Xây dựng quy trình tinh sạch axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh robusta

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ THANH HOA XÂY DỰNG QUY TRÌNH TINH SẠCH AXIT CHLOROGENIC TỪ HẠT CÀ PHÊ XANH ROBUSTA Ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số: 54 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS Hoàng Hải Hà TS Nguyễn Việt Phương NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận văn thạc sĩ kết nghiên cứu thân Kết nghiên cứu luận văn thạc sĩ trung thực Các tài liệu trích dẫn luận văn thạc sĩ công bố trích dẫn theo ngun tắc Tơi xin chịu trách nhiệm hoàn toàn nội dung luận văn thạc sĩ Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thanh Hoa i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc TS Hoàng Hải Hà, TS Nguyễn Việt Phương tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Khoa Công nghệ thực phẩm - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Trường Cao đẳng công nghiệp thực phẩm giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thanh Hoa ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Phần Tổng quan nghiên cứu 2.1 Giới thiệu cà phê 2.1.1 Giới thiệu chung cà phê 2.1.2 Cấu tạo thành phần hóa học cà phê 2.1.3 Thu hái, chế biến bảo quản hạt cà phê 2.1.4 Tình hình sản xuất cà phê giới Việt Nam 2.1.5 Khái niệm cà phê xanh sản xuất axit chlorogenic giới 11 2.2 Axit chlorogenic hạt cà phê xanh robusta 11 2.2.1 Đặc điểm hóa học vật lý 11 2.2.2 Tính chất sinh học axit chlorogenic 13 2.2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến biến đổi axit chlorogenic 16 2.3 Một số phương pháp làm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học 19 2.3.1 Làm tách chiết lỏng – lỏng 19 2.3.2 Làm sắc ký gel 20 2.4 Một số nghiên cứu tách chiết tinh axit chlorogenic từ hạt cà phê 22 Phần Vật liệu - nội dung, phương pháp nghiên cứu 25 3.1 Vật liệu nghiên cứu 25 iii 3.2 Hóa chất thiết bị dụng cụ 25 3.2.1 Hóa chất 25 3.2.2 Thiết bị dụng cụ 26 3.2.3 Địa điểm nghiên cứu 27 3.2.4 Thời gian nghiên cứu 27 3.3 Nội dung nghiên cứu 27 3.3.1 Nội dung Xác định hàm lượng axit chlorogenic nguyên liệu 27 3.3.2 Nội dung Xây dựng quy trình chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta 27 3.3.3 Nội dung Đánh giá khả tinh axit chlorogenic từ dịch chiết trích ly lỏng - lỏng 28 3.3.4 Nội dung Đánh giá khả tinh axit chlorogenic dịch chiết sau trích ly lỏng - lỏng sắc ký cột với hạt XAD-4 29 3.4 Phương pháp nghiên cứu 29 3.4.1 Phương pháp xác định hàm lượng chất khô tổng số nguyên liệu 29 3.4.2 Phương pháp xác định hàm lượng axit chlorogenic có nguyên liệu dịch trích ly 29 3.4.3 Phương pháp chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta yếu tố thực nghiệm 32 3.4.4 Tinh axit chlorogenic trích ly lỏng - lỏng 35 3.4.5 Tinh axit chlorogenic dịch chiết sắc ký cột hạt nhựa XAD-4 36 3.4.6 Xác định hiệu suất thu hồi axit chlorogenic 37 3.4.7 Xác định độ axit chlorogenic dịch chiết 38 3.4.8 Phương pháp tốn học xử lí thống kê 38 Phần Kết thảo luận 39 4.1 Xác định hàm lượng axit chlorogenic hạt cà phê xanh robusta 39 4.2 Xây dựng quy trình chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh robusta 40 4.2.1 Đánh giá ảnh hưởng thành phần dung mơi chiết đến q trình chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta 40 4.2.2 Đánh giá ảnh hưởng nhiệt độ đến trình chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta 41 iv 4.2.3 Đánh giá ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu đến trình chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta 42 4.2.4 Đánh giá ảnh hưởng thời gian đến trình chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta 43 4.2.5 Mơ hình hóa q trình trích ly axit chlorogenic hạt cà phê xanh Robusta 44 4.3 Tinh axit chlorogenic từ dịch chiết trích ly lỏng - lỏng 49 4.4 Tinh axit chlorogenic dịch chiết sau trích ly lỏng - lỏng cột nhồi hạt XAD-4 54 4.4.1 Động học trình nhả hấp phụ cột nhồi hạt XAD-4 54 4.4.2 Đông khô xác định độ phân đoạn 54 4.5 Đề xuất quy trình sản xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh robusta 56 Phần Kết luận kiến nghị 59 5.1 Kết luận 59 5.2 Kiến nghị 59 Tài liệu tham khảo 60 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt %, v/v % volume/ volume Phần trăm thể tích %, w/w % weight/ weight Phần trăm khối lượng BV Bed volume Thể tích chứa hạt CGA Chlorogenic acid Axit chlorogenic EtOH Ethanol Etanol ICO International Coffee Tổ chức cà phê giới Organnization MARD Ministry of Agriculture and Bộ Nông nghiệp phát Rural Development triển nông thôn mg/g CK Mg/g dry matter mg/g chất khơ v/w Volume/ weight Thể tích/ khối lượng USDA United States Department of Bộ Nông nghiệp Mỹ Agriculture vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hóa học cà phê nhân Bảng 2.2 Tình hình sản xuất cà phê Việt Nam Bảng 3.1 Gradien nồng độ pha động B phân tích HPLC 30 Bảng 3.2 Ma trận thực 35 Bảng 4.1 Hàm lượng chất khô axit chlorogenic hạt cà phê Robusta 39 Bảng 4.2 Ảnh hưởng nồng độ etanol đến hàm lượng axit chlorogenic 40 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến hàm lượng axit chlorogenic 41 Bảng 4.4 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu đến hàm lượng axit chlorogenic 42 Bảng 4.5 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến hàm lượng axit chlorogenic 43 Bảng 4.6 Các mức thí nghiệm 44 Bảng 4.7 Ma trận thực hàm lượng axit chlorogenic 45 Bảng 4.8 Phân tích phương sai mơ hình đáp ứng bề mặt 46 Bảng 4.9 Tính phù hợp mơ hình 46 Bảng 4.10 Các hệ số mơ hình 47 Bảng 4.11 Kết kiểm tra mơ hình 49 Bảng 4.12 Hiệu suất thu hồi độ dịch chiết axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta sau rửa dung mơi có độ phân cực khác 51 Bảng 4.13 Độ hiệu suất thu hồi phân đoạn sau rửa giải 55 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu tạo cà phê Hình 2.2 Cơng thức cấu tạo axit chlorogenic 12 Hình 2.3 Cấu trúc hóa học số đồng phân axit chlorogenic 12 Hình 2.4 Đặc điểm hạt macroporous resin 22 Hình 3.1 Mẫu nguyên liệu 25 Hình 3.2 Sắc ký đồ HPLC chất chuẩn axit chlorogenic bước sóng 325 nm 31 Hình 3.3 Đường chuẩn axit chlorogenic 31 Hình 3.4 Quy trình trích ly axit chlorogenic 33 Hình 3.5 Rửa giải axit chlorogenic cột sắc ký gel nhồi hạt XAD-4 37 Hình 4.1 Ảnh hưởng tương tác tỉ lệ dung môi/nguyên liệu, nhiệt độ, thời gian chiết đến hàm lượng axit chlorogenic .48 Hình 4.2 Kết dự báo hàm mục tiêu axit chlorogenic 48 Hình 4.3 Quy trình đề xuất rửa dịch chiết axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta 50 Hình 4.4 Sắc ký đồ dịch chiết lúc đầu .52 Hình 4.5 Sắc ký đồ dịch sau rửa hexan 52 Hình 4.6 Sắc ký đồ dịch sau rửa metyl clorua 53 Hình 4.7 Sắc ký đồ dịch sau rửa etyl axetat 53 Hình 4.8 Động học trình nhả hấp phụ axit chlorogenic cột nhồi hạt XAD-4 T-CQA = CGA: axit chlorogenic tổng 54 Hình 4.9 Sắc ký đồ phân đoạn rửa giải 1, 2, 56 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Thanh Hoa Tên luận văn: Xây dựng quy trình tinh axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta Ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số: 54 01 01 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Đưa quy trình tinh axit chlorogenic có độ tinh > 90% Phương pháp nghiên cứu - Thu thập xử lý hạt cà phê - Phương pháp xác định hàm lượng chất khô tổng số nguyên liệu - Phương pháp xác định hàm lượng axit chlorogenic có nguyên liệu - Phương pháp phân tích hàm lượng axit chlorogenic HPLC - Phương pháp chiết xuất axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta yếu tố thực nghiệm + Chiết axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta với nồng độ dung môi khác + Chiết axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta với nhiệt độ khác + Chiết axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta với tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu khác + Chiết axit chlorogenic từ hạt cà phê xanh Robusta với thời gian khác + Tối ưu hóa q trình tách chiết axit chlorogenic hạt cà phê xanh Robusta - Phương pháp tinh axit chlorogenic trích ly lỏng - lỏng - Phương pháp tinh axit chlorogenic dịch chiết sắc ký cột hạt nhựa XAD-4 - Phương pháp xác định hiệu suất thu hồi axit chlorogenic - Phương pháp xác định độ axit chlorogenic dịch chiết - Phương pháp tốn học xử lí thống kê Kết nghiên cứu kết luận - Hàm lượng axit chlorogenic hạt cà phê xanh Robusta đạt mức 4,69% - Điều kiện thích hợp để tách chiết axit chlorogenic hạt cà phê xanh ix TÀI LIỆU THAM KHẢO Ayelign A (2013) Determination of Axit chlorogenics (CQACGA) in Coffee Beans using HPLC Azevedo A., Mazzafera P., Mohamed R., Vieira De Melo S & Kieckbusch T (2008) https://doi.org/10.1590/SO104-66322008000300012 Belitz H.D Grosch W & Schieberle P (2009) 21 Coffee, Tea, Cocoa Food Chemistry, 938-970 Bin Z., Ruiyuan Y., Yan Z & Chun-Zhao L (2008) Journal of Chromatography B, “Separation of axit chlorogenic from honeysuckle crude extracts by macroporous resin”, https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2008.04.016 Clifford M N (1999) Chlorogenic axit s and other cinnamates - nature, occurrence and dietary burden Journal of the Science of Food and Agriculture, 79(3): 362–372 COFFEE NEW (2017) Cà phê xanh Robusta Truy cập từ https://www.coffeenew.vn/tong-quan-ve-ca-phe-robusta-30n.html ngày 12/8/2019 Dawidowicz A.L & Typek R (2010) Thermal stability of 5-O-caffeoylquinic acid in aqueous solutions at different heating conditions J Agric Food Chem 58:12578–12584 Đinh Cát Điềm (2009), Sắc ký gel Truy cập từ https://www.academia.edu/29657715/C%C3%81C_K%E1%BB%B8_THU%E1 %BA%ACT_S%E1%BA%AEC_K%C3%9D ngày 14/8/2019 Đỗ Tất Lợi (2015) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Thời Đại, 344 346, 355 – 357 Farah A & Donangelo C M (2006) Các hợp chất phenolic cà phê Tạp chí Sinh lý Thực vật Brazil, 18 (1): 23–36 doi: 10.1590 / s1677-04202006000100003 Farah A., de Paulis T., Trugo L C & Martin P R (2005) Effect of roasting on the formation of axit chlorogenic lactones in coffee Journal of Agricultural and Food Chemistry 53(5): 1505-13 ICO (2019) Báo cáo tổng hợp thị trường cà phê giới tháng 2/2019 Báo công thương (2019) Truy cập từ http://tapchicongthuong.vn/bai-viet/ico-bao-cao-tonghop-thi-truong-ca-phe-the-gioi-thang-22019-61376.htmhttp://tapchicongthuong vn/bai-viet/ico-bao-cao-tong-hop-thi-truong-ca-phe-the-gioi-thang-2201961376.htm, ngày 13/8/2019 60 Jaiswal R., Sovdat T., Vivan F & Kuhnert N (2010) Profiling and characterization by LC-MSn of the chlorogenic acids and hydroxycinnamoylshikimate esters in maté (Ilex paraguariensis) J Agric Food Chem 58:5471–5484 Jing Li* & Howard A C (2010) Development of adsorptive (non-ionic) macroporous resins and their uses in the purification of pharmacologically-active natural products from plant sources The Royal Society of Chemistry, 27 1493–1510 DOI: 10.1039/c0np00015a Khuyết danh (2012) Kỹ thuật chiết lỏng- lỏng Truy cập từ: https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/ showthread.php?tid =75, ngày 14/8/2019 Ky I C., Noirot M & Hamon S (1997) Comparison of Five Purification Methods for Axit chlorogenic in Green Coffee Beans (Cofea sp.) J Agric Food Chem, 45: 786-790 Truy cập từ https://doi.org/10.1021/jf9605254 ngày 14/8/2019 Lại Thị Ngọc Hà, Nguyễn Thị Na & Lê Thị Trang (2010) Mơ hình hóa q trình tách chiết polyphenol từ sim thu hái Hịa Bình Tạp chí Dinh dưỡng thực phẩm, (3+4): 191 – 201 Học viên Nông nghiệp Việt Nam Moon J.K & Shibamoto T (2010) Formation of volatile chemicals from thermal degradation of less volatile coffee components: quinic acid, caffeic acid, and chlorogenic acid J Agric Food Chem 58:5465–5470 Muhammad N., Veghar H., Muhammad A., Asghar A., Ghulam J K., Muhammad S., Fawwad A., Daryoush B., Xia F F., Modarresi-Ghazani F., Li W & Zhou X H (2018) Axit chlorogenic (CGA): A pharmacological review and call for further researchBiomedicine & Pharmacotherapy 97: 67–74 Truy cập từ http://dx.doi.org/10.1016/j.biopha.2017.10.064 ngày 14/8/2019 Mussatto S I., Machado E M S., Martins S & Teixeira J A (2011) Production, Composition, and Application of Coffee and Its Industrial Residues Food and Bioprocess technology 4(5): 661-672 Truy cập từ ttps//doi.org/10.10007/s11947011-0565 ngày 14/8/2019 Natalina C B., António E L & José C R., Nuno Bartolomeu de Alvarenga & Fernando Cebola Lidon (2013) Identification of Chemical Clusters Discriminators of Arabica and Robusta Green Coffee, International Journal of Food Truy cập từ https://doi.org/10.1080/10942912.2011.573114 ngày 14/8/2019 Nguyễn Đình Triệu (1999) Các phương pháp vật lý ứng dụng hóa học NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Phattanit Tripetch and Chaleeda Borompichaicha (2019) Effect of packaging materials and storage time on changes of colour, phenolic content, chlorogenic acid and 61 antioxidant activity in arabica green coffee beans (Coffea arabica L cv Catimor) Journal of Stored Products Research Volume 84 Prime coffee (2017) Các loại axit cà phê Truy cập từ https://primecoffea.com/axit ity-la-gi-cac-loai-axit-trong-ca-phe.html, loại axit cà phê, ngày truy cập 20/9/2019 Santana-Gálvez J., Cisneros-Zevallos L & Jacobo-Velázquez D A (2017) Axit chlorogenic: Recent Advances on Its Dual Role as a Food Additive and a Nutraceutical against Metabolic Syndrome Molecules 22 358 21 pages Scholz B.M & Maier H.G (1990) Isomers of quinic acid and quinide in roasted coffee Z Lebensm Unters Forsch 190: 132-134 Stephanie V E P., Harry G., Antonie J W G V., van Koningsveld G.A., Govardus A H D J & Alfons G J V (2003) American Chemical Society, “Effects of Noncovalent Interactions withaxit chlorogenic on the Heat denaturation and solubility of Globular Proteins” Suarez-Quiroz M.L., Alonso Campos A., Valerio Alfaro G., Gonzalez-Rios O., Villeneuve P & Figueroa-Espinoza M C (2014) Isolation of green coffee axit chlorogenics using activated carbon Journal of Food Composition and Analysis, 33(1), 55-58 https://doi.org/10.1016/j.jfca.2013.10.005 Trịnh Xuân Ngọ (2009) Cà phê kỹ thuật chế biến NXB Tp Hồ Chí Minh Trương Hồng (2017) Cách thu hoạch cà phê đạt suất chất lượng cao Truy cập từ http://voh.com.vn/ky-nang-nha-nong/cach-thu-hoach-ca-phe-dat-nang-suat-vachat-luong-cao-257889.html ngày 13/08/2019 UBND tỉnh Đăk Lăk (2017) Báo cáo số 293/BC, 2017 Báo cáo tổng kết niêm vụ cà phê 2016-2017 kế hoạch niên vụ 2017-2018 UBND tỉnh Đăk Lăk Wikipedia (2019) Chế biến cà phê Truy cập từ https://vi.wikipedia.org/wiki/Cà_phê#Thưởng_thức ngày 13/08/2019 Zanoelo E.F & Beninca C (2009) Chemical kinetics of 5-O-caffeoylquinic acid in superheated steam: effect of isomerization on mate (Ilex paraguariensis) manufacturing J Agric Food Chem 57:11564–11569 Zhao H., Wang J., Jia J., Liu J., Ling X & Lu D (2019) Enrichment and Purification of Total Axit chlorogenics from Tobacco Waste Extract with Macroporous ResinsSeparation Science and Technology 10.1080/01496390903566713 62 45(6): 794-800, DOI: PHỤ LỤC PHỤ LỤC Một số hình ảnh sản phẩm axit chlorogenic thị trường Thực phẩm chức Hình ảnh sản phẩm Green coffee pro 1600 Pure green coffee bean 800mg Green coffee bean extract 63 PHỤ LỤC HÀM LƯỢNG CHẤT KHÔ CỦA BỘT CÀ PHÊ Khối lượng mẫu Khối lượng mẫu Hàm lượng chất trước sấy (g) sau sấy (g) khô (%) 2,0004 1,8084 90,40 2,0066 1,8125 90,33 2,0012 1,8172 90,81 Lần lặp 90,51 ± 0,26 TB PHỤ LỤC HÀM LƯỢNG AXIT CHLOROGENIC TRONG NGUYÊN LIỆU Mẫu Hàm lượng axit chlorogenic (mg/g CK) 47,96 44,19 48,54 TB 46,90 ± 2,36 64 PHỤ LỤC ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ One-way ANOVA: Hàm lượng (mg/g CK) versus Nồng độ etanol (%) Source Nồng độ etanol (%) Error Total S = 1.811 Level 20 40 60 80 100 N 3 3 3 DF SS MS F P 2352.92 470.58 143.43 0.000 12 39.37 3.28 17 2392.29 R-Sq = 98.35% Mean 9.554 22.545 37.861 32.635 27.817 6.673 StDev 0.594 2.397 1.233 2.690 2.169 0.354 R-Sq(adj) = 97.67% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( *-) ( *-) (-*-) ( *-) (-*-) ( *-) + -+ -+ -+ 10 20 30 40 Pooled StDev = 1.811 Grouping Information Using Tukey Method Nồng độ etanol (%) 40 60 80 20 100 N 3 3 3 Mean 37.861 32.635 27.817 22.545 9.554 6.673 Grouping A B B C D D 65 PHỤ LỤC ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ One-way ANOVA: Hàm lượng (mg/g CK) versus Nhiệt độ Source Nhiệt độ Error Total S = 1.138 Level 40 50 60 70 80 90 95 N 3 2 3 DF 11 17 SS 234.44 14.15 248.69 MS 39.07 1.30 R-Sq = 94.17% Mean 37.715 38.698 36.798 39.359 39.588 42.845 47.661 StDev 0.512 0.592 0.931 0.740 0.107 1.251 2.057 F 30.16 P 0.000 R-Sq(adj) = 91.14% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( * -) + -+ -+ -+ 36.0 40.0 44.0 48.0 Pooled StDev = 1.138 Grouping Information Using Tukey Method Nhiệt độ 95 90 80 70 50 40 60 N 3 2 3 Mean 47.661 42.845 39.588 39.359 38.698 37.715 36.798 Grouping A B B C B C C C C 66 PHỤ LỤC ẢNH HƯỞNG CỦA TỈ LỆ DUNG MÔI/NGUYÊN LIỆU One-way ANOVA: Hàm lượng (mg/g CK) versus Tỷ lệ Source Tỷ lệ Error Total DF 10 14 S = 1.198 Level 10 15 20 25 N 3 3 SS 94.79 14.25 109.14 MS 23.70 1.43 R-Sq = 86.85% Mean 31.901 39.541 37.368 35.487 36.503 StDev 1.258 0.883 0.952 1.864 0.656 F 16.52 P 0.000 R-Sq(adj) = 81.60% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 33.0 36.0 39.0 42.0 Pooled StDev = 1.198 Grouping Information Using Tukey Method Tỷ lệ 10 15 25 20 N 3 3 Mean 39.541 37.368 36.503 35.487 31.901 Grouping A A B A B B C 67 PHỤ LỤC ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN One-way ANOVA: Hàm lượng (mg/g CK) versus Thời gian (giờ) Source Thời gian (giờ) Error Total S = 1.719 Level 0.5 1.0 1.5 2.0 N 3 3 DF 11 SS 700.63 23.65 724.18 R-Sq = 96.73% Mean 25.449 42.288 43.707 43.175 StDev 1.538 1.194 2.611 1.103 MS 233.54 2.96 F 79.00 R-Sq(adj) = 95.51% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * -) ( * -) ( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -24.0 30.0 36.0 42.0 Pooled StDev = 1.719 Grouping Information Using Tukey Method Thời gian (giờ) 1.5 2.0 1.0 0.5 N 3 3 Mean 43.707 43.175 42.288 25.449 P 0.000 Grouping A A A B 68 PHỤ LỤC MƠ HÌNH HÓA VÀ TỐI ƯU HÓA Response Axit chlorogenic Actual by Predicted Plot Summary of Fit Rsquare 0.854942 RSquare Adj 0.736259 Root Mean Square Error Mean of Response Observations (or Sum Wgts) 3.44446 28.93714 21 Analysis of Variance Source DF Sum of Squares Mean Square F Ratio Model 769.18549 85.4651 7.2035 Error 11 130.50734 11.8643 Prob > F C Total 20 899.69283 0.0017* Lack Of Fit Source DF Sum of Squares Mean Square 24.2950 F Ratio Lack Of Fit 121.97501 17.1547 Pure Error 8.53233 1.4221 Prob > F Total Error 11 130.50734 0.0017* Max RSq 69 Parameter Estimates Term Estimate Std Error t Ratio Prob>|t| Intercept 30.765081 1.984491 15.50 |t| Temperature(45,85) 4.7786034 0.856331 5.58 0.0002* Time(25,65) 2.4157213 0.856331 2.82 0.0166* Ratio(7,13) 1.5552511 0.856331 1.82 0.0967 Ratio*Ratio -1.160569 1.019493 -1.14 0.2791 Temperature*Time -1.072287 1.103759 -0.97 0.3522 Ratio*Time -0.622287 1.103759 -0.56 0.5842 Time*Time -0.508263 1.019493 -0.50 0.6279 Ratio*Temperature 0.4127129 1.103759 0.37 0.7156 Temperature*Temperature -0.214813 1.019493 -0.21 0.8370 70 Prediction Profiler 71 PHỤ LỤC QUY TRÌNH RỬA DỊCH CHIẾT QUA DUNG MƠI HEXAN , METYL CLORUA , ETHYL ACTATE 72 73 74