(Luận văn) nghiên cứu khả năng nhân giống cây nhân sâm (panax ginseng c a meyer) bằng phương pháp in vitro

c ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ LIÊN Tên đề tài: lu an NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY NHÂN SÂM (Panax ginseng C.A Meyer) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO n va p ie gh tn to KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC d oa nl w an lu : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP ll oi m Khóa học u nf va Hệ đào tạo : 2010 - 2014 z at nh z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ LIÊN Tên đề tài: lu an NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY NHÂN SÂM (Panax ginseng C.A Meyer) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO n va p ie gh tn to KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC d oa nl w lu Hệ đào tạo va an : Chính quy : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP ll u nf Chuyên ngành : 2010 - 2014 oi m Khóa học z at nh Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH - CNTP - Đại học Nông Lâm Thái Nguyên z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu khả nhân giống Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) phương pháp in vitro” lu Qua thời gian làm việc phịng ni cấy mơ Khoa Cơng nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa thầy cô giáo môn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua an n va gh tn to Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: ThS Nguyễn Thị Tình tận tình bảo, hướng dẫn em trình học tập thực đề tài p ie Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lòng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần để em hoàn thành đề tài Do thời gian thực đề tài có hạn nên đề tài khơng tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài em hoàn thiện d oa nl w lu ll u nf va an Em xin chân thành cảm ơn ! oi m Thái Nguyên, ngày 05 tháng 06 năm 2014 z at nh Sinh viên thực z l gm @ m co Dương Thị Liên an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1: Kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau ngày nuôi cấy) 26 Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 20 ngày nuôi cấy) 29 lu an Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 32 n va p ie gh tn to Bảng 4.4: Kết ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 35 d oa nl w Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng nồng độ BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 u nf va an lu Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 41 ll Bảng 4.7: Kết ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 44 oi m z at nh z Bảng 4.8: Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau nuôi cấy mô vườn ươm (sau 30 ngày theo dõi) 49 m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Sơ đồ q trình phân hố phản phân hố tế bào thực vật Hình 4.1: Biểu đồ kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau ngày nuôi cấy) 27 lu Hình 4.2.a: Tỷ lệ tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường MS, B5, WPM (sau 20 ngày nuôi cấy) 29 an n va Hình 4.2.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 20 ngày nuôi cấy môi trường MS, B5, WPM 30 ie gh tn to Hình 4.3.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung nồng độ BA khác 32 p Hình 4.3.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung BA (sau 30 ngày nuôi cấy) nồng độ khác 33 nl w d oa Hình 4.4.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung Kinetin 35 an lu u nf va Hình 4.4.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) nuôi cấy nồng độ Kinetin khác sau 30 ngày 36 ll Hình 4.5.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 oi m z at nh z Hình 4.5.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng CA Meyer) môi trường kết hợp BA (0,5mg/l) với nồng độ IBA, NAA IAA sau 30 ngày nuôi cấy 39 l gm @ m co Hình 4.6.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung hàm lượng nước dừa (sau 30 ngày nuôi cấy) 42 an Lu n va ac th si Hình 4.6.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung hàm lượng nước dừa khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 42 Hình 4.7.a: Số rễ trung bình tạo thành từ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung NAA than hoạt tính 45 Hình 4.7.b: Chất lượng rễ tạo thành từ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) bổ sung NAA than hoạt tính vào mơi trường ni cấy sau 30 ngày 46 lu Hình 4.8.a: Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau nuôi cấy mô vườn ươm (sau 30 ngày theo dõi) 49 an n va p ie gh tn to Hình 4.8.b: Cây Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày trồng giá thể khác 50 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin HCl B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine HCl BA : 6-Benzyladenin CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IAA : Indol-3- axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s oa nl w AND : α - Naphthalene axetic acid CT : Công thức NAA d an lu : Woody Plant Medium IBA u nf va WPM : Indol-3- butyric acid ll : Than hoạt tính oi m THT HSN z at nh TLMSKN : Tỷ lệ mẫu sống không nhiễm Số rễ TB/cây : Số rễ trung bình/cây Cồn : C2H5OH : Hệ số nhân z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC Trang lu an n va p ie gh tn to PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Nhân Sâm 2.1.1 Nguồn gốc, phân loại phân bố Nhân Sâm 2.1.2 Đặc điểm hình thái Nhân Sâm 2.1.3 Đặc điểm thích nghi 2.1.4 Thành phần hóa học 2.1.5 Công dụng Nhân Sâm 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3 Các giai đoạn nhân giống in vitro 2.4 Các chất điều hịa sinh trưởng ni cấy mơ tế bào thực vật 10 2.4.1 Auxin 10 2.4.2 Cytokinin 11 2.5 Tình hình nghiên cứu Nhân Sâm giới nước 12 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 12 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 13 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 16 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 16 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 16 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng 16 3.3.1 Hóa chất 16 3.3.2 Thiết bị 17 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu 17 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 17 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 18 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 4.1 Kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 26 4.2 Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 28 4.3 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nước dừa tới khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 30 4.3.1 Kết ảnh hưởng nồng độ BA Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 31 4.3.2 Kết ảnh hưởng nồng độ BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 37 4.3.3 Kết ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 41 4.4 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 43 4.5 Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm 48 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề lu an n va p ie gh tn to Nhân Sâm có tên khoa học Panax ginseng C.A Meyer loại dược thảo quý hiếm, Nhân Sâm có chứa hàm lượng saponin triterpen cao, đặc biệt nhóm dammaran với hợp chất saponin mà đại diện ginsenosides Rb1, Rb2, Rh2, Rg1, Rg3 [48] Nhân Sâm có vai trị quan trọng cung cấp nguyên liệu cho ngành dược liệu, mỹ phẩm, thực phẩm chức Theo nghiên cứu khoa học, ngồi tác dụng bổ dưỡng Nhân Sâm cịn nhiều tác dụng đáng ghi nhận như: ngăn chặn trình lão hóa, kích thích hoạt động não, tăng cường chức hệ thống miễn dịch, chống oxy hóa, chống stress, chống viêm, kháng khuẩn, chống khối u [27], [41], giảm lượng glucose - kích thích tiết insulin tế bào B [42], chống trầm cảm, bảo vệ gan, giảm cholesterol lipit máu, điều hòa tim mạch [6] Chính vậy, Nhân Sâm dùng phổ biến Tuy nhiên, Nhân Sâm có thời gian sinh trưởng dài, phạm vi phân bố hẹp bị khai thác mức Phương pháp nhân giống truyền thống hạt, đầu mầm thân rễ hiệu không cao, tỷ lệ nảy mầm hạt kém, thường xảy biến dị gây khó khăn cho việc phát triển diện tích trồng trọt, khơng đáp ứng đủ nhu cầu sử dụng thị trường [5], [11] Ngoài ra, việc điều khiển loại dịch bệnh, kháng loại thuốc trừ sâu vấn đề nghiêm trọng [18] d oa nl w ll u nf va an lu oi m Do đó, phương pháp ni cấy mô tế bào phương pháp hiệu để nhân giống, sản xuất số lượng lớn giống mà đảm bảo chất lượng giống bệnh, đồng mặt di truyền, đồng thời khắc phục nhược điểm phương pháp nhân giống truyền thống [23] z at nh z m co l gm @ Nhận thức vấn đề bảo tồn phát triển loài dược liệu quý nên tiến hành đề tài: “Nghiên cứu khả nhân giống Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) phương pháp in vitro” an Lu n va ac th si 56 lu an n va p ie gh tn to Sâm Cau (Curculigo orchicides Gaertr)”, Tuyển tập báo cáo khoa học Hội nghị nghiên cứu Khoa học lần thứ Đại học Đà Nẵng, 523 - 527 24 Phan Hùng Vĩnh, Nguyễn Văn Song, Trương Thị Bích Phượng (2009), “Nhân nhanh in vitro lan Nhất điểm hồng (Dendrobium draconis) lồi lan rừng có nguy tuyệt chủng”, Hội nghị khoa học Công nghệ Sinh học toàn quốc, 469 - 471 25 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục Tài liệu tiếng Anh 26 Boggetti, B., Jásik J., Mantell S.H (2001), “In vitro root formation in Anacardium occidentale microshoots”, Biologia Plantarum, 44(2), 175-179 27 C.O Akalezi, S Liu, Q.S Li, J.T Yu, J.J Zhong (1999), “Combined effects of initial sucrose concentration and inoculum size on cell growth and ginseng saponin production by suspension cultures of Panax ginseng”, Process Biochemistry, 34(6 - 7), 639 - 642 28 Dong H, Bai LP, Wong VK, Zhou H, Wang JR, Liu Y, Jiang ZH, Liu L (2011), “The in vitro structure-related anti-cancer activity of ginsenosides and their derivatives”, Molecules., 16(12), 10619 - 10630 29 Duong Tan Nhut, Nguyen Phuc Huy, Vu Quoc Luan, Nguyen Van Binh, Nguyen Ba Nam, Le Nu Minh Thuy, Dang Thi Ngoc Ha, Hoang Xuan Chien, Trinh Thi Huong, Hoang Van Cuong, Le Kim Cuong and Vu Thi Hien (2011), “Shoot regeneration and micropropagation of Panax vietnamensis Ha et Grushv from ex vitro leaf-derived callus”, African Journal of Biotechnology, 10(84), 19499 - 19504 30 Edwin F George, Michael A Hall Geert-Jan De Klerk (2008), “Plant Growth Regulators III: Gibberellins, Ethylene, Abscisic acid, their Analogues and Inhibitors; Miscellaneous Compounds”, Plant Propagation by Tissue Culture, 1, 227 - 281 31 Hong YJ, Kim N, Lee K, Hee Sonn C, Eun Lee J, Tae Kim S, Ho Baeg I, Lee KM (2012), “Korean red ginseng (Panax ginseng) ameliorates type diabetes and restores immune cell compartments”, Journal of ethnopharmacology, 144(2), 225 - 233 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 57 lu an n va p ie gh tn to 32 Ji Yeon Yu, Yong-Ri Jin, Jung-Jin Lee, Jin-Ho Chung, Ji-Yoon Noh, Soon-Hyang You, Ki-Nam Kim, Ji-Hyun Im, Ju-Hyun Lee, Ji-Min Seo, Hyeong-Jun Han, Yong Lim, Eun-Seok Park, Tack-Joong Kim, Kyeong-Soeb Shin, Jae-Joon Wee, Jong-Dae Park, Yeo-Pyo Yun (2006), “Antiplatelet and antithrombotic activities of Korean Red Ginseng”, Arch Pharm Res, 29(10), 898 - 903 33 Jing-Tian Xie, Sangeeta Mehendale and Chun-Su Yuan (2005), “Ginseng and diabetes”, American Journal Chinese Medicine, 33, 397 - 404 34 Kim HS, Hong YT, Jang CG (1998), “Effects of the ginsenosides Rg1 and Rb1 on morphine-induced hyperactivity and reinforcement in mice”, J Pharm Pharmacol., 50(5), 555 - 560 35 Larraburu E.E., Apóstolo N.M., and Llorente B.E (2012), “In vitro propagation of pink lapacho: responese surface methodology and factorial analysis for optimisation of medium components”, International Journal of Forestry Research, - 36 Liu CX, Xiao PG (1992), “Recent advances on ginseng research in China”, J Ethnopharmacol, 36(1), 27 - 38 37 Liu Z , J Zhang , Ouyang X , Liu X , Guan X (1999), “The effects of Radix ginseng rubra on cAMP of experimental ischemic myocardium in rats”, J Tongji Med Univ., 19(2), 90 - 92 38 Mercedes Bonfill, Rosa M Cusidó, Javier Palazón, M Teresa Piđol, Carmen Morales (2002), “Influence of auxins on organogenesis and ginsenoside production in Panax ginseng calluses”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 68 (1), 73 - 78 39 Parida R., Mohanty S., Kuanar A., Nayak S (2010), “Rapid multiplication and in vitro production of leaf biomass in Kaempferia galanga through tissue culture”, Electron J Biotechnol., 13(4), ISSN 0717-3458 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z @ m co l gm 40 Sarita Arya, Inder Dev Arya and Tage Eriksson (1993), “Rapid multiplication of adventitious somatic embryos of Panax ginseng”, Plant cell, Tissue and organ culture, 34, 157 - 162 41 Soowon Kang and Hyeyoung Min (2012), “Ginseng, the 'Immunity Boost': The Effects of Panax ginseng on Immune System”, Journal of Gensing research, 36(4), 354 - 368 an Lu n va ac th si 58 lu an n va p ie gh tn to 42 Sun Min Park, Sang Mee Hong, So Ra Sung, Ji Eun Lee, Dae Young Kwon (2008), “Extracts of Rehmanniae radix, Ginseng radix and Scutellariae radix improve glucose-stimulated insulin secretion and β-cell proliferation through IRS2 induction”, Genes & Nutrition, 4(2), 347-351 43 Tao LL, Lei Y, Wang GL, Zhu LQ, Wang Y (2012), “Effect of extracts from Radix ginseng, Radix notoginseng and Rhizoma chuanxiong on delaying aging of vascular smooth muscle cells in aged rats”, Chin J Integr Med, 18(8), 582 - 590 44 Thorne (2009), “Panax ginseng”, Alternative Medicine Review, 14 (2), 172-176 45 WC Chang , YI Hsing (1980), “Plant regeneration through somatic embryogenesis in root-derived callus of ginseng (Panax ginseng C A Meyer)”, Theoretical and Applied Genetics, 57(3), 133 - 135 46 Wei R, Chen C, Dong J, Qiu S, Cao Z (1992), “Effect of radix Astragali and radix ginseng in enhancing the metabolism of human myocardial cells in vitro”, China journal of Chinese materia medica, 17(3), 173-175 47 William E Court (2006), Ginseng the genus Panax, Medicinal and Aromatic Plants - Industrial Proifles harwood academic publishers, vol 15 48 World Health Organization (1999), WHO Monographs on Selected Medicinal Plants, tập 49 Yoo YC, Lee J, Park SR, Nam KY, Cho YH, Choi JE (2013), “Protective effect of ginsenoside-Rb2 from Korean red ginseng on the lethal infection of haemagglutinating virus of Japan in mice”, J Ginseng Res., 37(1), 80 - 86 50 Zoltán Molnár, Emese Virág, Vince Ưrdưg (2011), “Natural substances in tissue culture media of higher plants”, Acta Biologica Szegediensis, 55(1), 123 - 127 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC Phụ lục : Kết xử lý số liệu Bảng 4.1: Kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE 113 19/ 5/** 11:25 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao vat lieu sach nam va vi khuan tu doan than cay Nhan Sam VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION DF lu an n va p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1355.56 677.778 182.63 0.000 * RESIDUAL 22.2668 3.71113 * TOTAL (CORRECTED) 1377.82 172.228 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE 113 19/ 5/** 11:25 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao vat lieu sach nam va vi khuan tu doan than cay Nhan Sam VARIATE V004 TLMC w SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 446.983 223.491 90.42 0.000 * RESIDUAL 14.8297 2.47162 * TOTAL (CORRECTED) 461.812 57.7266 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 113 19/ 5/** 11:25 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao vat lieu sach nam va vi khuan tu doan than cay Nhan Sam d oa nl LN ll u nf va an lu oi m CT$ TLMS 44.4433 61.1100 74.4433 TLMN 26.6700 31.1100 14.4433 gm @ NOS 3 z z at nh MEANS FOR EFFECT CT$ - m co l SE(N= 3) 1.11222 0.907674 5%LSD 6DF 3.84736 3.13979 - an Lu n va ac th si ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 113 19/ 5/** 11:25 PAGE anh huong cua phuong phap khu trung den kha nang tao vat lieu sach nam va vi khuan tu doan than cay Nhan Sam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 59.999 24.074 TLMS TLMN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 13.124 1.9264 3.2 0.0000 7.5978 1.5721 6.5 0.0001 | | | | Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE P 19/ 5/** 11:38 lu PAGE anh huong cua moi truong MS, B5 va WPM den kha nang tai sinh choi Nhan Sam an n va VARIATE V003 TLTS SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5965.62 2982.81 150.85 0.000 * RESIDUAL 118.637 19.7728 * TOTAL (CORRECTED) 6084.26 760.532 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE P 19/ 5/** 11:38 PAGE anh huong cua moi truong MS, B5 va WPM den kha nang tai sinh choi Nhan Sam p ie gh tn to LN oa nl w d MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLTS 100.000 60.0000 3 37.7767 u nf va an lu ll SE(N= 3) 2.56728 5%LSD 6DF 8.88064 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE P 19/ 5/** 11:38 PAGE anh huong cua moi truong MS, B5 va WPM den kha nang tai sinh choi Nhan Sam oi m z at nh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - z STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 27.578 4.4467 6.7 0.0000 | | | | m co l gm TLTS GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 65.926 @ VARIATE an Lu n va ac th si Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 87 19/ 5/** 11:56 PAGE anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 24.2240 6.05600 283.88 0.000 * RESIDUAL 10 213333 213333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 24.4373 1.74552 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 87 19/ 5/** 11:56 PAGE anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam an va n MEANS FOR EFFECT CT$ to CT$ NOS 3 3 tn p ie gh HSN 1.23333 2.43333 3.36667 4.76667 4.26667 oa nl w SE(N= 3) 0.843273E-01 5%LSD 10DF 0.265718 d ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 87 19/ 5/** 11:56 PAGE anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam va an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.3212 0.14606 4.5 0.0000 oi m GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.2133 ll HSN u nf VARIATE | | | | z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE KOI 19/ 5/** 12:16 PAGE anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Nhân Sam VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.68667 562222 337.34 0.000 * RESIDUAL 133332E-01 166665E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.70000 154545 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KOI 19/ 5/** 12:16 PAGE anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Nhân Sam an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 p ie gh HSN 1.20000 1.56667 2.23333 1.80000 w d oa nl SE(N= 3) 0.235701E-01 5%LSD 8DF 0.768597E-01 va an lu ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KOI 19/ 5/** 12:16 PAGE anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Nhân Sam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.39312 0.40825E-01 2.4 0.0000 oi m | | | | z at nh GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 1.7000 ll HSN u nf VARIATE z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng nồng độ BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN IBA FILE BAG 19/ 5/** 13:45 PAGE anh huong cua nong BA (0,5mg/l)ket hop voi cac nong IBA, NAA IAA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam VARIATE V003 HSN IBA LN lu an n va tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 13.0067 3.25167 375.19 0.000 * RESIDUAL 10 866676E-01 866676E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 13.0933 935238 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN NAA FILE BAG 19/ 5/** 13:45 PAGE anh huong cua nong BA (0,5mg/l) ket hop voi cac nong IBA, NAA IAA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam VARIATE V004 HSN NAA LN SOURCE OF VARIATION DF SOURCE OF VARIATION DF p ie gh SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 11.9467 2.98667 224.00 0.000 * RESIDUAL 10 133334 133334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 12.0800 862857 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN IAA FILE BAG 19/ 5/** 13:45 PAGE anh huong cua nong BA (0,5mg/l) ket hop voi cac nong IBA, NAA IAA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam VARIATE V005 HSN IAA d oa nl w va an lu LN SOURCE OF VARIATION DF ll u nf SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.03067 1.50767 141.34 0.000 * RESIDUAL 10 106666 106666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.13733 438381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAG 19/ 5/** 13:45 PAGE anh huong cua nong BA (0,5mg/l) ket hop voi cac nong IBA, NAA IAA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN IBA HSN NAA HSN IAA 4.70000 4.63333 4.66667 5.33333 5.16667 3.06667 3 6.16667 5.76667 3.66667 5.66667 5.26667 4.76667 3.46667 3.16667 4.10000 oi m z at nh z m co l gm @ 3) 10DF an Lu SE(N= 5%LSD 0.537487E-01 0.666669E-01 0.596284E-01 0.169364 0.210070 0.187891 n va ac th si ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAG 19/ 5/** 13:45 PAGE anh huong cua nong BA (0,5mg/l) ket hop voi cac nong IBA, NAA IAA den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 5.0667 15 4.8000 15 4.0533 HSN IBA HSN NAA HSN IAA STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.96708 0.93095E-01 1.8 0.0000 0.92890 0.11547 2.4 0.0000 0.66210 0.10328 2.5 0.0000 | | | | lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE S3 19/ 5/** 13:51 PAGE anh huong cua nong nuoc dua den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 13.8573 3.46433 866.07 0.000 * RESIDUAL 10 400006E-01 400006E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 13.8973 992667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE S3 19/ 5/** 13:51 PAGE anh huong cua nong nuoc dua den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 p ie gh HSN 1.23333 2.20000 2.90000 3.96667 3.46667 nl w d oa SE(N= 3) 0.365151E-01 5%LSD 10DF 0.115060 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE S3 19/ 5/** 13:51 PAGE anh huong cua nong nuoc dua den kha nang nhan nhanh choi cay Nhan Sam va an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.99633 0.63246E-01 2.3 0.0000 oi m | | | | z at nh GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.7533 ll HSN u nf VARIATE z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.7: Kết ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE MN 19/ 5/** 14: PAGE Anh huong cua NAA THT den kha nang re cua choi cay Nhan Sam VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 274.809 68.7023 254.45 0.000 * RESIDUAL 10 2.70001 270001 * TOTAL (CORRECTED) 14 277.509 19.8221 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MN 19/ 5/** 14: PAGE Anh huong cua NAA THT den kha nang re cua choi cay Nhan Sam an va n MEANS FOR EFFECT CT$ - to CT$ tn NOS 3 3 p ie gh SR 3.60000 7.20000 15.7667 12.0333 6.93333 d oa nl w SE(N= 3) 0.300001 5%LSD 10DF 0.945313 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MN 19/ 5/** 14: PAGE Anh huong cua NAA THT den kha nang re cua choi cay Nhan Sam an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 9.1067 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.4522 0.51962 5.7 0.0000 ll u nf | | | | oi m SR va VARIATE z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.8: Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau nuôi cấy mô vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE DT 19/ 5/** 14:22 PAGE anh huong cua mot so loai gia the den kha nang sinh truong va phat trien cua cay Nhan Sam o giai doan sau nuoi cay mo o ngoai vuon uom VARIATE V003 TLS SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6477.79 2159.26 582.63 0.000 * RESIDUAL 29.6483 3.70604 * TOTAL (CORRECTED) 11 6507.44 591.585 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLC FILE DT 19/ 5/** 14:22 PAGE anh huong cua mot so loai gia the den kha nang sinh truong va phat trien cua cay Nhan Sam o giai doan sau nuoi cay mo o ngoai vuon uom VARIATE V004 TLC lu an n va SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6477.79 2159.26 582.63 0.000 * RESIDUAL 29.6484 3.70604 * TOTAL (CORRECTED) 11 6507.44 591.585 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DT 19/ 5/** 14:22 PAGE anh huong cua mot so loai gia the den kha nang sinh truong va phat trien cua cay Nhan Sam o giai doan sau nuoi cay mo o ngoai vuon uom p ie gh tn to LN d oa nl w an lu ll u nf va MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLS TLC 100.000 0.00000 83.3333 16.6667 3 75.5567 24.4433 36.6667 63.3333 oi m z at nh SE(N= 3) 1.11146 1.11146 5%LSD 8DF 3.62436 3.62437 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DT 19/ 5/** 14:22 PAGE anh huong cua mot so loai gia the den kha nang sinh truong va phat trien cua cay Nhan Sam o giai doan sau nuoi cay mo o ngoai vuon uom z gm @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - l VARIATE m co GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | 12 73.889 24.323 1.9251 2.6 0.0000 12 26.111 24.323 1.9251 7.4 0.0000 an Lu TLS TLC n va ac th si Phụ lục 2: Môi trường Table 1: Preparation of modified Murashige AND Skoog’s MS medium Component I NH4NO3 KNO3 82,5 95 II MgSO4 7H2O MnSO4 4H2O ZnSO4 7H2O CuSO4 5H2O 37,0 2,23 1,058 0,0025 III CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O 44,0 0,083 0,0025 lu Bottle Stock Solution (g/l) an n va p ie gh tn to 1.650,0 1.900,0 20 17,0 0,62 0,025 KH2PO4 H3BO3 Na2MoO4.2H2O Final concentratic (mg/ l) 10 370,0 22,3 10,6 0,025 10 440,0 0,83 0,025 10 170,0 6,2 0,25 10 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 0,5 2,0 0,1 0,5 oa nl w IV Amount to take preparation (ml) FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O 2,784 3,724 d an lu V va mg/100ml 100,0 30.000,0 z @ m co l 5,8 8.000,0 gm Agar PH z at nh Sucrose 100 100 100 100 oi Inositol m Vitamin ll u nf Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl PyridoxineHCl an Lu n va ac th si Table 2: Preparation of modified Gamborg’s B5 medium (E-24medium ) Bottle Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/ l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 15,0 150,0 lu Component Stock Solution (g/l) an n va p ie gh tn to d oa nl w lu 160 u nf Inositol mg/100ml ll Pyridoxine HCL 1,0 100 10 10,0 100 1,0 z 8000,0 Agar m co 5,6 - 5,8 l gm @ Sucrose PH z at nh Thiamine HCL 100 oi Nicotinic acid m Vitamins 27,85 va an CaCl2.2H2O 10 an Lu n va ac th si Table 3: Môi trường WPM - Woody Plant Medium Nồng độ Muối khoáng Nồng độ Muối khoáng (mg/l) (mg/l) 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8,6 CaCl2.2H2O 96 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 lu NH4NO3 37,2 Na2EDTA.2 H2O an n va to 100 Nicotinic acid 0,5 0,5 Thiamine HCL 1,0 w Myo-inositol 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 ie gh tn Các chất hữu p Pyridoxine HCL Glycine d oa nl 5,6 - 5,8 ll u nf va an lu pH oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si