(Luận văn) nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học và hoạt tính sinh học dịch chiết n hexane lá đu đủ đực (carica papaya l ) thu hái tại quảng nam đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA  lu an n va p ie gh tn to TRẦN THỊ ĐỨC Ý oa nl w NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN d HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC DỊCH CHIẾT lu nf va an N-HEXANE LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) THU HÁI TẠI QUẢNG NAM – ĐÀ NẴNG z at nh oi lm ul z an Lu Đà Nẵng, tháng 04 năm 2018 m co l gm @ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC n va ac th si ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA  lu an n va HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC DỊCH CHIẾT p ie gh tn to NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÁI TẠI QUẢNG NAM – ĐÀ NẴNG d oa nl w N-HEXANE LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) THU nf va an lu z at nh oi lm ul KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực z : 14CHD @ Lớp : Trần Thị Đức Ý an Lu Đà Nẵng, tháng 04 năm 2018 m co l gm Giảng viên hướng dẫn : GS.TS Đào Hùng Cƣờng n va ac th si LỜI CẢM ƠN Để có đƣợc kiến thức kinh nghiệm nhƣ ngày hôm nay, em xin chân thành cảm ơn thầy giáo mơn khoa Hóa học trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Đà Nẵng hết lòng dạy dỗ, truyền đạt kinh nghiệm quý báu trang bị cho em kiến thức vững Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy giáo GS.TS Đào Hùng Cƣờng cô giáo ThS Đỗ Thị Thúy Vân, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, góp ý, sửa chữa báo cáo tạo điều kiện cho em hoàn thành đề tài khóa luận Tiếp đến, em xin chân thành cảm ơn thầy giáo phịng thí nghiệm lu hƣớng dẫn, tạo điều kiện tốt để em có hội vận dụng kiến thức vào an n va thực tiễn, thành thạo số thao tác thí nghiệm Những kết đạt đƣợc công việc sau Cuối cùng, cho phép em đƣợc cảm ơn thầy cô hội đồng giành thời ie gh tn to đề tài khóa luận hành trang vững chắc, tảng giúp em tự tin vào p gian quý báu để nhận xét, đánh giá tham gia chấm khóa luận nl w Đà Nẵng, ngày 23 tháng 04 năm 2018 d oa Sinh viên nf va an lu Trần Thị Đức Ý z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 1.Tính cấp thiết đề tài 2.Mục tiêu nghiên cứu .2 3.Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 4.Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1 Phƣơng pháp nghiên cứu lý thuyết 4.2 Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm 5.Bố cục khóa luận tốt nghiệp lu CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .4 an va 1.1 Giới thiệu Đu đủ .4 n 1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ nƣớc gh tn to 1.3 Nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ ngồi nƣớc ie 1.4 Những nghiên cứu hoạt tính sinh học Đu đủ p 1.5 Các phƣơng pháp nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào 15 nl w 1.5.1 Phƣơng pháp MTT 15 d oa 1.5.2 Phƣơng pháp SRB 15 an lu CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị nghiên cứu .17 nf va 2.1.1 Nguyên liệu .17 lm ul 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu .17 z at nh oi 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Xác định số tiêu hóa lý .18 2.2.2 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến q trình chiết hợp chất hóa học z gm @ Đu đủ đực 19 2.2.2.1 Phƣơng pháp chiết mẫu thực vật 19 l co 2.2.2.2 Phƣơng pháp định danh thành phần hóa học hợp chất 20 m 2.2.3 Định tính số hợp chất Đu đủ đực 20 an Lu 2.2.3.1 Alkaloid 20 n va ac th si 2.2.3.2 Flavonoid 21 2.2.3.3 Coumarin .22 2.2.3.4 Saponin 22 2.2.3.5 Đƣờng khử 23 2.2.3.6 Polyphenol 23 2.2.3.7 Steroid 24 2.2.3.8 Axit hữu 24 2.2.3.9 Chất béo .24 2.2.3.10 Carotene .25 lu an 2.2.3.11 Polysaccarid .25 n va 2.2.3.12 Iridoid 26 2.2.5 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết n-hexane 27 gh tn to 2.2.4 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 ie 2.2.5.1 Quy trình chiết xuất dịch chiết Đu đủ đực để nghiên cứu tác dụng ức chế p tế bào ung thƣ 27 nl w 2.2.5.2 Các dòng tế bào 28 d oa 2.2.5.3 Phƣơng pháp 28 an lu 2.2.5.4 Thử độc tế bào 28 nf va 2.2.6 Định danh thành phần hóa học dịch chiết n-hexane .29 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 lm ul 3.1 Kết xác định số đại lƣợng vật lý 30 z at nh oi 3.1.1 Độ ẩm 30 3.1.2 Hàm lƣợng tro 30 3.1.3 Hàm lƣợng kim loại 31 z gm @ 3.2 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến q trình chiết hợp chất hóa học Đu đủ đực dung môi n-hexane .31 l co 3.2.1 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết ngâm dầm 31 m 3.2.1.1 Kết khảo sát thời gian chiết ngâm dầm dung môi n-hexane 32 an Lu 3.2.1.2 Kết khảo sát tỉ lệ Rắn/Lỏng (R/L) chiết dung môi n-hexane .33 n va ac th si 3.2.2 Kết khảo sát thời gian chiết soxhlet dung môi n-hexane 36 3.2.3 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết siêu âm .36 3.2.3.1 Kết khảo sát thời gian chiết siêu âm dung môi n-hexane 36 3.3 Kết định tính lớp chất Đu đủ đực 38 3.4 Kết điều chế cao chiết 40 3.5 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết n-hexane từ Đu đủ đực 40 3.6 Kết khảo sát thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Đu đủ đực phƣơng pháp GC-MS 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 lu an Kết luận 45 n va Kiến nghị .46 Tiếng Việt 47 gh tn to TÀI LIỆU TH M KHẢO 47 p ie Tiếng Anh 48 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BuOH: Butanol CHCl3: Chloroform EtOAc: Ethyl acetate MeOH: Methanol GC-MS: Gas chromatography-Mass spectrometry SRB: Sulforhodamine B DMSO: Dimethyl sunfoxide lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng bảng Trang Thành phần hóa học Đu đủ 1.1 Tác dụng chất chiết từ Đu đủ lên dòng tế bào 1.2 11 ung thƣ khác điều kiện in vitro Hoạt tính chống ung thƣ phenolic, flavonoid lu 1.3 13 an alkaloid Đu đủ n va Kết khảo sát độ ẩm Đu đủ đực 30 3.2 Kết khảo sát hàm lƣợng tro Đu đủ đực 30 p ie gh tn to 3.1 Kết khảo sát hàm lƣợng số kim loại Đu đủ 31 đực Kết khảo sát thời gian chiết ngâm dầm dung môi 32 d 3.4 oa nl w 3.3 an lu n-hexane Kết khảo sát thời gian chiết soxhlet dung môi nhexane 35 z at nh oi 3.7 33 dung môi n-hexane lm ul 3.6 Kết khảo sát tỉ lệ Rắn/Lỏng chiết ngâm dầm nf va 3.5 Kết khảo sát thời gian siêu âm tối ƣu dung môi n- 36 z hexane @ hexane 37 39 m Định tính lớp chất Đu đủ đực co l 3.9 Kết khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm dung môi n- gm 3.8 an Lu n va ac th si 3.10 Khối lƣợng cao chiết phân đoạn 40 3.11 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết n-hexane 41 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Đu đủ 3.12 42 đực lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang lu Hình ảnh Đu đủ 1.2 Cơng thức cấu tạo hợp chất Đu đủ 2.1 Lá Đu đủ đực bột Đu đủ đực 17 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 an 1.1 n va p Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo tỉ lệ 34 Rắn/Lỏng chiết ngâm dầm nl w 3.2 32 chiết ngâm dầm ie gh tn to Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo thời gian 3.1 Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo thời gian oa 35 d 3.3 an lu chiết soxhlet 36 Mối quan hệ khối lƣợng cao chiết n-hexane theo nhiệt độ chiết siêu âm 38 z at nh oi 3.6 chiết siêu âm lm ul 3.5 Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo thời gian nf va 3.4 Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết n-hexane Đu đủ đực 41 z m co l gm @ an Lu n va ac th si 3.2.3 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết siêu âm 3.2.3.1 Kết khảo sát thời gian chiết siêu âm dung môi n-hexane Sử dụng phƣơng pháp chiết siêu âm với lƣợng bột Đu đủ đực khoảng 10g, 200mL dung môi n-hexane 500C Tiến hành chiết mẫu với thời gian khác nhau, lần lƣợt 30, 60, 90, 120 150 phút Thu dịch chiết, cô đuổi dung môi đến khối lƣợng không đổi cân % Khối lƣợng cao chiết : Trong đó: mcao: khối lƣợng cao chiết (g) lu an mđầu: khối lƣợng bột Đu đủ đực (g) n va Kết khảo sát thời gian chiết dung môi n-hexane đƣợc trình bày tn to bảng 3.7, hình 3.4 p ie gh Bảng 3.7 Kết khảo sát thời gian siêu âm tối ƣu dung môi n-hexane Tỷ lệ R/L Nhiệt độ Thời gian mđầu mcao (0C) (phút) (g) (g) STT % mcao (%) 1/20 30 30 10,001 1,011 10,11 1/20 30 60 10,003 1,129 11,29 1/20 30 90 10,002 1,187 11,87 1/20 120 10,004 1,234 12,34 1/20 30 150 10,002 1,239 12,39 d oa nf va nl w (g/mL) an lu 30 z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Hình 3.4 Mối quan hệ khối lượng cao n-hexane theo thời gian chiết siêu âm n va ac th 36 si Qua kết bảng 3.7 hình 3.4 ta thấy, thời gian siêu âm tăng khối lƣợng cao thu đƣợc nhiều Tuy nhiên từ 120 đến 150 phút, khối lƣợng cao lại tăng không đáng kể Nguyên nhân tăng thời gian siêu âm, cấu tử có bột Đu đủ hịa tan dung mơi nhiều Thời gian tăng hàm lƣợng cấu tử có cao chiết tăng dẫn đến khối lƣợng cao chiết tăng lên Đến l c đó, cấu tử h a tan gần hết dung mơi khối lƣợng cao chiết tăng chậm có xu hƣớng khơng đổi Nhƣ thời gian siêu âm tối ƣu dung môi n-hexane 120 phút 3.2.3.2 Kết khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm dung môi n-hexane lu an Sử dụng phƣơng pháp chiết siêu âm với lƣợng bột Đu đủ đực khoảng 10g, n va 200mL dung môi n-hexane 90 phút Tiến hành chiết mẫu với nhiệt độ khác tn to nhau, lần lƣợt 30, 40, 50, 60 700C Thu dịch chiết, cô đuổi dung môi đến khối % Khối lƣợng cao chiết : p ie gh lƣợng không đổi cân nl w Trong đó: oa mcao: khối lƣợng cao chiết (g) d mđầu: khối lƣợng bột Đu đủ đực (g) lu bảng 3.8 hình 3.5 nf va an Kết khảo sát nhiệt độ chiết dung mơi n-hexane đƣợc trình bày lm ul Bảng 3.8 Kết khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm môi n-hexane mđầu mcao % mcao (0C) (g) (g) (%) 30 10,001 1,185 11,85 gm 1,267 12,67 10,002 1,348 13,48 1,382 13,82 an Lu z at nh oi Nhiệt độ 13,94 Thời gian (g/mL) (phút) 1/20 90 1/20 90 40 1/20 90 50 1/20 90 60 10,004 1/20 90 70 10,002 z Tỷ lệ R/L STT @ 10,003 m co l 1,394 n va ac th 37 si lu Hình 3.5 Mối quan hệ khối lượng cao chiết n-hexane theo nhiệt độ chiết an va siêu âm n Qua kết bảng 3.8 hình 3.5 ta thấy, nhiệt độ siêu âm tăng gh tn to khối lƣợng cao thu đƣợc nhiều Tuy nhiên từ 600C đến 700C, khối lƣợng cao p ie lại tăng không đáng kể Nguyên nhân tăng nhiệt độ siêu âm, cấu tử có bột Đu đủ hịa tan dung mơi nhiều Nhiệt độ tăng hàm nl w lƣợng cấu tử có cao chiết tăng dẫn đến khối lƣợng cao chiết tăng d oa lên Đến l c đó, cấu tử h a tan gần hết dung mơi khối an lu lƣợng cao chiết tăng chậm có xu hƣớng không đổi Nhƣ nhiệt độ siêu âm nf va tối ƣu dung môi n-hexane 600C lm ul Kết luận: Qua trình nghiên cứu chiết tách thành phần hóa học Đu đủ đực thu hái Quảng Nam – Đà Nẵng dung môi n-hexane, cho thấy z at nh oi rằng: hai phương pháp chiết cổ điển phương pháp chiết soxhlet phương pháp ngâm dầm cho hàm lượng cao chiết thấp phương pháp chiết siêu âm đại, z thời gian chiết dài nhiều Vì thời gian chiết ngắn lại thu gm @ lượng cao nhiều nên lựa chọn phương pháp siêu âm để chiết tách thành phần l hóa học Đu đủ đực m co 3.3 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC an Lu Kết định tính lớp chất Đu đủ đực phản ứng hóa học đƣợc trình bày bảng 3.9 n va ac th 38 si Bảng 3.9 Định tính lớp chất Đu đủ đực STT Nhóm hợp chất Thuốc thử phản ứng Kết Kết luận sơ Phản ứng với thuốc thử Ankaloid Flavonoid lu an Coumarin Saponin gh tn to NaOH 10%: - H2SO4 đậm đặc - FeCl3 5% + +++ Có - Khơng + Polyphenol Gelatin 1% + Dung dịch chì acetat 10% ++ d oa nl w Dung dịch FeCl3 5% nf va an lu Steroid ứng Khơng Có thử Fehling B Phản Có ++ Thuốc thử Fehling A thuốc + Hiện tƣợng tạo bọt p ie Wagner lacton Đƣờng khử ++ Phản ứng mở đóng v ng n va Mayer Libermann- Có + Burchard Có lm ul Phản ứng Salkowski + + Có +++ Có + Có - Không - Không Axit hữu Phản ứng với Na2CO3 tinh thể Chất béo Để lại vết mờ tờ giấy lọc 10 Carotene Phản ứng với H2SO4 11 Polysaccarid Thuốc thử Lugol 12 Iridoid Thuốc thử Trim-Hill z at nh oi z m co l gm @ Ghi chú:(+++): Phản ứng rõ an Lu (++): Phản ứng rõ (+): Có phản ứng n va ac th 39 si (-): Khơng có phản ứng Nhận xét: Sau tiến hành định tính nhóm hợp chất tự nhiên Đu đủ đực có lớp chất: alkaloid, coumarin, saponin, polyphenol, steroid, acid hữu cơ, chất béo, carotene 3.4 KẾT QUẢ ĐIỀU CHẾ CAO CHIẾT Kết khối lƣợng cao chiết phân đoạn n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol dịch nƣớc thu đƣợc từ cao chiết tổng methanol đƣợc trình bày bảng 3.10 lu Bảng 3.10 Khối ƣợng cao chiết phân đoạn an methanol n-hexane chloroform ethyl acetate n-butanol nƣớc Khối 1500 555,12 221,54 18,31 321,31 176,50 lƣợng (g) (g) (g) (g) (g) (g) n va Cao p ie gh tn to Nhận xét: Lƣợng cao thu đƣợc phân đoạn so với lƣợng cao tổng oa nl w 86% Đảm bảo trình thu nhận cao 3.5 THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA DỊCH CHIẾT N-HEXANE TỪ LÁ d an lu ĐU ĐỦ ĐỰC nf va Cao chiết n-hexane đem thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung Phổi (A549) - Gan (Hep3B) - Vú (MCF-7) z at nh oi - lm ul thƣ: z Kết hoạt tính độc tế bào cao chiết đƣợc trình bày bảng @ l gm 3.11 Ký hiệu: co m M/H: phân đoạn cao chiết n-hexane từ cao tổng methanol an Lu Camptothecin: đƣợc sử dụng làm chất chuẩn n va ac th 40 si Bảng 3.11 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết n-hexane TB sống sót (%) Nồng độ Mẫu (µg/mL) A549 % TB sống Control Hep3B % TB Sai số sống MCF-7 Sai số % TB Sai sống số 100.00 1.29 100.00 2.64 100.00 1.93 30 62.47 2.69 59.94 2.27 65.01 1.21 100 57.93 2.36 49.72 2.06 56.29 2.29 Camptothecin 0.1 55.66 2.49 54.27 2.01 56.25 1.97 * 10 35.74 0.77 22.64 0.67 44.84 0.22 M/H lu an va n Nhận xét: Dựa vào bảng 3.11, phân đoạn n-hexane thể hoạt tính gây tn to độc tế bào dòng tế bào ung thƣ phổi ( 549), ung thƣ gan (Hep 3B), ung thƣ ie gh vú (MCF-7) Trong phân đoạn ức chế tế bào ung thƣ gan tốt hai p nồng độ nghiên cứu 30μg/mL 100μg/mL: phần trăm d ng tế bào Hep3B sống nl w sót lần lƣợt 59,94% ± 2,27% 49,72% ± 2,06%; phần trăm dòng tế bào A549 oa sống sót lần lƣợt 62,47% ± 2,69% 57,93% ± 2,36; phần trăm dòng tế bào d MCF-7 sống sót lần lƣợt 65,01% ± 1,21% 56,29% ± 2,29% an lu 3.6 KẾT QUẢ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT nf va N-HEXANE LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC BẰNG PHƢƠNG PHÁP GC-MS lm ul Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết n-hexane Đu đủ đực đƣợc trình bày z at nh oi hình 3.6 z m co l gm @ an Lu Hình 3.6 Sắc k đồ GC-MS dịch chiết n-hexane Đu đủ đực n va ac th 41 si Kết định danh thành phần hóa học có dịch chiết n-hexane Đu đủ đực đƣợc trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Đu đủ đực Peak TR Area Name Structure % 2,24 0,91 1,3,5-Triazine-2,4HN dianime,6-chloro-Nethyl ; N C5H8ClN5 lu Cl an 3,75 0,24 N N NH Cis-9-Octadecenoic va O n acid, (2-phenyl-1,3- O O O to tn dioxolan-4-yl) ie gh methyl ester; p C28H44O4 w 4,68 11,59 Trans-2-pentadecyl- oa nl O d 5-hexadecyloxy-1,3- O an lu dioxane; C35H70O3 nf va O 5,00 0,12 lm ul O I-Gala-I-ido-octose; HO z at nh oi C8H16O8 OH OH HO HO OH OH z 5,96 13,75 3-(4'- @ acetyl-2- m phenylindolizine; N co l gm methoxyphenyl)-1- O an Lu C23H19O2N O n va ac th 42 si 6,34 29,37 2-Undecenal; O C11H20O 8,12 O 21,06 5,9-Undecadien-2one,6,10-dimethyl; C13H22O 9,60 7,24 Dodecanoic O acid, O O O 2,3bis(acetyloxy)propyl O ester; C19H34O6 lu an 9,77 6,14 Methyl O 14-(2O n va octylcyclopropyl)tet tn to radecanoate; O C26H50O2 gh 20,03 6,13 p ie 10 HO 9-Octadecenoic acid O 38,73 0,13 d 11 oa nl w (Z); C18H34O2 Methyl 2,5- nf va an lu O octadecadlynoate; O C19H30O2 41,75 3,32 lm ul 12 Cholest-5-en-3ol z at nh oi (3á)-,9- octadecenoate; C45H78O2 O O z l gm @ co Nhận xét : Từ bảng 3.12 cho thấy, kết phân tích sắc kí đồ GC-MS so m sánh với thƣ viện chuẩn có 12/12 cấu tử đƣợc định danh Các cấu tử đƣợc an Lu định danh với hàm lƣợng lớn bao gồm: 2-Undecenal (29,37%); 5,9-Undecadien-2- n va ac th 43 si one,6,10-dimethyl (21,06%); 3-(4'-methoxyphenyl)-1-acetyl-2-phenylindolizine (13,75%); Trans-2-pentadecyl-5-hexadecyloxy-1,3-dioxane (11,59%) Trong có 2-Undecenal 9-Octadecenoic acid (Z) có hoạt tính sinh học 2-Undecenal thành phần tinh dầu rau má (Coriandrum sativum) ức chế phát triển chất promigigotes Leishmani donovani nuôi cấy với IC50 2,81±0,12 μg/mL đƣợc phân lập từ tinh dầu C.sativum, chất ức chế hiệu nuôi cấy in vitro L Donovani promastigotes – nguồn tiềm loại thuốc chống lại bệnh leishmaniasis – loại bệnh truyền nhiễm mãn tính [36] lu an 9-Octadecenoic acid (Z) hay gọi Oleic acid chất chống oxy hóa n va tốt cho thể ngƣời Gi p ngăn chặn cholesterol xấu máu, làm tăng tn to cholesterol tốt để phòng chống bệnh tim mạch, xơ vữa động mạch Có khả gh trì ổn định lƣợng lipid cho bà bầu Hỗ trợ tăng trƣởng phát triển trí p ie não bé có sữa mẹ Gi p thể nhuận tràng có tác dụng loại bỏ chất thải Gi p thể dễ hấp thụ Omega-3 vitamin Ngăn ngừa ung thƣ v , ung oa nl w thƣ miệng ung thƣ thận Kích thích ruột non sản xuất hợp chất Oleoiletanolamid, giảm cảm giác thèm ăn cản trở việc hấp thụ nhanh Tăng cƣờng chức tái d nf va an lu tạo máu Chống tác hại tia xạ [11] z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 44 si KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trong trình triển khai nghiên cứu, đề tài đạt đƣợc kết nhƣ sau: Đã xác định thơng số hóa lý ngun liệu: độ ẩm nguyên liệu bột - khô 10,272%; hàm lƣợng tro trung bình 6,718%; hàm lƣợng kim loại nằm giới hạn cho phép theo Quyết định số 46/2007/QĐ-BYT ngày 19/12/2007 “quy định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm” Đã định tính đƣợc lớp chất có Đu đủ đực: alkaloid, coumarin, lu - an saponin, polyphenol, steroid, acid hữu cơ, chất béo, carotene va Đã chiết tách đƣợc cấu tử có Đu đủ đực dung môi n-hexane n - tn to với phƣơng pháp chiết khác xác định đƣợc điều kiện chiết tối ƣu Phƣơng pháp chiết ngâm dầm: thời gian ngày với tỉ lệ R/L = 10g nguyên p ie gh phƣơng pháp: nl w liệu/200mL dung môi thu đƣợc 0,701g cao; tỉ lệ R/L = 1/25 thu đƣợc 0,735g cao d oa Phƣơng pháp chiết soxhlet: thời gian với tỉ lệ R/L = 10g nguyên an lu liệu/200mL dung môi thu đƣợc 0,756g cao nf va Phƣơng pháp chiết siêu âm: thời gian 120 phút thu đƣợc 1,234g cao; nhiệt độ 600C thu đƣợc 1,382g cao với tỉ lệ R/L = 10g nguyên liệu/200mL z at nh oi lm ul dung mơi Trong phƣơng pháp chiết siêu âm thu đƣợc hàm lƣợng cao nhiều thời gian ngắn Đã thu đƣợc cao chiết phân đoạn: n-hexane, chloroform, ethyl acetate, z - @ Đã thử hoạt tính độc tế bào phân đoạn n-hexane tế bào ung thƣ: l - gm n-butanol m co phần trăm d ng tế bào Hep3B sống sót lần lƣợt 59,94% ± 2,27% 49,72% ± an Lu 2,06%; A549 lần lƣợt 62,47% ± 2,69% 57,93% ± 2,36; MCF-7 lần lƣợt n va ac th 45 si 65,01% ± 1,21% 56,29% ± 2,29% nồng độ thử nghiệm 30μg/mL 100μg/mL Bằng phƣơng pháp GC-MS định danh đƣợc 12 cấu tử dịch chiết - n-hexane từ Đu đủ đực Trong đó, 2-Undecenal 9-Octadecenoic acid (Z) có hoạt tính sinh học Kiến nghị Phân lập xác định cấu trúc chất phân lập đƣợc từ phân đoạn dịch - chiết n-hexane Đu đủ đực lu an - Thăm d hoạt tính sinh học chất phân lập đƣợc - Tiếp tục thử hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết chloroform, va n ethyl acetate, n-butanol để lựa chọn phân đoạn có hoạt tính sinh học cao phân lập p ie gh tn to tiếp d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th 46 si TÀI LIỆU THAM HẢO Tiếng Việt 1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [2] Nguyễn Văn Đàm, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [3] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012), “Hai cycloratane triterpene lần phân lập từ đu đủ (Carica papaya L.)”, Tạp chí hóa học, Tập 50 (4A), tr 166-169 lu [4] Hồ Thị Hà (2014), Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết an tách từ đu đủ (Carica papaya Linn), Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng Đại học va n Bách khoa Hà Nội tn to [5] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học ie gh Kỹ thuật, Hà Nội p [6] Phạm Kim Mãn cộng (2001), “Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng nl w điều trị ung thƣ”, Tạp chí dược liệu, (2+3), tr 58-62 d oa [7] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007), “Điều tra lu hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam”, Tạp chí Khoa học nf va an ĐHQGHN, 23, tr 130-134 [8] Đỗ Thị Thảo (2006), Nghiên cứu xác định khả phòng chống ung thư lm ul chất hóa học số thuốc Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học động Xã hội, Hà Nội z at nh oi [9] Trần Thế Tục, Đoàn Thế Lƣ (2004), Cây đu đủ kỹ thuật trồng, Nxb Lao z [10] Nguyễn Tƣờng Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khơi, Trần Mạnh Bình, Phan gm @ Quốc Kinh (1983), “Chiết xuất xác định carpaine alkaloid Đu đủ”, Tạp chí l dược học, số m co [11].https://123doc.org//document/3424838-chat-beo-khong-no-va-vai-tro-trong- an Lu dinh-duong.htm, tr.9, mục 2.1.4 “Vai trò dinh dưỡng acid oleic“ [12] https://thucvatduocvn.blogspot.com/2016/02/bao-quan-duoc-lieu.html?m=1 n va ac th 47 si [13] file:///C:/Users/PC/Downloads/QD+46+BYT.pdf, phần ”Giới hạn tối đa kim loại thực phẩm” chè sản phẩm chè, tr.51-55 Tiếng Anh [14] Okunola A., Alabi, Muyideen T Haruna, Chinedu P Anokwuru, Tomisin Jegede, Harrison Abia, Victor U Okegbe and Babatunde E Esan (2012), “Comparative studies on antimicrobial properties of extracts of fresh and dried leaves of Carica papaya (L) on clinical bacterial and fungal isolates, Pelagia Research Library”, Advances in Applied Science Research, 3(5), pp 3107-3114 [15] Adlin Afzan, Noor Rain Abdullah, Siti Zaleha Halim, Badrul Amini Rashid lu an (2012), “Repeated dose 28 days oral toxicity study of Carica papaya L leaf extract n va in Sprague dawley rats”, Molecules 2012, 17, pp 4326-4342 Adeolu Alex, Adedapo and Vivian Eguonor, Orherhe (2013), tn to [16] gh “ ntinociceptive and anti-inflammatory studies of the aqueous leaf extract of p ie Carica papaya in laboratory animals” Asian J.EXP.BIOL.SCI, Vol 4(1), pp 89-96 w [17] Moses Alo, Ukpai Agwu Eze, Chukwudi nyim (2012), “Invitro antimicrobial oa nl activities of extracts of magnifera indica, carica papaya and psidium guajava leaves d on salmonella typhi isolates”, World J Public Health Sciences, 1(1):1 lu ntonella Canini, Daniela lesiani, Giuseppe D’ rcangelo, Pietro Tagliatesta nf va an [18] (2007), “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds z at nh oi 584-590 lm ul from Carica papaya L leaf”, Journal of food composition and analysis, Vol 20, pp [19] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S., (1994), “Effect of papaya latex against scaris suum in naturally infected pigs”, J Helminthol Dec, 68(4):343-6 z K., Ezennia E.C., gm @ [20] Ayoola G.A., Coker H.A.B., Adesegun S.A., Adepoju-Bello A.A., Obaweya tangbayila T.O (2008), “Phytochemical screening and l antioxidant activities of some selected medicinal plants used for malaria therapy in co m southwestern Nigeria”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 7(3), pp an Lu 1019-1024 n va ac th 48 si [21] Srikanth G.S., Manohar Babu S., Kavitha CH.N., Bhanoji Rao M.E., Vijaykumar N., Pradeep CH (2010), “Studies on in - vitro antioxidant activities of Carica papaya aqueous leaf extract”, Research journal of pharmaceutical, Biological and Chemical sciences, Vol 1, pp 59-65 [22] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008), “Review on nutritional, medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.)”, Natural product radiance, Vol 7(4), pp 364-373 [23] K Kayalvizhi, Dr L Cathrine K Sahira Banu (2015), “Phytochemical and antibacterial studies on the leaf extracts of female Carica papaya.linn”, lu an International Journal of PharmTech Research, Vol 8(7), pp 166-170 va [24] Noriko Otsuki, Nam H Dang, Emi Kumagai, Akira Kondo, Satoshi Iwata, n tn to Chikao Morimoto (2010), “ queous extract of Carica papaya leaves exhibits anti - gh tumor activity and immunomodulatory effects”, Journal of Ethnopharmacology, p ie 127, pp 760 - 767 w [25] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1996), “Fungicidal oa nl activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)-glucosamine d on Candida albicans growth” Mycoses, 39, pp 103-110 lu ction of Non Stervidal an [26] John R., Van (1998), “Mechanism of nti lm ul 3s nf va inflammatory Drug”, The American Jour of Med March 30, Vol 104 (3A), pp 2s- and Huzaimah z at nh oi [27] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini bdullah Sani (2002), “ ntiproliferative ctivity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus z @ vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell l gm Lines”, Journal of Medical Sciences, Vol 2, Issue 2, pp 55-58 [28] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002), co m “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, an Lu Phytochemistry, Vol 60, pp 873-882 n va ac th 49 si [29] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011), “ ntibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya L.”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 5(20), pp 51675171 [30] Govindachari T.R., Naga rajan K and Viswanathan N (1965), “Carpaine and pseudocarpaine”, Tetrahedron letters, No 24, pp 1907-1916 [31] Chung-Shih Tang (1979), “New macrocyclic Δ1–piperideine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II”, Phytochemistry, Vol 18, pp 651-652 [32] Ashok Kumar U., Manjunath C., Thaminzhmani T., Ravi Kiran Y., Brahmaiah lu an Y (2012), “ review on immunomodulatory activity plants”, Indian Journal of va Novel Drug delivery, 4(2), pp 93-103 n yodele O, Soladoye (2008), “ nti-inflammatory activities of ethanolic extract of gh tn to [33] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and p ie Carica papaya leave”, Inflammopharmacology, 16, pp 168-173 [34] Abrham W.B., (1978), Techniques of Animal and Clinical toxicology, Med Pub, oa nl w Chicago d [35] Rumiyati, Sismindari dan riyani (2006), “Effect of protein fraction of Carica lu nf va an papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl-2 in breast cancer cells line”, Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170-176 lm ul [36] http://www.thegoodscentscompany.com/data/rw1036141.html, Articles: donovani” z at nh oi “Pharmacological activities of cilantro’s aliphatic aldehydes against Leishmania z m co l gm @ an Lu n va ac th 50 si