Tối ưu hóa quy trình phân tích isoflavones và xác định khả năng kháng oxi hóa của đậu tương nảy mầm

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  - NGUYỄN MINH ANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: TỐI ƯU HÓA QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ISOFLAVONES VÀ XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG OXI HÓA CỦA ĐẬU TƯƠNG NẢY MẦM Hà Nội - Năm 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: TỐI ƯU HĨA QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ISOFLAVONES VÀ XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG OXI HÓA CỦA ĐẬU TƯƠNG NẢY MẦM Người thực : NGUYỄN MINH ANH Mã SV : 620940 Lớp : K62CNTPC Khóa : 62 Chun Ngành : CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS TRẦN THỊ ĐỊNH TS VŨ THỊ HUYỀN Hà Nội - Năm 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu khóa luận nghiên cứu trung thực Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 06 tháng 09 năm 2021 Sinh viên thực (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Minh Anh i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, trước hết chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy, cô giáo khoa Công nghệ thực phẩm trường Học viện nông nghiệp Việt Nam truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho chúng em suốt trình học tập rèn luyện trường Trong trình thực đề tài chúng em gặp khơng khó khăn Nhưng với động viên giúp đỡ quý thầy cô, người thân bạn bè, chúng em hoàn thành tốt đề tài nghiên cứu có kinh nghiệm, kiến thức hữu ích cho thân Cảm ơn thầy, anh chị phịng thí nghiệm trung tâm khoa công nghệ thực phẩm tạo điều kiện thuận lợi để chúng em hồn thành thí nghiệm Đặc biệt chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Trần Thị Định giảng viên môn Công nghệ chế biến, khoa Công nghệ thực phẩm TS Vũ Thị Huyền, giảng viên mơn Hóa học, khoa Mơi trường, người trực tiếp hướng dẫn tận tình giúp đỡ chúng em suốt thời gian thực đề tài Dù cố gắng tránh khỏi sai sót Rất mong thơng cảm đóng góp ý kiến quý thầy cô bạn để khóa luận hồn thiện Cuối cùng, xin kính chúc quý thầy cô bạn sức khỏe, thành công công việc sống Chúng em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 06 tháng 09 năm 2021 Sinh viên thực (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Minh Anh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH VÀ ĐỒ THỊ vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài .2 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 Giới thiệu chung hạt đậu tương 2.1.1 Hạt đậu tương .3 2.1.2 Sự nảy mầm hạt đậu tương 2.2 Giới thiệu isoflavones 2.2.1 Đặc điểm cấu trúc tính chất isoflavones 2.2.2 Vai trò, ứng dụng isoflavones 2.2.3 Sự biến đổi hàm lượng isoflavones trình nảy mầm .10 PHẦN III ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 3.1 Đối tượng nghiên cứu .11 3.1.1 Nguyên liệu 11 3.1.2 Hóa chất, thiết bị, phạm vi nghiên cứu 11 3.2 Nội dung nghiên cứu .11 3.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm .11 3.3.1 Chuẩn bị mẫu bột đậu tương nảy mầm 12 3.3.2 Tối ưu hóa quy trình phân tích isoflavones từ đậu tương nảy mầm 12 iii 3.4 Phương pháp phân tích 20 3.4.1 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số 20 3.4.2 Xác định hàm lượng flavonoid tổng số 22 3.4.3 Xác định hoạt tính kháng oxi hóa phương pháp DPPH .24 3.4.4 Xử lí kết .26 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Tối ưu hóa quy trình phân tích isoflavone ứng dụng để định lượng isoflavone hạt đậu tương nảy mầm .27 4.1.1 Tối ưu hóa quy trình phân tích isoflavone hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao 27 4.1.2 Ảnh hưởng số yếu tố quy trình chiết isoflavone từ đậu tương nảy mầm 35 4.1.3 Ứng dụng quy trình phân tích tối ưu để định lượng isoflavone mẫu đậu tương nảy mầm 38 4.2 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số 39 4.3 Xác định hàm lượng flavonoid tổng số 41 4.4 Xác định hoạt tính kháng oxi hóa đậu tương nảy mầm .42 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 : Thành phần hóa học hạt đậu tương Bảng 2.2: Danh sách isoflavones Bảng 3.1: Cách pha nồng độ dãy dung dịch chuẩn làm việc isoflvone 15 Bảng 3.2: Ảnh hưởng loại dung mơi đến q trình chiết isoflavone 18 Bảng 3.3: Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung mơi đến q trình chiết isoflavone 19 Bảng 3.4: Ảnh hưởng số lần chiết đến trình chiết isoflavone 19 Bảng 3.5: Nồng độ dung dịch mẹ hợp chất isoflavones 20 Bảng 3.6: Nồng độ cách pha dãy chuẩn gallic acid 21 Bảng 3.7: Nồng độ cách pha dãy chuẩn quercetin 23 Bảng 3.8: Dãy nồng độ dung dịch Trolox 25 Bảng 4.1: Mối tương quan nồng độ hợp chất daidzein diện tích phổ 31 Bảng 4.2: Mối tương quan nồng độ hợp chất glycitein diện tích phổ 32 Bảng 4.3: Mối tương quan nồng độ hợp chất genistein diện tích phổ 33 Bảng 4.4: Phương trình hồi quy daidzein, glycitein genistein 34 Bảng 4.5: Độ lặp lại hệ thống HPLC với hợp chất isoflavone 35 Bảng 4.6: Ảnh hưởng loại dung mơi đến q trình tách chiết isoflavone từ đậu tương 36 Bảng 4.7: Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến trình chiết isoflavone từ đậu tương 37 Bảng 4.8: Ảnh hưởng số lần chiết đến trình chiết isoflavone từ đậu tương38 Bảng 4.9: Ảnh hưởng thời gian ngâm đến hàm lượng isoflavone hai giống đậu tương nảy mầm DT84 DT51 39 Bảng 4.10: Ảnh hưởng thời gian ngâm đến hoạt tính kháng oxi hóa hai giống đậu tương nảy mầm DT84 DT51 43 v DANH MỤC HÌNH VÀ ĐỒ THỊ Hình 2.1 Cấu trúc hóa học isoflavones Hình 2.2 Cấu trúc hóa học aglycones Hình 3.1 Quy trình tách chiết isoflavone 17 Hình 4.1 Sắc ký đồ chất hợp chất isoflavones chuẩn 27 Hình 4.2 Sắc ký đồ hợp chất isoflavone với tốc độ dòng 0,8 ml/phút (a) 1,0 ml/phút (b) 28 Hình 4.3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn hợp chất isoflavone theo hệ 29 Hình 4.4 Sắc ký đồ mẫu chuẩn hợp chất isoflavone theo hệ 30 Hình 4.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn hợp chất isoflavone theo hệ 30 Hình 4.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích phổ vào nồng độ daidzein 32 Hình 4.7 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích phổ vào nồng độ glycitein 33 Hình 4.8 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích phổ vào nồng độ genistein 34 Hình 4.9 Ảnh hưởng thời gian ngâm đến hàm lượng polyphenol hai giống đậu tương DT51 DT84 40 Hình 4.10 Ảnh hưởng thời gian ngâm đến hàm lượng flavonoid hai giống đậu tương DT51 DT84 42 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ kí hiệu Từ viết tắt viết tắt CK Chất khô NXB Nhà xuất TB Trung bình g GAE/g DW g gallic acid equivalent/g dry weight mg QE/g DW mg quercetin equivalent/g dry weight DMSO Dimethyl sulfoxide (CH3)2SO DPPH 2,2 – Diphenyl – – picryl hydrazyl DW Dry weight (hàm lượng vật chất khô) GAE Gallic acid equivalent HPLC High performance liquid chromatography LDL - C Low density lipoprotein cholesterol HDL - C High density lipoprotein cholesterol DAD Detector Diod Array ACN Acetonenitril FA Formic axit SD Standard deviation (độ lệch chuẩn) RSD Relative standard deviation (độ lệch chuẩn tương đối) mAU milli-Absorbance Units LOD Limit of Detector (giới hạn phát hiện) LOQ Limit of Quantitation (giới hạn định lượng) AOAC Association of Official Analytical Chemists (Hiệp hội nhà hố phân tích thống) STD Standard (dung dịch chuẩn) TPC Total polyphenol content (hàm lượng polyphenol tổng số) TFC Total flavonoid content (hàm lượng flavonoid tổng số) vii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Rất nhiều cơng trình nghiên cứu khoa học cho thấy đậu tương (Glycine max (L) Merrill) loại thực phẩm chứa hàm lượng dinh dưỡng cao cung cấp dồi protein lipid (Saldivar cs., 2011) Bên cạnh đó, nhà khoa học chứng minh đậu tương có polyphenol isoflavones, chất kháng oxi hóa cần thiết cho thể người (Wang cs., 2015; Singh cs., 2017) Polyphenol hoạt chất tự nhiên có tác dụng kháng oxi hóa làm giảm nguy mắc bệnh tim xơ vữa động mạch (Peterson cs., 2001) Nhóm chất phổ biến hợp chất polyphenol có chế độ dinh dưỡng người flavonoid (Spencer, 2008) Hợp chất có khả kháng oxi hóa mạnh nhóm flavonoid isoflavones (Wei cs., 2012) Ở đậu tương, isoflavones có hoạt tính sinh học cao gồm genistein, daidzein glycitein (Barnes, 2010) Isoflavones nhóm hoạt chất thực vật, có khả chống viêm, điều hòa miễn dịch (Verdrengh cs., 2003; Yellayi cs., 2003; Masilamani cs., 2012) Ngoài ra, nghiên cứu khác ghi nhận tác dụng có lợi chúng bệnh người ung thư, béo phì, tim mạch, biến chứng tiểu đường, bệnh Alzheimer triệu chứng mãn kinh (Dijsselbloem cs., 2004; Orgaard cs., 2008; Beavers cs., 2010; Valles cs., 2010; Valsecchi cs., 2011) Hoạt tính sinh học isoflavones khác dạng glycoside dạng aglycon, isoflavone aglycon hấp thụ nhanh với lượng lớn so với dạng glycoside (Izumi cs., 2000) Mặt khác nảy mầm, isoflavones glycoside chuyển hóa thành isoflavone aglycon (Nguyễn Mạnh Thắng cs., 2012) Do đó, nảy mầm cơng nhận phương pháp kinh tế, đơn giản hiệu để nâng cao hoạt tính sinh học isoflavones đậu tương (Dia cs., 2012) Mặt khác, chất lượng sống người ngày nâng cao thực phẩm chức sản xuất từ hợp chất tự nhiên nhằm cải thiện sức khỏe cho người lại quan tâm trọng Chính vậy, việc tối ưu hóa quy trình phân tích isoflavones đậu tương nảy mầm cấp thiết, cung cấp sở 0h 5h 2h 3h 3 3 36.712 25.554 24.906 24.473 B C C C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Mẫu Individual confidence level = 99.43% Mẫu = 0h subtracted from: Mẫu 1h 2h 3h 4h 5h Lower 2.859 -22.587 -23.020 -9.008 -21.938 Center 13.640 -11.806 -12.239 1.773 -11.157 Upper 24.421 -1.025 -1.458 12.554 -0.376 + -+ -+ -+( -* ) ( * ) ( -* ) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+-20 20 40 Mẫu = 1h subtracted from: Mẫu 2h 3h 4h 5h Lower -36.227 -36.660 -22.648 -35.578 Center -25.446 -25.879 -11.867 -24.797 Upper -14.665 -15.098 -1.086 -14.016 + -+ -+ -+( * -) ( * ) ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+-20 20 40 Mẫu = 2h subtracted from: Mẫu 3h 4h 5h Lower -11.214 2.798 -10.133 Center -0.433 13.579 0.648 Upper 10.348 24.360 11.429 + -+ -+ -+( -* ) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+-20 20 40 Mẫu = 3h subtracted from: Mẫu 4h 5h Lower 3.231 -9.700 Center 14.012 1.081 Upper 24.793 11.862 + -+ -+ -+( * ) ( -* ) + -+ -+ -+-20 20 40 Mẫu = 4h subtracted from: Mẫu 5h Lower -23.712 Center -12.931 Upper -2.150 + -+ -+ -+( -* ) + -+ -+ -+-20 20 40 Daidzein 73 One-way ANOVA: Daidzein (ug/g DW)-DT84 versus Mẫu Source Mẫu Error Total DF 12 17 SS 2136.34 110.33 2246.67 S = 3.032 Level 0h 1h 2h 3h 4h 5h N 3 3 3 MS 427.27 9.19 R-Sq = 95.09% Mean 53.113 70.628 65.051 58.103 51.211 36.485 F 46.47 P 0.000 R-Sq(adj) = 93.04% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( * ) ( * -) ( -* ) ( * -) -+ -+ -+ -+ -36 48 60 72 StDev 3.243 2.574 0.740 1.396 4.744 3.608 Pooled StDev = 3.032 Grouping Information Using Tukey Method Mẫu 1h 2h 3h 0h 4h 5h N 3 3 3 Mean 70.628 65.051 58.103 53.113 51.211 36.485 Grouping A A B B C C C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Mẫu Individual confidence level = 99.43% Mẫu = 0h subtracted from: Mẫu 1h 2h 3h 4h 5h Lower 9.199 3.622 -3.326 -10.218 -24.944 Center 17.515 11.938 4.990 -1.902 -16.629 Upper 25.831 20.253 13.305 6.413 -8.313 -+ -+ -+ -+-( * ) ( -* ) ( * ) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 25 25 50 Mẫu = 1h subtracted from: Mẫu 2h 3h 4h 5h Lower -13.893 -20.841 -27.733 -42.459 Center -5.577 -12.525 -19.417 -34.144 Upper 2.738 -4.210 -11.102 -25.828 -+ -+ -+ -+-( -* ) ( * ) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 25 25 50 74 Mẫu = 2h subtracted from: Mẫu 3h 4h 5h Lower -15.264 -22.156 -36.882 Center -6.948 -13.840 -28.566 Upper 1.367 -5.524 -20.251 -+ -+ -+ -+-( * -) ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 25 25 50 Mẫu = 3h subtracted from: Mẫu 4h 5h Lower -15.207 -29.934 Center -6.892 -21.618 Upper 1.424 -13.303 -+ -+ -+ -+-( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 25 25 50 Mẫu = 4h subtracted from: Mẫu 5h Lower -23.042 Center -14.726 Upper -6.411 -+ -+ -+ -+-( * ) -+ -+ -+ -+ 25 25 50 One-way ANOVA: Daidzein (µg/g DW) - DT51 versus Mẫu Source Mẫu Error Total DF 12 17 S = 1.343 Level 0h 1h 2h 3h 4h 5h N 3 3 3 SS 250.83 21.64 272.47 MS 50.17 1.80 R-Sq = 92.06% Mean 18.328 13.106 19.140 18.968 20.305 25.869 StDev 0.193 2.913 1.430 0.197 0.276 0.373 F 27.82 P 0.000 R-Sq(adj) = 88.75% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( -* ) ( * -) ( * -) ( * ) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+-15.0 20.0 25.0 30.0 Pooled StDev = 1.343 Grouping Information Using Tukey Method Mẫu 1h 4h 2h 3h 0h 5h N 3 3 3 Mean 25.869 20.305 19.140 18.968 18.328 13.106 Grouping A B B B B C Means that not share a letter are significantly different 75 Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Mẫu Individual confidence level = 99.43% Mẫu = 0h subtracted from: Mẫu 1h 2h 3h 4h 5h Lower -8.904 -2.870 -3.043 -1.706 3.859 Center -5.222 0.812 0.640 1.977 7.542 Upper -1.539 4.495 4.323 5.660 11.224 + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) ( -* ) ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ -10 10 20 Mẫu = 1h subtracted from: Mẫu 2h 3h 4h 5h Lower 2.351 2.179 3.516 9.080 Center 6.034 5.861 7.199 12.763 Upper 9.717 9.544 10.881 16.446 + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ -10 10 20 Mẫu = 2h subtracted from: Mẫu 3h 4h 5h Lower -3.855 -2.518 3.046 Center -0.173 1.165 6.729 Upper 3.510 4.848 10.412 + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ -10 10 20 Mẫu = 3h subtracted from: Mẫu 4h 5h Lower -2.346 3.219 Center 1.337 6.902 Upper 5.020 10.585 + -+ -+ -+ ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ -10 10 20 Mẫu = 4h subtracted from: Mẫu 5h Lower 1.882 Center 5.565 Upper 9.247 + -+ -+ -+ ( -* ) + -+ -+ -+ -10 10 20 Phụ lục 8: Xác định hoạt tính kháng oxi hóa phương pháp DPPH 8.1 % ức chế DPPH Đường chuẩn Trolox Trolox (mM) A517 A517 A517 A517 tb Control 0.000 0.105 0.210 1.367 1.251 1.125 1.368 1.248 1.121 1.359 1.255 1.124 1.365 1.251 1.123 1.365 1.365 1.365 76 % kim ham 0.02 8.33 17.70 0.419 0.629 0.884 1.048 0.849 0.675 0.354 0.238 0.853 0.68 0.355 0.231 0.858 0.671 0.352 0.237 0.853 0.675 0.354 0.235 1.365 1.365 1.365 1.365 90.00 y = 80.388x + 0.871 R² = 0.9966 80.00 70.00 % kìm hãm 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 0.00 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 Trolox (mM) 77 1.000 1.200 37.48 50.53 74.09 82.76 78 5h 4h 3h 2h 1h 0h Mẫu m mẫu 0.5053 0.5015 0.5027 0.5026 0.503 0.5045 0.5033 0.503 0.5059 0.5030 0.5015 0.5004 0.5031 0.5033 0.5035 0.5019 0.501 0.5006 TT 3 3 3 X=(y-0.871)/80.388 DT51 8.2 Bảng số liệu 1.92 1.92 1.92 2.8 2.8 2.8 1.53 1.53 1.53 1.53 1.53 1.53 2.47 2.47 2.47 2.03 2.03 2.03 Độ ẩm 0.4956 0.4919 0.4930 0.4885 0.4889 0.4904 0.4956 0.4953 0.4982 0.4953 0.4938 0.4927 0.4907 0.4909 0.4911 0.4917 0.4908 0.4904 m ck 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Định mức 0.886 0.885 0.893 0.887 0.873 0.876 0.884 0.865 0.881 0.901 0.900 0.898 0.879 0.882 0.893 0.887 0.856 0.889 Abs 24.34 24.20 23.74 25.25 25.45 25.19 24.51 24.65 24.77 23.06 23.14 23.31 24.94 24.68 25.12 24.25 23.90 24.08 0.29 0.29 0.28 0.30 0.31 0.30 0.29 0.30 0.30 0.28 0.28 0.28 0.30 0.30 0.30 0.29 0.29 0.29 1472.58 1475.01 1442.49 1551.94 1563.33 1542.43 1483.30 1493.04 1491.67 1393.03 1402.57 1416.44 1525.25 1508.41 1535.69 1478.82 1459.13 1471.83 1469.93 1523.12 1404.01 1489.33 1552.57 1463.36 9.98 13.76 11.77 5.27 10.46 18.11 (µg TB (µg % kìm C (mM C SD hãm TE) TE/g CK) TE/g CK) Control : 1.171 Phụ lục 8: Xác định hoạt tính kháng oxi hóa phương pháp DPPH 0.68 0.90 0.84 0.35 0.67 1.24 RSD(% ) 79 5h 4h 3h 2h 1h 0h Mẫu m mẫu 0.5041 0.5002 0.5012 0.5014 0.5003 0.5006 0.5000 0.5002 0.5001 0.5007 0.5001 0.5002 0.5007 0.5011 0.5008 0.5014 0.5000 0.5008 TT 3 3 3 X=(y-0.871)/80.388 DT84 8.2 Bảng số liệu 3.7 3.7 3.7 3.31 3.31 3.31 3.27 3.27 3.27 3.52 3.52 3.52 3.25 3.25 3.25 2.61 2.61 2.61 Độ ẩm 0.4854 0.4817 0.4827 0.4848 0.4837 0.4840 0.4837 0.4838 0.4837 0.4831 0.4825 0.4826 0.4844 0.4848 0.4845 0.4883 0.4870 0.4877 m ck 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Định mức 0.984 0.988 0.988 0.914 0.915 0.913 0.936 0.925 0.926 0.928 0.930 0.925 0.926 0.921 0.912 0.925 0.915 0.917 Abs control 15.97 15.63 15.63 21.95 21.86 22.03 20.07 21.01 20.92 20.75 20.58 21.01 20.92 21.35 22.12 21.01 21.86 21.69 0.19 0.18 0.18 0.26 0.26 0.26 0.24 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.26 0.25 0.26 0.26 967.24 952.72 950.82 1351.99 1349.47 1359.63 1234.41 1294.29 1289.06 1279.86 1270.38 1297.64 1287.25 1313.61 1363.73 1282.44 1340.57 1327.54 1316.85 1321.53 1282.63 1272.59 1353.70 956.93 % kìm C (mM C (ug TE/g TB hãm TE) DW) 1.171 Phụ lục 8: Xác định hoạt tính kháng oxi hóa phương pháp DPPH 30.50 38.85 13.84 33.17 5.29 8.98 SD 2.32 2.94 1.08 2.61 0.39 0.94 RSD 8.3 Đánh giá ảnh hưởng thời gian ngâm đến khả khử gốc tự hai giống đậu tương DT84 DT51 one-way ANOVA One-way ANOVA: C (µg TE/g DW) - DT51 versus Mẫu Source Mẫu Error Total DF 12 17 SS 39844 1786 41631 S = 12.20 Level 0h 1h 2h 3h 4h 5h N 3 3 3 MS 7969 149 F 53.54 R-Sq = 95.71% Mean 1463.4 1552.6 1489.3 1404.0 1523.1 1469.9 P 0.000 R-Sq(adj) = 93.92% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+ 1400 1450 1500 1550 StDev 18.1 10.5 5.3 11.8 13.8 10.0 Pooled StDev = 12.2 Grouping Information Using Tukey Method Mẫu 1h 4h 2h 5h 0h 3h N 3 3 3 Mean 1552.57 1523.12 1489.34 1469.93 1463.36 1404.01 Grouping A A B B B C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Mẫu Individual confidence level = 99.43% Mẫu = 0h subtracted from: Mẫu 1h 2h 3h 4h 5h Lower 55.75 -7.48 -92.81 26.30 -26.89 Center 89.21 25.98 -59.35 59.76 6.57 Upper 122.67 59.44 -25.89 93.22 40.03 + -+ -+ -+( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+-100 100 200 Mẫu = 1h subtracted from: Mẫu 2h 3h 4h 5h Lower -96.69 -182.01 -62.91 -116.10 Center -63.23 -148.55 -29.45 -82.64 Upper -29.77 -115.09 4.01 -49.18 + -+ -+ -+( -* ) ( * ) ( * ) ( -* ) 80 + -+ -+ -+-100 100 200 Mẫu = 2h subtracted from: Mẫu 3h 4h 5h Lower -118.78 0.32 -52.87 Center -85.32 33.78 -19.41 Upper -51.86 67.24 14.05 + -+ -+ -+( * -) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+-100 100 200 Mẫu = 3h subtracted from: Mẫu 4h 5h Lower 85.64 32.45 Center 119.10 65.91 Upper 152.56 99.37 + -+ -+ -+( * ) ( -* ) + -+ -+ -+-100 100 200 Mẫu = 4h subtracted from: Mẫu 5h Lower -86.65 Center -53.19 Upper -19.73 + -+ -+ -+( -* ) + -+ -+ -+-100 100 200 One-way ANOVA: C (ug TE/g DW) -DT84 versus Mẫu Source Mẫu Error Total DF 12 17 S = 25.30 Level 0h 1h 2h 3h 4h 5h N 3 3 3 SS 323406 7680 331086 MS 64681 640 R-Sq = 97.68% Mean 956.9 1353.7 1272.6 1282.6 1321.5 1316.9 StDev 9.0 5.3 33.2 13.8 38.9 30.5 F 101.07 P 0.000 R-Sq(adj) = 96.71% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( *-) ( *-) ( * ) ( * ) ( * ) ( *-) -+ -+ -+ -+ -960 1080 1200 1320 Pooled StDev = 25.3 Grouping Information Using Tukey Method Mẫu 1h 4h 5h 3h 2h 0h N 3 3 3 Mean 1353.70 1321.53 1316.85 1282.63 1272.59 956.93 Grouping A A B A B B B C Means that not share a letter are significantly different 81 Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Mẫu Individual confidence level = 99.43% Mẫu = 0h subtracted from: Mẫu 1h 2h 3h 4h 5h Lower 327.39 246.28 256.32 295.23 290.55 Center 396.77 315.66 325.70 364.60 359.92 Upper 466.15 385.04 395.08 433.98 429.30 -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * -) ( -* ) ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 160 320 480 Mẫu = 1h subtracted from: Mẫu 2h 3h 4h 5h Lower -150.49 -140.45 -101.54 -106.22 Center -81.11 -71.07 -32.17 -36.85 Upper -11.73 -1.69 37.21 32.53 -+ -+ -+ -+ ( -* -) ( * -) ( -* -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 160 320 480 Mẫu = 2h subtracted from: Mẫu 3h 4h 5h Lower -59.34 -20.43 -25.11 Center 10.04 48.94 44.26 Upper 79.42 118.32 113.64 -+ -+ -+ -+ ( * -) ( -* -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 160 320 480 Mẫu = 3h subtracted from: Mẫu 4h 5h Lower -30.47 -35.15 Center 38.90 34.22 Upper 108.28 103.60 -+ -+ -+ -+ ( -* ) ( -* -) -+ -+ -+ -+ 160 320 480 Mẫu = 4h subtracted from: Mẫu 5h Lower -74.06 Center -4.68 Upper 64.70 -+ -+ -+ -+ ( * -) -+ -+ -+ -+ 160 320 480 Phụ lục 9: Sắc ký đồ mẫu thực theo thời gian ngâm 9.1 Mẫu DT84 82 Mẫu Blank Thời gian ngâm 0hl1 Thời gian ngâm 1hl1 Thời gian ngâm 2hl1 83 Thời gian ngam 3hl1 Thời gian ngâm 4hl1 Thời gian ngâm 5hl1 9.2 Mẫu DT51 Thời gian ngâm 0hl1 84 Thời gian ngâm 1hl1 Thời gian ngâm 2hl1 Thời gian ngam 3hl1 85 Thời gian ngâm 4hl1 Thời gian ngâm 5hl1 86 Phụ lục 10: Kết xác định hàm lượng chất khô hai giống đậu tương nảy mầm DT84 DT51 theo thời gian ngâm Thời gian ngâm cho nảy mầm đậu tương (h) Hàm lượng chất khô mẫu DT84 (%) Hàm lượng chất khô mẫu DT51(%) 96,30 ± 0,13 96,48 ± 0,08 96,73 ± 0,06 96,69 ± 0,04 96,75 ± 0,05 97,39 ± 0,06 98,08 ± 0,05 87 97,97 ± 1,97 98,47 ± 0,11 98,47 ± 0,03 97,53 ± 0,06 97,02 ± 0,04