(Luận văn) khảo sát thành phần hóa học của cây hương nhu tía (ocimum sanctum l ) họ bạc hà (lamiaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA  lu KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ an n va KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA CÂY HƯƠNG NHU TÍA (Ocimum sanctum L.) HỌ BẠC HÀ (Lamiaceae) p ie gh tn to Đề tài: d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh Người hướng dẫn khoa học: Ths PHÙNG VĂN TRUNG Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỤY KHẢ ÁI z @ m co l gm THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 2012 an Lu n va ac th si LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên – Viện Cơng Nghệ Hóa Học – Viện Khoa học Công Nghệ Việt Nam; số Mạc Đĩnh Chi, phường Bến Nghé, quận 1, tp.Hồ Chí Minh; năm 2012 Với lòng trân trọng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến: PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh Cô động viên tạo điều kiện tốt để em hồn thành khóa luận lu an ThS Phùng Văn Trung n va Trưởng phịng Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên tn to Thầy tận tình hướng dẫn em kỹ thuật, truyền đạt kiến thức ie gh chuyên môn, giúp em giải khó khăn gặp phải q trình thực p luận văn nl w ThS Phan Nhật Minh, cử nhân Nguyễn Tấn Phát, cử nhân Nguyễn Trung oa Kiên, cử nhân Võ Thị Bé anh chị trường Đại học Cần Thơ, bạn sinh d viên thực luận văn phịng Hố Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên, năm lu u nf công việc mình… va an 2012 giúp đỡ, hướng dẫn, góp ý, cung cấp tài liệu, tạo điều kiện để em làm tốt ll Quý thầy cô Ban Giám Hiệu trường Đại Học Sư Phạm TP.HCM, Ban chủ m oi nhiệm Khoa Khoa Hóa-Tổ Hóa Hữu Cơ, tất quý thầy cô giáo trang bị z at nh cho em kiến thức tảng vững suốt thời gian học trường, niên z khóa 2008-2012 @ gm Cuối cảm ơn gia đình giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện từ m co l vật chất đến tinh thần cho học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn TP.Hồ Chí Minh, tháng 05, năm 2012 an Lu NGUYỄN THỤY KHẢ ÁI n va ac th si DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Viết đầy đủ B.W Body Weight CHCl3 Chloroform COSY Correlation Spectroscopy D Doublet Dd Doublet of doublet DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer lu Chữ viết tắt an n va p ie gh tn to Dimethyl sulfoxide oa nl w DMSO EtOAc Ethyl acetate d lu Ethanol HMBC u nf va an EtOH HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation Heteronuclear Multiple Bond Correlation ll oi m z at nh J Coupling constant z Multiplet MeOH Methanol NMR Nuclear Magnetic Resonance m co l gm @ M an Lu n va ac th si PA Pure analysis ppm Parts per million para-Nitrophenol PNP-Glc para-Nitrophenyl-α-D-glucoside Rf Retention factor s Singlet t Triplet T Technical TLC Thin Layer Chromatography UV Ultra Violet lu PNP an n va p ie gh tn to nl w δ d oa Chemical shift ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG BẢNG: Trang lu an n va Khảo sát đường kính vịng vơ khuẩn Bảng 1.2: Tổng quan thành phần hóa học hương nhu tía 27 Bảng 3.1: Kết sắc ký cột HPLC cao EtOAc 40 Bảng 3.2: Cách pha mẫu thử hoạt tính 45 Bảng 41: Khối lượng loại cao so với nguyên liệu 46 Bảng 4.2: Dữ liệu phổ HSQC Os01 48 Bảng 4.3: Dữ liệu phổ 13C-NMR DEPT Os01 49 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HMBC Os01 50 So sánh liệu phổ Os01 với tài liệu tham khảo 51 Dữ liệu phổ 13C-NMR phổ DEPT Os02 56 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HMBC Os02 57 gh tn to Bảng 1.1 p ie Bảng 4.4: d an lu Bảng 4.7: oa Bảng 4.6: nl w Bảng 4.5: So sánh liệu phổ Os02 với tài liệu tham khảo 57 Bảng 4.9: So sánh liệu phổ Os03 với tài liệu tham khảo 60 Bảng 4.10: Dữ liệu phổ 13C DEPT Os04 67 Bảng 4.11: Dữ liệu phổ 1H, 13C, HMBC Os04 68 Bảng 4.12: Kết đo mật độ quang mẫu dựng đường chuẩn 70 Bảng 4.13: Kết đo mật độ quang mẫu Os03 ll u nf va Bảng 4.8: oi m z at nh z @ 70 m co l gm an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ- BIỂU ĐỒ: Sơ đồ: Trang Sơ đồ 3.1: Quy trình chiết xuất cao EtOH 38 Sơ đồ 3.2: Quy trình phân lập hợp chất từ cao EtOAc 40 Biểu đồ 4.1 : Phương trình đường chuẩn 68 Biểu đồ 4.2 : Phần trăm ức chế theo nồng độ chất ức chế Os03 69 lu an DANH MỤC CÁC HÌNH n va Trang tn to HÌNH: Hình 1.1: Cây hương nhu tía ie gh Hình 1.2: Lá hương nhu tía p Hình 1.3: Cụm hoa hương nhu tía nl w oa Hình 1.4: Quả hương nhu tía d 33 Hình 2.2: Sắc ký cột 33 u nf va an lu Hình 2.1: Sắc ký lớp mỏng Hình 3.1: Nguyên liệu cắt nhỏ trước chiết với EtOH ll 35 m oi Hình 3.2: Sắc kí lớp mỏng cao EtOAc hương nhu tía 39 z at nh 41 Hình 3.4: Tinh chế Os03: (a) Trước, (b) sau 42 44 m co 47 an Lu Hình 4.2 : Sắc kí lớp mỏng Os01 l Hình 4.1 : Hợp chất Os01 44 gm Hình 3.6: Mẫu thử hoạt tính @ Hình 3.5: Mẫu ức chế nồng độ z Hình 3.3: Tinh chế Os01: (a): Trước, (b): Sau 47 n va ac th si Hình 4.3: Hợp chất Os02 53 Hình 4.4: Sắc kí lớp mỏng Os02 53 Hình 4.5 : Hợp chất Os03 59 Hình 4.6 : Sắc kí lớp mỏng Os03 59 Hình 4.7: Sắc kí lớp mỏng Os03 ursolic acid 64 Hình 4.8: Hợp chất Os04 66 Hình 4.9 : Sắc kí lớp mỏng Os04 66 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC: Trang lu an n va p ie gh tn to Lời mở đầu Chương 1: Tổng quan 1.1.Đại cương hương nhu tía - 1.1.1 Mô tả 1.1.1.1 Khái quát 1.1.1.2 Mô tả - 1.1.2 Phân bố sinh thái - 1.2 Các nghiên cứu hương nhu tía - 1.2.1 Tác dụng dược lý 1.2.1.1 Các nghiên cứu nước - 1.2.1.2 Các nghiên cứu nước - 1.2.2 Thành phần hóa học 13 1.2.2.1 Các nghiên cứu nước - 13 1.2.2.2 Các nghiên cứu nước - 13 Chương II: Các phương pháp 30 2.1 Phương pháp chiết ngâm dầm 31 2.2 Phương pháp sắc kí lớp mỏng - 32 2.3 Phương pháp sắc kí cột - 32 2.4 Phương pháp thử hoạt tính kháng tiểu đường - 33 Chương III: Thực nghiệm - 35 3.1 Nguyên liệu-Hóa chất- Thiết bị - 35 3.1.1 Nguyên liệu 35 3.1.2 Hóa chất - 36 3.1.3 Thiết bị - 36 3.2 Chiết xuất cao - 37 3.2.1 Chiết xuất cao EtOH 37 3.3 Phân lập hoạt chất từ cao 39 3.3.1 Cô lập 39 3.3.2 Tinh chế 40 3.3.2.1 Os01 41 3.3.2.2 Os02 41 3.3.2.3 Os03 42 3.3.2.4 Os04 42 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất cô lập 42 3.5 Thử hoạt tính kháng tiểu đường chất phân lập - 42 3.5.1 Pha hóa chất 42 3.5.2 Tiến hành 42 Chương IV: Kết thảo luận - 46 4.1 Kết chiết xuất cao 46 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to 4.1.1 Chiết xuất cao EtOH 46 4.2 Kết cô lập tinh chế 46 4.2.1 Os01 47 4.2.1.1 Các đặc tính Os01 47 4.2.1.2 Nhận danh cấu trúc Os01 47 4.2.2 Os02 52 4.2.2.1 Các đặc tính Os02 52 4.2.2.2 Nhận danh cấu trúc Os02 53 4.2.3 Os03 60 4.2.3.1 Các đặc tính cuả Os03 61 4.2.3.2 Nhận danh cấu trúc Os03 61 4.2.4 Os04 66 4.2.4.1 Các đặc tính Os04 66 4.2.4.2 Nhận danh cấu trúc Os04 66 4.3 Kết thử hoạt tính - 70 Chương V: Kết luận kiến nghị 72 5.1 Các kết đạt 72 5.2 Kiến nghị - 74 Tài liệu tham khảo 75 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si LỜI MỞ ĐẦU Thiên nhiên cung cấp cho nhân loại nguồn nguyên liệu lớn để tạo phương thuốc chữa bệnh Từ nhiều kỷ trước, loại thảo mộc sử dụng để chữa bệnh Theo tổ chức y tế Thế giới (WHO), khoảng 80% dân số giới dựa vào y học cổ truyền để thực việc chăm sóc sức khỏe thông thường Hiện nay, bệnh đái tháo đường bệnh mãn tính, gây tử vong lu cao, đứng hàng thứ ba giới sau bệnh tim mạch ung thư Đái tháo đường an ngày trở nên vấn đề lớn giới y khoa cộng đồng va n Vì vậy, địi hỏi phải tìm loại thuốc hiệu bệnh đái tháo tn to đường Theo kinh nghiệm dân gian, có nhiều dược liệu dùng làm thuốc p ie gh cho bệnh đái tháo đường Trong đó, có hương nhu tía Hương nhu tía (Ocimum sanctum L.) biết đến hàng ngàn năm với nl w nhiều văn minh giới Loại thảo mộc xem biểu tượng d oa thiêng liêng đạo Hindu Khoa học nghiên cứu đặc tính chữa bệnh hương an lu nhu tía phát triển từ kỉ XX Những năm gần đây, hương nhu tía va biết đến với nhiều công dụng kháng khuẩn, kháng viêm, chống mẫn cảm, u nf làm lành vết thương, giảm nguy ung thư, tăng cường sức khỏe… Vì vậy, chúng ll tơi thực đề tài “Khảo sát thành phần hóa học hương nhu tía” oi m z at nh Trong luận văn này, chúng tơi trình bày số kết chiết tách, cô lập, xác định cấu trúc đồng thời khảo sát hoạt tính kháng tiểu đường hợp chất lập z Qua đó, góp phần làm sáng tỏ thêm thành phần hóa học tác dụng dược lý m co l gm @ hương nhu tía an Lu n va ac th si  Một mũi đơn vùng trường thấp 6.77 ppm (1H, s, H–3) chứng tỏ proton khơng có tương tác với proton kề bên  Có mũi đôi proton nhân thơm 6.93 ppm (2H; d; J = 8.5Hz; H– 3’; H–5’) 7.92 ppm (1H; d; J = 8.5Hz; H–2’; H–6’) chứng tỏ chúng tương tác ortho với vòng thơm  Một mũi đơn độ chuyển dịch 12.96 ppm cho thấy Os04 có nhóm – OH kiềm nối lu Bảng 4.10: Dữ liệu phổ 13C-NMR DEPT Os04 an va n Vị trí C 13 DEPT 90 DEPT 135 Kết luận 164.1 Biến Biến =C–O 102.8 Mũi dương Mũi dương –CH= 181.7 Biến Biến >C=O Biến Biến =C–O Mũi dương Mũi dương –CH= Biến =C–O C-NMR tn to p ie gh d oa nl w 161.4 98.8 163.7 93.9 Mũi dương Mũi dương –CH= 157.3 Biến Biến =C–O 10 103.7 Biến 1’ 121.1 Biến Biến 2’ 128.4 Mũi dương Mũi dương u nf va an lu ll Biến oi m z at nh z @ Biến m co l gm >C= >C= an Lu –CH= n va ac th si 3’ 115.9 Mũi dương Mũi dương –CH= 4’ 161.1 Biến Biến =C–O 5’ 115.9 Mũi dương Mũi dương –CH= 6’ 128.4 Mũi dương Mũi dương –CH= • Phổ HMBC: Cho tín hiệu tương tác –OH kiềm nối với nhóm carbon cacbonyl carbon tứ cấp khác.Suy Os04 hợp chất có khung flavone lu • Bảng 4.11 : Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HMBC Os04 an H-NMR δ ppm n va Vị trí C/H 13 HMBC (số H; dạng mũi; J = Hz) δ ppm C-NMR gh tn to 164.1 p ie H → 13C 6.77 (1H; s) H-3 → C-2,4,10,1’ 102.8 181.7 d oa nl w an lu 6.20 (1H; d; J = 2) 161.4 u nf va H-6 → C-5,7,8,10 98.8 ll oi m 6.48 (1H; d; J = 2) z at nh 163.7 H-8 → C-6,7,9,10 93.9 z @ 157.3 10 103.7 1’ 121.1 m co l gm an Lu n va ac th si 2’ 7.92 (1H; d; J = 8.5) 128.4 3’ 6.93 (2H; d; J = 8.5) 115.9 4’ H-2’ → C-3’,4’,6’ 161.1 5’ 6.93 (2H; d; J = 8.5) 115.9 H-5’→C-3,1’,3’,4’ 6’ 7.92 (1H; d; J = 8.5) 128.4 H-6’ → C-2,2’,4’ Từ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HBMC tài liệu tham khảo suy lu cấu trúc Os04 trùng với cấu trúc Apigenin: an va 3' OH 2' n 4' to tn HO 1' O gh p ie 6' 10 OH 5' O w oa nl 4’,5,7-trihydroxyflavone d 4.3 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH: lu va an Sau tiến hành đo mật độ quang mẫu thử hoạt tính Thu kết u nf sau: ll Bảng 4.12: Kết đo mật độ quang mẫu dựng đường chuẩn : oi m 20 z at nh Nồng độ 0.1013 0.14367 (µmol/l) 40 60 100 0.23167 0.2767 z 80 0.189 m co l gm 0.0613 @ A tb an Lu n va ac th si 0.3 0.25 0.2 y = 0.0022x + 0.0592 R2 = 0.9996 0.15 0.1 0.05 0 20 40 60 80 100 120 Biểu đồ 4.1 : Phương trình đường chuẩn lu an Mẫu Os01, Os02 Os04 khơng có hoạt tính ức chế men α-glucoside va n Mẫu Os03 ức chế mạnh men α-glucosidase Thể qua số liệu Bảng 4.13: Kết đo mật độ quang mẫu Os03 : p ie gh tn to sau : 0.109 0.108 0.105 0.111 0.108 0.106 1.444 0.192 0.132 0.123 0.109 0.109 0.133 0.134 0.113 0.108 0.135 0.131 0.108 0.105 0.018333 0.002 0.002 99.85108 99.85108 oa nl w Mẫu trắng d Lần 1.481 0.194 Lần 1.431 u nf A 1.343 0.062 %I 95.38347 va an lu Mẫu ức chế Lần 0.124 ll oi m z at nh 0.028333 z @ 98.6349 m co l gm 97.8903 an Lu n va ac th si 150.0 100.0 y = 3E-07x5 - 8E-05x4 + 0.0085x - 0.4479x2 + 11.05x - 1.0005 R2 = 50.0 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 Biểu đồ 4.2: Phần trăm ức chế theo nồng độ chất ức chế Os03 lu Suy giá trị IC 50 = µg/ml = 13.15 µmol/ml an n va So sánh với giá trị IC 50 Acarbose (IC 50 = 50 µM)[62] Nhân thấy : tn to Giá trị IC 50 Os03 thấp chứng minh hoạt tính ức chế men α−glucosidase p ie gh Os03 cao d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Chương V : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ: 5.1 CÁC KẾT QUẢ ĐÃ ĐẠT ĐƯỢC - Từ cao EtOH, tiến hành tách riêng thành loại cao theo độ phân cực hợp chất có hương nhu tía :  Cao n-hexan 27g (16.3% ẩm độ)  Cao EtOAc 12,3g (11.6% ẩm độ)  Cao MeOH 94g (35.4% ẩm độ) lu an - Từ cao EtOAc, cô lập, tinh chế định danh chất n va p ie gh tn to d oa nl w an lu Luteolin ll u nf va Hay 3’,4’,5,7-tetrahydroxyflavone m OH oi OCH3 OH O z at nh O z OH m co l Eugenyl-β-D-glucoside gm @ OH an Lu Hay 4-allyl-1-O-β-D-glucopyranosyl-2-methoxybenzene n va ac th si Ursolic acid lu Hay 3β-hydroxy-urs-12-en-28-oic an n va p ie gh tn to d oa nl w Apigenin lu va an Hay 4’,5,7-trihydroxyflavone ll oi m mẫu đối chứng Acarbose u nf - Khảo sát hoạt tính kháng tiểu đường hợp chất phân lập So sánh với z at nh • Hợp chất Os01, Os02 Os04 khơng có hoạt tính kháng tiểu đường • Hợp chất Os03 có hoạt tính kháng tiểu đường cao z gm @ 5.2 KIẾN NGHỊ: m co hương nhu tía l Tiếp tục khảo sát thành phần hóa học cao n-Hexan, MeOH, an Lu Khảo sát hoạt tính khác hợp chất phân lập n va ac th si Hợp chất Os03 có hoạt tính kháng tiểu đường cao Do kiến nghị tiến hành khảo sát phương pháp phổ khác để khẳng định lại xác cấu trúc tiến hành thử hoạt tính kháng tiểu đường Os03 động vật thí nghiệm Khảo sát ứng dụng chất có hoạt tính hỗ trợ điều trị tiểu đường lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT: Bộ y tế, 1977, Cơng trình nghiên cứu khoa học, 189,196, 198 Bộ y tế, 2002, Dược điển Việt Nam I, tập trang 383-384 Đỗ Huy Ích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, 2003, Viện Dược Liệu, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập 1, trang 1027-1029 lu an Đỗ Tất Lợi, 1995, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất n va Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội, trang 829-831 tn to Ngô Văn Thu, 1998, Bài giảng dược liệu tập I, Nhà xuất Bộ Y Tế ie gh Giáo dục Đào tạo p Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007, Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất nl w Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, trang 91, 138, 213 d oa Nguyễn Kim Phi Phụng, 2005, Phổ NMR sử dụng phân tích hữu cơ, Nhà an lu xuất Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, trang 176-178 ll u nf va Phạm Hoàng Hộ, 2000, Cây Cỏ Việt Nam, Nhà Xuất Bản Trẻ, trang 847 oi m TIẾNG NƯỚC NGOÀI: z at nh Agrawal P, Rai V, Singh RB, 1996, Int J Clin Pharmol Ther: 34, z Randomized placebo-controlled, single blind trail of holy basil leaves in @ gm patients with noninsulin dependent diabetes mellitus, 406–409 1-56 Directorate, CSIR, New Delhi, pp 79–89 1-1 K, Sivaramakrishnan VM, 1992, Food an Lu 11 Aruna m co l 10 Anonymous., 1991, Wealth of India Vol 7, Publication and Information Chem Toxicol, Anticarcinogenic effects of some Indian plants products, 953 2-14 n va ac th si 12 Auil F, Khan MS, Owais M, Ahmad I, 2005, J Basic Microbiol , Effect of certain bioactive plant extracts on clinical isolates of beta-lactamase producing methicillin resistant Staphylococcus aureus , pp 106-114 2-32 13 Bhargava KP, Singh N, 1981, J Res Edu Indian, Anti-stress activity of Ocimum sanctum Lin 73: 443–451 1-20 14 Batta SK, Santhakumari G, 1971, Indian J Medical Research, The antifertility effect of Ocimum sanctum and Hibiscuc Rosa Sinensis, 59: 777– 781 15 Bhatnagar M, Kapur KK, Jalees S, Sharma SK, 1993, J Entomol Res, lu Laboratory evaluation of insecticidal properties of O basilicum Lin and O an sanctum Lin Plant essential oil and their major constituents against vector va n mosquito species, 17: 21–26 1-86 J Essent Oil Res, The gh tn to 16 Brophy JJ, Goldsack RJ, Clarkson JR, 1993, essential oil of Ocimum tenuiflorum L (Lamiaceae) growing in Northern ie p Australia 459–461 1-10 oa nl w 17 Chattopadhyay RR, Sarkar SK, Ganguly S, Medda C, Basu TK, 1992, Indian J Physiol Pharmacol, Hepato-protective activity of Ocimum sanctum leaf d an lu extract against paracetamol induced hepatic damage in rats, 24: 163–165.1-59 u nf va 18 Dey BB, Choudhury MA, 1984, Indian Perfumer, Essential oil of Ocimum sanctum L and its antimicrobial activity, 28: 82–87 1-24 ll m oi 19 Josip Masteli, Igor Jerkovi, Marijana Vinkovi, Zoran Dzoli, and Drazen z at nh Viki-Topi, Josip Masteli, 2004, Synthesis of Selected Naturally Occurring Glucosides of Volatile Compounds Their Chromatographic and Spectroscopic z gm @ Properties, 1735 20 Dey BB, Choudhary MA, 1980, Indian Perfumer, Effect of plant l m co development stage and some micronutrients on eugenol content in O sanctum L Determination of eugenol by Folin-Ciocalteu reagent 24: 199–203 1-100 an Lu n va ac th si 21 Godhwani S, Godhwani JL, Vyas DS, 1987, J Ethnopharmacol , Ocimum sanctum: an experimental study evaluating its anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activity in animals, 21:153–163 1-61 22 Hasan SB, Deo PG, 1994, Int Pest Control, Ocimum sanctum seeds for mosquito control, 20–21 1-85 23 Kathiresan K, Guanasekan P, Rammurthy N, Govidswami S, 1999, Pharmaceutical Biology 37(4), Anticancer activity of Ocimum sanctum 285290 2-13 24 Karthikeyan K, Ravichadran P, Govindasamy S, 1999, Oral Oncol 35, lu Chemopreventive effect of Ocimum sanctum on DMBA-induced hamster an buccal pouch carcinogenesis, 112-119 18-2 va n 25 Kamaraj C, Rahuman AA, Bagavan A, 2008, Parasitol Res, Screening for Helicoverpa gh tn to antifeedant and larvicidal activity of plant extracts against armigera (Hübner), Sylepta derogata (F.) and Anopheles stephensi (Liston), ie p 103: 1361–1368 1-89 oa nl w 26 Kicel A, Kurowska A, Kalemba D, 2005, J Essent Oil Res, Composition of the essential oil of Ocimum sanctum L Grown in Poland during vegetation, d an lu 17: 217–219, 1-16 J Chromatogr A, u nf va 27 Kothari SK, Bhattacharya AK, Ramesh S, 2004, Essential oil yield and quality of methyl eugenol rich Ocimum tenuiflorum L.f ll z at nh harvest :1054: 67–72 1-7 oi m (syn Ocimum sanctum L.) grown in south India as influenced by method of 28 Lawrence BM, Hogg JW, Terhune SJ, Pichitakul N, 1972, Flav Industry, z l gm Ocimum basilicum from Thailand, 47–49 1-8 @ Essential oils and their constituents IX The Oils of Ocimum sanctum and m co 29 Machado MIL, Silva MGV, Matos FJA, Craverio AA, Alencar WJ, 1999, J Essent Oil Res, Volatile constituents from leaves and inflorescence oil of an Lu Ocimum tenuiflorum L.f (syn Ocimum sanctum L) grown in Northeastern n va Brazil, 11: 324–326, 1-15 ac th si 30 Mondello L, Zappia G, Cotroneo A, Bonaccorsi I, Chowdhury JU, Yusuf M, Dugo G, 2002, Studies onthe essential oil-bearing plants of Bangladesh, Part VIII, Composition of some Ocimum oils O.basilicum L var purpurascens ; O sanctum L green; O sanctum L purple; O americanum L., citral type; O americanum L., camphor type, 17: 335–340 1-17 31 Nadkarni GB, Patwardhan VA, 1952, CurSci, Fatty oil from the seeds of Ocimum sanctum Linn (Tulsi), 91: 68–69 1-113 32 Nguyen H, Lemberkovics E, Tarr K, Mathe IJ, Petri G, 1993, Acta Agronomica Hungarica, A comparative study on formation of flavonoid, tannin, polyphenol contents in ontogenesis of Ocimum basilicum L, 42: 41–50 lu an 1-11 va n 33 Norr H, Wanger H, 1992, Planta Med, New constituents from Ocimum gh tn to sanctum, 58: 574 1-13 34 Prajapati ND, Purohit SS, Sharma AK, Kumar T, 2003, Agrobios, India, A ie p Hand Book of Medicinal Plant, 1st Ed, p 367 2-2 oa nl w 35 Prashar R, Kumar A, Hewer A, Cole KJ, Davis W, Phillips DH, 1998, Cancer Lett , Inhibition by an extract of Ocimum sanctum of 7, 12- d an lu dimethylbenz(a)anthracene in rat hepatocytes in vitro, 155-160 2-19 u nf va 36 Phillip MP, Damodaran NP, 1985, Indian Perfumer, Chemo-types of Ocimum sanctum Linn, 29: 49–56 1-4 ll m oi 37 Rao BG, Nigam SS, 1970, Indian J Med Res, The in vitro antimicrobial z at nh efficiency of essential oils, 58: 627–633 1-25 38 Rai V, Iyer U, Mani UV, 1997, Plant Foods Hum Nutri, Effect of Tulasi z gm @ (Ocimum sanctum) leaf powder supplementation on blood sugar levels, serum lipids and tissue lipids in diabetic rats, 50: 9-16 1-50 l m co 39 Ravid Z, Putievsky E, Katzir I, Lewinsohn E, 1997, Flav Frag, Enantiomeric composition of linalol in the essential oils of Ocimum species an Lu and in commercial Basil oils, 12: 393–396 1-14 n va ac th si 40 Reddy SS, Karuna R, Saralakumari, 2008, Horm Metab, Prevention of insulin resistance by ingesting aqueous extract of Ocimum sanctum to fructosefed rats, 40: 44-49 1-54 41 Sekhawat PS, Prasada R, 1971, Sci Cult, Antifungal properties of some plant extracts II growth inhibition studies,37: 40–4 1-23 42 Skaltsa H, Philianos S, Singh M, 1987, Fitoterapia Phytochemical study of the leaves of Ocimum sanctum 1987; 8: 286 1-12 43 Skaltsa H, Tzakou O, Singh M, 1999, Pharmaceut Biol, Polyphenols of Ocimum sanctum from Suriname, 1999; 37: 92–94 1-112 lu 44 Singh S, Majumdar DK, Rehan HMS, 1996, Ethanopharmacol, Evaluation an va of anti-inflammatory potential of fixed oil of Ocimum sanctum (holy basil) and n its possible mechanism of action 54: 19–26.1-63 tn to 45 Singh S, Taneja M, Majumdar DK, 2007, Indian J Exp Biol 45, Biological gh p ie activities of Ocimum sanctum L fixed oil, 403-412 w 46 Singh S, Agrawal SS, 1991, J Res Edu Indian Med, Anti-asthematic and oa nl anti-inflammatory activity of Ocimum sanctum Linn 7–9: 23–28 1-62 d 47 Singh S, Agrawal SS, 1991, J Res Edu Indian Med, Anti-asthematic and lu va an anti-inflammatory activity of Ocimum sanctum Lin 7–9: 23–28 u nf 48 S Hammami, M L Ciavatta, H Ben Jannet, G Cimino and Z Mighria, ll 2006, Croatica chemica acta ccacaa 79, Three Phenolic and a Sterol Glycosides m oi Identified for the First Time in Matthiola longipetala Growing in Tunisia z at nh 49 Sukari MA, Rahmani M, Lee GB, 1995, Fitoterapia Constituents of stem z barks of Ocimum sanctum, LXVI: 552–553 1-9 @ gm 50 Ubaid RS, Anantrao KM, Jaju JB, Mateenuddin MD, 2003, Indian J Physiol by antitubercular drugs in rats 2003; 47:465–470 1-58 m co l Pharmacol, Effect of Ocimum sanctum leaf extract on hepatotoxicity induced an Lu n va ac th si 51 Uma Devi P, Bisht KS, Vinitha M, 1998, Br J Radiol, A comparative study of radioprotection by Ocimum flavonoids and synthetic aminothiol protectors in the mouse, 71: 782–784 1-76 52 Uma Devi P, Ganasoundari A, 1999, Indian J Exp Biol , Modulation of glutathione and antioxidant enzymes by Ocimum sanctum and its role in protection against radiation injury, 37: 262–268 1-78 53 Uma Devi P Radioprotective,2001, Indian J Exp Biol, Anticarcinogenic and antioxidant properties of the Indian holy basil, Ocimum sanctum (Tulasi), 39:185-190 2-15 lu 54 Uma Devi P, Gonasoundari A, Vrinda B, Srinivasan KK, Unnikrishanan an MK, 2000, Radiat Res, Radiation protection by the Ocimum sanctum va n flavonoids orientin and vicenin: Mechanism of action,455-460 gh tn to 55 Vats V, Yadav SP, Grover JK, 2004, Jethanopharmacol, Ethanolic extract of Ocimum sanctum leaves partially attenuatesstreptozotocin-induced ie p alteration in glycogencontent and carbohydrate metabolism in rats, 90: 155– oa nl w 160 1-51 56 Vina A, Murillo E, 2003, J Braz Chem Soc, Essential oil composition from d an lu twelve varieties of Basil (Ocimum spp) grown in Colombia, 14: 744–749 1-18 u nf va 57 I Wawer and A Zielinska, 2001, Magn Reson Chem 39(7), 13C CP/MAS NMR studies of flavonoids, 374-380 ll m oi 58 Yanpallewar SU, Rai S, Kumar M, Acharya SB, 2004, Pharmacol z at nh Biochem Behav 79, Evaluation of antioxidant and neuroprotective effect of Ocimum sanctum on transient cerebral ischemia and long term cerebral z gm @ hypoperfusion, 155-164 2-5 59 Y Orihara, T Furuya, N Hashimoto, Y Deguchi, K, 1992, Tokoro, and T m co l Kanisawa, Phytochemistry 31, 827–831 6-hamimi os02 60 Y Takeda, Y Ooiso, T Masuda, G Honda, H Otsuka, E.Sezik, and E an Lu Yesilada, 1998, Phytochemistry 49, 787–791 hamama -7 n va ac th si 61 Harmand, P.O.; Duval, R.; Liagre, B.; Jayat-Vignoles, C.; Beneytout, J.L.; Delage, C.; Simonb, A, 2003, Int J Oncol, Ursolic acid induces apoptosis through caspase-3 activation and cell cycle arrest in HaCat cells, 105-112 62 Syed Shahzad ul Hussan, 2005, Institute of Chemistry University of Lubeck, Small Ligand Effectors of Bio-macromolecules, Exploration of Novel α-Glucosidase Inhibitors and NMR Investigation of tRNAPhe-bound Aminoglycosides, 99 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si