Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu ảnh hưởng của đèn led đơn sắc và co2 đến sinh trưởng của tảo lục dunaliella salina

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED ĐƠN SẮC VÀ CO ĐẾN SINH TRƯỞNG CỦA TẢO LỤC DUNALIELLA SALINA” HÀ NỘI - 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐÈN LED ĐƠN SẮC VÀ CO ĐẾN SINH TRƯỞNG CỦA TẢO LỤC DUNALIELLA SALINA” Sinh viên thực : NGUYỄN MẠNH LÂM MSV : 620588 Lớp : K62CNSHC Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : PGS TS Nguyễn Đức Bách HÀ NỘI – 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết quả, hình ảnh, số liệu nghiên cứu sử dụng luận văn trung thực, chưa sử dụng báo cáo Tất thơng tin trích dẫn khóa luận rõ nguồn gốc giúp đỡ cảm ơn Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước Học viện Hội đồng Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Mạnh Lâm i LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến toàn thể thầy, cô công tác Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đặc biệt thầy, cô khoa Công nghệ sinh học tận tình dạy dỗ truyền đạt kiến thức quý báu cho suốt năm học tập rèn luyện trường Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Nguyễn Đức Bách tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, quan tâm tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp Tơi xin trân trọng cảm ơn tất anh, chị, bạn bè làm việc môn sinh học phân tử CNSH ứng dụng tận tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến bổ ích tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Mặc dù cố gắng hồn thiện luận văn nhiệt tình lực mình, nhiên khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đóng góp q thầy bạn để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Nguyễn Mạnh Lâm ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT x TÓM TẮT xi Phần I Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Phần II Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu tảo D salina 2.1.1 Vị trí phân loại tảo D salina 2.1.2 Đặc điểm hình thái sinh học tảo D salina 2.1.3 Thành phần dinh dưỡng tảo D salina 2.2 Các nghiên cứu ứng dụng tảo D salina 2.2.1 Tình hình nghiên cứu nuôi tảo D salina Việt Nam 2.2.2 Tình hình nghiên cứu ni tảo D salina giới 2.2.3 Ứng dụng tảo D salina 2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng tảo D salina .11 2.3.1 Ảnh hưởng nguồn sáng đến sinh trưởng tảo D salina 11 2.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng tảo D salina 12 2.3.3 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng tảo D salina 12 2.3.4 Ảnh hưởng dinh dưỡng đến sinh trưởng tảo D salina 13 2.3.5 Ảnh hưởng độ mặn đến sinh trưởng tảo D salina 14 2.4 Ứng dụng đèn LED nghiên cứu vi tảo .15 2.4.1 Giới thiệu đèn LED 15 2.4.2 Ứng dụng đèn LED nuôi tảo .15 2.5 Ứng dụng CO nghiên cứu vi tảo .16 iii 2.5.1 Giới thiệu CO 16 2.5.2 Ứng dụng CO nuôi tảo 16 Phần III Vật liệu phương pháp nghiên cứu 18 3.1 Vật liệu nghiên cứu 18 3.1.1 Chủng giống 18 3.1.2 Máy móc thiết bị nghiên cứu 18 3.1.3 Hóa chất 21 3.2 Địa điểm nghiên cứu thời gian thực 23 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu .23 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 24 3.3 Nội dung nghiên cứu 24 3.3.1 Nghiên cứu vòng đời tảo D salina 24 3.3.2 Xác định mối tương quan mật độ tế bào giá trị quang phổ .24 3.3.3 Xác định ảnh hưởng môi trường đến khả sinh trưởng tảo D salina .24 3.3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng đèn LED đến khả sinh trưởng tảo D salina .25 3.3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng CO đến khả sinh trưởng tảo D salina 25 3.4 Phương pháp nghiên cứu 25 3.4.1 Phương pháp lưu giữ nhân giống tảo .25 3.4.2 Phương pháp xác định vòng đời tảo D salina .27 3.4.3 Phương pháp xác định mật độ tế bào 27 3.4.4 Phương pháp xác định tốc độ sinh trưởng riêng 29 3.4.5 Phương pháp xác định ảnh hưởng môi trường đến khả sinh trưởng tảo D salina .30 3.4.6 Phương pháp xác định ảnh hưởng đèn LED đến khả sinh trưởng tảo D salina .30 3.4.7 Phương pháp xác định ảnh hưởng CO đến khả sinh trưởng tảo D salina 34 3.4.8 Phương pháp xử lý số liệu 35 Phần IV Kết thảo luận 36 4.1 Vòng đời tảo D salina .36 4.1.1 Đặc điểm hình thái tảo D salina 36 iv 4.1.2 Chu kỳ vòng đời tảo D salina .37 4.3 Mối tương quan mật độ tế bào độ hấp thụ quang học tảo D salina 40 4.4 Ảnh hưởng môi trường đến khả sinh trưởng tảo D salina .41 4.5 Ảnh hưởng đèn LED đến khả sinh trưởng tảo D salina 44 4.5.1 Ảnh hưởng đèn LED trắng đến khả sinh trưởng tảo D salina 44 4.5.2 Ảnh hưởng đèn LED đỏ đến khả sinh trưởng tảo D salina 47 4.5.3 Ảnh hưởng đèn LED xanh đến khả sinh trưởng tảo D salina 51 4.6 Ảnh hưởng CO đến khả sinh trưởng tảo D salina 55 Phần V: Kết luận kiến nghị 58 5.1 Kết luận .58 5.2 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Vị trí phân loại tảo D salina Bảng 2.2 Các thành phần tảo D salina Bảng 2.3 Thành phần chất khoáng tảo D salina Bảng 2.4 Thành phần axit béo tảo D salina .6 Bảng 3.1 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu .18 Bảng 3.2 Thành phần môi trường Walne nuôi tảo D salina 21 Bảng 3.3 Thành phần môi trường F/2 nuôi tảo D salina 22 Bảng 3.4 Thành phần nước biển nhân tạo nuôi tảo D salina 23 Bảng 3.5 Thí nghiệm ảnh hưởng ánh sáng trắng đến sinh trưởng tảo D salina 31 Bảng 3.6 Thí nghiệm ảnh hưởng ánh sáng đỏ đến sinh trưởng tảo D salina 32 Bảng 3.7 Thí nghiệm ảnh hưởng ánh sáng xanh đến sinh trưởng tảo D salina 33 Bảng 3.8 Thí nghiệm ảnh hưởng CO đến sinh trưởng tảo D salina 34 Bảng 4.1 Mối tương quan mật độ tế bào độ hấp thụ quang học 40 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc chức tế bào tảo D salina Hình 2.2 Khả hấp thụ quang phổ sắc tố quang hợp 15 Hình 3.1 Cấu tạo buồng đếm Neubauer 20 Hình 3.2 Thiết bị sục khí CO 21 Hình 3.3 Sơ đồ thí nghiệm ảnh hưởng đèn LED trắng đến sinh trưởng tảo D salina .31 Hình 3.4 Sơ đồ thí nghiệm ảnh hưởng đèn LED đỏ đến sinh trưởng tảo D salina 32 Hình 3.5 Sơ đồ thí nghiệm ảnh hưởng đèn LED xanh đến sinh trưởng tảo D salina .33 Hình 3.6 Sơ đồ thí nghiệm ảnh hưởng CO đến sinh trưởng tảo D salina 35 Hình 4.1 Tế bào tảo D salina quan sát kính hiển vi quang học 36 Hình 4.2 Giống tảo D salina lưu giữ ống nghiệm 37 Hình 4.3 Tế bào tảo D salina sinh sản vơ tính dạng sinh dưỡng 38 Hình 4.4 Tế bào D salina dạng giao tử 39 Hình 4.5 Các bào tử quan sát vật kính X100 39 Hình 4.6 Kết sau 14 ngày ni tảo D salina loại môi trường F/2 Walne 43 Hình 4.7 Kết sau 14 ngày nuôi tảo D salina cường độ ánh sáng trắng khác 47 Hình 4.8 Kết thu sau 14 ngày nuôi tảo D salina cường độ ánh sáng đỏ khác .50 Hình 4.9 Hình thái tảo D salina sau 14 ngày nuôi chiếu sáng đèn LED đỏ .51 Hình 4.10 Kết thu sau 14 ngày nuôi tảo D salina cường độ ánh sáng xanh khác 53 vii Hình 4.11 Hình thái tảo D salina sau 14 ngày ni chiếu sáng đèn LED xanh 54 Hình 4.12 Kết sau 14 ngày ni tảo D salina với nồng độ sục CO khác 57 viii salina cường độ ánh sáng đỏ khác cao cường độ tương ứng ánh sáng trắng Hình ảnh kết thí nghiệm thể hình sau: Hình 4.8 Kết thu sau 14 ngày nuôi tảo D salina cường độ ánh sáng đỏ khác Chú thích: CT1, CT2, CT3, CT4, CT5 tương ứng với cường độ ánh sáng đỏ 1000, 2000, 3000, 4000 5000Lux Ở thí nghiệm ánh sáng đỏ, cường độ khác nhau, vào ngày thứ tám bắt đầu có tích lũy β-carotene Ở ngày thứ mười bốn, bình tảo thí nghiệm chuyển sang màu vàng Kết giải thích khơng phải mơi trường bị cạn kiệt dinh dưỡng nhanh mà nguồn ánh sáng đỏ có kích thích sinh tổng hợp β-carotene tảo D salina Khác với loài tảo Haematococcus pluvialis nghiên cứu thấy đèn LED đỏ giúp tối ưu sinh trưởng cho tảo khơng gây kích thích sinh tổng hợp hợp chất carotenoid (Pham et al., 2018) Tảo D salina quan sát kính hiển vi quang học ngày thứ mười bốn (CT5) quan sát thể hình sau: 50 Hình 4.9 Hình thái tảo D salina sau 14 ngày nuôi chiếu sáng đèn LED đỏ Chú thích: (1) Vùng chứa lục lạp tế bào D salina; (2) β-carotene có mặt khắp tế bào D salina Các tế bào quan sát cho thấy có tích lũy cao β-carotene Ở hình 4.9 cho thấy lượng lớn β-carotene tập trung nhiều gần màng sinh chất dần vào tế bào tảo D salina Ở vùng chứa lục lạp cho thấy xuất màu xanh chlorophyll, thấy lượng lớn β-carotene tổng hợp giúp che phủ bảo lục lạp tế bào tránh khỏi cường độ ánh sáng môi trường cạn kiệt dinh dưỡng Hiện tượng thấy giống với nghiên cứu Polle et al., (2020) 4.5.3 Ảnh hưởng đèn LED xanh đến khả sinh trưởng tảo D salina Ngoài ánh sáng đỏ hấp thụ cực đại chlorophyll a, chlorophyll b thành phần có nhiều lục lạp Chlorophyll b hấp thụ bước sóng cực đại 430 đến 490nm dẫn truyền lượng sang chlorophyll a để thực trình quang hợp Vì vậy, sử dụng nguồn sáng xanh nghiên cứu có phổ ánh sáng tập trung khoảng từ 400 đến 490nm với đỉnh đạt 467nm ảnh hưởng định đến khả sinh trưởng tảo D salina Do đó, cường độ ánh sáng khác từ 1000 đến 5000Lux nguồn ánh sáng xanh thực để theo dõi ảnh hưởng đến sinh trưởng tảo D salina Kết thể biểu đồ 4.8 51 Mật độ tế bào (x104 tế bào/ml) Cường độ ánh sáng (Lux) 1000 2000 3000 4000 5000 35.0 30.0 25.0 20.0 15.0 10.0 5.0 0.0 Thời gian (ngày) 10 12 14 Biểu đồ 4.8 Đường cong sinh trưởng tảo D salina nuôi cường độ ánh xanh khác Từ biểu đồ 4.8 cho thấy nguồn ánh sáng xanh làm kéo dài thời gian sinh trưởng tảo D salina Mật độ tế bào cường độ ánh sáng khác có xu hướng tăng chậm từ ngày thứ hai đến ngày thứ mười bốn Ở kết ánh sáng trắng đỏ cho thấy mật độ tế bào đạt cực đại vào ngày thứ mười giảm dần sau đó, cịn nguồn sáng xanh cho thấy mật độ tế bào tiếp tục tăng mật độ sau ngày thứ mười bốn Ở cường độ 1000Lux có mật độ tế bào tăng chậm gần không thay đổi từ ngày thứ tám đến ngày thứ mười bốn Đối với tảo Chlorella vulgaris, cường độ ánh sáng xanh 3700Lux 8100Lux nghiên cứu thấy làm chậm ức chế khả sinh trưởng tảo (Khalili et al., 2015) Ở cường độ 4000Lux 5000Lux, tế bào tảo D salina có xu hướng tăng nhanh tế bào tảo cường độ cịn lại, có mật độ đạt cực đại 30,8x104 23,6x104 tế bào/ml vào ngày thứ mười bốn Ở cường độ 1000Lux, tế bào tảo D salina có tốc độ tăng chậm nhất, mật độ đạt cực đại 8,6x104 tế bào/ml vào ngày thứ mười bốn Tuy nhiên thấy sau ngày thứ mười bốn, mật độ tế bào công thức cho thấy tế bào tảo tiếp tục sinh trưởng không bị giảm Từ đó, thấy ánh sáng xanh khơng gây ức chế khả sinh trưởng mà giúp trì trạng thái sinh trưởng sinh dưỡng tảo D salina Kết cho thấy phù hợp với nghiên cứu Helana et al., (2016), người đèn LED xanh trì khả sinh trưởng sinh dưỡng tảo D salina 52 Tốc độ sinh trưởng riêng tảo D salina cường độ ánh sáng xanh khác thể biểu đồ sau: Tốc độ sinh trưởng riêng (µ) 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 1000 2000 3000 4000 5000 Cường độ ánh sáng (Lux) Biểu đồ 4.9 Tốc độ sinh trưởng riêng tảo D salina cường độ ánh sáng xanh khác Từ biểu đồ 4.9 cho thấy tốc độ sinh trưởng riêng tảo D salina cường độ có sai khác mặt thống kê sinh học (p0.05) Ở nồng độ 5% CO có tốc độ sinh trưởng riêng cao với µ=0,262, cịn nồng độ 7% CO có tốc độ sinh trưởng riêng thấp với µ=0,209 56 Hình 4.12 Kết sau 14 ngày nuôi tảo D salina với nồng độ sục CO khác Chú thích: CT1, CT2, CT3, CT4 tương ứng với nồng độ CO 0%, 2%, 5% 7% Ở bình thí nghiệm 0% CO cho thấy có tích lũy β-carotene từ sớm (ngày ni thứ mười), cịn bình cịn lại trì trạng thái xanh lâu Có thể thấy việc bổ sung CO với nồng độ thích hợp (5% CO ) giúp trì giai đoạn sinh trưởng sinh dưỡng tảo D salina lâu hơn, từ giúp tối ưu điều kiện nuôi để đạt mật độ tế bào cao Kết sau 14 ngày ni, bình thí nghiệm nồng độ 5% CO tích lũy lượng β-carotene, cịn bình khơng bổ sung CO có tích lích cao β-carotene chuyển sang màu vàng cam rõ rệt, bình cịn lại cho thấy chuyển sang màu vàng cam nhạt màu 57 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết thí nghiệm ảnh hưởng đến sinh trưởng tảo D salina, rút số kết luận sau: Đối với hai loại môi trường khảo sát, môi trường Walne cho thấy tăng trưởng nhanh tối ưu so với môi trường F/2 Mật độ tảo cực đại môi trường Walne đạt 36,9x104 tế bào/ml vào ngày thứ mười Ba nguồn sáng thí nghiệm đèn LED trắng, đèn LED đỏ đèn LED xanh với cường độ ánh sáng khác gây ảnh hưởng đến khả sinh trưởng tảo D salina Ở đèn LED xanh trì quang hợp không gây ức chế cho tảo D salina trình ni Ở đèn LED đỏ cường độ ánh sáng 4000Lux tối ưu cho sinh trưởng tảo D salina với mật độ tế bào đạt cao 49,7x104 tế bào/ml vào ngày thứ mười Khi tiến hành thí nghiệm nồng độ CO kết hợp với nguồn sáng đỏ cường độ 4000Lux kết cho thấy điều kiện sục 5% CO cho mật độ cực đại đạt cao 53,8x104 tế bào/ml vào ngày thứ mười 5.2 Kiến nghị - Nghiên cứu điều kiện ánh sáng kết hợp ánh sáng xanh ánh sáng đỏ ảnh hưởng đến sinh trưởng tảo D salina - Nghiên cứu điều kiện cảm ứng sản xuất β-carotene tảo D salina 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đặng Diễm Hồng (2019) Nuôi trồng vi tảo giàu dinh dưỡng làm thực phẩm chức cho người động vật nuôi Việt Nam Nhà xuất Khoa học tự nhiên Cơng nghệ, 154-580 Đặng Đình Kim, Trần Văn Tựa, Dương Thị Thủy, Bùi Thị Kim Anh, Vũ Thị Nguyệt Nguyễn Hồng Yến (2018) Công nghệ sản xuất ứng dụng vi tảo Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ, 110-317 Huỳnh Hiệp Hùng, Lê Thị Thanh Loan, Nguyễn Thị Mỹ Lan, Lê Thị Mỹ Phước Phạm Thành Hồ (2013) Khảo sát khả tạo Beta-carotene chủng vi tảo Dunaliella phân lập Việt Nam Tạp Chí Phát Triển KH&CN, 16, Nguyễn Đức Bách, Phí Thị Cẩm Miện, Kim Anh Tuấn, Nguyễn Thị Hiền Vũ Lê Diệu Hương (2021) Nghiên cứu ứng dụng đèn LEDs để kéo dài thời gian ni tảo xoắn Spirulina Tạp chí Khoa học cơng nghệ Việt Nam, 63(7), 57-64 Nguyễn Thị Thanh Hải Ngô Đặng Nghĩa (2014) Phân lập vi tảo D salina NT6 Khánh Hòa nghiên cứu điều kiện sinh trưởng tổng hợp βcaroten tảo Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 1, 218-228 Võ Hồng Trung, Nguyễn Thị Bích Ngọc, Nguyễn Thị Hồng Phúc, Trần Huỳnh Phong Vũ Thị Thu Hồng (2018) Sự tăng trưởng, tích lũy carotenoid lipit D salina điều kiện ức chế Tạp chí Khoa học Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh, 15(12), 14-24 Võ Hồng Trung Bùi Văn Lệ (2018) Tăng trưởng khả chống oxy hóa D salina điều kiện ức chế ánh sáng Tạp chí Khoa học Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh, 15(6), 179-190 Tiếng Anh Aasen A.J., Eimhjellen K.E and Liaaen-Jensen S (1969) An extreme source of beta-carotene Acta Chem Scan, 23, 2544-2545 59 Aharon O (2005) A hundred years of Dunaliella research: 1905–2005 Saline syst, 1(1), 10 Avron M and Ben-Amotz A (1992) Dunaliella: Physiology, Biochemistry, and Biotechnology CRC Press, Boca Raton 11 Basu T.K., Hill G.B., Ng D., Abdi E and Temple N (1989) Serum vitamins A and E, beta-carotene, and selenium in patients with breast cancer J Am Coll Nutr 8, 524-529 12 Ben-Amotz A and Avron M (1983) On the factors which determine massive beta-carotene accumulation in the halotolerant alga D bardawil Plant Physiol, 72, 593-597 13 Ben-Amotz A and Avron M (1989) The biotechnology of mass culturing of Dunaliella for products of commercial interest In Algal and Cyanobacterial Biotechnology, 90-114 14 Ben-Amotz A., Sussman I and Avron M (1982) Glycerol production by Dunaliella In: Mislin H., Bachofen R (eds) New Trends in Research and Utilization of Solar Energy through Biological Systems EXS 43: Experientia Supplementum, 43, 55-58 15 Borowitzka L.J (1981) The microflora Salt Lakes, 33-46 16 Borowitzka M.A and Borowitzka L.J (1987) Limits to growth and carotenogenesis in laboratory and large-scale outdoors of D salina In Algal Biotechnology, 345-402 17 Borowitzka M.A and Borowitzka L.J (1988) Vitamins and fine chemicals from microalgae In Micro-algal Biotechnology, 153-196 18 Borowitzka M.A and Borowitzka L.J (1990) Commercial Production of βCarotene by D salina in Open Ponds Bulletin of Marine Science, 47(1), 244-252 19 Cheirsilp B and Torpee S (2012) Enhanced growth and lipid production of microalgae under mixotrophic culture condition: Effect of light intensity, 60 glucose concentration and fed-batch cultivation Bioresource Technology, 110, 510-516 20 Comstock G.W., Helzlsouer K.I and Bush T.L (1991) Prediagnostic serum levels of carotenoids and vitamin E as related to subsequent cancer in Washington County, Maryland Am J Clin Nutr, 53, 260-264 21 Dewan A., Kim J., Rebecca H.M.L., Siva A.V Karim M (2012) Growth kinetics of microalgae in microfluidic static droplet arrays Biotechnology and Bioengineering, 109, 2987-2996 22 El-Baz F.K., Abdo S.M and Hussein A.M.S (2017) Microalgae D salina for use as food supplement to improve pasta quality International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 46, 45-51 23 Farhat N., Rabhi M., Falleh H., Jouini J., Abdelly C and Smaoui A (2011) Optimization of salt concentrations for a higher carotenoid production in D salina (Chlorophyceae)(1) J Phycol, 47(5), 1072-1077 24 Feng S., Hu L., Zhang Q., Zhang F., Du J., Liang G., Li A., Song G and Liu Y (2020) CRISPR/Cas technology promotes the various application of D salina system Appl Microbiol Biotechnol 104, 8621-8630 25 Habibi R and Sibi G (2019) Light Emitting Diode (LED) Illumination for Enhanced Growth and Cellular Composition in Three Microalgae Advances in Microbiology Research 26 Helana S., Zainuri M and Suprojanto J (2016) Microalgae D salina (teodoresco, 1905) growth using the LED light (Light Limiting Diode) and different media ScienceDirect,7, 226-230 27 Ismail D., Sugiarto C.W., Muharam Y and Susanto B.H (2018) The effect of nutrient arrangement on biomass growth and lipid content of microalgae Nannochloropsis oculata in internally illuminated bubble column photobioreactor AIP Conferrence Proceedings, 20-34 28 Jang-Hyun J., Phunlap S., Chae H.R., Jong-Myung k., Gwi-Taek J and Sung-Koo K (2018) Effects of green LED light and three stresses on 61 biomass and lipid accumulation with two-phase culture of microalgae Process Biochemistry, 77, 93-99 29 Kativu E (2011) Carbon dioxide absorption using fresh water algae and identifying potential uses of algal biomass Environmental Science, 1-133 30 Khalili A., Najafpour G., Amini G and Samkhaniyani F (2015) Influence of nutrients and LED light intensities on biomass production of microalgae Chlorella vulgaris Biotechnology and Bioprocess Engineering, 20(2), 284290 31 Lamers P.P., Janssen M., De-Vos R.C.H., Bino R.J and Wijffels R.H (2012) Carotenoid and fatty acid metabolism in nitrogen-starved D salina, a unicellular green microalga Journal of Biotechnology, 162(1), 21-27 32 Lerche W (1937) Untersuchungen über Entwicklung und Fortpflanzung in der Gattung Dunaliella Arch f Protistenkd, 88, 236-268 33 Mil’ko E.D (1962) Study of the requirement of two Dunaliella spp in mineral and organic components of the medium Moscow University Vestnik Biologiya, 6, 21-23 34 Mil’ko E.S (1963) Effect of various environmental factors on pigment production in the alga D salina Mikrobiologya, 32, 299-307 35 Murthy K.C (2005) Production of Beta-Carotene from cultured Dunaliella sp and Evaluation of Biological Activities University of Mysore, 2-227 36 Naito K., Suzuki M., Mito S., Hasegawa H., Imai I., Sohrin Y and Matsui M (2001) The Pursuit of Siderophore Secreted by Marine Phytoplankton Rhodomonas Ovalis Analytical Sciences, 17 37 Paul-Hubert B., Guillaume R., Michel L and Lionel M (2017) A new insight into cell walls of Chlorophyta Algal Research, 25, 333-371 38 Pham K.T., Nguyen T.C., Luong T.H., Dang P.H., Vu D.C., Do T.N, Phi T.C.M and Nguyen D.B (2018) Influence of inoculum size, CO2 concentration and LEDs on the growth of green microalgae Haematococcus pluvialis Flotow Life Sciences, 60(4), 59-65 62 39 Polle J.E.W., Roth R., Ben-Amotz A and Goodenough U (2020) Ultrastructure of the green alga D salina strain CCAP19/18 (Chlorophyta) as investigated by quick-freeze deep-etch electron microscopy Algal Research, 49, 101953 40 Polle J.E.W., Struwe L and Jin E (2008) Identification and characterization of a new strain of the unicellular green alga D salina (Teod.) from Korea J Microbiol Biotechnol, 18(5), 821-827 41 Pourjamshidian R., Abolghasemi H., Esmaili M., Amrei H.D., Parsa M and Rezaei S (2019) Carbon dioxide biofixation by Chlorella sp In a bubble column reactor at different flow rates and CO2 concentrations Brazilian Journal of Bioprocess Engineering, 36(2), 639-645 42 Preetha K., John L., Subin C.S and Vijayan K.K (2012) Phenotypic and genetic characterization of Dunaliella (Chlorophyta) from Indian salinas and their diversity Aquatic Biosystems, 8(1), 27 43 Saifuddin N.M., Puvunathan P., Aisswarya K and Juan Y.P (2015) Sequestration of High Carbon Dioxide Concentration for Induction of Lipids in Microalgae for Biodiesel Production Journal of Applied Sciences, 15(8), 1045-1058 44 Satthong S., Saego K., Kitrungloadjanaporn P., Nuttavut N., Amornsamankul S and Triampo W (2019) Modeling the effects of light sources on the growth of algae Advances in Difference Equations, 170 45 Schulze P.S (2014) Light emitting diodes (LEDs) applied to microalgal production Trends in biotechnology, 32(8), 422-430 46 Shklar G., Schwartz I., Trickier D and Reid S (1989) Regression of experimental cancer by oral administration of combined alpha-tocopherol and beta-carotene Nutr Cancer, 12(4), 321-325 47 Siegel B.Z., Siegel S.M., Speitel T., Waber J anh Stoeker R (1984) Brine organisms and the question of habitat-specific adaptation Origins of Life, 14, 757-770 63 48 Sukenik A and Shelef G (1984) Algal autoflocculation: verification and proposed mechanism Biotechnol Bioeng 26, 142-147 49 Stich H.F., Rosin M.P., Hornby A.P., Mathew B., Sankaranarayanan R and Nair M.K (1988) Remission of oral leukoplakias and micronuclei in tobacco/betel quid chewers treated with beta-carotene and with beta-carotene plus vitamin A Int J Cancer 42, 195-199 50 Tafreshi A.H and Shariati M (2009) Dunaliella biotechnology: methods and applications Applied Microbiogy, 107(1), 14-35 51 Tertychnaya T.N., Manzhesov V.I., Andrianov E.A and Yakovleva S.F (2020) New aspects of application of microalgae D Salina in the formula of enriched bread IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 422, 12-21 52 Thakur A and Kumar H.D (1999) Nitrate, ammonium, and phosphate uptake by the immobilized cells of D salina Bull Environ Contam Toxicol 62, 70-78 53 Woutersen R.A and Garderen-Hoetmer A.V (1988) Inhibition of dietary fat promoted development of (pre)neoplastic lesions in exocrine pancreas of rats and hamsters by supplemental selenium and β-carotene Cancer Lett 49, 79-85 54 Zakowski K., Naony M and Szocinski M (2014) Influence of water salinity on corrosion risk – The case of the southern Baltic Sea coast Environmental Monitoring and Assessment, 186(8), 4871-4879 64