ĐẠIHỌCQUỐCGIAHÀNỘITRƢỜN GĐẠIHỌCKHOAHỌCTỰNHIÊN * NGUYỄN THỊÁNHTUYẾT NGHIÊNCỨUPHÂNTÍCHĐÁNHGIÁHÀML ƢỢNGKHÁNGSINHHỌBETALACTAM TRONGĐỐITƢỢNGDƢỢCPHẨMVÀSINHHỌCBẰN GPHƢƠNGPHÁPPHÂNTÍCHHIỆNĐẠI LUẬNÁNTIẾNSĨHÓAHỌ[.]
ĐẠIHỌCQUỐCGIAHÀNỘITRƢỜN GĐẠIHỌCKHOAHỌCTỰNHIÊN * NGUYỄN THỊÁNHTUYẾT NGHIÊNCỨUPHÂNTÍCHĐÁNHGIÁHÀML ƢỢNGKHÁNGSINHHỌBETALACTAM TRONGĐỐITƢỢNGDƢỢCPHẨMVÀSINHHỌCBẰN GPHƢƠNGPHÁPPHÂNTÍCHHIỆNĐẠI LUẬNÁNTIẾNSĨHĨAHỌC HÀNỘI–2013 ĐẠIHỌCQUỐCGIAHÀNỘITRƢỜNG ĐẠIHỌCKHOAHỌCTỰNHIÊN NGUYỄNTHỊÁNHTUYẾT NGHIÊNCỨUPHÂNTÍCHĐÁNHGIÁHÀML ƢỢNGKHÁNGSINHHỌBETALACTAM TRONGĐỐITƢỢNGDƢỢCPHẨMVÀSINHHỌCBẰN GPHƢƠNGPHÁPPHÂNTÍCHHIỆNĐẠI CHUNNGÀNH :HĨAPHÂNTÍCH M Ã SỐ : 62 4429 01 LUẬN ÁN TIẾNSĨHÓAHỌC NGƢỜIHƢỚNGDẪNKHOAHỌC: PGS.TS.NGUYỄNVĂNRI GS.TS.PHẠMHÙNGVIỆT HÀNỘI–2013 LỜICAMĐOAN Tơixincamđoanđâylàcơngtrìnhnghiêncứucủariêngtơi.Cácsốli ệu,kếtquảnêutrongluậnánlàtrungthựcvànộidungnàychƣa từngđƣợccơngbốtrongbấtkỳcơngtrìnhnghiêncứunàotrƣớcđó HàNội,tháng2năm2013 Tácgiảluậnán NguyễnThịÁnhTuyết LỜICẢMƠN EmxinbàytỏlịngbiếtơnsâusắctớithầyPGS.TS.NGUYỄNVĂNRIvàG S T S.PHẠMHÙNG VIỆTđãgiaođềtàivàtận tìnhhƣớngdẫn,động viên,giúpđỡ,tạođiềukiệnthuậnlợichoemtrongsuốtqtrìnhlàmluậnán TơixinchânthànhcảmơnQthầycơ, anhchịcán bộtrongBộmơnHóaPhântích,KhoaHóahọc,TrƣờngĐạihọcKhoahọcTựnhiên,T rungtâmnghiêncứucơngnghệ mơitrƣờngvàphát triểnbềnvững- ĐạihọcKhoahọcTựnhiênĐạih ọ c QuốcgiaHàNộiđãtậntìnhgiúpđỡvàtạomọiđiềukiệnt huậnlợiđểtơihồnthànhluậnán Tơixin chân thành cảmơncác anh chị cánbộnghiêncứu, Ban Lãnh đạo ViệnKh o a họccơngnghệmơitrƣờng(INEST)đãtạođiềukiện,giúpđỡtơitrongq trìnhthựchiệnluậnán Tơix i n t r â n t r ọ n g cảmơ n B a n G i m h i ệ u , B a n C h ủ n h i ệ m K h o a C b ả n , TrƣờngĐại học Y-Dƣợc Thái Nguyên đãtạođiều kiện thuận lợicho đƣợchọctậpvàhồnthànhbảnluậnán Cuối tơixin chânthànhcảm ơnbốmẹ,anh chị,giađìnhvàbạn bè,đồngnghiệpnhữngngƣờilnđộngviên,chiasẻmọikhókhăncùngtơitrongsuốt qtrìnhhọctậpvàthựchiệnluậnán HàNội,tháng2năm2013 Nghiêncứusinh NguyễnThịÁnhTuyết MỤCLỤC LỜICAMĐOAN .i LỜICẢMƠN .ii MỤCLỤC iii KÝHIỆUCÁC CHỮVIẾTTẮT TRONG LUẬN ÁN vi KÝHIỆUĐƠNVỊĐOLƢỜNGCÁCĐƠNVỊĐOLƢỜNG viii DANHMỤCCÁC BẢNG ix DANHMỤCCÁC HÌNH xii MỞĐẦU CHƢƠNG1:TỔNGQUANTÀILIỆU .4 1.1 Giớithiệuchungvềchấtkhángsinh β-lactam .4 1.1.1 Tính chấtvậtlývàhốhọc 1.1.2 Tácdụng 1.1.3 Tính chấtquanghọccủacácβ-lactam 10 1.2 TìnhhìnhlạmdụngkhángsinhởViệtNamvàtrênthếgiớihiệnnay 10 1.3 Mộtsốphƣơngphápđịnhlƣợng β-lactam 13 1.3.1 Phƣơngphápquanghọc 13 1.3.2 Phƣơngphápđiệnhóa 14 1.3.3 Sắckýlỏnghiệu năngcao(HPLC) .15 1.3.4 Phƣơngphápđiệndimaoquản-electrophoresis(CE) 19 CHƢƠNG2:PHƢƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU .25 2.1 Mụctiêunghiên cứu 25 2.2 Phƣơng phápnghiêncứu .25 2.2.1 Kỹthuậtphântíchsắckýlỏnghiệu năngcao(HPLC) .25 2.2.1.1 PhƣơngphápRP-HPLC,detector UV 26 2.2.1.2 PhƣơngphápRP-HPLC,detectorhuỳnhquang .31 2.2.1.3 ỨngdụngphƣơngphápRPHPLC,detectorhuỳnhquangđểphânt í ch mẫu .34 2.2.1.4 Phƣơngphápxửlýsốliệuphântích 36 2.2.2Kỹthuậtđiệndimaoquản(CE) .39 2.3 Hóachất,mẫuphântíchvàthiếtbị,dụng cụ 50 2.3.1 Hóachất 50 2.3.2 Mẫu phântích 52 2.3.3 Thiết bịvàdụngcụ .53 2.3.3.1 Thiếtbị 53 2.3.3.2 Dụngcụ 54 CHƢƠNG3:KẾTQUẢVÀTHẢOLUẬN .56 3.1 Táchvàxácđịnhđồngthờikhángsinhlactambằngkỹthuậtsắckýlỏngh i ệ u năngcao(HPLC) 56 3.1.1 KỹthuậtRP-HPLC,detectorUV 56 3.1.1.1 Chọncácthông sốmáyđo đểpháthiệnchấtphân tích 56 3.1.1.2 Hệdungmơiphađộng 57 3.1.1.3 Đánh giá thống kêphƣơngphápphântích-lactam phƣơngphápRPHPLC 64 3.1.1.4 Phântíchmẫu 70 3.1.2 KỹthuậtRP-HPLC,detectorhuỳnhquang 73 3.1.2.1 KhảosátcácđiềukiệntạodẫnxuấtgiữalactamvàthuốcthửNBD-F 73 3.1.2.2 Tốiƣuhóacácđiềukiệntáchvàđịnhlƣợngmộtsốkhángsinhhọ-lac ta m .77 3.1.2.3 Đánhgiáphƣơngphápphântích .85 3.1.2.4 Phântíchmẫu 90 3.1.3KếtluậnvềphƣơngphápHPLC 94 3.2 Táchvàxácđịnhđồngthờikhángsinhβlactambằngkỹthuậtđiệndimaoq u ả n điệnđộnghọckiểumixen(MEKC) .95 3.2.1 Chọncácthôngsốmáyđiệndi 95 3.2.2 Khảosátảnhhƣởngcủadungdịchđiệngiảiđếnquátrìnhđiệndi 96 3.2.2.1 Ảnhhƣởngcủathànhphầndungdịchđệm .96 3.2.2.2 ẢnhhƣởngpHcủadungdịchđệmđiệndi 96 3.2.2.3 KhảosátảnhhƣởngcủanồngđộchấtmixenSDS 99 3.2.2.4 Khảosátảnhhƣởngcủanồngđộđệm 101 3.2.3 Khảosátảnhhƣởngthờigianbơmmẫu 104 3.2.4 Khảosátảnhhƣởngthếđiệndi .105 3.2.5 Khảosátảnhhƣởngnhiệtđộcủamaoquản .107 3.2.6 Đánhgiáthốngkêphƣơngphápphântích-lactambằngMEKC .109 3.2.6.1 Khảosátkhoảngtuyếntínhvàlậpđƣờngchuẩn 109 3.2.6.2 Độchínhxác 112 3.2.6.3 Độlặplạicủaphépđo 116 3.2.6.4 GiớihạnpháphiệnvàgiớihạnđịnhlƣợngcủaphƣơngphápCE 116 3.2.7 Phântíchmẫu 117 3.2.7.1 Phântíchmẫudƣợcphẩm 117 3.2.7.2 Phântíchmẫunƣớctiểu 119 3.2.8 Kếtluậnvềphƣơngphápđiệndi(CE) 125 3.3S o s n h k ế t q u ả p h â n t í c h c ủ a c c p h ƣ n g p h p M E K C , HPLCU V , H P L C - huỳnhquang .126 KẾTLUẬN 128 KIẾN NGHỊ 130 DANHMỤCCƠNG TRÌNHKHOA HỌCCỦATÁCGIẢLIÊNQUANĐẾNLUẬNÁN131 TÀILIỆU THAMKHẢO .132 PHỤLỤC .141 KÝHIỆUCÁCCHỮVIẾTTẮTTRONGLUẬNÁN 6APA 7ACA β-lactam :Axit6-aminopenicillanic :Axit7-aminocephalosporinic :Betalactam ACN :Acetonitril AMO :Amoxicillin AMP :Ampicillin C :Nồngđộ CE :Điệndimaoquản(Capillaryelectrophoresis)CEC :Cefaclor CEF :Cefixim CEP :Cephalexin CLO :Cloxacillin CZE :Điệndimaoquảnvùng(Capillaryzoneelectrophoresis)E FF :LựcđiệntrƣờngEnhấtđịnh(ElectricFieldForce) Em EOF :Bƣớcsóngphátxạhuỳnhquang :Dịngđiệndithẩmthấu Ex :Bƣớcsóngkíchthíchhuỳnhquang Gram(-) :Gramâm(vikhuẩn)Gr a m (+) :Gramdƣơng(vikhuẩn) HLB :Chấthấpphụ(hydrophiliclipophilicbalance)H píc :Chiềucaopícsắckí HPLC :Sắckýlỏnghiệunăngcao (HighperformanceLiquidChromatography)HPLC -MS :SắckýlỏnghiệunăngcaoghépnốikhốiphổMAX :Giátrịcao MEKC :ĐiệndimaoquảnđiệnđộnghọckiểuMixenMEKC(MicellarElectrokineticCapillaryChromatography) MeOH :Metanol MIN :Giátrịthấpnhất MP :Phađộng(mobilephase) MSL OD LOQ NBD-F :Phổkhối(massspectrometry) :Giớihạnpháthiện(limitofdetection) :Giớihạnđịnhlƣợng(limitofquantily) :7 - F l u o r o - - n i t r o b e n z o - - o x a - , - d i a z o l e OXA PENG RP-HPLC :Oxacillin :PenicillinG :Sắckílỏnghiệunăngcaophađảo (Reversedphase-Highperformanceliquidchromatography) rpm :Vòng/phút RSD :Độlệchchuẩntƣơngđối SDS :Natridodecylsunfat SP :Phatĩnh(staticphase) SPE :Chiếtpharắn(solidphaseextraction) Spic :Diệntích pícsắckí TCA :Axittricloaxetic UV :Tiacựctím(ultraviolet) v/v :Thểtích/thểtích KÝHIỆUCÁCĐƠNVỊĐOLƢỜNGĐƢỢCVIẾTTẮT % :Phầntrăm µg :Microgam µm :Micromet Cal :Calo cm :Centimet cm :Centimetvuông h :Giờ kg :Kilogam kV :Kilovôn mAu :Đơnvịhấpthụ mbar :Đơnvịápsuất mg :Miligam ml :Mililit mM :Milimol ng :Nanogam s :Giây