Nghiên cứu quy trình ổn định gel và chiết tách aloin từ lá lô hội (aloa vera l )

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KH & CN VIỆT NAM VIỆN CÔNG NGHỆ HÓA HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU (ðã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu ngày 13 tháng năm 2011) ðề tài: NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH ỔN ðỊNH GEL VÀ CHIẾT TÁCH ALOIN TỪ LÁ LÔ HỘI (ALOE VERA L.) Chủ nhiệm ñề tài: PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh ThS Phan Nhật Minh THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 7/2011 PHẦN MỞ ðẦU 1 Tên ñề tài: Nghiên cứu quy trình ổn định gel chiết tách aloin từ Lơ Hội (Aloe vera L.) Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh ThS Phan Nhật Minh Cơ quan chủ trì: VIỆN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC Thời gian thực ñề tài: 24 tháng tháng 5/2008 ñến tháng 11/2010 Kinh phí duyệt: 235.000.000 đồng Kinh phí ñã cấp: 150.000.000 ñồng theo thông báo số: 65/TB-SKHCN ngày 6/5/2008 62.000.000 đồng theo thơng báo số: 236/TB-SKHCN ngày 4/12/2009 Mục tiêu: Ổn ñịnh gel chiết tách aloin từ Lô Hội (Aloe vera L.) làm nguyên liệu cung cấp cho công ty dược phẩm mỹ phẩm Nội dung: - Xây dựng quy trình loại Aloin gel tươi - Xây dựng quy trình ổn định gel quy mơ phịng thí nghiệm pilot (10-20 kg/mẻ) - Khảo sát thành phần polysaccharide gel trước sau ổn định - Xây dựng quy trình chiết xuất Aloin từ nhựa Lô Hội quy mơ phịng thí nghiệm quy mơ pilot (5 kg nhựa/mẻ) - Xây dựng tiêu chuẩn sở Aloe vera gel Aloin Sản phẩm ñề tài TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học Báo cáo tổng kết tài liệu Quy trình chiết xuất aloin quy trình Quy trình tinh chế ổn định gel Aloe vera quy trình Aloin tinh khiết 10g Gel Aloe vera 200 lít Bài báo khoa học CHƯƠNG I TỔNG QUAN I.1 ðặc ñiểm thực vật [2, 3, 4, 6, 12] Tên khoa học: Aloe vera L Tên ñồng nghĩa: Aloe barbadensis Miller [3], Aloe perfoliata Lour [2] Họ: Lơ hội (Asphodelaceae) Tên nước ngồi: Curacao Aloes (Mỹ); Aloe de Curacao, Aloès vrai, laloi (Pháp); Echte Aloe, Aloe vera (ðức); Aloe vera (Ý); Sábila, Zábila (Tây Ban Nha) Tên Việt Nam: Lơ hội, Nha đam, Lư hội, Lưỡi hổ, Long tu (Bình ðịnh), Tượng đảm, Du thơng, Nơ hội, Hổ thiệt Theo nghĩa Hán, lơ có nghĩa đen, hội tụ lại, tụ ñọng lại, ý nhựa lại có sắc đen, đóng thành bánh, có tên Lơ hội Lơ hội loại thảo nhỏ, sống lâu năm Thân ngắn hóa gỗ, to thơ, mang nhiều vết sẹo rụng Hình 1: Cây Lơ hội Lá khơng cuống, gốc tầy rộng, mọc áp sát vào thành hình hoa thị, đầu thn dài thành mũi nhọn Phiến dày, mọng nước, dài 30 - 50 cm, rộng - 10 cm, dày - cm phía cuống lá, mặt phẳng lồi, có đốm trắng, mặt khum, mặt cắt tam giác, mép có gai thưa thơ cứng Cắt thấy có nhựa vàng chảy Cụm hoa dài chừng m, mọc kẽ thành chùm cán dài, mang nhiều hoa màu vàng xanh lục nhạt lúc ñầu mọc ñứng, sau rủ xuống, dài - cm Quả nang: hình trứng thn, lúc đầu xanh chín màu nâu, chứa nhiều hạt Tại Miền Bắc có trồng lồi Lơ hội chủ yếu để làm cảnh, có ngắn đo ñược chừng 15 - 20 cm; chưa thấy hoa kết
Bộ phận dùng: Lá Lô hội gồm phần chính: phần gel bên phần nhựa vàng Lá Lô hội thu hái quanh năm, dùng tươi điều chế thành nhựa Lơ hội cách cắt lá, loại bỏ lớp biểu bì, lấy hết khối nhựa suốt, sấy nhiệt ñộ khoảng 50 °C Cũng ép lấy dịch, đem cách thủy đến khơ Hoa rễ thường dùng làm thuốc Hình 3: Hoa Lơ hội Hình 2: Nhựa vàng Lô hội I.2 Phân bố, sinh thái [2, 3, 4, 5] Chi Aloe L có khoảng 330 lồi giới, phân bố vùng nhiệt ñới Châu Phi, Madagasca Ả Rập,… Trong đó, Nam Phi, Ethiopia Bắc Somali trung tâm có đa dạng cao loài chi Trong số 330 lồi, có 100 lồi dạng lai trồng phổ biến khắp vùng nhiệt ñới thuộc Bắc Mỹ, vùng Caribê, Châu Phi, Nam Á, ðông Nam Á Australia Cây Lơ hội trồng nhiều nước Thái Lan, Campuchia, Malaysia, Ấn ðộ, Indonesia, Philippin Việt Nam Vào cuối kỉ XIII, du khách người Ý tên Macro Polo ñã thực chuyến thám hiểm tồn Châu Á Khi đến Trung Quốc, Polo ñã giới thiệu cho người xứ dược thảo mà sau gọi Lô hội Từ Trung Quốc, Lơ hội di thực sang Việt Nam Ở nước ta, Lơ hội trồng rải rác khắp nơi, nhiều tỉnh phía nam ven biển miền trung Cây ñược trồng chậu hay ñồng ruộng ñể làm cảnh làm thuốc Hình 4: Nơng trại trồng Lơ hội Bình Chánh Lơ hội có biên độ sinh thái rộng, thích nghi với nhiều loại đất, kể đất pha cát có cát Cây có khả chịu hạn tốt khả giữ nước (lá mọng nước), sinh trưởng phát triển mạnh ñiều kiện chiếu sáng ñầy ñủ hoa nhiều
Cách trồng: Lơ hội nhân giống phương pháp vơ tính, sử dụng ñể tiến hành nhân giống Ðể tăng hệ số nhân giống, ta cắt bỏ đọt mẹ, năm sau xung quanh mẹ xuất chục Khi lớn chừng 10 cm, tách đem vào vườn ươm, chăm sóc lớn chừng 15 - 20 cm lấy ñem trồng Cây Lơ hội trồng quanh năm, tốt trồng vào mùa xuân mùa thu, ñây thời gian phục hồi phát triển nhanh Cây Lô hội dễ trồng nhà, cần nước cần chăm sóc Cây thích ánh sáng mặt trời chịu bóng mát đất cằn cỗi Ở quy mơ lớn hơn, cần làm đất, lên luống trồng với khoảng cách 30 x 30 cm hay 30 x 40 cm Muốn cho mọc khỏe, to, cần bón lót phân chuồng Sau trồng sau lần thu hoạch lá, bón thúc thêm nước phân chuồng, nước giải đạm pha lỗng Chú ý khơng tưới phân lên cây, dễ làm thối nõn non Cây có sâu bệnh, cần giữ cho không bị ngập úng I.3 Ứng dụng Lô hội sống [3, 6, 23] Từ lâu, người biết dùng Lơ hội để chế biến ăn Lá Lơ hội thường dùng để ăn tươi với đường nấu chè, có nơi cịn dùng để nấu canh, muối chua Ngồi ra, gel Lơ hội cịn làm chất đơng kết cho nhiều ăn Năm 1996, Tổ chức Lương thực Liên hiệp quốc (FAO) ñã so sánh hàm lượng giá trị dinh dưỡng thành phần có ích loại hoa thực vật toàn cầu Kết cho thấy Lơ hội thuộc sản phẩm đứng ñầu, trở thành sản phẩm thực phẩm bảo vệ thể tốt kỉ XXI Chính sản phẩm như: trà túi lọc, rau câu, nước uống dinh dưỡng, thạch Lô hội, sinh tố Lô hội, sữa chua Lơ hội … đời ngày đuợc ưa chuộng Lơ hội, ngồi việc sử dụng làm thực phẩm, cịn sử dụng rộng rãi mỹ phẩm Gần ñây, với xu hướng “quay với thiên nhiên”, người ta cho việc sử dụng hợp chất thiên nhiên có nguồn gốc từ thảo dược ưu việt Lô hội cách để sống khỏe Do đó, nhà sản xuất mỹ phẩm dùng Lơ hội, đặc biệt phần gel lá, thành phần sản phẩm Trên thị trường có nhiều mỹ phẩm chiết xuất từ Lô hội như: sữa tắm, son dưỡng mơi, kem đánh răng, xà phịng nước, nước tẩy rửa, dầu gội đầu, dầu xả, keo xịt tóc, chất khử mùi, kem dưỡng da sau cạo râu, gel tạo kiểu tóc, kem dưỡng da, kem chống nắng… I.4 Tác dụng dược lý Lô hội thuốc vượt khỏi phân cách ðông Tây Y Ngay Mỹ, vốn ñược xem nước chậm tiến việc dùng thảo mộc ñể chữa bệnh, dùng Lơ hội nhiều dược phẩm mỹ phẩm Hơn nữa, nhiều nhà nghiên cứu Mỹ ñã phải khuyên người dân Mỹ nhà nên trồng Lơ hội để vừa làm cảnh, vừa làm thuốc dùng cần cấp cứu I.4.1 Y học dân gian Việt Nam [2, 3] Lơ hội có vị đắng, tính mát, có tác dụng nhiệt, giải ñộc, mát huyết, cầm máu, nhuận tràng; thường dùng chữa số bệnh đau đầu, chóng mặt, đại tiện bí, viêm dày, tiêu hóa kém, viêm mũi, kinh bế, cam tích, co giật trẻ em, đái tháo ñường
Một số thuốc dân gian dùng Lơ hội: − Tiểu đường: Lá Lơ hội 20 g Sắc uống ngày thang (có thể uống tươi) − Tiểu đục: Lơ hội tươi 20 g giã nát, thêm ñạm qua tử nhân 30 hạt, uống trước bữa ăn, ngày lần Có thể dùng hoa 20 g nấu với thịt lợn để ăn − Nơn máu: Hoa Lơ hội 20 g, sắc với rượu − Ho đờm: Lơ hội 20 g bỏ vỏ ngồi, lấy nước rửa chất dính Sắc uống ngày thang − Ho khạc máu: Hoa lô hội 12 - 20 g khơ, sắc uống ngày thang − ðau đầu, chóng mặt: Lơ hội 20 g, hoa đại 12 g, dâu 20 g Sắc uống ngày thang, chia - lần − Tiêu hóa kém: Lơ hội 20 g, bạch truật 12 g, cam thảo g Sắc uống ngày thang, chia 2-3 lần − Viêm loét tá tràng: Lô hội 20 g, cẩm 20 g, nghệ vàng 12 g (tán bột mịn), cam thảo g Sắc uống ngày thang, chia - lần Nếu ợ chua nhiều, thêm mai mực tán bột 10 g, chiêu với nước thuốc trên, 15 - 20 ngày liệu trình − Bế kinh, đau bụng kinh: Lơ hội 20 g, nghệ đen 12 g, rễ củ gai 20 g, tô mộc 12 g, cam thảo g Sắc uống ngày thang, chia - lần − Eczema: Lá Lô hội xẻ mỏng, bôi nhựa vào chữa bỏng Hằng ngày bôi phủ lên khơng kỳ rửa, nhựa khơ đóng vảy bong lên da non Nếu chàm chảy nước nhiều, nhựa Lơ hội thành cao đặc sệt mà phết vào, phủ dày cho ñến da non − Viêm da: Dùng nước sơi thấm ướt khăn dấp vào, nguội vắt kiệt lại thấm nước sôi dấp, làm - lần cho đỡ ngứa, sau lau khơ, lấy Lơ hội xẻ mỏng đắp tổn thương, ngày ñắp - lần, làm liên tục nhiều ngày − Quai bị: Lá Lô hội giã nát, ñắp lên chỗ sưng ñau ðồng thời dùng Lô hội 20g sắc uống ngày thang, chia - lần − Viêm đại tràng mãn: Lơ hội tươi bóc bỏ vỏ ngồi, đem xay nhỏ với 500 mL mật ong Ngày uống - lần, lần chén (30 ml) − ðau nhức chấn thương, tụ máu: Lá Lô hội tươi giã nát, ñắp vào chỗ sưng ñau; kèm theo Lô hội 20 g xay nhỏ giã nát, chia - lần uống ngày − Táo bón: Lá Lô hội tươi ngày ăn lá, Lơ hội 20 g xay nhỏ với 0,5 lít nước; chia uống - lần ngày − Mụn nhọt: Lá Lơ hội tươi giã nát, đắp lên mụn nhọt − Trứng cá: Lá Lơ hội tươi bóc vỏ, lấy phần gel tươi, xoa lên vùng bị trứng cá, ngày làm lần Làm liên tục nhiều ngày I.4.2 Y học ñại [2, 3] a Tác dụng gel Lô hội − Tác dụng trị bỏng chữa lành vết thương Khả gel Lô hội việc giúp trị lành vết thương ñã ñược ghi nhận lần vào năm 1935 Tạp chí Y khoa Mỹ công bố trường hợp phụ nữ bị tia X trị lành cách ñắp chất nhầy lấy trực tiếp từ Lô hội Sau tác dụng gel Lơ hội vết thương vết bỏng ñã ñược nghiên cứu kỹ khắp nơi giới, riêng cơng trình nghiên cứu ðại học Texas (Galverton) ñã ghi nhận gel Lơ hội có thể: • ði sâu vào mơ tế bào • Có tác dụng làm tê tế bào • Diệt vi khuẩn, siêu vi khuẩn ngăn phát triển nấm gây bệnh • Chống sưng • Làm giãn nở vi mạch máu, giúp ñưa máu nuôi dưỡng tế bào bị hư hại − Tác dụng chống sưng Tác dụng kháng viêm gel Lơ hội giải thích chế sinh học: • Phân hóa tố Bradykinase (loại Carboxypeptidase) gel ức chế tác dụng gây đau nhức Bradykinin • Magnesium lactate có khả ngăn cản tiến trình tạo Histamin • Khi có diện gel, chất thromboxane B2 prostaglandin F2 (các chất gây sưng ñau nhức) ñều giảm bớt Hợp chất sterol (lupeol) gel có tác dụng kháng viêm mạnh − Tác dụng kháng khuẩn kháng nấm Gel Lơ hội chứng minh có tác dụng ngăn chặn phát triển vi trùng Mycobacterium tuberculosis (bệnh lao), Staphyloccoccus aureus, Streptococcus pyogenes (gây mụn nhọt), Salmonella paratyphi, Seudomonas, Escherichia coli loại nấm gây bệnh Candida albicans, Trichophyton (nấm tóc), siêu vi Herpes − Tác dụng hạ đường huyết Một thí nghiệm Âu châu cho thấy gel Lơ hội có khả làm hạ đường máu thú vật Thí nghiệm Thái Lan (1996) 72 người tiểu ñường, tuổi từ 35 ñến 60, uống dung dịch gel, sau tuần lễ, lượng ñường máu giảm rõ rệt, tiếp tục giảm 35 ngày sau đó; nồng ñộ triglyceride giảm theo với nồng ñộ ñường − Ngồi ra, Lơ hội cịn có tác dụng việc kháng virus, chống lão hóa tế bào, giải độc cho thể, sinh lượng dinh dưỡng… b Tác dụng nhựa Lô hội Tác dụng trị liệu thức nhựa Lơ hội y học phương Tây chấp nhận gây xổ, trị táo bón Tác dụng làm xổ nhựa hợp chất 1,8dihydroanthracene glycoside, Aloin A B Sau uống Aloin A B, không bị hấp thu nơi phần ruột, bị thủy phân nơi ruột vi khuẩn để trở thành chất biến dưỡng có hoạt tính (chất aloe-emodin-9-anthrone) Phụ lục 3n: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 93 Phụ lục 3o: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 94 Phụ lục 3p: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 95 Phụ lục 3q: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 96 Phụ lục 3r: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 97 Phụ lục 3s: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 98 Phụ lục 3t: Khối lượng phân tử polysaccharide gel ñun ñược 80 oC 99 Phụ lục 3u: Khối lượng phân tử polysaccharide gel đun 80 oC 100 TĨM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Lô hội (Aloe vera L.), dược thảo ñã ñược biết ñến từ lâu, có giá trị đặc biệt ðơng y Tây y Trong trình khảo sát thành phần hóa học nhựa Lơ hội, chúng tơi ñã cô lập ñược chất Aloin A hỗn hợp Aloin A+B, đồng thời khảo sát khơng bền aloin dung môi MeOH, aloin bị phân hủy thành aloe emodin hợp chất khác theo nhiệt ñộ thời gian Trong phần gel Lô hội, phần aloin antraquinon loại khỏi gel, cịn 2,97 mg/L, dịch gel sau ly tâm ñược ổn ñịnh với nhiệt ñộ 70 oC – 80 oC với lượng polysaccaride giảm khơng đáng kể (3,07 mg/L → 2,97 mg/L), sau giờ, cấu trúc polysaccaride bị ổn định Xây dựng quy mơ pylot dựa quy trình chiết Aloin từ nhựa Lơ Hội quy trình ổn định gel quy mơ phịng thí nghiệm Xây dựng tiêu chuẩn sở cho gel Lô hội, hỗn hợp Aloin A Aloin B, chất Aloin A SUMMARY OF RESEARCH CONTENT Aloe (Aloe vera L.), one of the herbs have been known for a long time, has special value in both modern medicine and traditional medicine In the process of surveying the chemical composition of the resin of aloe vera, we have isolated the substance mixture Aloin and Aloin A, and decomposition of Aloin in MeOH, Aloin broken Aloe emodin and other compounds with temperature and time In the aloe vera gel, the aloin and antraquinon be excluded from the gel, only 2,97 mg/L, this gel after centrifugation is stable with temperature 80 oC and 70 oC for hours with not significant reduction of polysaccaride (3,07 mg/L → 2,97 mg/L), after hours, polysaccaride structural is unstable Process-scale laboratory of the extract aloin and Aloe gel stability from the leaves Aloe vera are based pylot scale construction process Construction of basic standards for aloe vera gel, mixed Aloin A and Aloin B, and Aloin A I MỤC LỤC Tóm tắt đề tài/dự án (gồm tiếng Việt tiếng Anh) Mục lục Danh sách chữ viết tắt Danh sách hình Danh sách bảng Danh sách sơ ñồ PHẦN MỞ ðẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN I.1 ðặc ñiểm thực vật I.2 Phân bố, sinh thái I.3 Ứng dụng Lô hội sống I.4 Tác dụng dược lý I.4.1 Y học dân gian Việt Nam I.4.2 Y học đại I.4.3 Hố sinh học đại I.5 Thành phần hóa học Lơ hội I.5.1 Các cơng trình nghiên cứu Việt Nam I.5.2 Các cơng trình nghiên cứu giới I.5.3 Các hợp chất tiêu biểu lập từ Lơ hội I.6 MỘT SỐ SẢN PHẨM CĨ CHỨA LÔ HỘI CHƯƠNG II NGHIÊN CỨU & KẾT QUẢ II.1 NGUYÊN LIỆU II.2 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT Thiết bị Hóa chất II.3 NỘI DUNG 1: QUY TRÌNH LOẠI ALOIN TRONG GEL TƯƠI Mục đích Quy trình loại aloin gel tươi Phương pháp định tính nhóm ANTHRAQUINON Phương pháp định lượng aloin HPLC Nhận xét II.4 NỘI DUNG 2: XÂY DỰNG QUY TRÌNH ỔN ðỊNH GEL QUY MƠ PHỊNG THÍ NGHIỆM VÀ QUY MƠ PILOT (10-20 LÍT/MẺ) Khảo sát quy trình ổn định gel theo nhiệt độ thời gian 1.1 Mục đích 1.2 Phương pháp khảo sát II TRANG I II IV V VI VII 7 10 11 11 11 12 17 20 21 22 22 23 24 24 24 25 25 25 26 26 26 26 1.3 Phân tích hàm lượng polysaccaride mẫu phương pháp Phenol-Sulfuric acid 1.3.1 Phương pháp Phenol-Sulfuric acid 1.3.2 Hàm lượng polysaccaride 1.4 Khảo sát khối lượng phân tử polysaccharide mẫu o 70 C 80oC 1.5 Nhận xét Quy trình ổn định gel quy mơ phịng thí nghiệm Quy trình ổn định gel quy mơ pilot (10-20 lít/mẻ) II.5 NỘI DUNG 3: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN POLYSACCHARIDE TRONG GEL TRƯỚC VÀ SAU KHI ỔN ðỊNH Khảo sát polysaccaride gel phương pháp Phenol-Sulfuric acid Khảo sát khối lượng phân tử polysaccaride gel gel trước sau ổn ñịnh phương pháp sắc ký gel II.6 NỘI DUNG 4: XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT ALOIN TỪ NHỰA LÁ CÂY LƠ HỘI QUY MƠ PHỊNG THÍ NGHIỆM VÀ QUY MƠ PILOT (5KG NHỰA/MẺ) TÁCH CHIẾT CAO VÀ HỢP CHẤT THÔ TỪ LÁ LƠ HỘI 1.1 Thuyết minh quy trình 1.2 Phân lập ALOIN A+ B từ Aloin thô 1.3 ðịnh lượng chất ATL phương pháp HPLC 1.4 ðịnh lượng Aloin Aloin thô HPLC 1.5 Phân lập Aloin A từ Aloin thô 1.6 Nhận danh chất AT3 1.7 Khảo sát phân hủy aloin methanol QUY TRÌNH CHIẾT ALOIN TỪ NHỰA LÁ LƠ HỘI QUY TRÌNH CHIẾT ALOIN TỪ NHỰA LÁ LƠ HỘI QUY MÔ PILOT II.7 NỘI DUNG : XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ ALOE VERA GEL VÀ ALOIN TIÊU CHUẨN CƠ SỞ ALOIN VÀ ALOIN A TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CHO GEL LÔ HỘI 2.1 ðỘ ẨM 2.2 ðỘ TRO 2.3 CẢM QUAN 2.4 pH 2.5 KIM LOẠI NẶNG 2.6 ALOIN CHƯƠNG III KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC III 26 26 27 28 29 29 31 32 32 32 32 32 32 33 34 36 37 39 41 43 44 45 45 46 46 47 47 47 48 48 51 53 56 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT CHCl3 Chloroform 13 Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance C–NMR d Doublet (NMR) dd Doublet of doublets (NMR) DðVN Dược ðiển Việt Nam DEPT Detortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO Dimethyl Sulfoxide EP Ether petroleum EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol GPC Gel permeation chromatography Proton Nuclear Magnetic Resonance H–NMR HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence HPLC High Performance Liquid Chromatography H2O Nước H2SO4 sulfuric acid HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation Iso-BuOH Iso Butanol J Coupling constant (NMR) kDa kiloDalton KOH Potassium hydroxide m Multiplet (NMR) MeOH Methanol mp Melting point NaHCO3 Sodium bicarbonate ppm Parts per million Rf Retention factor s Singlet (NMR) TLC Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) δ Chemical shift (NMR) IV DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Cây Lơ hội Hình 2: Nhựa vàng Lơ hội Hình 3: Hoa Lơ hội Hình 4: Nơng trại trồng Lơ hội Bình Chánh Hình 5: Các sản phẩm thạch miếng Hình 6: Nước uống dinh dưỡng Hình 7: Sinh tố hương vải Hình 8: Dược phẩm từ Lơ hội Hình 9: Một số mỹ phẩm có thành phần Lơ hội Hình 10: Lơ hội - năm tuổi Hình 11: Lá Lơ hội Hình 12: Nhựa vàng Lơ hội Hình 13: Nhựa vàng Lơ hội để qua đêm Hình 14: Thu gel từ Lơ hội Hình 15: Máy HPLC - SHIMADZU Hình 16: Máy GPC 1100 Agilent Hình 17: Máy ly tâm 4500 vịng/phút HETTICH Hình 18 : ðồ thị biểu diễn ñộ hấp thu theo nồng ñộ glucose Hình 19: ðồ thị biểu diễn hàm lượng polysaccaride mẫu theo nhiệt ñộ thời gian TRANG 5 17 18 18 18 19 21 21 21 22 22 23 23 23 27 28 Hình 20: Máy khuấy dung tích 30 Lít Hình 21: Aloin thơ Hình 22: Chất ATL Hình 23: Sắc ký đồ ATL HPLC Hình 24: Sắc ký đồ Aloin thơ Hình 25: Tinh thể AT3 Hình 26: Aloin A Hình 27: Aloin EtOAc MeOH sau 12 Hình 28: ðồ thị biểu diễn nồng độ aloin cịn lại aloe-emodin sinh MeOH theo thời gian Hình 29: ðồ thị biểu diễn ảnh hưởng nhiệt ñộ ñối với nồng ñộ aloin theo thời gian 42 Hình 30: Aloin 45 V 30 33 33 35 37 39 41 42 42 DANH SÁCH BẢNG TRANG Bảng 1: Các monosaccharide Lô Hội 15 Bảng 2: Các amino acid Lô Hội 15 Bảng 3: Các sterol triterpenoid Lô Hội 17 Bảng : Kết ño ñộ hấp thu dãy chuẩn 27 Bảng 5: Hàm lượng polysaccaride mẫu theo nhiệt ñộ thời gian 28 Bảng 6: Khối lượng phân tử polysaccharide theo thời gian ñun 29 Bảng 7: Các phân đoạn phân lập aloin A+ B từ aloin thô 34 Bảng : Các peak sắc ký chất ATL 35 Bảng 9: Các peak sắc ký chất ATL 36 Bảng 10: Các Peak Aloin thơ 36 Bảng 11: Kết q trình sắc ký cột thường aloin thô 38 Bảng 12: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, NOESY HMBC AT3 40 Bảng 13: Tiêu chuẩn sở chất tinh khiết 45 Bảng 14: ðộ ẩm Gel trước ổn ñịnh 46 Bảng 15: ðộ ẩm Gel sau ổn ñịnh 46 Bảng 16: ðộ tro Gel trước ổn ñịnh 47 Bảng 17: ðộ pH Gel trước ổn ñịnh 47 Bảng 18: ðộ pH Gel sau ổn ñịnh 48 Bảng 19: Kim loại nặng Gel trước ổn ñịnh 48 Bảng 20: Kết phân tích dịch gel trước ổn định 48 Bảng 21: Kết phân tích dịch gel sau ổn ñịnh 49 Bảng 22: Tiêu chuẩn sở cho gel Lô hội 50 VI DANH SÁCH SƠ ðỒ TRANG Sơ đồ 1: Quy trình loại aloin gel tươi 24 Sơ đồ : Quy trình ổn định gel quy mơ phịng thí nghiệm 30 Sơ đồ : Quy trình ổn định gel quy mơ pylot 31 Sơ ñồ 4: Quy trình tách chiết cao hợp chất thơ từ nhựa Lơ hội 33 Sơ đồ 5: Quy trình chiết aloin 43 Sơ đồ 6: Quy trình chiết aloin từ nhựa Lô Hội quy mô pilot 5-10 kg 44 VII