Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu quy trình tách chiết flavonoid toàn phần từ rễ cây bồ công anh

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - HỒNG THỊ HƯƠNG GIANG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT FLAVONOID TỒN PHẦN TỪ RỄ CÂY BỒ CÔNG ANH HÀ NỘI – 9/2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT FLAVONOID TỒN PHẦN TỪ RỄ CÂY BỒ CƠNG ANH Người thực : Hồng Thị Hương Giang MSV : 620943 Khóa : 62 Chun ngành : Cơng nghệ thực phẩm Giáo viên hướng dẫn : TS Vũ Thị Hạnh ThS Nguyễn Thị Quyên Địa điểm thực tập : Bộ môn công nghệ chế biến HÀ NỘI– 9/2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, q trình nghiên cứu tơi hướng dẫn TS Vũ Thị Hạnh ThS Nguyễn Thị Quyên Các nội dung nghiên cứu, số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực Tơi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 06 tháng 09 năm 2021 Sinh viên thực (Ký ghi rõ họ tên) Hoàng Thị Hương Giang LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập khoa Công nghệ thực phẩm- Học viện Nông nghiệp Việt Nam, với cố gắng thân, giúp đỡ thầy bạn, tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trước hết, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Vũ Thị Hạnh ThS Nguyễn Thị Quyên, người trực tiếp hướng dẫn suốt thời gian thực tập Các cô tận tình bảo tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Đồng thời xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Thị Huyền- Cán Phịng thí nghiệm mơn Cơng nghệ chế biến, Khoa Công nghệ thực phẩm chị cán làm việc Phịng thí nghiệm trung tâm bạn sinh viên nhóm thực khóa luận tốt nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn thầy giáo, cô giáo Khoa Công nghệ thực phẩm dạy dỗ tạo điều kiện để nghiên cứu học hỏi Cuối cùng, cảm xin cảm ơn gia đình bạn bè ln bên cạnh ủng hộ tinh thần, động viên thực khóa luận tốt nghiệp Vì kiến thức thân cịn hạn chế nên q trình thực khóa luận tơi khơng tránh khỏi sai sót, kính mong nhận ý kiến đóng góp thầy cô bạn để báo cáo hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực (Ký ghi rõ họ tên) Hoàng Thị Hương Giang MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan bồ công anh 2.1.1 Giới thiệu bồ công anh 2.1.2 Giới thiệu rễ bồ công anh 2.2 Tổng quan flavonoid 2.2.1 Giới thiệu flavonoid 2.2.2 Một số nhóm thuộc lớp chất flavonoid 2.2.3 Hoạt tính sinh học flavonoid 2.2.3.1 Tác dụng chống oxy hóa 2.2.3.2 Tác dụng enzyme .8 2.2.3.3 Tác dụng chống độc .9 2.2.3.4 Tác dụng thông tiểu 2.2.3.5 Tác dụng chống loét .9 2.2.3.6 Tác dụng khác 2.2.4 Phân bố flavonoid thực vật 2.3 Phương pháp thu nhận flavonoid toàn phần .10 2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình thu nhận flavonoid từ thực vật 11 2.4.1 Dung môi 11 2.4.2 Kích thước nguyên liệu 12 2.4.3 Độ ẩm nguyên liệu 12 2.4.4 Nhiệt độ trích ly 13 2.4.5 Thời gian trích ly 13 2.4.6 Tỉ lệ dung môi/nguyên liệu 13 2.5 Tình hình nghiên cứu nước giới 14 2.5.1 Trên giới 14 2.5.2 Trong nước 14 PHẦN III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Vật liệu hóa chất 16 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 16 3.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 16 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 17 3.3 Nội dung nghiên cứu 18 3.4 Phương pháp nghiên cứu 18 3.4.1 Phương pháp công nghệ 18 3.4.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 19 3.4.3 Phương pháp phân tích 22 3.4.3.1 Phương pháp xác định độ ẩm rễ bồ công anh 22 3.4.3.2 Phương pháp phân tích chất khơ hòa tan 22 3.4.3.3 Phương pháp định tính flavonoid .23 3.4.3.4 Phương pháp định lượng flavonoid toàn phần 23 3.4.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 PHẦN IV: KẾT QUẢ THẢO LUẬN .26 4.1 Kết phân tích đặc tính rễ bồ cơng anh 26 4.1.1 Kết xác định độ ẩm hàm lượng chất khơ hịa tan rễ bồ công anh 26 4.1.2 Kết thử nghiệm định tính flavonoid tồn phần từ rễ bồ công anh ……………………………………………………………………………………26 4.2 Kết nghiên cứu quy trình tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ công anh 27 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng loại dung mơi tách chiết đến hàm lượng flavonoid tồn phần thu nhận từ rễ bồ công anh 27 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dung môi đến đến hàm lượng flavonoid tồn phần thu nhận từ rễ bồ cơng anh 28 4.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian tách chiết đến hàm lượng flavonoid toàn phần thu nhận từ rễ bồ công anh 30 4.2.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ dung mơi/ngun liệu đến hàm lượng flavonoid tồn phần thu nhận từ rễ bồ công anh 31 4.2.5 Đề xuất quy trình tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh 33 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 5.1 Kết luận 35 5.2 Kiến nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 36 TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 37 TÀI LIỆU INTERNET 39 PHỤ LỤC .40 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây bồ cơng anh Việt Nam .3 Hình 2.2 Khung sườn flavonoid Hình 2.3 Khung sườn flavonoid chalcon Hình 3.1 Mẫu rễ sau cắt nhỏ để sấy .16 Hình 3.2 Mẫu rễ sau xay nhỏ 16 Hình 3.3 Sơ đồ quy trình dự kiến tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh .19 Hình Biểu diễn đường chuẩn phương trình đường chuẩn 24 Hình 4.1 Kết thí nghiệm định tính kiểm tra có mặt flavonoid rễ bồ công anh 27 Hình 4.2 Đề xuất quy trình tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh .33 Hình 4.3 Ảnh hưởng loại dung môi đến khả tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh .40 Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ dung mơi đến khả tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ công anh 40 Hình 4.5 Ảnh hưởng thời gian đến khả tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh .41 Hình 4.6 Ảnh hưởng tỉ lệ dung mơi/ ngun liệu q trình tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh 41 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bảng thành phần dưỡng chất rễ bồ cơng anh (tính 100g bồ cơng anh khơ) Bảng 2.2 Một số nhóm thuộc lớp chất flavonoid Bảng 3.1 Các thiết bị sử dụng 16 Bảng 3.2 Các hóa chất sử dụng 17 Bảng 3.3 Các dụng cụ sử dụng 17 Bảng 3.4 Công thức pha nồng độ xây dựng đường chuẩn quercetin 24 Bảng 4.1 Kết phân tích độ ẩm chất khơ hịa tan .26 Bảng 4.2 Kết khảo sát ảnh hưởng loại dung môi 28 Bảng 4.3 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ dung môi 29 Bảng 4.4 Kết khảo sát thời gian tách chiết flavonoid toàn phần từ rễ bồ công anh 30 Bảng 4.5 Kết khảo sát tỉ lệ dung môi/nguyên liệu 31 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Chữ viết tắt TCVN TCN Tiêu chuẩn Việt Nam Tiêu chuẩn nghành QE Quercetin Equivalents- Tương đương quercetin TFC Total Flavonoid Content- Hàm lượng flavonoid tổng (mg QE/g chất khô) CT Cơng thức TN Thí nghiệm PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu trên, ta rút kết luận:  Rễ bồ công anh dùng để nghiên cứu sấy nhiệt độ 60 oC có độ ẩm 6.926 ± 0.171 (%) có hàm lượng chất khơ hịa tan rễ bồ cơng anh 18.667 ± 1.155 (oBx)  Loại dung môi đạt hàm lượng cao trình chiết ethanol  Nồng độ ethanol 70% thu hàm lượng flavonoid tồn phần cao q trình chiết  Thời gian chiết để thu hàm lượng flavonoid toàn phần cao trình chiết 22  Tỉ lệ dung môi/nguyên liệu để thu hàm lượng flavonoid tồn phần cao q trình chiết 20/1 (ml/g) Do đó, với tất điều kiện chọn hàm lượng flavonoid tồn phần tốt thu 0.085 (mg/g) 5.2 Kiến nghị Trong suốt trình thực đề tài, thời gian nghiên cứu hạn chế ảnh hưởng dịch Covid-19, nên số nội dung nghiên cứu chưa thực để xây dựng quy trình phân tích thu nhận flavonoid, vậy, chúng tơi đề xuất số nội dung sau:  Khảo sát ảnh hưởng yếu tố khác nhiệt độ, kích thước nguyên liệu đến hiệu suất trích ly flavonoid  Tiến hành xác định ảnh hưởng số phương pháp khác ảnh hưởng đến khả trích ly flavonoid toàn phần  Phương pháp thu hồi điều kiện bảo quản flavonoid  Khảo sát khả điều kiện để ứng dụng flavonoid trích ly thực phẩm với mục đích chống oxy hóa 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Dương Thị Phượng Liên, Phan Thị Bích Trâm Hà Thanh Tồn (2014), Ảnh hưởng q trình trích ly đến hàm lượng Polyphenol khả chống oxy hóa từ đậu nành, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, số nơng nghiệp 2014:8-15 Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, nhà xuất thời đại Giang Trung Khoa, Bùi Quang Thuật, Ngô Xuân Mạnh (2017), Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố công nghệ đến hiệu suất trích ly polyphenol từ chè Camellia sinensis (L) O Kuntze, Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, tập 15, số 2: 205- 213 Ngô Văn Thu (2004), Bài giảng dược liệu tập 1, Trường đại học dược Hà Ngơ Hồng Linh (2017), Nghiên cứu quy trình cơng nghệ tách chiết Nội chất flavonoid sterol từ diếp cá Nghệ An, Tạp chí Khoa học Công nghệ, tập số 11: 15- 18 Nguyễn Thanh Nhật Phương, Phạm Tấn Phương, Nguyễn Hồng Trí Tài, Trần Hồng Đức, Nguyễn Đức Độ (2017), Khảo sát hàm lượng Flavonoid, Alkaloid khả kháng khuẩn cao chiết cỏ Mần Trầu, Tạp chí Khoa học trường đại học Cần Thơ, 53b: 54- 60 Nguyễn Thị Hồng Ngọc, Trần Văn Chí, Nguyễn Sinh Huỳnh, Lưu Hồng Sơn, Vũ Thị Diệp (2019), Tối ưu hóa q trình tách chiết Flavonoid từ gai xanh Cao Bằng, Tạp chí khoa học cơng nghệ- Đại học Thái Ngun, 207 (17): 207- 212 Huỳnh Ngọc Trung Dung, Nguyễn Phương Thảo, Nguyễn Phú Lộc (2021), Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học cao chiết từ xà lách xoong (Nasturtium microphyllum), Tạp chí khoa học trường đại học Cần Thơ, tập 57, số 2B (2021): 78- 86 36 Trần Văn Chí cơng (2020), Nghiên cứu quy trình chế biến trà túi lọc từ gai Cao Bằng, Tạp chí khoa học công nghệ Đại học Thái Nguyên, 225(11): 160-165 10 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 7975:2008, Chè thảo mộc túi lọc 11 Tiêu chuẩn nghành TCN 842:2006, Tiêu chuẩn rau phương pháp xác định hàm lượng nước tính hàm lượng chất khô 12 Tôn Nữ Liên Hương, Huỳnh Văn Lợi, Lê Thị Hồng Diễm, Huỳnh Thị Quỳnh Mai (2017), Đánh giá thành phần dưỡng chất hoạt tính sinh học rễ bồ công anh Việt Nam, Tạp chí Khoa học trường đại học An Giang, Vol 18 (6), 37- 46 13 TS Phan Quốc Kinh (2011), Giáo trình Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học, Nhà xuất Giáo dục Việt Nam TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 14 Afoakwah A.N., Owusu, J., Adomako, C & Teye E (2012), Microwave assisted extraction (MAE) of antioxidant constituents in plant materials, Global Journal of Bioscience and Biotechnology, vol.1 (2) 2012: 132-140 ISSN 2278 – 9103 15 Birdi, T.J., S Brijesh and P.G Daswani (2006), Approaches towards the Preclinical Testing and Standardization of Medicinal Plants, Foundation for Medicinal Research, India 16 Chang C, Yang M., Wen H and Chem J (2002), Estimation of flavonoid total content in propolis by two complementary colorimetric methods, Jounral of Food and Drug Analisis, 10(7): 178-182 17 Katsube T., Tsurunaga Y., Sugiyama M., Furuno T and Yamasaki Y (2009), Effect of air-drying temperature on antioxidant capacity and stability of polyphenolic compounds in mulberry (Morus alba L.) leaves, Food Chemistry 113: 964– 969 18 Ki Hyun Kim, Young Ho Kim and Kang Ro Lee (2007), Isolation of quinic acid derivatives and flavonoids from the aerial parts of Lactuca indica L and their hepatoprotective activity in vitro, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17: 6739-6743 37 19 Ki Hyun Kim, Young Ho Kim and Kang Ro Lee (2010), Isolation of Hepatoprotective Phenylpropanoid from Lactuca indica, Natural Product Sciences 16: 6- 20 Marur, C J and L Sodek (1995), Microwave Drying of Plant Material for Biochemical Analysis, Revista Brasileira de Fisiologia Vegetal, 7, pp 111– 114 21 Müller, J., A Heindl and R.J Bogers (2006), Drying of Medicinal Plants, In Medicinal and Aromatic Plants- Agricultural, Commercial, Ecological, Legal, Pharmacologicaland Social Aspects, pp 237– 252 22 Shamsa F, Monsef H, Ghamooshi R, and Verdianrizi M (2008), Strectrophotometric determination of total alkaloids in some Iranian medicinal plants Thai J Pham Sci 32:17-20 23 Silva E M., Rogez H and Larondelle Y (2007), Optimization of extraction of phenolics from Inga edulis leaves using response surface methodology, Separation and Purification Technology 55 (2007) 381–387 24 SHENG-YANG WANG, HSING-NING CHANG, KAI-TI LIN, CHIU- PING LO, NING-SUN YANG, AND LIE-FEN SHYUR (2003), Antioxidant Properties and Phytochemical Characteristics of Extracts from Lactuca indica, Journal of Argicultural and Food Chemistry, 51:1506-1512 25 Sˇpela Stangler Herodezˇ, Majda Hadolin, Mojca Sˇkerget, Zˇeljko Knez (2007), Solvent extraction study of antioxidants from Balm (Melissa officinalis L.) leaves, Food Chemistry 80: 275–282 26 Panjaitan CR Jesika Albinus Silalahi (2020), PHYTOCHEMICAL SCREENING OF SIJUKKOT EKSTRACT (Lactuca Indica L.), Indonesian Journal of Chemical Science and Technology State University of Medan e-ISSN: 2622-4968, pISSN: 2622-1349 IJCST-UNIMED, Vol 03, No 2, Page; 53-56 27 Ju Nam Kim, Ja Min Kim, and Kyung Soo Lee (2012), Antioxidant Activity of Methanol Extracts from Lactuca indica, Korean Journal of Food Preservation Volume 19 issue 2, Page: 294-300 38 28 Wong, B.Y., Tan, C P., and Ho, C.W (2013), Effect of soild- to- solvent ratio on phenolic content and antioxidant capacities of “Dukung Anak” (Phyllanthus niuri), International Food Research Journal, 20, pp 325- 330 TÀI LIỆU INTERNET 29 https://lh3.googleusercontent.com/nrKeMHukeFKoshKfC4YK- F5Lpm9HiXLcJCDpNuu2Icq8R5RLuIdNIrt5MJ3CtrK1LUCM=s85, truy cập ngày 18/09/2021 39 PHỤ LỤC Phụ lục: Biểu đồ khảo sát ảnh hưởng yếu tố đến q trình thu nhận flavonoid tồn phần từ rễ bồ công anh 0.000 Hàm lượng flavonoid (mg QE/g) 0.036a ± 0.004 0.0318a ± 0.007 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.011b ± 0.004 0.000 0.000 0.000 Nước Etylaxetat Ethanol Loại dung mơi Hình 4.3 Ảnh hưởng loại dung môi đến khả tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh Ghi chú: chữ a, b thể khác có ý nghĩa mức ý nghĩa ∝ = 5% Hàm lượng flavonoid (mg QE/ g) 0.000 0.000 0.041a ± 0.001 0.035ab ± 0.004 0.034ab ± 0.003 0.030b ± 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 60° 70° 80° 90° Nồng độ dung mơi Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ dung môi đến khả tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ cơng anh Ghi chú: chữ a, b thể khác có ý nghĩa mức ý nghĩa ∝ = 5% 40 Hàm lượng flavonoid (mg QE/g) 0.000 0.000 0.081a ± 0.001 0.070b ± 0.005 0.071b ± 0.002 0.073ab ± 0.005 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 18h 20h 22h 24h Thời gian (h) Hình 4.5 Ảnh hưởng thời gian đến khả tách chiết flavonoid toàn phần từ rễ bồ công anh Ghi chú: chữ a, b, c thể khác có ý nghĩa mức ý nghĩa ∝ = 5% Hàm lượng flavonoid (mg QE/g) 0.000 0.000 0.085a ± 0.004 0.081a ± 0.001 0.000 0.000 0.000 0.043b ± 0.004 0.000 0.038b ± 0.002 0.000 0.030c ± 0.001 0.000 0.026c ± 0.002 0.000 0.000 0.000 10:1 20:1 30:1 40:1 50:1 60:1 Tỉ lệ DM:NL (ml/g) Hình 4.6 Ảnh hưởng tỉ lệ dung mơi/ ngun liệu q trình tách chiết flavonoid tồn phần từ rễ bồ công anh Ghi chú: chữ a, b, c thể khác có ý nghĩa mức ý nghĩa ∝ = 5% 41 Phụ lục: Kết xử lý ANOVA One-way ANOVA: TFC versus Dung môi Source DF SS MS F P Dung môi 0.0010708 0.0005354 21.24 0.002 Error 0.0001512 0.0000252 Total 0.0012221 S = 0.005021 R-Sq = 87.62% R-Sq(adj) = 83.50% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ Ethanol 0.035639 0.004003 Etylaxetat 0.031298 0.006720 ( * ) ( * ) Nước 0.010637 0.003799 ( * ) + -+ -+ -+ 0.010 0.020 0.030 0.040 Pooled StDev = 0.005021 Grouping Information Using Tukey Method Dung môi N Mean Grouping Ethanol 0.035639 A Etylaxetat 0.031298 A Nước 0.010637 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Dung môi Individual confidence level = 97.80% Dung môi = Ethanol subtracted from: Dung môi Lower Center Upper Etylaxetat -0.016921 -0.004341 0.008239 42 Nước -0.037582 -0.025002 -0.012422 Dung môi -+ -+ -+ -+ Etylaxetat ( -* -) Nước ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.020 0.000 0.020 0.040 Dung môi = Etylaxetat subtracted from: Dung môi Lower Center Upper Nước -0.033241 -0.020661 -0.008081 Dung môi -+ -+ -+ -+ Nước ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.020 0.000 0.020 0.040 One-way ANOVA: TFC versus Nồng độ Source DF SS MS F P Nồng độ 0.0001874 0.0000625 7.54 0.010 Error 0.0000663 0.0000083 Total 11 0.0002536 S = 0.002878 R-Sq = 73.87% R-Sq(adj) = 64.07% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+-Ethanol 60° 0.034833 0.003911 Ethanol 70° 0.041423 0.001244 ( -* ) Ethanol 80° 0.034004 0.002985 ( -* -) ( -* -) Ethanol 90° 0.030492 0.002717 ( -* -) -+ -+ -+ -+-0.0300 0.0350 0.0400 0.0450 Pooled StDev = 0.002878 43 Grouping Information Using Tukey Method Nồng độ N Mean Grouping Ethanol 70° 0.041423 A Ethanol 60° 0.034833 A B Ethanol 80° 0.034004 A B Ethanol 90° 0.030492 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nồng độ Individual confidence level = 98.74% Nồng độ = Ethanol 60° subtracted from: Nồng độ Lower Center Upper Ethanol 70° -0.000938 0.006590 0.014117 Ethanol 80° -0.008357 -0.000830 0.006698 Ethanol 90° -0.011868 -0.004341 0.003186 Nồng độ + -+ -+ -+Ethanol 70° Ethanol 80° ( -* ) ( * -) Ethanol 90° ( -* ) + -+ -+ -+-0.010 0.000 0.010 0.020 Nồng độ = Ethanol 70° subtracted from: Nồng độ Lower Center Upper Ethanol 80° -0.014947 -0.007419 0.000108 Ethanol 90° -0.018458 -0.010931 -0.003403 Nồng độ + -+ -+ -+Ethanol 80° ( -* ) Ethanol 90° ( * -) + -+ -+ -+-0.010 0.000 0.010 0.020 44 Nồng độ = Ethanol 80° subtracted from: Nồng độ Lower Center Upper Ethanol 90° -0.011039 -0.003511 0.004016 Nồng độ + -+ -+ -+Ethanol 90° ( * -) + -+ -+ -+-0.010 0.000 0.010 0.020 One-way ANOVA: TFC versus Thời gian Source DF SS MS F P Thời gian 0.0002364 0.0000788 5.55 0.023 Error 0.0001135 0.0000142 Total 11 0.0003499 S = 0.003767 R-Sq = 67.55% R-Sq(adj) = 55.39% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 18h 0.069931 0.005143 ( * -) 20h 0.071181 0.002406 ( * -) 22h 0.081319 0.001463 ( * -) 24h 0.073125 0.004732 ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0660 0.0720 0.0780 0.0840 Pooled StDev = 0.003767 Grouping Information Using Tukey Method Thời gian N Mean Grouping 22h 0.081319 A 24h 0.073125 A B 20h 0.071181 B 18h 0.069931 B 45 Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Thời gian Individual confidence level = 98.74% Thời gian = 18h subtracted from: Thời gian Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-20h -0.008603 0.001250 0.011103 ( -* -) 22h 0.001536 0.011389 0.021242 ( -* ) 24h -0.006659 0.003194 0.013047 ( * -) -+ -+ -+ -+ 0.012 0.000 0.012 0.024 Thời gian = 20h subtracted from: Thời gian Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-22h 0.000286 0.010139 0.019992 ( -* ) 24h -0.007909 0.001944 0.011797 ( * -) -+ -+ -+ -+ 0.012 0.000 0.012 0.024 Thời gian = 22h subtracted from: Thời gian Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-24h -0.018047 -0.008194 0.001659 ( -* -) -+ -+ -+ -+ 0.012 0.000 0.012 0.024 One-way ANOVA: TFC versus DM:NL Source DF SS MS F P DM:NL 0.0100440 0.0020088 256.02 0.000 Error 12 0.0000942 0.0000078 46 Total 17 0.0101382 S = 0.002801 R-Sq = 99.07% R-Sq(adj) = 98.68% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ 10:1 0.081371 0.000930 20:1 0.084752 0.004020 30:1 0.043058 0.004265 (-*) (*-) (-*) 40:1 0.038488 0.002029 (-*-) 50:1 0.029854 0.001460 (-*-) 60:1 0.026088 0.002369 (-*-) -+ -+ -+ -+ 0.040 0.060 0.080 0.100 Pooled StDev = 0.002801 Grouping Information Using Tukey Method DM:NL N Mean Grouping 20:1 0.084752 A 10:1 0.081371 A 30:1 0.043058 B 40:1 0.038488 B 50:1 0.029854 C 60:1 0.026088 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of DM:NL Individual confidence level = 99.43% DM:NL = 10:1 subtracted from: DM:NL Lower Center Upper 20:1 -0.004300 0.003382 0.011063 30:1 -0.045995 -0.038313 -0.030631 47 40:1 -0.050565 -0.042883 -0.035201 50:1 -0.059198 -0.051516 -0.043835 60:1 -0.062964 -0.055282 -0.047601 DM:NL -+ -+ -+ -+ 20:1 30:1 (-*-) (-*-) 40:1 (-*-) 50:1 (-*-) 60:1 (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.035 0.000 0.035 0.070 DM:NL = 20:1 subtracted from: DM:NL Lower Center Upper 30:1 -0.049376 -0.041694 -0.034012 40:1 -0.053946 -0.046265 -0.038583 50:1 -0.062580 -0.054898 -0.047216 60:1 -0.066346 -0.058664 -0.050982 DM:NL -+ -+ -+ -+ 30:1 (-*-) 40:1 (-*-) 50:1 (-* ) 60:1 (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.035 0.000 0.035 0.070 DM:NL = 30:1 subtracted from: DM:NL Lower Center Upper 40:1 -0.012252 -0.004570 0.003112 50:1 -0.020886 -0.013204 -0.005522 60:1 -0.024652 -0.016970 -0.009288 DM:NL -+ -+ -+ -+ 40:1 ( *-) 50:1 (-*-) 60:1 (-*-) -+ -+ -+ -+ 48 -0.035 0.000 0.035 0.070 DM:NL = 40:1 subtracted from: DM:NL Lower Center Upper 50:1 -0.016315 -0.008633 -0.000952 60:1 -0.020081 -0.012399 -0.004718 DM:NL -+ -+ -+ -+ 50:1 60:1 ( *-) (-* ) -+ -+ -+ -+ -0.035 0.000 0.035 0.070 DM:NL = 50:1 subtracted from: DM:NL Lower Center Upper 60:1 -0.011448 -0.003766 0.003916 DM:NL -+ -+ -+ -+ 60:1 (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.035 0.000 0.035 0.070 49