THÔNG TIN TÀI LIỆU
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÀ RỊA-VŨNG TÀU BÁO CÁO lu an ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG n va tn to NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH CAO NEEM TỪ LÁ CÂY NEEM ie gh ẤN ĐỘ BẰNG CÁC HỆ DUNG MÔI KHÁC NHAU VÀ BƯỚC p ĐẦU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG TRONG THUỐC BẢO VỆ d oa nl w THỰC VẬT nf va an lu lm ul z at nh oi Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: TS Tống Thị Minh Thu z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bà Rịa - Vũng Tàu, năm 2019 MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC SƠ ĐỒ iv LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN LÝ THUYẾT 1.1 Giới thiệu Neem 1.1.1 Định danh 1.1.2 Đặc điểm hình thái lu an 1.1.3 Nguồn gốc phân bố n va 1.1.4 Giá trị công dụng tn to 1.2 Các chất có hoạt tính sinh học Neem 1.2.1 Diterpenoid p ie gh 1.2.2 Triterpenoid (limonvgoid) .8 1.3 Tác động hoạt chất Neem loài dịch hại nl w 11 d oa 1.4 Cơ sở hóa học thuốc bảo vệ thực vật công nghệ sản xuất thuốc bảo an lu vệ thực vật 12 nf va 1.4.1 Hoạt chất 12 1.4.2 Chất mang 12 lm ul 1.4.3 Chất hoạt động bề mặt 12 z at nh oi 1.4.4 Các chất phù trợ 13 1.4.5 Các dạng thuốc bảo vệ thực vật 13 z 1.4.6 Phân loại thuốc bảo vệ thực vật 14 gm @ 1.5 Cơng trình nghiên cứu, phương pháp chiết tách phối phẩm 15 l 1.5.1 Trên giới 15 co 1.5.2 Trong nước 17 m 1.6 Phương pháp thử hoạt tính khuẩn 18 an Lu 1.6.1 Staphylococcus aureus (Gr +) .18 n va 1.6.2 Pseudomonas aeruginosa (Gr -) 21 ac th si 1.7 Một số phương pháp chiết cao Neem .23 1.7.1 Các phương pháp truyền thống 23 1.7.2 Các phương pháp đại 24 1.8 Hoạt tính kháng oxi hóa cao Neem [21] 25 1.9 Một số phương pháp định tính, định lượng cao Neem 25 1.9.1 Phương pháp định tính phản ứng thuốc thử 25 1.9.2 Phương pháp phân tích trọng lượng 28 1.9.3 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC – MS) 29 1.9.4 Phương pháp sắc ký lỏng ghép đầu dò khối phổ (LC – MS) 30 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 32 2.1.Địa điểm nguyên vật liệu .32 lu 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 32 an va 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 32 n 2.1.3 Dụng cụ - thiết bị hóa chất 32 2.2.1 Lý thuyết 34 p ie gh tn to 2.2 Phương pháp nghiên cứu 33 2.2.2 Thực nghiệm 34 nl w 2.2.3 Quy trình chiết tách dịch chiết Neem 34 d oa 2.3 Mơ hình chiết tách thực nghiệm phịng thí nghiệm 37 an lu 2.3.1 Ngâm dầm 37 nf va 2.3.2 Soxhlet 37 2.4 Phương pháp quay chân khơng tuần hồn .37 lm ul 2.5 Xác định thành phần hóa học từ cao Neem phương pháp z at nh oi GC/MS, LC/MS 38 2.6 Khảo sát điều kiện ảnh hưởng đến trình chiết 38 2.6.1 Xác định ảnh hưởng thời gian chiết 38 z gm @ 2.6.2 Xác định ảnh hưởng tỉ lệ dung mơi/ngun liệu 39 2.7 Định tính số hợp chất có Neem 39 l co 2.7.1 Định tính Flavonoid 39 m 2.7.2 Định tính Alkaloid .39 an Lu 2.7.3 Định tính saponin 40 n va 2.7.4 Định tính Cacbonhyđrat 40 ac th si 2.7.5 Định tính Steroid – triterpenoid 40 2.8 Đánh giá khả kháng khuẩn cao chiết Neem .41 2.9 Xác định hoạt tính kháng oxi hóa cao Neem 43 2.10 Cách pha thuốc trừ sâu 44 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Kết khối lượng cao Nem chiết hệ dung môi khác 45 3.1.1 Cao Neem chiết dung môi Hexan 45 3.1.2 Cao Neem chiết dung môi Chloroform .46 3.1.3 Cao Neem chiết dung môi Ethanol 96o 47 3.1.4 Cao Neem chiết dung môi Methanol 47 lu 3.1.5 Cao Neem chiết dung môi Ethyl acetat .48 an va 3.1.6 Cao Neem chiết dung môi Nước .49 n 3.1.7.So sánh khối lượng cao Neem chiết với hệ dung môi khác tn to 50 gh p ie 3.2 Kết định tính nhóm chất có cao Neem 51 3.2.1 Cao Neem chiết dung môi Hexan 51 nl w 3.2.2 Cao Neem chiết dung môi Chloroform .52 d oa 3.2.3 Cao Neem chiết dung môi Ethanol 96o 53 an lu 3.2.4 Cao Neem chiết dung môi Methanol 54 nf va 3.2.5 Cao Neem chiết dung môi Ethyl Axetat 55 3.2.6 Nước 55 lm ul 3.3 Hoạt tính chống oxi hóa cao Neem 57 z at nh oi 3.4 Kết kháng khuẩn cao Neem 58 3.4.1 Cao Neem chiết dung môi Hexan 58 3.4.2 Cao Neem chiết dung môi Chloroform .60 z gm @ 3.4.3 Cao Neem chiết dung môi Ethanol 96o 62 3.4.4 Cao Neem chiết dung môi Methanol 64 l co 3.4.5 Cao Neem chiết dung môi Ethyl acetate 66 m 3.4.6 Cao Neem chiết dung môi Nước .69 an Lu 3.5 Thành phần hóa học có cao chiết 70 n va 3.5.1 Xác định thành phần hóa học có cao Neem chiết với n – hexan ac th si 70 3.5.2 Xác định thành phần hóa học có cao chiết Ethanol 96o .73 3.5.3 Xác định thành phần hóa học có cao Neem chiết với Methanol 76 3.6 Kết thử nghiệm sâu 78 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 79 4.1 Kết luận .79 4.2 Kiến nghị 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC VIẾT TẮT Am: thuốc kháng sinh Amipicillin DK: Đường kính DMSO: Dimethyl sulfoxide - Hợp chất hữu lưu huỳnh với công thức (CH3)2SO DNA: Acid deoxyribonucleic - Phân tử mang thơng tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng, phát triển, chuyên hóa chức sinh sản sinh vật nhiều lồi virus MHA: Mueller Hinton Agar - Mơi trường thạch Mueller Hinton MYP Mannitol Egg Yolk Polymixin NB: Nutrient Agar PDA: Potato Dextrose Agar Môi trường dinh dưỡng PDA lu an rpm: tốc độ vòng/ phút n va RNA: Acid ribonucleic tn to Te: thuốc kháng sinh Tetracycline gh TSB: Tryptone Soy Broth - Môi trường dinh dưỡng TSB p ie TT: Thuốc thử d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th i si DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Hoạt tính dược liệu chất Neem Bảng 1.2: Các thương phẩm thuốc trừ sâu từ Neem lưu hành thị trường Việt Nam .14 Bảng 2.1: Độ phân cực nhiệt độ sôi hệ dung môi khác 47 Bảng 1: Khối lượng cao Neem chiết tách với Hexan phương pháp khác .45 Bảng 3.2: Khối lượng cao Neem chiết tách với Chloroform phương pháp khác .46 Bảng 3.3: Khối lượng cao Neem chiết tách với Ethanol 96o phương pháp lu an khác .47 n va Bảng 3.4: Khối lượng cao Neem chiết tách với Methanol phương pháp khác to .48 gh tn Bảng 3.5: Khối lượng cao Neem chiết tách với Ethyl acetat phương pháp p ie khác .49 Bảng 3.6: Khối lượng cao Neem chiết tách với Nước phương pháp khác nl w 49 d oa Bảng 3.7: Khối lượng cao Neem chiết tách với hệ dung môi khác 50 an lu Bảng 3.8: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Hexan 51 nf va Bảng 3.9: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Chloroform .52 lm ul Bảng 3.10: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethanol z at nh oi 96o 53 Bảng 3.11: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Methanol z 54 gm @ Bảng 3.12: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethyl l acetate 55 co Bảng 3.13: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Nước 55 m Bảng 3.14: Định tính nhóm chất cao Neem chiết với dung môi khác an Lu .56 n va Bảng 3.15: Mật độ quang đường chuẩn axit galic 57 ac th ii si Bảng 3.16: Kết hoạt tính chống oxi hóa cao Neem 57 Bảng 3.17: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Hexan (mm) .59 Bảng 3.18: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Chloroform (mm) 61 Bảng 3.19: đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Ethanol 96o (mm) 63 Bảng 3.20: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Methanol (mm) .65 Bảng 3.21: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung mơi Ethyl acetate (mm) 67 lu an Bảng 3.22: Đường kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Nước (mm) 69 n va Bảng 3.23: bảng định danh số cấu tử cao chiết n – Hexan từ Neem .71 to Bảng 3.24: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem 74 p ie gh tn Bảng 3.25: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem 77 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Bộ phận Neem Hình 1.2: Neem tricyclic diterpene .8 Hình 1.3: Nhóm protomelicin Hình 1.4: Limonoid với vịng ngun chuỗi bên γ – hydroxybutenolid Hình 1.5: Azadirone .10 Hình 1.6: Gedunin dẫn xuất .10 Hình 1.7: Salannin 10 Hình 1.8: Nimbin 11 Hình 1.9: Azadirachtin A 11 Hình 1.10: Vi khuẩn Staphylococus kính hiển vi 20 lu an Hình 1.11: Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa kính hiển vi 22 n va tn to Hình 2.1: Lá Neem tươi 32 Hình 2.2: Lá Neem khô 37 gh p ie Hình 2.3: Mơ hình ngâm dầm .37 Hình 2.4: Mơ hình chiết tách phịng thí nghiệm 37 nl w Hình 2.5: Thiết bị quay chân khơng tuần hồn 38 d oa Hình 2.6 Mơ tả vịng kháng khuẩn 43 an lu nf va Hình 3.1: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Hexan phương pháp khác .45 lm ul Hình 3.2: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Chloroform phương z at nh oi pháp khác 46 Hình 3.3: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Ethanol 96o phương pháp khác 47 z gm @ Hình 3.4: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Methanol phương pháp khác 48 l co Hình 3.5: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Ethyl acetat phương m pháp khác 49 an Lu Hình 3.6: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Nước phương pháp n va khác .50 ac th iii si Hình 3.7: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Hexan .52 Hình 3.8: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Chloroform 53 Hình 3.9: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethanol 96o 53 Hình 3.10: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Methanol 54 Hình 3.11: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethyl acetate 55 Hình 3.12: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Nước 56 Hình 3.13: Biểu đồ phương trình đường chuẩn Acid gallic 57 Hình 3.14: Biểu đồ thể hoạt tính chống oxi hóa cao Neem 58 Hình 3.15: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Hexan .60 Hình 3.16: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Hexan lu an 60 n va Hình 3.17: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với to Chloroform 62 gh tn Hình 3.18: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với p ie Chloroform 62 Hình 3.19: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Ethanol nl w 96o 64 d oa Hình 3.20: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Ethanol an lu 96o 64 nf va Hình 3.21: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Methanol 66 lm ul Hình 3.22: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với z at nh oi Methanol 66 Hình 3.23: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Ethyl z acetate 68 gm @ Hình 3.24: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Ethyl l acetate 68 co Hình 3.25: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Nước m Chiết 70 an Lu Hình 3.26: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Nước n va 70 ac th iii si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Hình 3.25: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Nước Chiết Trên chủng S aureus khảo sát nồng độ cho thấy nồng độ 800 mg/ml 400 mg/ml có kết 3.5 mm 3.0 mm Hai nồng độ lại 400 mg/ml lu an 200 mg/ml có kết 2.5 mm Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn n va cao Neem chiết với Nước chủng S aureus tương đối ổn định, nhận thấy Trên chủng vi khuẩn P.aeruginosa khảo sát nồng độ nhận thấy gh tn to cao Neem chiết với Nước có khả kháng chủng nồng độ cao p ie nồng độ nồng độ 800 mg/ml 400 mg/ml kết 2.0 mm Hai nồng độ w lại 400 mg/ml 200 mg/ml có kết 1.0 mm Kết cho thấy oa nl hoạt tính kháng khuẩn cao Neem chủng P.aeruginosa tương đối ổn định, d nhận thấy cao Neem chiết với Nước Ethyl acetate có khả kháng chủng nồng nf va an lu độ cao z at nh oi lm ul z gm @ Thành phần hóa học có cao chiết m co 3.5 l Hình 3.26: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Nước Sắc ký ghép khối phổ GC/MS cao cao Neem thể hình 3.21 an Lu Kết xác định thành phần hoá học cao Neem bảng 3.23 n va 3.5.1 Xác định thành phần hóa học có cao Neem chiết với n – hexan 70 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường Phân tích định tính hàm lượng tương đối hợp chất mẫu cao Neem chiết với dung môi n – hexan trung tâm phân tích Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam, Viện Cơng Nghiệ Hóa Học, số 01 – Mạc Đĩnh Chi – Quận – TP Hồ Chí Minh Điều kiên chạy GC – MS: - Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) hiệu SCION SQ 456 - GC - Cột: Rxi - 5ms hiệu RESTEK (30 m x 0.25 mm (i.d.), 0.25 µm df) - Khí mang: Heli, tốc độ dịng khơng đổi: mL/phút, nhiệt độ đầu phun: 250 °C, tỷ lệ phân chia: 30 - Khối quang phổ kế: lu + Tác động điện tử (EI +), lượng ion hóa: 70 eV, Chế độ quét toàn bộ: 50- an 500 amu, tốc độ quét 1s / lần quét, nhiệt độ nguồn ion hóa: 250 °C n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Hình 3.27: sắc ký đồ GC – MS cao chiết n – Hexan từ Neem Bảng 3.23: bảng định danh số cấu tử cao chiết n – Hexan từ Neem n va 71 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Thời gian STT Định danh lưu Hàm Công thức cấu tạo lượng (%) (phút) Diacetone 4.045 2.601 15.531 17.162 Phytol 11.75 17.442 Linolenic acid 20.02 alcohol Palmitic 4.857 acid lu an n va 20.616 ethylhexyl - 1.883 adipate p ie gh tn to Mono – – Carbonic acid, 25.252 27.235 2-Methyleicosane 30.769 3.273 eicosyl vinyl ester d oa nl w 24.556 Dioctyl lu 1.814 nf va an terephthalate hydroxyandrost 3.534 Heptacosane 16.04 z gm @ 32.551 3-Ethyl-3- z at nh oi lm ul 10 22.14 m co l an-17-one an Lu n va 72 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 11 33.552 Norgestrel 1.161 12 33.879 Octacosane 2.385 13 34.467 -Sitosterol 2.243 lu an Thành phần va 6.299 n không định danh gh tn to Nhận xét: Từ kết bảng 3.23 cho thấy phương pháp GC – MS xác địch p ie 13 cấu tử cao Neem chiết với hexan Các cấu tử điểm peak: 4.045, 15.531, 17.162; 17.442, 27.235, 30.769 có thời gian lưu cách xa có hàm lượng tương nl w đối cao cao Neem, 2-Methyleicosane chiếm hàm lượng cao d oa (22.24%), Linolenic acid (20.02%), Heptacosane (16.04%) Các cấu tử cịn lại có cường an lu độ tương đối thấp nên có hàm lượng không đáng kể cao cao Neem nf va Cao Neem chiết với hexan chứa số cấu tử có nhiều tác dụng đời sống lm ul như: Heptacosane có tác dụng ức chế tế bào ung thư, ngăn ngừa tích béo lịng động mạch, giảm nguy xơ vữa động mạch Linolenic acid có tác dụng ngăn z at nh oi ngừa phịng chống ung thư, viêm da, tiêu đường ngồi Linolenic acid sử dụng việc sản xuất xà phòng, dầu gội z 3.5.2 Xác định thành phần hóa học có cao chiết Ethanol 96o gm @ Phân tích định tính hàm lượng tương đối hợp chất mẫu cao Neem m co Quyền, phường Thọ Quang, quận Sơn Trà, Tp Đà Nẵng l chiết với dung môi Ethanol 96o Chi cục Kiểm định Hải quan 04 Số 10, đường Ngô Điều kiên chạy GC – MS: an Lu Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) hiệu SCION SQ 456 - GC - Cột: Rxi - 5ms hiệu RESTEK (30 m x 0.25 mm (i.d.), 0.25 µm df) n va - 73 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường Khí mang: Heli, tốc độ dịng khơng đổi: ml/phút, nhiệt độ đầu phun: 250 °C, - tỷ lệ phân chia: 30 - Khối quang phổ kế: + Tác động điện tử (EI +), lượng ion hóa: 70 eV, Chế độ qt tồn bộ: 50500 amu, tốc độ quét 1s / lần quét, nhiệt độ nguồn ion hóa: 250 °C lu an n va p ie gh tn to oa nl w d Hình 3.28: Sắc ký đồ GC – MS cao chiết Ethanol 96o từ Neem lu nf va an Bảng 3.24: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem Thời Định danh (phút) lượng Công thức cấu tạo z at nh oi lm ul STT gian lưu (%) 0.79 an Lu m co l gm 11.62 Tetradecane, 2,6,10-trimethyl (C17H36) 1.46 @ 6.1 [1,1'Bicyclopropyl]2-octanoic acid, 2'-hexyl-, methyl ester (C21H38O) z Hàm n va 74 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH 13.483 13.710 Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [1,1'Bicyclopropyl]2-octanoic acid, 2'-hexyl-, methyl ester (C21H38O2) 0.74 Dodecanoic acid (C12H24O2) 14.164 16.143 Oleic Acid (C18H34O2) lu Octadecane, 1chloro (C18H37Cl) 2.6 0.52 an 2.09 n va p ie gh tn to 16.622 1.2 d oa nl w 7-Methyl-Ztetradecen-1-ol acetate (C17H32O2) lu 17.162 nf va an 3,7,11,15Tetramethyl-2hexadecen-1-ol (C20H40O) 30.91 19.085 Phytol (C20H40O) 9.72 z 17.848 z at nh oi lm ul 9-Eicosyne (C20H38) m co l 1.62 gm @ 10 an Lu n va 75 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH 11 12 13 Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 19.796 l-(+)-Ascorbic acid 2,6dihexadecanoate (C38H68O8) 7.18 20.336 nHexadecanoic acid (C16H32O2) 35.98 20.735 5,8,11Heptadecatriyno ic acid, methyl ester (C18H24O2) 5.19 lu an Nhận xét: Mẫu cao Neem lắc qua với n – hexan để phù hợp với n va thiết bị trung tâm phân tích kết có khả chưa có Từ kết bảng 3.24 cho thấy phương pháp GC – MS xác địch 13 cấu tử gh tn to khoảng 50% cao Neem chiết với Ethanol 96o tan n – hexan p ie cao Neem chiết với Ethanol 96o Các cấu tử có hàm lượng tương đối cao w cao Neem n-Hexadecanoic acid chiếm hàm lượng cao (35.95%), 3,7,11,15- oa nl Tetramethyl-2-hexadecen-1-ol (30.91%) Các cấu tử cịn lại có cường độ tương đối thấp d nên có hàm lượng khơng đáng kể cao cao Neem an lu 3.5.3 Xác định thành phần hóa học có cao Neem chiết với Methanol nf va Phân tích định tính hàm lượng tương đối hợp chất mẫu cao Neem lm ul chiết với dung môi Ethanol 96o trung tâm phân tích Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam, Viện Cơng Nghiệ Hóa Học, số 01 – Mạc Đĩnh Chi – Quận – Điều kiên chạy LC – MS: z at nh oi TP Hồ Chí Minh z - Thiết bị: UPLC- DAD (Thermo, Hoa Kỳ), nhiệt độ: 27 oC @ m co l gm Cột: Hypersil GOLD Dim (mm) 150 x 2.1 Kích thước hạt: 𝜇 an Lu n va 76 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường lu an Hình 3.29: Sắc ký đồ LC – MS cao chiết Methanol từ Neem n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu lm ul Bảng 3.25: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem STT lưu Định danh Hàm Công thức cấu tạo lượng (%) z (phút) z at nh oi Thời gian Palmitic m 10.527 co Linolenic acid l 9.850 gm @ acid an Lu Nhận xét: Đây bảng kết chạy LC – MS, chúng tối dự n va 77 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường đốn nên kết có khả khơng chắn chạy LC – MS hợp chất cao chiết Neem khơng có thư viện phổ 3.6 Kết thử nghiệm sâu Thử nghiệm hiệu diệt sâu cao Neem pha theo cách sau đây: g cao Neem chiết với Methanol + 100 ml nước + ml Tween 80 Do thời gian cịn hạn hẹp khơng đủ đáp ứng cho q trình thử nghiệm nên chúng tơi chưa khảo sát tỉ lệ pha loãng Mỗi đĩa petri chuẩn bị sâu sau tiến hành thử nghiệm thuốc Sau phun trực tiếp lên sâu, sau chúng tơi nhận thấy số sâu chết con, sau số sâu chết Khi nhúng cải vào sau cho sâu vào lu đĩa sâu có tượng bị khỏi nhúng thuốc không ăn Chúng nhận an thấy nguyên nhân tác dụng thuốc làm sâu ngán ăn chết sau thời n va gian phun thuốc không chết p ie gh tn to d oa nl w lu nf va an Hình 3.30 Lá cải nhúng thuốc Hình 3.31 Phun trực tiếp z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va 78 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Bằng phương pháp ngâm dầm phương pháp chiết soxhlet sử dụng dung mơi có độ phân cực khác (Hexan, chloroform, ethanol 96o, methanol, ethyl acetat) Ngâm dầm: Tỉ lệ nguyên liệu/dung môi 1:20 (15g Neem 300 ml dung môi) thời gian ngày, ngày, ngày, ngày Chiết soxhlet: Tỉ lệ nguyên liệu/dung môi 1:20 (15g Neem 300 ml dung môi) thời gian giờ, giờ, giờ, 12 Sau so sánh khối lượng cao Neem chiết với hệ dung môi khác phương pháp ngâm dầm phương pháp chiết Soxhlet nhận thấy lu chiết với Methanol Ethanol 96o lượng cao Neem thu nhiều an Định tính số chất hữu cao Neem chiết với dung môi khác nhau: va n Hầu hết tất cao Neem chiết với dung môi khác phản ứng dương tn to tính với cacbonhydrat, Steroid – triterpenoid Trong đó, chiết với Ethanol 96o gh Methanol cho kết có hợp chất như: alkaloid, cacbonhydrat, p ie Steroid – triterpenoid w Khi chiết với dung mơi Nước có xuất nhiều nhóm chất nhất: oa nl Flavonoid, Saponin, Cacbonhydrat, Triterpenoid Steroid Và chiết với dung môi d Hexan co mặt nhóm chất nhất: Cacbonhydrat, Triterpenoid Steroid lu an Khả kháng khuẩn cao Neem chiết với hệ dung môi khác nhau: nf va Kết khảo sát hoạt tính cao Neem chủng vi khuẩn thử lm ul nghiệm cho thấy nồng độ cao 800 mg/ml 400 mg/ml đạt đường kính vịng kháng kháng z at nh oi khuẩn cao Và hai nồng độ 200 mg/ml với 100 mg/ml kháng có khơng Trong hệ dung mơi dung mơi Hexan Methanol có khả kháng z khuẩn cao gm @ Thử nghiệm hiệu diệt sâu cao Neem co l g cao Neem chiết với Methanol + 100 ml nước + ml Tween 80 Khi chúng tơi nhúng cải vào sau cho sâu vào đĩa sâu có tượng bị m an Lu khỏi nhúng thuốc không ăn n va 79 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH 4.2 Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Kiến nghị Quá trình nghiên cứu thực quy mơ phịng thí nghiệm với thời gian hạn chế Do đó, chúng tơi xin đưa số kiến nghị sau: Nên nghiên cứu sử dụng thêm phương pháp khác chiết cao Neem: sử dụng - loại enzyme, dùng sóng siêu âm hay vi sóng, để q trình chiết đạt hiệu cao - Khảo sát thêm tiềm kháng khuẩn cao Neem - Định danh số hợp chất khác Neem để đánh giá khả dược liệu Tiếp tục pha thuốc trừ sâu từ cao Neem với nồng độ khác - lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va 80 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng việt [1] “Cây tử đinh hương Ấn đa dụng” Đăng ngày 14/04/2004 lúc 29 phút Truy cập ngày 15 tháng năm 2019 [2] Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn, 2005 Danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng Việt Nam, trang [3] D A Tuấn and et al, 2001 Azdirachtin- Hoạt chất gây ngán ăn mạnh sâu khoang phân lập từ hạt Neem (Azadirachta indica A.Juss) di thực vào Việt Nam Tuyển tập Hội nghị Khoa học Cơng nghệ hóa hữa tồn quốc lần thứ hai., lu pp Trang 333- 337 Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp, Hà Nội an [4] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, Bùi Xuân Chương Viện Dược liệu, 1000 n va thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Tập 2, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật tn to Hồ Văn Chiến, 2001 Thuốc bảo vệ thực vật kỹ thuật phun thuốc khảo nghiệm gh đồng Tài liệu Cục bảo vệ thực vật – Trung tâm kiểm định thuốc bảo vệ thực vật p ie phía Nam, trang – 16 w [5] Karumitze S A., 1963 Cơ sở hóa học bảo vệ thực vật (Phan Cát dịch) Nhà xuất oa nl Khoa học Hà Nội, trang – 66, 197 – 203 d [6] L T T Phượng, 2004 Chiết xuất hoạt chất sinh học từ hạt Neem khỏa lu an sát tác động chúng ngài gạo (Corcyra cephalonica St) Luận văn Thạc sĩ nf va Khoa học Nông nghiệp Đại học Nông Lâm, Hồ Chí Minh lm ul [7] Lâm Cơng Định, 1985 Xoan chịu hạn (Azadirachta indica A Juss ) – Một lồi z at nh oi thích ứng với vùng nóng hạn Thuận Hải Tạp chí Lâm nghiệp, tháng 8/1985 [8] Lâm Công Định, 1991 Giới thiệu cấy xoan chịu hạn (Azadirachta indica A.Juss) nhập nội vào vùng cát nóng hạn Phan Thiết- Tuy Phong Sở Nơng nghiệp Thuận Hải z [9] Lê Thị Thanh Phượng, 2004 Chiết xuất hoạt chất sinh học từ nhân hạt Neem @ gm (Azadirachta indica A Juss) khảo sát tác động chúng ngài gạo (Corcyra co l cephalonica St.) Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Đại học Nơng lâm Thành phố Hồ Chí Minh, trang – 26, 96 – 98 m Ninh Thuận, ĐH Khoa học Tự Nhiên Hồ Chí Minh an Lu [10] N T Ý Nhi, 2012 Nghiên cứu thành phần limonoid Neem trồng n va 81 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [11] Nguyễn Trần Oánh, 2002 Công nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật Giáo trình cao học – Viện khoa học Nơng nghiệp, trang 20 – 54 [12] Nguyễn Xuân Thành, 1997 Nông dược bảo quản sử dụng, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội, trang 3-17, 13-24, 146-147 [13] Trần Kim Quy cộng sự, 2005 Báo cáo nghiệm thu giai đoạn đề tài: Hồn thiện quy trình trích ly limonoid quy mô pilot từ Neem điều chế phụ gia thích hợp để làm nguyên liệu pha chế thuốc trừ sâu bảo vệ thực vật, 75 trang [14] Trần Quang Hùng, 1999 Thuốc bảo vệ thực vật Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội, trang 7-13, 56-62, 114-117 [15] V Đ K Vũ Văn Độ, Nguyễn Tiến Thắng, "Đánh giá độ độc chế phẩm lu phối trộn dầu Neem với Bt (Baccillus thuringiensis) sâu xanh (Heliothis an armigara), sâu tơ (Plutella xylostella)," Viện Sinh học Nhiệt Đới- Trung tâm Khoa Học n va Tự Nhiên Công Nghệ Quốc Gia 2005 tn to [16] V Đ Khánh, 2004 Khảo sát hoạt tính kháng số loài nấm gây bệnh nấm gh Aspergiluss flavus sinh độc tố aflatoxins sản phẩm chiết xuất từ Neem trồng p ie Việt Nam Luận văn Thạc sĩ Đại học Khoa Học Tự Nhiên Hồ Chí Minh w [17] V N Phượng, P Đ Trí, T X Du, and N V Uyển, 1999- 2000 Nhân giống in oa nl vitro xoan Ấn Độ (Azadirachta indica A.Juss), Tuyển tập cơng trình nghiên cứu d khoa học công nghệ, Viện Sinh học Nhiệt đới, 2001 Nhà xuất Nông nghiệp lu nf va an [18] V V Đ Nguyễn Tiến Thắng, Đỗ Thị Tuyến, Lê Thị Thanh Phượng, Vũ Đăng Khánh, 2003 Xây dựng qui trình chiết xuất hoạt chất sinh học từ hạt Neem trồng lm ul Việt Nam khảo sát ảnh hưởng dịch chiết lên phát triển nấm gây bệnh thực z at nh oi vật (Fusarium oxysporum, Alternaria sp.) Ngài Gạo (Corcyra cephalonica st.) Báo cáo đề tài cấp sở- Viện Sinh học Nhiệt đới Tài liệu Tiếng anh z [19] A V B Sankaram et al., "Pesticidal dry powder formulation enriched in @ gm azadirachtin up to 88% an emulsifiable concentrate enriched up to 30% of azadirachtin co l and a process for preparing such formulation and concentrate from Neem seed/kernel," ed: Google Patents, 1999 m an Lu [20] B Hicks, "Developments in the world of Neem," Pesticide Outlook, vol 14, no 3, pp 102-103, 2003 n va 82 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [21] Baptista, J., Lima, E., Paiva, L., Castro, A.R (2014), Value of off-season fresh camellia sinensis leaves Antiradical activity, total phenolics content and catechin profiles, Food science and technology, 59, pp 1152-1158 [22] D Mongkholkhajornsilp, S Douglas, P L Douglas, A Elkamel, W Teppaitoon, and S Pongamphai, "Supercritical CO extraction of nimbin from Neem seeds – a modelling study," Journal of Food Engineering, vol 71, no 4, pp 331-340, 2005 [23] E Melwita and Y.-H Ju, "Separation of azadirachtin and other limonoids from crude Neem oil via solvent precipitation," Separation and Purification Technology, vol 74, no 2, pp 219-224, 2010 [24] G Jadeja, R Maheshwari, and S Naik, "Extraction of natural insecticide lu azadirachtin from Neem (Azadirachta indica A Juss) seed kernels using pressurized an hot solvent," The Journal of Supercritical Fluids, vol 56, no 3, pp 253-258, 2011 n va [25] Gupta B N and Sharma K K., 1998 Neem – A Wonder Tree Indian council of to tn forestry research and education, Dehra Dun, India ie gh http://www.nysipm.cornell.edu/publication/eiq/files/EIQ_values04.pdf p [26] I Ara, B S Siddiqui, S Faizi, and S Siddiqui, "Tricyclic diterpenoids from the stem bark of Azadirachta indica," Journal of Natural Products, vol 51, no 6, pp 1054- oa nl w 1061, 1988 d [27] J D Stark and J F Walter, "Neem oil and Neem oil components affect the efficacy lu nf va an of commercial Neem insecticides," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol 43, no 2, pp 507-512, 1995 lm ul [28] Kelkar C M., 1996 Chap.28, Commercialization, Neem Society of Pesticide publish, pages 319 – 323 z at nh oi Science, India (ED by N S Randhawa and B S Parmar) New age international limited [29] Kenneth and J Lissant, 1974 Emulsions and emulsions technology Marcel z Dekker Inc, New York, USA, pages 71 – 111 @ gm [30] Kovach J., Petzoldt C., Pegni J., Tette J., 2005 Method for measure the co l environment impact of pesticides [31] Lindner Paul L., 1974 Chap 4, Agricultural Emulsions In Emulsions and m an Lu Emulsions technology ED by Kenneth and J Lissant, Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 191 – 209 n va 83 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [32] N R Council, Neem: a tree for solving global problems The Minerva Group, Inc., 2002 [33] P M Murali, "Process of preparing purified azadirachtin in powder form from Neem seeds and storage stable aqueous composition containing azadirachtin," ed: Google Patents, 2001 [34] P Murali, "Process for preparing purified Azadirachtin in powder form from Neem seeds and storage stable aqueous composition containing Azadirachtin," ed: Google Patents, 1998 [35] Puri H S., 1999 Neem A Divine Tree Azadirachta indica Harwood Academic Publishers, England lu [36] R O Larson, "Stable anti-pest Neem seed extract," ed: Google Patents, 1985 an [37] S Pankaj, T Lokeshwar, B Mukesh, and B Vishnu, "Review on Neem n va (Azadirachta indica): thousand problems one solution," Int Res J Pharm, vol 2, no to tn 12, pp 97-102, 2011 ie gh [38] S R Damarla, S Sridhar, and M C Gopinathan, "Compositions containing Neem p seed extracts and saccharide," ed: Google Patents, 2002 [39] Saxena R C., 1995 Homoteria: leaf and planthoppers, aphids, psyllids, whiteflies w oa nl and scale insect In The Neem tree Azadirachta indica A Juss and Other Meliaceous d Plants, (ED by H Schmutterer) VCH Publishers Inc, New York, USA, pages 269 – 281 lu nf va an [40] V Vijayan, S Aafreen, S Sakthivel, and K R Reddy, "Formulation and characterization of solid lipid nanoparticles loaded Neem oil for topical treatment of lm ul acne," Journal of Acute Disease, vol 2, no 4, pp 282-286, 2013 USA, pages 65 – 110 z at nh oi [41] Vankenburg W V., 1973 Pesticide Formulations, Marcel Dekker Inc, New York, [42] Völlinger M., 1986 The possible development of resistance against Neem seed z kernel extract and deltamethrin in Plutella xylostella In Natural pesticides from the @ gm Neem tree Azadirachta indica A Juss and other tropical plants Proc.3rd inter Neem co l conf., Nairobi, Kenya, pages 543 – 554 [43] Z Lidert, C G Overberger, and J S Clovis, "Preparation of high purity Neem m an Lu seed extracts," ed: Google Patents, 1995 n va 84 ac th Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu si
Ngày đăng: 17/07/2023, 09:35
Xem thêm: