Hân lập một số saponin từ loài bảy lá một hoa ( paris yunnanensis franch )

Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG PHÂN LẬP MỘT SỚ SAPONIN TỪ LỒI BẢY LÁ MỢT HOA (PARIS YUNNANENSIS FRANCH) Mã số:………………… Chủ nhiệm đề tài: ThS Châu Thị Nhã Trúc Tp Hồ Chí Minh, 05/2018 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG PHÂN LẬP MỢT SỚ SAPONIN TỪ LỒI BẢY LÁ MỢT HOA (PARIS YUNNANENSIS FRANCH) Mã số: ……………… Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) ThS Châu Thị Nhã Trúc Tp Hồ Chí Minh, 05/2018 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI Châu Thị Nhã Trúc Nguyễn Thị Tuyết Trinh Nguyễn Thành Trung Ca Thị Thúy Nguyễn Lê Vũ Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM MỤC LỤC DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật học loài Paris yunnanensis[1, 2, 3] 1.2 Thành phần hóa học[27] 1.3 Tác dụng dược lý 10 THỰC NGHIỆM 15 2.1 Thiết bị 15 2.2 Nguyên liệu 16 2.3 Quy trình tách chiết 16 KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 17 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Dữ liệu phổ 1H and 13C NMR EA41 so với diosgenin-3-O-αL-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside (paris V) 19 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H and 13C NMR EA51 so với diosgenin 3-O-αL-rhamnopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-β-Dglucopyranoside (gracillin) 23 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 (a) thân (b) thân rễ Bảy hoa Hình 3.1 Cấu trúc diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-Dglucopyranoside (EA41) 17 Hình 3.2 Cấu trúc diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[β-Dglucopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucopyranoside Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 21 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT brd : Broad doublet (mũi đôi rộng) brs : Broad singlet (mũi đơn rộng) COSY : COrrelation SpectroscopY d : Doublet (mũi đôi) dd : Doublet-doublet (mũi đôi-đôi) DE : Diethyl ether DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer EtOAc : Ethyl acetate EtOH : Ethanol HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence HSQC : Heteronuclear Single Quantum Correlation Hz / MHz : Hertz / MegaHertz (đơn vị tần số) J : Hằng số ghép cặp (coupling constant, phổ 1H-NMR) m : Multiplet (mũi đa) M : Khối lượng phân tử MeOH : Methanol m/z : Tỉ lệ khối lượng theo điện tích ion (phổ MS) BuOH : n-Butanol NMR : Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy ppm : Part per million (phần triệu) Rf : Retardation factors s : Singlet (mũi đơn) STT : Số thứ tự Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Thơng tin chung: - Tên đề tài: PHÂN LẬP MỘT SỐ SAPONIN TỪ LỒI BẢY LÁ MỢT HOA (PARIS YUNNANENSIS FRANCH) - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: Châu Thị Nhã Trúc Điện thoại: 0908185784 Email: chauthinhatruc@ump.edu.vn - Đơn vị quản lý chuyên môn (Khoa, Tổ môn): Khoa KHCB – BM Hóa - Thời gian thực hiện: 09/2017 – 09/2018 Mục tiêu: Mục tiêu đề tài phân lập xác định cấu trúc số saponin có thân rễ Bảy hoa thu hái Kontum Nội dung chính: Thân rễ Bảy hoa (Paris yunnanensis.) thu hái Kon Plong – Kontum, làm ẩm ngâm 24 giờ, chiết ngấm kiệt EtOH 70% Cô giảm áp dịch chiết đến dạng cao sệt, thu cao EtOH thô Từ cao EtOH thô điều chế loại cao diethyl ether (DE), ethyl acetat (EA), n-butanol (NB) theo phương pháp chiết lỏng – lỏng Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tiến hành sắc kí cột nhiều lần phân đoạn ethyl acetat (EA) với hệ dung môi giải li EtOAc-MeOH CHCl3 – MeOH với tỉ lệ khác nhau, thu hai hợp chất EA41 EA51 Các chất EA41 EA51 xác định cấu trúc hóa học phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều chiều Kết đạt được: Phân lập hai hợp chất gồm: paris V gracillin Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM MỞ ĐẦU Một xu hướng chữa trị giới nghiên cứu sử dụng thuốc có nguồn gốc từ hợp chất tự nhiên Những năm gần đây, nhiều nghiên cứu nước ngồi tìm thấy nhiều hoạt chất sinh học có giá trị cao lồi chi Paris (Trilliaceae) Cây Bảy hoa (Paris yunnanensis), thuộc họ Trilliaceae phân bố nhiều Ấn Độ, Myanma, Trung Quốc, có Việt Nam Tại Việt Nam, lồi thường phân bố Lào Cai (Sa Pa), Lai Châu (Phong Thổ), Kontum Trong y học dân gian, Bảy hoa (Paris yunnanensis) sử dụng làm thuốc nhiệt giải độc, tiêu thủng thống, lương can định kinh Thân rễ giã đắp chữa rắn cắn, ngã bị sưng… Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu tác dụng dược lý Bảy hoa cho thấy tác dụng kể cịn có nhiều tác dụng khác ức chế khả tăng trưởng tế bào ung thư vú, ung thư đường ruột, ung thư buồng trứng, ức chế co bóp tử cung, tác dụng kháng nấm Các hợp chất phân lập từ Bảy hoa bao gồm saponin steroid, phytoecdyson, phytosterol, flavon, penylpropanoid, số hợp chất khác Trong saponin steroid flavon hợp chất Lồi Bảy hoa Paris yunnanensis loài chi thuốc thuộc diện quý cần bảo vệ Trong báo cáo này, khảo sát loài Paris thu hái Kon Tum, xác định hợp chất steroid loài để góp phần cho việc nâng cao giá trị thuốc, qua giúp bảo tồn phát triển thuốc quí nước ta Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT HỌC CỦA LOÀI PARIS YUNNANENSIS[1, 2, 3] Cỏ nhiều năm, cao 30 – 60 (80) cm; thân rễ gần hình trụ, ngắn, đường kính khoảng cm; thân mặt đất thẳng đứng, đơn độc không phân nhánh, nảy mầm vào mùa xuân, tàn lụi vào mùa đơng Lá – 5, xết thành vịng thân; phiến mỏng, màu lục, hình trứng ngược, kích thước 12 – 18 x – 10 cm, gân chính, khơng xuất phát từ gốc, chóp nhọn, gốc trịn hình nêm, cuống dài 3,5 – cm Hoa mọc đơn độc đỉnh thân, to, đều, lưỡng tính, cuống dài 10 – 18 cm, thẳng đứng Đài – 5, dạng lá, rời nhau, hình mũi giáo, kích thước 4,5 – x 1,2 – 2,5 cm, màu lục Cánh hoa – 5, màu vàng, dạng dải, kích thước 7,5 – 10 x 0,1 cm, Nhị – 10, dài 1,5 – 2,5 cm; nhị dẹp, dài 0,5 – cm, đính gốc mảnh bao hoa; bao phấn hình thn, đính gốc, ô, mở khe dọc, đỉnh trung đới kéo dài thành hình sợi dài 0,5 mm Bầu thượng, hình trứng, có cạnh, – ơ, đính nỗn trung trụ, nhiều nỗn ; vịi nhụy – 5, phần hợp dài 0,1 – 0,2 cm, phần rời dài 0,4 – 0,5 cm; đầu nhụy – Quả nang, mở lưng ô Hạt màu nâu tối, hình cầu hình bầu dục, nhẵn, vỏ hạt mọng nước khơng, có nội nhũ rắn nạc chứa dầu, mỡ, tinh bột, phơi nhỏ, hình cầu hình trứng (b) (a) Hình 1.1 (a) thân (b) thân rễ Bảy hoa Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 2.2 NGUYÊN LIỆU Dược liệu: thân rễ Bảy hoa (Paris yunanensis Franch.) thu hái xã Măng Bút, huyện Kon Plong – Kon Tum vào tháng 10 Mẫu định danh GS Trần Hợp đại học Khoa học Tự nhiên TP HCM Sơ chế: nguyên liệu rửa sạch, sấy khô 60 oC, xay thành bột mịn bảo quản nhiệt độ phịng 2.3 QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT Bột ngun liệu làm ẩm ngâm 24 giờ, chiết ngấm kiệt EtOH 70% (tỉ lệ khối lượng nguyên liệu (kg): thể tích EtOH 70% (l) = 1:6), thu dịch chiết Cô giảm áp dịch chiết đến dạng cao sệt thu cao EtOH thơ Cao EtOH thơ hịa với nước chiết phân đoạn với diethyl ether, ethyl acetate, n-butanol Dịch chiết phân đoạn cô giảm áp thu cao diethyl ether (DE), ethyl acetate (EA), n-butanol (NB) Tiến hành sắc ký cột phân đoạn ethyl acetate (EA, 51,2 g) với hệ dung môi giải li EtOAc-MeOH (10:0−0:10) thu chín phân đoạn EA1 (4,3 g), EA2 (2,7 g), EA3 (1,5 g), EA4 (2,3 g), EA5 (2,2 g), EA6 (3,4 g), EA7 (1,8 g), EA8 (0,9 g), EA9 (1,2 g) Tiến hành sắc ký cột nhiều lần phân đoạn EA4 (2,3 g) silica gel với hệ dung môi CHCl3 – MeOH với độ phân cực hệ tăng dần, thu hợp chất EA41 (10 mg) Tiến hành sắc ký cột nhiều lần phân đoạn EA5 (2,2 g) silica gel với hệ dung môi CHCl3 – MeOH với độ phân cực hệ tăng dần, thu hợp chất EA51 (13 mg 16 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM KẾT QUẢ - THẢO LUẬN Từ cao EtOH (300 g) Paris yannanensis, kỹ thuật chiết lỏng-lỏng, thu cao chiết diethyl ether, ethyl acetate, n-butanol, dịch nước lại Tiến hành kỹ thuật sắc ký cột sắc ký lớp mỏng cao chiết ethyl acetate thu hai hợp chất: EA41 EA51 Cấu trúc hóa học năm hợp chất xác định phương pháp phổ nghiệm kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo 3.1 CẤU TRÚC HÓA HỌC EA41 Hợp chất EA41 chất bột vơ định hình, màu trắng lập từ phân đoạn EA4 cao chiết ethyl acetate Hình 3.1 Cấu trúc diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D- glucopyranoside (EA41) Phổ 1H-NMR xuất hai nhóm methyl tứ cấp δH 0,81 (s), 1,06 (s) hai nhóm methyl bậc hai δH 0,68 (d), 1,12 (d, J = 7,0 Hz) tương ứng với nhóm methyl steroid sapogenin Ngồi ra, phổ 1H-NMR hiển thị tín hiệu mũi đơi H 5,30 (br d, J = 5,0 Hz), đặc trưng sterol có nối đơi vị trí số Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu hydro carbon anomer δH 5,03 (d, J = 7,5 Hz), 6,36 (br s) chứng tỏ 17 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM có monosacharide cấu trúc Tín hiệu nhóm methyl δH 1,76 (d, J = 6,5 Hz) gắn vị trí deoxyhexose đường Phổ 13 C-NMR DEPT cho thấy EA41 có 39 carbon Trong đó, có carbon loại >CCH– (với carbon loại –CH–O, carbon anomer, carbon loại – CH=, carbon loại >CH–); 11 carbon loại –CH2– ( với carbon loại –CH2–O, carbon – CH2–); carbon loại –CH3 Tín hiệu nhóm methyl δC 15,01 (C-21); 16,32 (C18); 17,31 (C-27); 19,41 (C-19) tương ứng với cấu trúc steroid sapogenin Các carbon olefin khung củng cố tín hiệu δC 121,73 (C-6) 140, 87 (C-5) Ngoài ra, xuất tín hiệu carbon tứ cấp δC 109,25 (C-22) cho biết tồn carbon spirocetal Như vậy, EA41 có phần aglycon spirostanol Sự diện hai carbon anomer qua hai mũi cộng hưởng δC 100,38 (C-1’) 102,07 (C-1”) với carbon loại >CH–O phân tử đường cộng hưởng vùng 69 – 80 ppm cho phép dự đoán EA41 spirostanol glycoside gắn hai phân tử đường Trong đó, đường glucose (δC6’ 62,68) đường rhamnose (δC6” 18,67) Các phổ COSY, HSQC, HMBC giúp xác định vị trí phân tử đường gắn vào nối vào phần aglycon Phổ HMBC cho thấy tương quan proton anomer H-1’ (δH1’ 5,03) với C-3 (δC3 77,95) Phổ COSY xuất tương quan H-1’ H-2’ (δH2’ 4,26); H-2’ trùng vị trí với H-3’; H-3’ với H-4’ (δH4’ 4,15); H-4’ với H-5’ (δH5’ 3,88); H-5’ với H-6’ (δH6’ 4,34) Vậy đường glucose gắn trực tiếp vào khung spirostanol vị trí C-3 H-2’ có tương quan với C-1” (δC1” 102,07 phổ HMBC Phổ COSY xuất tương quan H-1” (δH1” 6,36) với H-2” (δH2” 4,83); H-2” với H-3” (δH3” 4,61); H3” với H-4” (δH4” 4,34); H-4” với H-5”( δH5” 4,98); H-5” với H-6” (δH6” 1,76) Vậy phân tử đường rhamnose gắn vào phân tử đường glucose vị trí C-2’ Từ liệu phổ so sánh với tài liệu tham khảo, hợp chất EA41 xác định diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside (paris V)[16] 18 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Bảng 3.1 Dữ liệu phổ 1H and 13C NMR EA41 so với diosgenin-3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside (paris V) Hợp chất EA41 Paris V[13] (pyridine-d5) (pyridine-d5) STT HMBC δH (J/Hz) δC δC DEPT H > C 37,51 CH2 37,3 29,97 CH2 30,0 77,6 3,93; 1H (m) 77,95 CH 2,79; 2H; (m) 38,99 CH2 140,87 C 121,73 CH 32,31 CH2 32,1 31,69 CH 31,5 50,29 CH 50,1 10 37,15 C 36,9 11 21,09 CH2 20,9 12 39,86 CH2 39,6 13 40,46 C 40,2 14 56,64 CH 56,4 5,30; 1H;(d; J = 5,0) 19 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn C2, C3, C5, C6, C10 38,8 140,7 C7, C10 121,5 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 15 32,22 CH2 32,0 16 81,11 CH 80,9 17 62,90 CH 62,5 18 0,81; 3H (s) 16,32 CH3 C12, C13, C14, C17 16,1 19 1,06; 3H (s) 19,41 CH3 C5, C9, C10 19,2 41,97 CH C13, C17, C21, C22, C23 41,7 15,01 CH3 C17, C20, C22 14,8 22 109,25 C 109,0 23 31,83 CH2 31,6 24 29,26 CH2 29,0 25 30,59 CH 30,4 26 66,86 CH2 66,6 0,68; 3H (d) 17,31 CH3 C24, C25, C26 17,1 1' 5,03; 1H (d, J = 7,5) 100,38 CH C3 100,2 2' 4,26; 1H (m) 77,85 CH C1', C3', C1" 79,4 3' 4,26; 1H (m) 79,66 CH C2' 78,0 4' 4,15; 1H (m) 71,84 CH C3' 71,6 5' 3,88; 1H (m) 78,27 CH 6'a 4,34; 1H (m) 20 21 1,12; 3H (d, J = 7,0) 27 3-O-Glc 62,68 CH2 20 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 77,7 62,7 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 6'b 4,53; 1H, (m) Rha (1 > 2) 1" 6,36; 1H (br) 102,07 CH C2', C2", C5" 101,8 2" 4,83; 1H (br) 72,58 CH C3" 72,3 4,61; 1H (dd, J = 9; 3) 72,85 CH 3" 4" 4,34; 1H (m) 74,18 CH 5" 4,98; 1H (m) 69,48 CH 6" 1,76; 3H (d; J = 6,5) 18,67 CH3 72,6 C3", C5" 74,0 69,2 C4", C5" 18,4 3.2 CẤU TRÚC HÓA HỌC EA51 Hợp chất EA51 hất bột vơ định hình, màu trắng cô lập từ phân đoạn EA5 cao chiết ethyl acetate Hình 3.2 Cấu trúc diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[β-D- glucopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucopyranoside 21 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Phổ 1H-NMR xuất hai nhóm methyl tứ cấp δH 0,85 (s), 1,09 (s) hai nhóm methyl bậc hai δH 0,72 (d, J = 5,65 Hz), 1,16 (d, J = 6,95 Hz) tương ứng với nhóm methyl steroid sapogenin Ngoài ra, phổ 1H-NMR hiển thị tín hiệu mũi đơi H 5,36 (br d, J = 5,15 Hz), đặc trưng sterol có nối đơi vị trí số Phổ H-NMR cho thấy tín hiệu hydro carbon anomer δH 4,97 (d, J = 7,35 Hz), 5,13 (d, J = 7,8 Hz), 6,41 (br, s) chứng tỏ có monosacharide cấu trúc Tín hiệu nhóm methyl δH 1,77 (d, J = 7,1 Hz) gắn vị trí deoxyhexose đường Dữ liệu phổ 13C-NMR làm rõ tín hiệu hợp chất thu Cụ thể: tín hiệu nhóm methyl δC 15,27, 16,59, 17,57, 19,66 tương ứng với cấu trúc steroid sapogenin Các carbon olefin khung aglycon củng cố tín hiệu δC 122,10 141,08 Dữ liệu 13C-NMR cho biết cấu trúc nhánh đường: carbon anomer δC 100,3, 102,47, 104,8 nhóm methyl δC 18,9 từ deoxyhexose Tín hiệu 13CNMR δC 109,5 cho biết tồn carbon spirocetal Hợp chất spirostane glycoside gắn ba đơn vị đường dựa vào phổ kể Qua liệu HMBC hợp chất lập được, tín hiệu proton anomer δH 4,97 (H-1’ glucose vị trí 2, 4); 5,13 (H-1’’’ nhánh glucose) 6,41 (H-1’’ rhamnose) cho tương quan với tín hiệu carbon δC 78,2 (C-3 aglycone); 82,5 (C-4’ glucose bị vị trí 2, 4) 77,8 (C-2’ glucose bị vị trí 2, 4) Từ việc so sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR[7], hợp chất EA51 xác định diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-β-D- glucopyranoside (gracillin) Đây hợp chất có hoạt tính gây độc hầu hết dịng tế bào, có giá trị cao việc nghiên cứu hợp chất kháng ung thư 22 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H and 13C NMR EA51 so với diosgenin 3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucopyranoside (gracillin) Hợp chất EA51 Gracillin[7] (pyridine-d5) (pyridine-d5) HMBC STT δH (J/Hz) δC δC DEPT H > C 37,76 CH2 37,8 30,36 CH2 30,4 3,96; 1H (m) 78,13 CH C1' 78,3 2,81; 1H (m) 39,00 CH2 C2, C3, C5, C6, C10 39,0 141,08 C 5,36; 1H (d, J = 5,15) 122,10 CH 32,60 CH2 32,7 31,98 CH 32,1 50,56 CH 50,6 10 37,43 C 37,5 11 21,37 CH2 21,4 12 40,15 CH2 40,2 13 40,74 C 40,8 141,1 C7, C10 23 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 122,1 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 14 56,93 CH 57,0 15 32,49 CH2 32,6 81,38 CH 81,4 63,18 CH 63,2 16 4,58; 1H (m) 17 18 0,85; 3H (s) 16,59 CH3 C12, C13, C14, C17 16,7 19 1,09; 3H (s) 19,66 CH3 C1, C9, C10 19,7 20 1,98; 1H (m) 42,25 CH C13, C17, C21, C22, C23 42,3 21 1,16; 3H (d, J = 6,95) 15,27 CH3 C17, C20, C22 15,4 22 109,52 C 109,6 23 32,11 CH2 32,0 24 29,54 CH2 29,6 25 30,87 CH 30,9 26 67,14 CH2 C22 67,2 17,56 CH3 C24, C25, C26 17,7 4,97; 1H (d, J = 7,35) 100,30 CH C3, C2’ 100,3 27 0,72; 3H (d, J = 5,65) 3-O-Glc 1' 2' 4,22; 1H (m) 78,02 CH C1”,C1’, C3’ 78,0 3' 4,21; 1H (m) 89,75 CH C1”’,C2’ 89,9 4' 4,09; 1H (m) 69,80 CH 69,9 5' 3,84; 1H (m) 77,32 CH 77,3 24 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 6'a 4,59; 1H (m) 62,74 62,7 CH2 6'b 4,45; 1H (m) Rha (1 > 2) C2’, C2”, C5” 1" 6,41; 1H (br,s) 102,47 CH 102,6 2" 4,90; 1H (m) 72,73 CH 72,8 3" 4,60; 1H (m) 73,05 CH 73,1 4" 4,34; 1H (m) 74,40 CH 74,4 5" 4,95; 1H (m) 69,88 CH 69,9 6" 1,77; 3H (d, J = 7,35) 18,94 CH3 18,9 5,13; 1H (d, J = 7,80) 104,80 CH Glc (1 >3) 1"' C3’, C3”’ 104,9 2"' 4,04; 1H (m) 75,26 CH 75,3 3"' 4,06; 1H (m) 78,77 CH 79,0 4"' 4,14; 1H (m) 71,80 CH 71,8 5"' 4,06; 1H (m) 78,96 CH 78,9 6"' 4,27; 1H (m) 62,74 CH2 62,7 25 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Với mục đích ban đầu đặt ra, sau thời gian tìm hiểu tiến hành nghiên cứu đề tài cách sử dụng kỹ thuật săc ký cột silica gel pha thường, pha đảo kết hợp với SKLM, cô lập hai hợp chất Dựa vào kết phổ 1H-NMR, 13CNMR, DEPT 90 135, HSQC, HMBC, MS cấu trúc hóa học hai hợp chất xác định là: paris V gracillin Kết góp phần nâng cao giá trị thuốc Bảy hoa Việt Nam KIẾN NGHỊ Tiếp tục lập xác định cấu trúc hóa học chất phân đoạn chưa khảo sát Thử nghiệm hoạt tính kháng vi sinh vật hoạt tính gây độc tế bào chất phân lập 26 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam NXB Khoa học – Kỹ thuật 2004, 1, 182 – 184 Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học 2012, 2, 774-777 Nguyễn Thị Đỏ, Bộ Hoa Loa kèn, Thực vật chí Việt Nam NXB Khoa học – Kỹ thuật 2007, 8, 317 – 318 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Cai, J.; Liu, M.; Wang, Z.; Ju, Y., Apoptosis induced by dioscin in Hela cells Biological & Pharmaceutical Bulletin 2002, 25 (2), 193-196 Chan, J Y.; Koon, J C.; Liu, X.; Detmar, M.; Yu, B.; Kong, S K.; Fung, K P., Polyphyllin D, a steroidal saponin from Paris polyphylla, inhibits endothelial cell functions in vitro and angiogenesis in zebrafish embryos in vivo J Ethnopharmacol 2011, 137 (1), 64-9 Cheung, J Y.; Ong, R C.; Suen, Y K.; Ooi, V.; Wong, H N.; Mak, T C.; Fung, K P.; Yu, B.; Kong, S K., Polyphyllin D is a potent apoptosis inducer in drugresistant HepG2 cells Cancer Lett 2005, 217 (2), 203-11 Chibber, R.; Hagan, R Core glcnac-t inhibitors, US20120142620A1, 2012 Deng, D.; Lauren, D R.; Cooney, J M.; Jensen, D J.; Wurms, K V.; Upritchard, J E.; Cannon, R D.; Wang, M Z.; Li, M Z., Antifungal saponins from Paris polyphylla Smith Planta Med 2008, 74 (11), 1397-402 Guo, L.; Su, J.; Deng, B W.; Yu, Z Y.; Kang, L P.; Zhao, Z H.; Shan, Y J.; Chen, J P.; Ma, B P.; Cong, Y W., Active pharmaceutical ingredients and mechanisms underlying phasic myometrial contractions stimulated with the 27 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM saponin extract from Paris polyphylla Sm var yunnanensis used for abnormal uterine bleeding Hum Reprod 2008, 23 (4), 964-71 10 Hu, K.; Yao, X., The cytotoxicity of methyl protoneogracillin (NSC-698793) and gracillin (NSC-698787), two steroidal saponins from the rhizomes of Dioscorea collettii var hypoglauca, against human cancer cells in vitro Phytother Res 2003, 17 (6), 620-6 11 Huang, X.; Gao, W.; Man, S.; Gao, Y.; Huang, L.; Liu, C., Structure-activity relationship study of twelve compounds from Paris polyphylla Smith var pubescens Latin American Journal of Pharmacy 2010, 29 (3), 401-7 12 Huang, X.; Gao, W.; Man, S.; Gao, Y.; Huang, L.; Liu, C., Isolation and identification of compounds present in rhizomes of Paris axialis H Li and study of their cytotoxic effects Latin American Journal of Pharmacy 2011, 30 (3), 5405 13 Huang, Y.; Cui, L.; Zhan, W.; Dou, Y.; Wang, Y.; Wang, Q.; Zhao, D., Separation and identification of steroidal compounds with cytotoxic activity against human gastric cancer cell lines in vitro from the rhizomes of Paris polyphylla var chinensis Chemistry of Natural Compounds 2007, 43 (6), 672-677 14 Lee, J C.; Su, C L.; Chen, L L.; Won, S J., Formosanin C-induced apoptosis requires activation of caspase-2 and change of mitochondrial membrane potential Cancer Sci 2009, 100 (3), 503-13 15 Lee, M S.; Chan, J Y W.; Kong, S K.; Yu, B.; Eng, V O.; Nai, H W.; Mak, T.; Fung, K P., Effects of polyphyllin D, a steroidal saponin in Paris polyphylla, in growth inhibition of human breast cancer cells and in xenograft Cancer Biology & Therapy 2014, (11), 1248-1254 16 Liu, H.; Yang, J.; Du, Y.; Bai, X.; Du, Y., Synthesis of four oligosaccharides derived from Paris polyphylla var yunnanensis and their tobacco (Nicotiana tabacum L.) growth-regulatory activity Plant Growth Regulation 2009, 60 (1), 69-75 28 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 17 Liu, M J.; Wang, Z.; Ju, Y.; Zhou, J b.; Wang, Y.; Wong, R N S., The mitoticarresting and apoptosis-inducing effects of diosgenyl saponins on human Leukemia cell lines Biological & Pharmaceutical Bulletin 2004, 27 (7), 10591065 18 Man, S.; Gao, W.; Yan, Y.; Liu, Z.; Liu, C., Inhibition of matrix metalloproteinases related to metastasis by diosgenyl and pennogenyl saponins J Ethnopharmacol 2011, 137 (3), 1221-7 19 Man, S.; Gao, W.; Zhang, Y.; Liu, Z.; Yan, L.; Huang, L.; Liu, C., Formosanin Cinhibited pulmonary metastasis through repression of matrix metalloproteinases on mouse lung adenocarcinoma Cancer Biology & Therapy 2011, 11 (6), 592-598 20 Matsuda, H.; Pongpiriyadacha, Y.; Morikawa, T.; Kishi, A.; Kataoka, S.; Yoshikawa, M., Protective effects of steroid saponins from Paris polyphylla var yunnanensis on ethanol- or indomethacin-induced gastric mucosal lesions in rats: structural requirement for activity and mode of action Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2003, 13 (6), 1101-1106 21 Shuli, M.; Wenyuan, G.; Yanjun, Z.; Chaoyi, M.; Liu, Y.; Yiwen, L., Paridis saponins inhibiting carcinoma growth and metastasis in vitro and in vivo Arch Pharm Res 2011, 34 (1), 43-50 22 Siu, F M.; Ma, D L.; Cheung, Y W.; Lok, C N.; Yan, K.; Yang, Z.; Yang, M.; Xu, S.; Ko, B C.; He, Q Y.; Che, C M., Proteomic and transcriptomic study on the action of a cytotoxic saponin (Polyphyllin D): induction of endoplasmic reticulum stress and mitochondria-mediated apoptotic pathways Proteomics 2008, (15), 3105-17 23 Sun, J.; Liu, B R.; Hu, W J.; Yu, L X.; Qian, X P., In vitro anticancer activity of aqueous extracts and ethanol extracts of fifteen traditional Chinese medicines on human digestive tumor cell lines Phytother Res 2007, 21 (11), 1102-4 29 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM 24 Wang, G X.; Han, J.; Zhao, L W.; Jiang, D X.; Liu, Y T.; Liu, X L., Anthelmintic activity of steroidal saponins from Paris polyphylla Phytomedicine 2010, 17 (14), 1102-5 25 Wang, Y C.; Yi, T Y.; Lin, K H., In vitro activity of Paris polyphylla smith against enterovirus 71 and coxsackievirus B3 and its immune modulation Am J Chin Med 2011, 39 (6), 1219-34 26 Wang, Z.; Zhou, J.; Ju, Y.; Zhang, H.; Liu, M.; Li, X., Effects of two saponins extracted from the Polygonatum Zanlanscianense Pamp on the human Leukemia (HL-60) cells Biological & Pharmaceutical Bulletin 2001, 24 (2), 159-162 27 Wei, J C.; Gao, W Y.; Yan, X D.; Wang, Y.; Jing, S S.; Xiao, P G., Chemical constituents of plants from the genus Paris Chem Biodivers 2014, 11 (9), 127797 28 Yan, L L.; Zhang, Y J.; Gao, W Y.; Man, S L.; Wang, Y., In vitro and in vivo anticancer activity of steroid saponins of Paris polyphylla var yunnanensis Exp Oncol 2009, 31 (1), 27-32 29 Zhang, X F.; Cui, Y.; Huang, J J.; Zhang, Y Z.; Nie, Z.; Wang, L F.; Yan, B Z.; Tang, Y L.; Liu, Y., Immuno-stimulating properties of diosgenyl saponins isolated from Paris polyphylla Bioorg Med Chem Lett 2007, 17 (9), 2408-13 30 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn