BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIỀU THỊ HOÀI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỀM HIÊN VI VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY SƠN DỊCH PETELOT (Aristolochia petelotii O C Schmidt) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ HÀ NỘI 2022 BỘ[.]
BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIỀU THỊ HOÀI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỀM HIÊN VI VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY SƠN DỊCH PETELOT (Aristolochia petelotii O.C.Schmidt) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ HÀ NỘI - 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIỀU THỊ HOÀI Mã sinh viên: 1701206 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HIÊN VI VÀ THÀNH PHÀN HÓA HỌC CÂY SƠN DỊCH PETELOT (Aristolochia petelotỉi O.C.Schmidt) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ Người hướng dẫn: DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Viện hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam HÃ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực khóa luận tốt nghiệp Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội nhận nhiều hỗ trợ, giúp đỡ, động viên từ thầy cô, bạn bè gia đình Lời tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng, người thầy dìu dắt tơi từ ngày đầu nghiên cứu khoa học đến hoàn thành đề tài Thầy bảo tận tình, giúp đỡ tơi nhiều Thầy khồng truyền cho niềm dam mê nghiên cứu khoa học mà cịn truyền cho tơi động lực co gắng học tập cống hiến chút sức lực nhỏ bé cho khoa học Việt Nam Tôi xin bày tở lời biết ơn tha thiết tới tồn thể thầy Trường Đại học Dược Hà Nội, thầy dìu dắt tơi qua năm với nhiều học ý nghĩa để thực đề tài Tôi xin cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viến Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện tốt cho tơi q trình thực nghiên cứu Xin cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Quốc Bình, TS Nguyễn Phương Hạnh nhóm nghiên cứu tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu thực khóa luận tốt nghiệp thơng qua đề tài mã số: VAST 04.02/20-21 Tôi xin cảm ơn bạn, em, anh chị nghiên cứu sinh nghiên cứu Bộ môn Dược liệu đà giúp đỡ động viên tinh thần cho suốt q trình thực đề tài Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè bên, đồng hành, giúp đờ, ủng hộ chỗ dựa vững cho học tập Cảm ơn bố mẹ anh trai động viên tinh thằn vật chất đế tơi hồn thành chặng đường học tập nghiên cứu trường Đại học Dược Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Kiều Thị Hoài MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐÈ CHƯƠNG TỐNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố khóa phân loại chi Aristolochia L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Aristolochia L 1.1.2 Đặc điếm thực vật phân bố chi Aristolochia L 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Aristolochia L Việt Nam 1.3 Thành phần hóa học chi Aristolochia L 1.3.1 Thành phần hóa học tinh dầu 1.3.2 Thành phần hóa học tinh dầu 1.4 Tác dụng sinh học công dụng lồi thuộc chi Aristolochia L .9 1.4.1 Cơng dụng loài thuộc chi Aristolochia L 1.4.2 Tác dụng sinh học loài thuộc chi Aristolochia L 11 CHƯƠNG 2: ĐỔI TƯỌNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứư 15 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 15 2.1.1 Đổi tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Thiết bị hóa chất 16 2.2 Nội dung nghiên cúu 16 2.2.1 Nghiên cứu đặc điềm hiền vi 16 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 16 2.3 Phuong pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi 17 2.3.2 Định tính phản ứng hóa học 17 2.3.3 Định tính thành phần hóa học sắc ký lớp mong 21 2.3.4 Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu 22 CHƯƠNG 3: KẾT QƯẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 Kết thực nghiệm 26 3.1.1 Đặc điểm hiển vi Sơn dịch 26 3.1.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học Sơn dịch 31 3.2 Bàn luận 41 3.2.1 Đặc điểm hiển vi Sơn dịch 41 3.2.2 Định tính thành phần hóa học ngồi tinh dầu 41 3.2.3 Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu 42 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 Kết luân .44 Kiến nghị .44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỦ VIẾT TẲT A.: Aristolochia DĐVN: Dược điển Việt Nam FID: Flame ionization detector (Detetor ion hóa lửa) GC: Gas Chromatography (Sac ký khí) MS: Mass spectrometry (Khối phổ) NP/PEG: Natural products/Polyethylenglycol NXB: Nhà xuất R/: Chỉ số lưu giữ SKLM: Sắc ký lớp mỏng STT: Số thứ tự TPHH: Thành phần hóa học TT: Thuốc thử UPGMA: Unweighted Pair Group Method using arithmetic Averages (Phương pháp gom cụm khơng có trọng số dùng trung bình số học) UV: Ultra Violet (Tử ngoại) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Thành phần tinh dầu thân A indica 1.2 Thành phần tinh dầu A kwangsiensis c 1.3 Cơng dụng lồi thuộc chi Aristolochia L Việt Nam 3.1 Ket định tính nhóm chất rễ, thân Sơn dịch 31 3.2 Ket thành phần tinh dầu rễ, thân, Sơn dịch 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình STT Trang Cấu trúc hóa học số họp chất thường gặp loài 1.1 thuộc chi Aristolochia L có Việt Nam 2.1 Đặc điểm hình thái Sơn dịch (A petelotỉi) 15 2.2 Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu theo quy định DĐVN V 23 3.1 Đặc điểm vi phẫu rễ Sơn dịch 26 3.2 Đặc điểm vi phẫu thân Sơn dịch 27 3.3 Đặc điếm vi phẫu Sơn dịch 28 3.4 Đặc điểm bột rễ Sơn dịch 29 3.5 Đặc điểm bột thân Sơn dịch 30 3.6 Đặc điểm bột Sơn dịch 30 Sắc ký đồ dịch chiết methanol mẫu rễ, thân, Sơn dịch quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm trước phun 3.7 ánh sáng tử ngoại bước sóng 366 nm trước sau phun thuốc 33 thử Sắc ký đồ dịch chiết methanol mẫu rễ, thân, Sơn dịch quan 3.8 sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm 366 nm 34 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu rễ, thân, Sơn dịch quan sát ánh 3.9 sáng tử ngoại bước sóng 254 nm, 366 nm ánh sáng trắng, ánh 35 sáng tử ngoại bước sóng 366 nm sau phun thuốc thử màu Phân tích cụm UPGMA dựa khoảng cách Pearson hợp 3.10 chất mẫu tinh dầu rễ, thân, Sơn dịch 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Họ Aristolochiaceae Jussieu, có 600 lồi giới Trong chi Aristolochia L có khoảng 550 lồi, phân bố Châu Á, Châu Phi, Bắc Mỹ, Nam Mỹ Châu úc phân bồ rộng rãi vùng nhiệt đới Châu Á [43] Việc sử dụng loài thuộc chi Aristolochia L y học cổ truyền Việt Nam giới đa dạng công dụng phận dùng Các loài thuộc chi Aristolochia L Việt Nam thường dùng để chữa rắn cắn, ăn uống khó tiêu, chừa lỵ, bí tiểu tiện, thấp khớp, đau dày, sốt, thủy thũng, nhọt độc, thấp sang Loài Aristolochia petelotii o.c.Schmidt loài đà ghi nhận Việt Nam Trong y học cổ truyền Trung Quốc, loài người dân Quảng Tây dùng rễ để làm thuốc tiêu viêm, trị viêm dày - ruột, viêm gan, dùng để trị thấp sang [6] Mặc dù sử dụng lâu y học cổ truyền loài Aristolochia petelotii chưa nghiên cứu đặc điểm hiển vi thành phần hóa học cách rõ ràng đầy đủ Việt Nam giới Hiện nay, có nhiều nghiên cứu ghi nhận có mặt acid aristolochic dẫn chất loài thuộc chi Aristolochia L Thành phần biết gây độc thận gây tử vong [25][37][49] Năm 2011, Cục quản lý dược Việt Nam có cơng văn số 3887/QLD-ĐK việc thu hồi dược liệu dương tính với acid aristolochic-I [4] Vì lý loài Aristolochia petelotii cần nghiên cứu cách hệ thống bao gồm đặc điểm hiển vi thành phần hóa học để có sở khai thác, sử dụng họp lý an toàn nguồn dược liệu Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm hiến vi thành phần hóa học Sơn dịch petelot (Aristolochia petelotii O.C.Schmidt)” Đề tài • thực • • với mục • tiêu sau: - Mô tả đặc điếm hiển vi cùa Sơn dịch petelot - Xác định thành phần hóa học Sơn dịch petelot - Phân tích thành phần tinh dầu phận rễ, thân, Sơn dịch petelot Đẻ thực mục tiêu trên, đề tài tiến hành nội dung sau: - Nghiên cứu đặc điếm hiển vi gồm: + Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu phận rễ, thân, + Nghiên cứu đặc điểm bột phận rễ, thân, - Nghiên cứu thành phần hóa học gồm: + Nghiên cứu thành phần hóa học phận phản ứng thường quy sắc ký lóp mỏng + Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu phận rễ, thân, sắc ký lớp mỏng sắc ký khí CHƯƠNG TỐNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố khóa phân loại chi Aristolochia L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Aristolochia L Chi Aristolochia L tên thường gọi Mã đậu linh chi thực vật nằm họ Aristolochiaceae Jussieu Vị trí phân loại chi Aristolochia L theo hệ thong phân loại thực vật Takhtajan (2009) sau: Ngành Ngọc lan Magnoliophyta Lớp Ngọc lan Magnoliopsida Phân lớp Ngọc lan Magnoliidae Liên Hồ tiêu Piperanae Bộ Hồ tiêu Piperales Họ Nam mộc hương Aristolochiaceae Chi Aristolochia L [19] 1.1.2 Đặc điếm thực vật phân bố chi Aristolochia L Đặc • điếm thực • vật: • Cây bụi, thảo dây leo Thường mọc xoắn leo Rễ thường dạng củ Thân gỗ hay thân thảo Lá mọc so le, gân hình lơng chim chân vịt, mép ngun khía tai bèo Hoa mọc đơn độc thành chùm nách lá, đơi từ thân gỗ Hoa đơn tính lường tính Đài hoa tràng hoa họp nhất, hình ống thường mở rộng tạo thành hình trụ hình phễu, thẳng cong Bộ nhị bó gồm nhị, đính vào nhụy tạo thành trụ nhị Bao phấn hướng Bầu nhụy thấp hơn, ơ, góc, đính nỗn trung trụ Quả nang, có cạnh Hạt phẳng hình cầu lồi, có khơng có cánh [41], Phân bố: Chi Aristolochia L có khoảng 550 lồi, phân bố Châu Á, Châu Phi, Bắc Mỹ, Nam Mỹ Châu úc phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới Châu Á [43] 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Aristolochia L ỏ’ Việt Nam 1.2.1 Loài Aristolochia indica L Tên tiếng Việt: Khoai ca, Sơn dịch [8] Apophin Tên hợp chất Công thức Nhóm H3CO Magloflorin * N-CH3 HO H CH3 HO H3CO o Cepharadion A o ọ N ch3 o Tuberosinon o ọ NH o HO H3CO (-)-Isocyridin ch3 H3CO HO h3co Salsolinol HO % HO CH3 HO 6,7-Dihydroxy-l,l- HO dimethyl-1,2,3,4tetrahydroisoquinolin H H3C ch3 HO Pericampylinon-B N H HO o H3CO H3CO n-Methyl-6,7CH3 dimethoxyisoquinolon 3,4-Dimethoxy-N,N- Amid dimethylbenzamid Aurantiamid acetat Cinnamamid N-p-trans- Coumaroyltyramin Pyridine-3,5-dicarbozamid Phenanthren o o Aristolophenanlactone I Aristolamide Aristololid Lignan (-)-Cubebin Phụ lục 2.1 Phiếu giám định tên khoa học VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN BẢO TÀNG THIÊN NHIÊN VIỆT NAM 18 Hoàng Quốc Việt, cầu Giấy, Hà Nội Telỉ 024.37568328 BÁO CÁO KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH I Thông tin chung: - Tên cá nhân/tổ chức yêu cầu giám định: Kiều Thị Hoài, lớp M1K72 - Địa chỉ: Trường Đại học Dược Hà Nội - Điện thoại/email: - Ngày nhận mẫu: 03./C&/202Í - Ngày trả kết quả:J2A-/-C’Ẩ/2O2ít O 5/BẠP II Yêu cầu giám định ' S' ■■ , S' „ S' llTHIEN N - Mâu giám định : (thông tin liên quan ký hiệu mâu/ảnh chụp mâu/loại máu/tv^ ự|£-jtrạng mẫu ) Mầu có ký hiệu SH 1191 Mầu tươi, bao gồm thân cây, cụm hoa mọc thân Xuất xứ mẫu: thu xã Tả Lèng, huyện Tam Đường, Lai Châu, ngày 16/05/2021; tọa độ; 22°26 58,3"N; 103°33T7,l" E, đọ cao: 1941 m -Yêu cầu giám định: Giám định tên khoa học thực vật -Họp đồng (nếu có): -Nhận kết bàng : □ Email □ Thư SMS □ Nhận văn thư - Bên yêu cầu giám định cam kết mẫu gửi giám định an toàn sinh học, có nguồn gốc rõ ràng, khơng có tranh chấp pháp lý III Kết giám định : III.1 Phương pháp giám định: Giám định mẫu vật phương pháp hình thái so sánh Sau phân tích đặc điểm hình thái ngồi, đặc biệt đặc điểm cùa quan sinh sản (cụm hoa, bao hoa, hoa, quả) hình dạng, kích thước, màu sắc, so sánh với tài liệu gốc, tài liệu chuyên khảo so sánh với mẫu họ, chi lưu giữ phòng tiêu để xác định tên khoa học mẫu % 111.2 Kết phân tích : , Cây bụi leo, thân có cạnh, nhành non nhiêu lôngnhungvang ’ c h V trứng cm' nhiều lơng nhung vàng nâu; ph ên hình b u hto1 trito toon, kích tốc 12-20 X 5-8 cm, nhăn dọc các1 gân co lộng nh ng, gân * g°c gân bên hình lơng chim, 4-6 đơi, gân cấp tạo ‘hành dạng lưới rõ mặt dưới; gôc phiến htah tim nông, đầu phiến nhọn Cụm hoa xim mọc thânI gô1 già, 2- hoa, hoa dài 4-6 cm; cuông hoa dài 3-4 cm, hoa thường rù xuống; hăc “nh trimg dạng mác, kích thước khoảng 10 X mm Đài hoa vàng nhạt, có nhiều đốm mau nâu tim gân dạng lưới; ống tràng cong, mặt ngồi nhiều lơng nhung;^phân cua ơng có kích thước 5-6;5 X 1-2 cm; mơĩ thn dài k‘ch thước 5-8 X 4-7 cm, cHa toy; toy khơng Bao phấn hình thn, dài 3-4 mm Bâu ơ, nang hình thn hẹp, nhọn đầu 111.3 Kết luận: So sánh với tài liệu chuyên khảo so với mẫu loài ^luru giữ Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam, phòng tiêu Viện Sinh thái Tài nguyên SinỊ1 vạt (Viện Han lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam), Bảo tàng thực vật trường Đại học Khoa học tự nhiên (Trường Đại học Quốc gia Hà Nội), xác định Sơn dịc petelot, tên khác: Mã đậu linh petelot, Phòng kỷ petelot Tên khoa học Aristolochia petelotii o.c Schmidt (tên đồng nghĩa: Aristolochia austroyunnanensis s M Hwang), thuộc họ Mộc hương, Phòng kỷ (Aristolochiaceae) Ghi chú- Mau vật sau định tên khoa học, lưu giữ Bảo tàng Thiên nhiêik Việt Nam G 304 NXBTre Efloras.org, http://www.efloras.org/florataxon.aspx? flora_id=2&taxon_id=242414709 Figure 223 (5-8) Xác nhận đơn vị A KT TONG GỈÁM BOC PHĨ TốNG GIAM Đốc Người phân tích < THIÊN NHIÊN Nguyễn Quốc Bình Phan Kê Long NGHẹ Tài liệu tham khảo: J Phạm Hoàng Hộ, 1999 Cây cỏ Việt Nam: Aristolochiaceae - họ Phòng kỷ, tập/|k/ Phụ lục 2.2 Mâu tiêu SH 1191 Bao tàng TN VN Sỏ hiệu: Sỉ ỉ ỉ 191 Ngày thu: 16/5/2021 Người thu: Nguyền Quốc Binh Địa điểm: l am Đường I Châu Tên Việt Nam: Phòng k< rên khoa học: Aristolochia peteỉotìiO.C Schmidt Họ: Aristolochiaceae Phụ lục 3.1 Kêt phân tích săc ký băng phân mêm VisionCATs dịch chiêt mẫu rễ, thân, hệ dung môi I: Toluen - Ethylacetat - Acid formic (5:4:1) Track - Mầu rễ: 0.08 0.06 2) 0.04 < 0.02 0.00 Peak # start Rf H 0.001 0.0000 0.024 0.0000 0.045 0.0015 0.093 0.0034 0.595 0.0093 0.665 0.0041 Rf 0.005 0.035 0.061 0.120 0.626 0.756 Max End H Rf H % 0.0357 16.09 0.012 0.0000 0.0123 5.54 0.045 0.0015 0.0310 13.96 0.093 0.0034 0.0694 31.25 0.152 0.0000 0.0204 9.17 0.657 0.0047 0.0533 23.99 0.795 0.0199 Area A % 0.00019 2.89 0.00012 1.79 0.00075 11.15 0.00188 27.95 0.00080 11.93 0.00299 44.30 Manual peak No No No No No No Substance Name Track - Mầu thân: Rf Peak # Start Rf 0.015 0.043 0.330 0.444 0.536 0.589 0.703 0.778 H 0.0126 0.0000 0.0046 0.0307 0.0710 0.1355 0.0186 0.0286 Rf 0.027 0.061 0.421 0.508 0.568 0.613 0.744 0.818 Max H 0.0263 0.0182 0.0544 0.1652 0.3103 0.4336 0.0408 0.0493 End % 2.39 1.66 4.96 15.05 28.26 39.48 3.71 4.49 Rf 0.042 0.104 0.444 0.535 0.587 0.663 0.773 0.933 H 0.0001 0.0001 0.0307 0.0711 0.1373 0.0163 0.0291 0.0037 Area A 0.00042 0.00057 0.00246 0.00848 0.00995 0.01522 0.00218 0.00381 % 0.98 1.33 5.72 19.67 23.09 35.32 5.06 8.84 Manual peak No No No No No No No No Substance Name Track - Mầu lá: 0.35 0.30 0.25 0.20