.22333 4.22333 SODOT 1.54333 2.15667 2.31000 2.92667 2.37000 CHIEUCAO 2.31667 3.03333 3.15667 3.23333 3.01667 SE(N= 3) 0.546911E-01 0.319376E-01 0.270390E-01 5%LSD 10DF 0.172333 0.100637 0.852010E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5A3 30/ 6/12 14:41 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI SODOT CHIEUCAO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.4113 15 2.2613 15 2.9513 STANDARD DEVIATION C OF V |ND$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.4624 0.94728E-01 2.8 0.0000 0.46141 0.55318E-01 2.4 0.0000 0.34105 0.46833E-01 1.6 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN5B3S 30/ 6/12 15:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 SOCHOI So choi (choi/mau) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 25.6624 6.41561 910.38 0.000 * RESIDUAL 10 704714E-01 704714E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 25.7329 1.83806 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SODOT FILE TN5B3S 30/ 6/12 15:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SODOT So dot (dot/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 2.34983 587457 183.20 0.000 * RESIDUAL 10 320666E-01 320666E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.38189 170135 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN5B3S 30/ 6/12 15:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu cao TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 2.04933 512333 256.17 0.000 * RESIDUAL 10 200000E-01 200000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.06933 147810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5B3S 30/ 6/12 15:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT ND$ ND$ 0,1 0,5 1,0 2,0 NOS 3 3 SOCHOI 1.22333 2.33000 4.22333 4.88667 3.22333 SODOT 1.54333 1.97667 2.44667 2.68000 2.01667 CHIEUCAO 2.31667 2.45000 3.05000 3.23333 3.08333 SE(N= 3) 0.484670E-01 0.326938E-01 0.258199E-01 5%LSD 10DF 0.152721 0.103019 0.813594E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5B3S 30/ 6/12 15:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI SODOT CHIEUCAO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.1773 15 2.1327 15 2.8267 STANDARD DEVIATION C OF V |ND$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.3558 0.83947E-01 2.6 0.0000 0.41247 0.56627E-01 2.7 0.0000 0.38446 0.44721E-01 1.6 0.0000 | | | | Bảng 3.6: Ảnh hưởng phối hợp nhóm chất auxin cytokinin đến phát sinh hình thái hệ số nhân BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN6S2 30/ 6/12 9:47 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 SOCHOI So luong choi (choi/mau) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 8.62642 4.31321 201.86 0.000 * RESIDUAL 128201 213668E-01 * TOTAL (CORRECTED) 8.75462 1.09433 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE SODOT FILE TN6S2 30/ 6/12 9:47 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SODOT So dot (dot/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 171267 856333E-01 40.99 0.001 * RESIDUAL 125333E-01 208889E-02 * TOTAL (CORRECTED) 183800 229750E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN6S2 30/ 6/12 9:47 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu cao TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 260000 130000 14.18 0.006 * RESIDUAL 550000E-01 916666E-02 * TOTAL (CORRECTED) 315000 393750E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6S2 30/ 6/12 9:47 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 NOS 3 SOCHOI 4.66667 4.33333 6.55667 SODOT 2.45000 2.52667 2.77333 CHIEUCAO 3.11667 3.21667 3.51667 SE(N= 3) 0.843936E-01 0.263874E-01 0.552771E-01 5%LSD 6DF 0.291931 0.912783E-01 0.191212 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6S2 30/ 6/12 9:47 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI SODOT CHIEUCAO GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 5.1856 2.5833 3.2833 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0461 0.14617 2.8 0.0000 0.15158 0.45704E-01 1.8 0.0005 0.19843 0.95743E-01 2.9 0.0059 | | | | Bảng 3.7 Ảnh hưởng IBA α-NAA đến Phát sinh hình thái hệ số nhân BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 SOCHOI So choi (choi.mau) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 175894 351789E-01 12.37 0.000 * RESIDUAL 12 341334E-01 284445E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 210028 123546E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SODOT FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SODOT So dot (dot/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 580761 116152 14.36 0.000 * RESIDUAL 12 970667E-01 808889E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 677828 398722E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu dai TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 6.89111 1.37822 261.14 0.000 * RESIDUAL 12 633328E-01 527773E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 6.95444 409085 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V006 SORE So luong re (re/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 943895 188779 38.35 0.000 * RESIDUAL 12 590667E-01 492223E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.00296 589977E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUDAI FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V007 CHIEUDAI Chieu dai TB re (cm) LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 187361 374722E-01 33.72 0.000 * RESIDUAL 12 133333E-01 111111E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 200694 118056E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT ND$ DF ND$ 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 SE(N= 5%LSD NOS 3 3 3 SOCHOI 1.33000 1.27667 1.17000 1.50000 1.27667 1.33000 3) 12DF ND$ 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 SODOT 2.12667 2.31000 2.52333 2.66000 2.39667 2.58667 CHIEUCAO 3.33333 4.11667 3.71667 3.55000 3.23333 2.11667 SORE 2.04333 2.43667 2.09333 1.96333 1.83000 1.71000 0.307920E-01 0.519259E-01 0.419433E-01 0.405061E-01 0.948807E-01 0.160001 0.129242 0.124813 NOS 3 3 3 CHIEUDAI 0.916667 1.11667 0.883333 0.983333 1.05000 1.16667 SE(N= 3) 0.192450E-01 5%LSD 12DF 0.593004E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN7S2 30/ 6/12 16:11 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI SODOT CHIEUCAO SORE CHIEUDAI GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 1.3139 18 2.4339 18 3.3444 18 2.0128 18 1.0194 STANDARD DEVIATION C OF V |ND$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.11115 0.53333E-01 4.1 0.0003 0.19968 0.89938E-01 3.7 0.0001 0.63960 0.72648E-01 2.2 0.0000 0.24289 0.70159E-01 3.5 0.0000 0.10865 0.33333E-01 3.3 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 SOCHOI So choi (choi.mau) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 15.7208 3.14417 503.95 0.000 * RESIDUAL 12 748683E-01 623903E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 15.7957 929159 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SODOT FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SODOT So dot (dot/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 2.33313 466627 56.75 0.000 * RESIDUAL 12 986668E-01 822224E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.43180 143047 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUCAO Chieu dai TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 325361 650722E-01 57.70 0.000 * RESIDUAL 12 135333E-01 112778E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 338895 199350E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V006 SORE So luong re (re/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 7.63998 1.52800 301.91 0.000 * RESIDUAL 12 607340E-01 506117E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 7.70071 452983 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUDAI FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V007 CHIEUDAI Chieu dai TB re (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 1.15569 231139 277.37 0.000 * RESIDUAL 12 999998E-02 833331E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.16569 685703E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT ND$ ND$ 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 SE(N= 5%LSD 3) 12DF ND$ 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 NOS 3 3 3 SOCHOI 1.33000 2.05667 2.55667 2.77667 4.11333 3.67000 SODOT 2.12667 2.54333 2.87000 2.30000 1.97333 1.78667 CHIEUCAO 3.33333 3.23333 3.41000 3.33333 3.36667 3.66667 SORE 2.04333 3.67667 4.19667 3.42000 3.32333 3.21333 0.456035E-01 0.523521E-01 0.193888E-01 0.410738E-01 0.140520 0.161315 0.597435E-01 0.126562 NOS 3 3 3 CHIEUDAI 0.916667 1.56667 1.33333 0.833333 1.31667 1.11667 SE(N= 3) 0.166666E-01 5%LSD 12DF 0.513556E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN7BS2 30/ 6/12 16:44 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI SODOT CHIEUCAO SORE CHIEUDAI GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 2.7506 18 2.2667 18 3.3906 18 3.3122 18 1.1806 STANDARD DEVIATION C OF V |ND$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.96393 0.78988E-01 2.9 0.0000 0.37822 0.90677E-01 4.0 0.0000 0.14119 0.33582E-01 1.0 0.0000 0.67304 0.71142E-01 2.1 0.0000 0.26186 0.28867E-01 2.4 0.0000 | | | | Bảng 3.8 Ảnh hưởng môi trường (mơi trường khơng có chất điều tiết sinh trưởng) đến rễ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TAOMAU FILE TN8SS 1/ 7/12 13:58 :PAGE Thietke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 TAOMAU Ty le tao mau (%) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= MT$ 2291.08 763.695 ****** 0.000 * RESIDUAL 128010E-03 160013E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 2291.08 208.280 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN8SS 1/ 7/12 13:58 :PAGE Thietke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SORE So luong re (re/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= MT$ 1.47340 491133 147.34 0.000 * RESIDUAL 266668E-01 333336E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.50007 136370 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUDAI FILE TN8SS 1/ 7/12 13:58 :PAGE Thietke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUDAI Chieu dai TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= MT$ 1.45667 485556 291.33 0.000 * RESIDUAL 133335E-01 166668E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.47000 133636 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN8SS 1/ 7/12 13:58 :PAGE Thietke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT MT$ MT$ MS MS/2 Knud* Knud*/2 NOS 3 3 TAOMAU 66.6700 83.3300 66.6700 100.000 SORE 1.25000 1.86667 1.50000 2.17000 CHIEUDAI 1.60000 2.30000 1.83333 2.46667 SE(N= 3) 0.230950E-02 0.333334E-01 0.235704E-01 5%LSD 8DF 0.753103E-02 0.108697 0.768605E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN8SS 1/ 7/12 13:58 :PAGE Thietke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TAOMAU SORE CHIEUDAI GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 79.167 12 1.6967 12 2.0500 STANDARD DEVIATION C OF V |MT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 14.432 0.40002E-02 0.0 0.0000 0.36928 0.57735E-01 3.4 0.0000 0.36556 0.40825E-01 2.0 0.0000 | | | | Bảng 3.9 Ảnh hưởng than hoạt tính đến cảm ứng rễ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TAOMAU FILE TN9S3 30/ 6/12 21:17 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V003 TAOMAU Ty le tao mau (%) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 2499.50 833.167 ****** 0.000 * RESIDUAL 544845E-03 681056E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 2499.50 227.227 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN9S3 30/ 6/12 21:17 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SORE So luong re (re/choi) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= ND$ 18.3798 6.12661 ****** 0.000 * RESIDUAL 170668E-01 213335E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 18.3969 1.67244 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUDAI FILE TN9S3 30/ 6/12 21:17 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien VARIATE V005 CHIEUDAI Chieu dai TB choi (cm) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= ND$ 6.33167 2.11056 ****** 0.000 * RESIDUAL 133334E-01 166667E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 6.34500 576818 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN9S3 30/ 6/12 21:17 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT ND$ ND$ NOS 3 3 TAOMAU 66.6700 100.000 100.000 100.000 SORE 1.25000 2.00000 3.83000 4.22333 CHIEUDAI 1.60000 2.88333 3.21667 3.50000 SE(N= 3) 0.476465E-02 0.266668E-01 0.235703E-01 5%LSD 8DF 0.155370E-01 0.869577E-01 0.768603E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN9S3 30/ 6/12 21:17 :PAGE Thiet ke hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TAOMAU SORE CHIEUDAI GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 91.667 12 2.8258 12 2.8000 STANDARD DEVIATION C OF V |ND$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 15.074 0.82526E-02 0.0 0.0000 1.2932 0.46188E-01 1.6 0.0000 0.75949 0.40825E-01 1.5 0.0000 | | | |