Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu đặc điểm sinh học và chẩn đoán potyvirus gây bệnh chanh leo

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA NƠNG HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ CHẨN ĐOÁN POTYVIRUS GÂY BỆNH CHANH LEO Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS HÀ VIẾT CƯỜNG Bộ môn : BỆNH CÂY Sinh viên thực : NGUYỄN MẠNH TUYỀN MSV : 620059 Lớp : K62 – BVTVA HÀ NỘI, 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình khóa luận tốt nghiệp riêng tơi Tồn bộ kết nghiên cứu có thành suốt trình thực đề tài Các kết quả, số liệu hoàn toàn thật, chưa xuất báo cáo khoa học Tôi xin cam đoan tài liệu tham khảo, thơng tin hữu ích phục vụ cho đề tài trích dẫn cụ thể, rõ ràng giúp đỡ cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Mạnh Tuyền i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài tốt nghiệp mình, tơi nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ cá nhân tập thể Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới người thầy đáng kính PGS.TS Hà Viết Cường – Giám đốc Trung tâm Bệnh nhiệt đới Trưởng môn Bệnh cây, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Người tận tình dẫn dắt, hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành báo cáo Đồng thời xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô khoa Nông Học Đặc biệt thầy cô ngành Bảo vệ thực vật giúp đỡ, dạy bảo suốt thời gian học tập rèn luyện trường Cuối cùng, chân thành cảm ơn tới người thân gia đình, bạn bè người ln tin tưởng, ủng hộ, động viên để tơi hồn thành báo cáo Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Mạnh Tuyền ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Bản tóm tắt khóa luận tốt nghiệp viii PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cây chanh leo 2.1.1 Giới thiệu sơ lược chanh leo 2.1.2 Tình hình sản xuất chanh leo giới 2.1.3 Tình hình nghiên cứu nước 2.1.4 Thành phần bệnh hại chanh leo 2.2 Potyvirus 2.2.1 Đặc điểm chung 2.2.2 Lan truyền potyvirus 2.2.3 Phòng chống potyvirus 2.3 Potyvirus chanh leo 10 2.3.1 Thành phần phân bố bệnh hại potyvirus gây hại chanh leo giới 10 2.3.2 Đặc điểm số potyvirus quan trọng giới 12 2.3.3 Đặc điểm số potyvirus quan trọng phát Việt Nam 14 iii 2.4 Các kỹ thuật chẩn đoán potyvirus hại chanh leo: 17 2.4.1 Kỹ thuật dựa acid nucleic (RT-PCR) 17 2.4.2 Kỹ thuật dựa kháng thể 18 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Thời gian nghiên cứu 20 3.3 Đối tượng nghiên cứu 20 3.4 Vật liệu nghiên cứu 20 3.4.1 Cây nguồn bệnh 20 3.4.2 Đệm lây nhiễm tiếp xúc học 20 3.4.3 Vật liệu Elisa 20 3.4.4 Vật liệu PCR/RT-PCR 21 3.5 Phương pháp nghiên cứu: 21 3.5.1 Phương pháp lây nhiễm nhân tạo virus tiếp xúc học: 21 3.5.2 Phương pháp lây nhiễm nhân tạo virus rệp theo kiểu truyền không bền vững: 22 3.5.3 Phương pháp chiết RNA 22 3.5.4 Phương pháp RT-PCR two steps phát potyvirus 23 3.5.5 Điện di sản phẩm PCR gel Agarose 1% 23 3.5.6 ELISA 24 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 NGHIÊN CỨU đặc điểm sinh học PaMoV 25 4.1.1 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV thị rau muối tiếp xúc học 25 4.1.2 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV thị thuốc tiếp xúc học 26 4.1.3 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV trên số trồng tiếp xúc học 27 iv 4.1.4 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV chanh leo tiếp xúc học 29 4.1.5 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV chanh leo rệp muội 30 4.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học TELOSMA MOSAIC VIRUS (TelMoV) 31 4.2.1 Kết lây nhiễm nhân tạo TelMV thị rau muối 32 4.2.2 Kết lây nhiễm nhân tạo TelMV thị thuốc tiếp xúc học 33 4.2.3 Kết lây nhiễm nhân tạo TelMV số trồng tiếp xúc học 34 4.2.4 Kết lây nhiễm nhân tạo TelMV chanh leo rệp muội tiếp xúc học 35 4.3 Nghiên cứu đặc điểm sinh học East Asion Passiflora virus chủng IB (EAPV-IB) 36 4.3.1 Kết lây nhiễm nhân tạo EAPV-IB thị tiếp xúc học 37 4.3.2 Kết lây nhiễm nhân tạo EAPV-IB số trồng tiếp xúc học 38 4.3.3 Kết lây nhiễm EAPV chanh leo rệp muội 39 4.4 Đánh giá ảnh hưởng lây nhiễm chéo potyvirus chanh leo bằ ng tiế p xúc ho ̣c 39 4.5 chẩ n đoán potyvirus ̣i chanh leo ta ̣i Viê ̣t Nam bằ ng ELISA RTPCR 41 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kế t luâ ̣n 44 5.2 Kiế n nghi ̣ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC 48 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Thông tin dinh dưỡng có 100 gram chanh leo Bảng 2.2: Thành phần potyvirus gây hại chanh leo giới 10 Bảng 4.1 Kết lây nhiễm PaMoV thị rau muối tiếp xúc học 25 Bảng 4.2 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV thị thuốc tiếp xúc học 27 Bảng 4.3 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV số trồng tiếp xúc học 28 Bảng 4.4 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV chanh leo tím tiếp xúc học 30 Bảng 4.5 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV chanh leo rệp muội theo kiểu không bền vững 31 Bảng 4.6 Kết lây nhiễm TelMV thị rau muối tiếp xúc học 32 Bảng 4.7 Kết lây nhiễm TelMV thị thuốc tiếp xúc học 34 Bảng 4.8 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV số trồng tiếp xúc học 35 Bảng 4.9 Kết lây nhiễm nhân tạo TelMV-SL7 chanh leo tím rệp muội tiếp xúc học 36 Bảng 4.10 Kết lây nhiễm EAPV-IB-LB4 thị tiếp xúc học 37 Bảng 4.11 Kết lây nhiễm nhân tạo EAPV-IB-LB4 số trồng tiếp xúc học 38 Bảng 4.12 Đánh giá ảnh hưởng lây nhiễm chéo potyvirus chanh leo tím bằ ng tiế p xúc ho ̣c 40 Bảng 4.13 So sánh phản ứng RT-PCR ELISA phát potyvirus chanh leo 42 vi DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Kết lây nhiễm PaMoV (nguồn PaMoV-ĐL) rau muối đỏ (Chenopodium amanticolor) 26 Hình 4.2 Kết lây nhiễm nhân tạo PaMoV lạc tiên tiếp xúc học 29 Hình 4.3 Lây nhiễm nhân tạo PaMoV rệp muội chanh leo tím 31 Hình 4.4 Kết lây nhiễm TelMV (nguồn TelMV-SL7) rau muối đỏ (Chenopodium amanticolor) 33 Hình 4.5 Đánh giá ảnh hưởng lây nhiễm chéo potyvirus chanh leo tím bằ ng tiế p xúc ho ̣c 41 Hình 4.6 Hình RT-PCR phát potyvirus cặp mồi chung CI-For CI-Rev chanh leo 43 vii BẢN TÓM TẮT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên khóa luận: “NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ CHẨN ĐOÁN POTYVIRUS GÂY BỆNH CHANH LEO.” Giảng viên hướng dẫn: PGS TS HÀ VIẾT CƯỜNG Sinh viên thực hiện: Nguyễn Mạnh Tuyền Lớp: K62BVTVA Khóa: 62 Mục đích đề tài: Xác định đặc điểm sinh học, đặc biệt tính gây bệnh potyvirus hại chanh leo; Đánh giá khả chuẩn đoán potyvirus hại chanh leo kỹ thuật dựa kháng thể RT-PCR Phương pháp nghiên cứu: Phương pháp lây nhiễm nhân tạo tiếp xúc học Phương pháp lây nhiễm nhân tạo virus rệp theo kiểu không bền vững Phương pháp RT-PCR two steps phát potyvirus Kỹ thuật điện di sản phẩm PCR gel Agarose 1% Kỹ thuật ELISA Kết nghiên cứu: Đặc điểm sinh học PaMoV gồm: Tạo vết bệnh cục rau muối đỏ không nhiễm rau muối trắng; không nhiễm thuốc K326 thuốc cảnh; nhiễm dễ dàng Lạc tiên; không nhiễm cà chua, đậu cove, đậu đũa, đậu Hà Lan, dưa chuột Hoắc hương; không truyền qua rệp đậu Đặc điểm sinh học TelMV gồm: Tạo vết bệnh cục rau muối đỏ không nhiễm rau muối trắng; nhiễm không tạo triệu viii chứng thuốc cảnh; không gây bệnh thuốc K326; không nhiễm Lạc tiên, cà chua, đậu cove, đậu đũa, đậu Hà Lan, dưa chuột Hoắc hương; không truyền qua rệp đậu truyền qua rệp Đặc điểm sinh học EAPV-IB gồm: Không nhiễm rau muối đỏ rau muối trắng; không nhiễm thuốc K326; nhiễm không tạo triệu chứng thuốc cảnh; không nhiễm Lạc tiên, cà chua, đậu cove, đậu đũa, đậu Hà Lan, dưa chuột Hoắc hương; không truyền qua rệp đậu Lây nhiễm chéo cặp potyvirus EAPV-IB-LB4, TelMV-SL7 PaMoV-ĐL cho thấy công thức gồm lây EAPV-IB-LB4 trước sau lây nhiễm TelMV-SL7 lây PaMoV-ĐL trước sau lây nhiễm TelMV-SL7 có giá trị OD trung bình lây nhiễm kép thấp so với lây nhiễm virus Kiểm tra RT-PCR với cặp mồi đặc hiệu potyvirus 18 mẫu chanh leo có phản ứng dương với ELISA cho thấy ELISA sử dụng kháng huyết PaMoV nhạy ổn định so với RT-PCR ix chứng tỏ ELISA sử dụng kháng huyết PaMoV nhạy ổn định so với RT-PCR nhằm phát potyvirus chanh leo virus mẫu bị ảnh hưởng trình chiết mẫu Bảng 4.13 So sánh phản ứng RT-PCR ELISA phát potyvirus chanh leo Địa điểm STT Mẫu Triệu chứng Huyện Tỉnh ELISA OD Kết Giếng PCR gel luận DL-1-4 Cuố n lá dữ dô ̣i Đức Trọng Lâm Đồng 0.9805 + + A9 DL-2-1 Khả m, Nhăn Đức Trọng Lâm Đồng 2.0215 + + A10 DL-2-2 Khả m, Đố m vàng Đức Trọng Lâm Đồng 2.048 + + A11 DL-3-4 Vàng đo ̣t, Khảm Đức Trọng Lâm Đồng 2.0386 + + A12 DL-3-6 Đức Trọng Lâm Đồng 1.9883 + + A13 DL-3-7 Đức Trọng Lâm Đồng 1.4695 + + A8 DL-5-2 Khả m Đức Trọng Lâm Đồng 2.0196 + + A15 NA-1-1 Đốm biến vàng nhẹ Quế Phong Nghệ An 0.3582 + - A16 NA-1-7 Đốm biến vàng nhẹ Quế Phong Nghệ An 0.3061 + - A17 10 NA-1-10 Dải gân Quế Phong Nghệ An 0.3264 + - A18 11 NA-2-1 Khảm nhẹ Quế Phong Nghệ An 0.3032 + - A19 12 TL-6-G Khảm Mộc Châu Sơn La 0.6275 + - A20 13 CK3 Khảm Mộc Châu Sơn La 2.0105 + + A21 14 CK5 Vàng gân Mộc Châu Sơn La 1.9139 + - A22 15 CK6 Khảm Mộc Châu Sơn La 2.0393 + - A23 Quế Phong Nghệ An 1.953 + + A4 Quế Phong Nghệ An 2.0468 + + A6 + A1 16 17 18 Cuố n lá, vàng gân, biế n và ng Cuố n lá nhe,̣ Khả m nhe ̣ NA4-7 (H40- Đốm hình nhẫn lá, 1-3) NA4-10 (A13- Đốm hình nhẫn lá, 3-4) PaMoV-DL (đối chứng +) Ghi chú: (-) phản ứng âm tính; (+): phản ứng dương tính Phản ứng ELISA thực từ trước 42 Hình 4.6 Hình RT-PCR phát potyvirus cặp mồi chung CI-For CI-Rev chanh leo Số mẫu trình bày Bảng 4.13 Các mẫu DL, A13-3-4, DL3-7, DL2-1, DL2-2, DL-3-4,DL3-6, DL5-2, CK3, mẫu nhìn thấy băng Trong mẫu DL, DL2-1, DL3-4 mẫu có băng đậm nhất, tiếp đến DL3-7, DL2-2, DL5-2, CK3 mẫu đậm hơn, Mẫu A13-3-4, DL3-6 mẫu băng đậm 43 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Đặc điểm sinh học PaMoV gồm: Tạo vết bệnh cục rau muối đỏ không nhiễm rau muối trắng; không nhiễm thuốc K326 thuốc cảnh; nhiễm dễ dàng Lạc tiên; không nhiễm cà chua, đậu cove, đậu đũa, đậu Hà Lan, dưa chuột Hoắc hương; không truyền qua rệp đậu Đặc điểm sinh học TelMV gồm: Tạo vết bệnh cục rau muối đỏ không nhiễm rau muối trắng; nhiễm không tạo triệu chứng thuốc cảnh; không gây bệnh thuốc K326; không nhiễm Lạc tiên, cà chua, đậu cove, đậu đũa, đậu Hà Lan, dưa chuột Hoắc hương; không truyền qua rệp đậu truyền qua rệp Đặc điểm sinh học EAPV-IB gồm: Không nhiễm rau muối đỏ rau muối trắng; không nhiễm thuốc K326; nhiễm không tạo triệu chứng thuốc cảnh; không nhiễm Lạc tiên, cà chua, đậu cove, đậu đũa, đậu Hà Lan, dưa chuột Hoắc hương; không truyền qua rệp đậu Lây nhiễm chéo cặp potyvirus EAPV-IB-LB4, TelMV-SL7 PaMoV-ĐL cho thấy cơng thức gồm lây EAPV-IB-LB4 trước sau lây nhiễm TelMV-SL7 lây PaMoV-ĐL trước sau lây nhiễm TelMV-SL7 có giá trị OD trung bình lây nhiễm kép thấp so với lây nhiễm virus Kiểm tra RT-PCR với cặp mồi đặc hiệu potyvirus 18 mẫu chanh leo có phản ứng dương với ELISA cho thấy ELISA sử dụng kháng huyết PaMoV nhạy ổn định so với RT-PCR 44 5.2 KIẾN NGHI ̣ Tiếp tục thử nghiệm nhằm tối ưu hóa việc sản xuất que thử nhanh nhằm chẩn đoán PaMV, chủ yếu xác định đệm chiết mẫu cần thiết làm tăng độ nhạy độ đặc hiệu phản ứng 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PGS.TS.Hà Viết Cường (2011), Bài giảng virus thực vật phytoplasma viroid, NXB Trường Đại Học Nông Nghiệp, Hà Nội, tr 101-111 Reis, L C R D., Facco, E M P., Salvador, M., Flôres, S H., & Rios, A D O (2020) Characterization of orange passion fruit peel flour and its use as an ingredient in bakery products Journal of Culinary Science & Technology, 18 (3), 214-230 Bahadır, E B and M K Sezgintürk (2016) "Lateral flow assays: Principles, designs and labels." TrAC Trends in Analytical Chemistry 82: 286-306 Chen, B., et al (2021) "Complete genome sequence of passiflora virus Y infecting passion fruit in China." Archives of virology 166(5): 1489-1493 Chen, S., et al (2018) "Identification of Telosma mosaic virus infection in Passiflora edulis and its impact on phytochemical contents." Virology journal 15(1): 1-8 Chiang, C.-H., et al (2012) "First report of Passiflora virus Y infecting Macroptilium atropurpureum in Taiwan." Plant disease 96(6): 918-918 Chiemsombat, P., et al (2014) "Occurrence of Telosma mosaic virus causing passion fruit severe mosaic disease in Thailand and immunostrip test for rapid virus detection." Crop Protection 63: 41-47 Coutts, B A., et al (2011) "Indigenous and introduced potyviruses of legumes and Passiflora spp from Australia: biological properties and comparison of coat protein nucleotide sequences." Archives of virology 156(10): 1757 Cường, H V., et al "Tạo kháng huyết đa dòng protein vỏ tái tổ hợp Passiflora mottle virus, potyvirus nhiễm chanh leo Việt Nam." 10 Ha, C., et al (2008) "Design and application of two novel degenerate primer pairs for the detection and complete genomic characterization of potyviruses." Archives of virology 153(1): 25-36 46 11 Jaramillo Mesa, H., et al (2018) "Molecular characterization of Soybean mosaic virus (SMV) infecting Purple passion fruit (Passiflora edulis f edulis) in Antioquia, Colombia." Archives of Phytopathology and Plant Protection 51(11-12): 617-636 12 Kiptui, L J., et al (2020) "Interaction between Cowpea Aphid-Borne Mosaic Virus Isolates and Its Effect on Passion Fruit Woodiness Disease on Passiflora edulis Sims and Passiflora ligularis Juss." Advances in Agriculture 2020 13 Manicom, B., et al (2003) "Diseases of passion fruit." Diseases of tropical fruit crops: 413-441 14 Nakamura, M and H Iwai (2020) "Effects of coinfection with East Asian Passiflora virus and East Asian Passiflora distortion virus on Passiflora foetida." Journal of General Plant Pathology 86(3): 211-218 15 Nascimento, A., et al (2006) "Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) is widespread in passionfruit in Brazil and causes passionfruit woodiness disease." Archives of virology 151(9): 1797-1809 16 Noveriza, R., et al (2016) "Molecular cloning and sequencing of telosma mosaic virus (TeMV) causing mosaic disease on patchouli." Plant Pathology Journal (Faisalabad) 15(2): 65-74 17 Parry, J., et al (2004) "Passiflora virus Y, a novel virus infecting Passiflora spp in Australia and the Indonesian Province of Papua." Australasian Plant Pathology 33(3): 423-427 18 Ribeiro, J and M Dias (2005) "Diseases of passion fruit." Informe Agropecuario 26(228): 36-39 19 Wijs, J d (1974) "A virus causing ringspot of Passiflora edulis in the Ivory Coast." Annals of applied biology 77(1): 33-40 20 Xie, L., et al (2020) "Molecular characterization of two recombinant isolates of telosma mosaic virus infecting Passiflora edulis from Fujian Province in China." PeerJ 8: e8576 47 PHỤ LỤC PHỤ LỤC KIỂM TRA ELISA CÁC MẪU LÂY NHIỄM PAMOV 10 11 12 A 0.0314 0.2871 0.2476 0.2675 0.2392 0.2671 0.2533 0.0279 0.0304 0.0302 0.031 0.034 B 0.0282 0.2381 0.2422 0.3463 0.2639 0.2784 0.2685 0.4185 0.2512 0.3112 0.2586 0.0263 C 0.0262 0.243 2.0932 0.2601 0.2405 0.2454 0.2377 0.2346 0.2691 0.2555 0.3739 0.0395 D 0.0244 0.2313 0.2447 0.2338 0.2419 0.2364 0.2457 0.2372 0.2439 0.2353 0.2173 0.0227 E 0.0283 1.9177 1.0177 0.3217 0.2479 0.2455 1.8127 0.265 0.2524 0.2525 0.2663 0.0285 F 0.0276 0.2377 0.2932 0.2743 0.2406 0.2499 0.2554 0.2343 0.2494 0.2333 0.3787 0.3461 G 0.0261 2.0256 0.2578 0.3051 0.2481 0.26 0.2873 0.2289 0.2437 0.2241 0.3843 0.3443 H 0.025 0.2251 2.0541 2.0708 2.0729 0.2212 0.2778 0.2674 0.2712 0.2404 0.4317 0.4043 A 43 50 57 64 71 B 44 51 58 65 C 45 52 59 66 D 46 53 60 E 40 47 54 61 F 41 48 55 G 42 49 56 đc dương đc dương đc dương H 10 11 72 95 73 98 67 74 68 75 62 69 63 70 96 97 122 99 100 123 104 105 106 124 113 114 115 131 đc chanh leo đc K326 đc TLC đc lạc tiên đc hoắc hương đc đậu đc chanh leo đc K327 đc TLC đc lạc tiên đc hoắc hương đc đậu đc chanh leo đc K328 đc TLC đc lạc tiên đc hoắc hương đc đậu 48 12 Mẫu Giếng Mẫu A2 Lá đậu Hà Lan 308F1 Lây từ chanh leo nhiễm PaMoV Đắc Lăk B2 Lá đậu cove nhâṭ haṭ trắ ng ( cove 03 ) Lây từ chanh leo nhiễm PaMoV Đắc Lăk C2 Lá đậu đũa cao sản số ( VA005 ) Lây từ chanh leo nhiễm PaMoV Đắc Lăk D2 Lá đậu cove lùn ̣t trắ ng Lây từ chanh leo nhiễm PaMoV Đắc Lăk 40 E2 Lá chanh leo non lây nhiễm lạc tiên nhiễm PaMoV đà loan sang chanh leo 41 F2 Lá chanh leo non lây nhiễm lạc tiên nhiễm PaMoV đà loan sang chanh leo 42 G2 Lá chanh leo non lây nhiễm lạc tiên nhiễm PaMoV đà loan sang chanh leo 43 A3 Lá chanh leo non lây nhiễm lạc tiên nhiễm PaMoV đà loan sang chanh leo 44 B3 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ lạc tiên nhiễm PaMoV Đăk Lak sang chanh leo 45 C3 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ lạc tiên nhiễm PaMoV Đăk Lak sang chanh leo 46 D3 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ lạc tiên nhiễm PaMoV Đăk Lak sang chanh leo 47 E3 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ lạc tiên nhiễm PaMoV Đăk Lak sang chanh leo 48 F3 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ lạc tiên nhiễm PaMoV Đăk Lak sang chanh leo 49 G3 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ lạc tiên nhiễm PaMoV Đăk Lak sang chanh leo 50 A4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 51 B4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 52 C4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 53 D4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 54 E4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 55 F4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 56 G4 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 57 A5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 58 B5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 59 C5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 60 D5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 61 E5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 62 F5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 63 G5 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 64 A6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 65 B6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 66 C6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 67 D6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 68 E6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 69 F6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 70 G6 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 71 A7 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 72 B7 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 73 C7 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 74 D7 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 75 E7 Lá chanh leo non Lây nhiễm từ rau muối đỏ đơn vết bệnh 95 B8 Lá chanh leo non nhiễm PaMoV A13-3-4 96 B9 Lá chanh leo non nhiễm PaMoV A13-3-4 Cây 49 Mẫu Giếng Mẫu 97 B10 Lá chanh leo non nhiễm PaMoV A13-3-4 98 C8 Lá chanh leo non nhiễm PaMoV A13-3-4 99 C9 Lá chanh leo non nhiễm PaMoV A13-3-5 100 C10 Lá chanh leo non nhiễm PaMoV A13-3-6 104 D8 Lá non thuốc K326 Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 105 D9 Lá non thuốc K327 Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 106 D10 Lá non thuốc K328 Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 113 E8 Lá non thuốc cảnh Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 114 E9 Lá non thuốc cảnh Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 115 E10 Lá non thuốc cảnh Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 122 B11 Lá non lạc tiên Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 123 C11 Lá non lạc tiên Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 124 D11 Lá non lạc tiên Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK 131 E11 Lá non hoắc hương Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK H3 Lá non chanh leo Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK H4 Lá non chanh leo Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK H5 Lá non chanh leo Cây nhiễm PaMoV ĐĂK LAK F7 Lá non chanh leo CÂY KHỎE G7 Lá non chanh leo CÂY KHỎE H7 Lá non chanh leo CÂY KHỎE F8 Lá thuốc K326 CÂY KHỎE G8 Lá thuốc K327 CÂY KHỎE H8 Lá thuốc K328 CÂY KHỎE F9 Lá thuốc cảnh CÂY KHỎE G9 Lá thuốc cảnh CÂY KHỎE H9 Lá thuốc cảnh CÂY KHỎE F10 Lá lạc tiên CÂY KHỎE G10 Lá lạc tiên CÂY KHỎE H10 Lá lạc tiên CÂY KHỎE F11 Lá hoắc hương CÂY KHỎE G11 Lá hoắc hương CÂY KHỎE H11 Lá hoắc hương CÂY KHỎE F12 Lá đậu CÂY KHỎE G12 Lá đậu CÂY KHỎE H12 Lá đậu CÂY KHỎE Cây 50 PHỤ LỤC KIỂM TRA ELISA CÁC MẪU LÂY NHIỄM TelMV 10 11 12 A 0.028 0.0306 0.0263 0.0275 0.026 0.0253 0.0273 0.0268 0.0267 0.0295 0.0287 0.0417 B 0.0272 0.2474 0.2508 0.2408 0.2601 0.2247 0.2414 0.2363 0.2475 0.25 0.2273 0.0264 C 0.0282 0.2121 0.227 0.2205 0.2327 0.2192 0.2165 0.2219 0.2228 0.217 0.22 0.0264 D 0.0295 0.219 0.2181 0.214 0.2175 0.2157 0.222 0.219 0.2273 1.188 0.3173 0.0233 E 0.0273 0.2225 0.2162 0.2192 0.2329 0.2138 0.1866 0.1874 0.2115 0.1849 0.194 0.0252 F 0.0279 0.1959 0.2171 0.2094 0.2203 0.1994 0.3374 0.333 0.1928 1.2753 0.1987 0.0255 G 0.0279 0.1938 0.2174 0.2044 0.2263 0.2064 0.3229 0.3098 0.1915 1.0899 0.1931 0.0258 H 0.1933 0.1915 0.2106 0.232 0.2286 0.2058 0.3262 0.2832 0.1935 1.0129 0.0253 0.0271 10 11 12 B 76 80 84 88 92 101 107 116 125 C 77 81 85 89 93 102 108 117 126 D 78 82 86 90 94 103 109 118 127 E 79 83 87 91 A đc F chanh leo đc G chanh leo đc H chanh leo đc k326 đc k327 đc k328 đc TLC đc TLC đc TLC 132 đc lạc đc hoắc tiên hương đc lạc đc hoắc tiên hương đc lạc đc hoắc tiên hương 51 đc đậu đc đậu đc đậu đc dương đc dương đc dương Mẫu Giếng Mẫu Cây B2 Lá đậu Hà Lan 308F1 Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 C2 Lá đậu cove nhâṭ haṭ trắ ng ( cove 03 ) Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 D2 Lá đậu đũa cao sản số ( VA005 ) Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 E2 Lá đậu cove lùn ̣t trắ ng Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 76 B3 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 77 C3 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 78 D3 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 79 E3 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 80 B4 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 81 C4 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 82 D4 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 83 E4 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 84 B5 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 85 C5 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 86 D5 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 87 E5 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 88 B6 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 89 C6 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 90 D6 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 91 E6 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 92 B7 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 93 C7 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 94 D7 Lá chanh leo đơn vết bệnh Lây từ rau muối đỏ 101 B8 Lá chanh leo lây nhiễm rệp đậu Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 102 C8 Lá chanh leo lây nhiễm rệp đậu Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 103 D8 Lá chanh leo lây nhiễm rệp đậu Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 107 B9 Lá thuốc k326 Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 108 C9 Lá thuốc k326 Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 109 D9 Lá thuốc k326 Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 116 B10 Lá thuốc cảnh Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 117 C10 Lá thuốc cảnh Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 118 D10 Lá thuốc cảnh Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 132 E9 Lá hoắc hương Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL7 125 B11 Lá lạc tiên Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL8 126 C11 Lá lạc tiên Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL9 127 D11 Lá lạc tiên Lây từ chanh leo nhiễm TelMV SL10 F3 Lá chanh leo khỏe số G3 Lá chanh leo khỏe số H3 Lá chanh leo khỏe số F4 Lá thuốc k326 khỏe G4 Lá thuốc k326 khỏe H4 Lá thuốc k326 khỏe 52 Mẫu Giếng Mẫu Cây F5 Lá thuốc cảnh khỏe G5 Lá thuốc cảnh khỏe H5 Lá thuốc cảnh khỏe F6 Lá lạc tiên khỏe G6 Lá lạc tiên khỏe H6 Lá lạc tiên khỏe F7 Lá hoắc hương khỏe G7 Lá hoắc hương khỏe H7 Lá hoắc hương khỏe F8 Lá đậu khỏe G8 Lá đậu khỏe H8 Lá đậu khỏe F11 Lá nhiễm bệnh TelMV G11 Lá nhiễm bệnh TelMV H11 Lá nhiễm bệnh TelMV 53 PHỤ LỤC KIỂM TRA ELISA CÁC MẪU LÂY NHIỄM EAPV VÀ LÂY CHÉO 10 11 12 A 0.028 0.225 0.213 0.186 0.185 0.036 0.03 0.028 0.028 0.034 0.036 0.028 B 0.041 0.25 1.89 1.454 0.986 0.244 0.518 1.413 0.533 2.064 1.104 2.06 C 0.036 0.229 1.911 0.237 1.933 2.097 2.062 2.07 1.868 1.946 2.084 1.951 D 0.028 0.205 0.23 1.902 1.552 1.947 1.933 1.872 0.306 1.624 1.901 1.931 E 0.038 0.225 0.245 0.226 0.206 0.208 0.193 0.309 0.315 2.061 1.094 1.156 F 0.027 0.229 0.214 0.225 0.21 0.217 0.204 0.319 0.307 2.013 0.769 0.968 G 0.028 0.225 0.428 0.224 0.21 0.215 0.202 0.309 0.292 2.048 0.911 0.957 H 0.028 0.032 0.034 0.03 0.041 0.028 0.029 0.029 0.032 0.033 0.032 0.036 10 11 12 A 133 B 10 119 13 14 15 16 17 18 19 20 21 C 11 120 22 23 24 25 26 27 28 29 30 D 12 121 31 32 33 34 35 36 37 38 39 đc đc đc đc E 110 128 chanh leo đc F 111 129 chanh leo đc G 112 130 chanh leo đc K326 đc K327 đc K328 đc TLC đc TLC đc TLC 54 đc lạc tiên đc lạc tiên đc lạc tiên đc hoắc đc đậu hương đc hoắc đc đậu hương đc hoắc hương đc đậu dương dương dương PaMoV- EAPV- TelMV ĐL IB SL7 đc đc đc dương dương dương PaMoV- EAPV- TelMV ĐL IB SL8 đc đc đc dương dương dương PaMoV- EAPV- TelMV ĐL IB SL9 Mẫu Giếng Mẫu Cây A2 Lá đậu Hà Lan 308F1 Lây từ chanh leo nhiễm EAPV-IB 10 B2 Lá đậu cove nhâṭ haṭ trắ ng ( cove 03 ) Lây từ chanh leo nhiễm EAPV-IB 11 C2 Lá đậu đũa cao sản số ( VA005 ) Lây từ chanh leo nhiễm EAPV-IB 12 D2 Lá đậu cove lùn ̣t trắ ng Lây từ chanh leo nhiễm EAPV-IB 110 E2 Lá non thuốc K326 Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 111 F2 Lá non thuốc K326 Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 112 G2 Lá non thuốc K326 Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 133 A3 Lá hoắc hương Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 119 B3 Lá thuốc cảnh Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 120 C3 Lá thuốc cảnh Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 121 D3 Lá thuốc cảnh Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 128 E3 Lá lạc tiên Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 129 F3 Lá lạc tiên Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 130 G3 Lá lạc tiên Cây chanh leo nhiễm EAPV-IB 13 B4 Lá chanh leo EAPV-IB 14 B5 Lá chanh leo EAPV-IB 15 B6 Lá chanh leo EAPV-IB 16 B7 Lá chanh leo EAPV-IB 17 B8 Lá chanh leo EAPV-IB 18 B9 Lá chanh leo EAPV-IB 19 B10 Lá chanh leo EAPV-IB 20 B11 Lá chanh leo EAPV-IB 21 B12 Lá chanh leo EAPV-IB 22 C4 Lá chanh leo TelMV 23 C5 Lá chanh leo TelMV 24 C6 Lá chanh leo TelMV 25 C7 Lá chanh leo TelMV 26 C8 Lá chanh leo TelMV 27 C9 Lá chanh leo TelMV 28 C10 Lá chanh leo TelMV 29 C11 Lá chanh leo TelMV 30 C12 Lá chanh leo TelMV 31 D4 Lá chanh leo PaMoV 32 D5 Lá chanh leo PaMoV 33 D6 Lá chanh leo PaMoV 34 D7 Lá chanh leo PaMoV 35 D8 Lá chanh leo PaMoV 36 D9 Lá chanh leo PaMoV 37 D10 Lá chanh leo PaMoV 38 D11 Lá chanh leo PaMoV 39 D12 Lá chanh leo PaMoV E4 Lá chanh leo Cây chanh leo khỏe 55 F4 Lá chanh leo Cây chanh leo khỏe G4 Lá chanh leo Cây chanh leo khỏe E5 Lá thuốc k326 Cây thuốc khỏe F5 Lá thuốc k326 Cây thuốc khỏe G5 Lá thuốc k326 Cây thuốc khỏe E6 Lá thuốc cảnh Cây thuốc khỏe F6 Lá thuốc cảnh Cây thuốc khỏe G6 Lá thuốc cảnh Cây thuốc khỏe E7 Lá lạc tiên Cây lạc tiên khỏe F7 Lá lạc tiên Cây lạc tiên khỏe G7 Lá lạc tiên Cây lạc tiên khỏe E8 Lá hoắc hương Cây hoắc hương khỏe F8 Lá hoắc hương Cây hoắc hương khỏe G8 Lá hoắc hương Cây hoắc hương khỏe E9 Lá đậu đỗ Lá đậu đỗ khỏe F9 Lá đậu đỗ Lá đậu đỗ khỏe G9 Lá đậu đỗ Lá đậu đỗ khỏe E10 Lá chanh leo PaMoV Đawk lak F10 Lá chanh leo PaMoV Đawk lak G10 Lá chanh leo PaMoV Đawk lak E11 Lá chanh leo EAPV-IB F11 Lá chanh leo EAPV-IB G11 Lá chanh leo EAPV-IB E12 Lá chanh leo TelMV-SL7 F12 Lá chanh leo TelMV-SL7 G12 Lá chanh leo TelMV-SL7 56