(Luận văn) nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - lu TRẦN THI ̣PHƢƠNG NHUNG an n va p ie gh tn to Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH GIỐNG LAN HÀ I GIÁP (Paphiopedilum malipoense) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO oa nl w d KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC nf va an lu z at nh oi lm ul Hê ̣ đào ta ̣o : Chính quy Chuyên ngành : Công nghê ̣ sinh ho ̣c : CNSH-CNTP z Khoa: @ Khoá học : 2012-2016 m co l gm an Lu Thái Nguyên, năm 2016 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - TRẦN THI ̣PHƢƠNG NHUNG lu an n va p ie gh tn to Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH GIỐNG LAN HÀ I GIÁP (Paphiopedilum malipoense) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO d oa nl w KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC an lu nf va Hê ̣ đào tạo : Chính quy Khoa : CNSH-CNTP z at nh oi Khoá học lm ul Chuyên ngành: Công nghê ̣ sinh ho ̣c : 2012-2016 Giảng viên hƣớng dẫn 1: ThS Nguyễn Thi Ti ̣ ̀nh z Giảng viên hƣớng dẫn 2: ThS Nguyễn Xuân Vũ m co l gm @ an Lu Thái Nguyên - năm 2016 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Đƣợc sự đồng ý của Ban giám hiệu nhà trƣờng , Ban chủ nhiê ̣m khoa Công nghê ̣ sinh ho ̣c và Công nghê ̣ thƣ̣c phẩ m , thời gian thƣ̣c tâ ̣p tố t nghiê ̣p em đã thƣ̣c hiê ̣n đề tài : “Nghiên cƣ́u khả nhân nhanh giố ng lan hài G iáp (Paphiopedilum malipoense) bằ ng phƣơng pháp in vitro” Trang đầ u tiên của khoá luâ ̣n này em xin gƣ̉i lời cảm ơn tới Ban giám hiê ̣u nhà trƣờng, Ban chủ nhiê ̣m khoa Công nghê ̣ S inh ho ̣c và Công nghê ̣ T hƣ̣c phẩ m cù ng các thầy cô giáo Khoa đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cƣ́u này lu Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc , em xin gƣ̉i lời cảm ơn chân thành an tới cô giáo ThS Nguyễn Thi Ti ̣ ̀nh và thầy giáo T hS Nguyễn Xuân Vũ , giảng viên khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công nghê ̣ Thƣ̣c phẩ m đã tâ ̣n tình chỉ bảo , giúp đỡ và n va gh tn to hƣớng dẫn em thời gian thƣ̣c hiê ̣n đề tài Đồng thời, em xin cám ơn tha ̣c si ̃ Ma Thi ̣Hoàn đã giúp đỡ và tạo điều kiện tốt Cuố i cùng, em xin cảm ơn gia đình đã tạo điều kiện vật chất và là chỗ p ie nhấ t cho em ś t q trình thƣ̣c tâ ̣p tớ t nghiê ̣p nl w dƣ̣a tinh thầ n cho em suố t thời gian thƣ̣c tâ ̣p , cảm ơn bạn bè đã hết lòng động oa viên, giúp đỡ suốt thời gian qua d Trong quá triǹ h thƣ̣c tâ ̣p , cũng nhƣ là quá trình làm báo cáo lu thƣ̣c tâ ̣p thời nên đề tài không thể tránh khỏi nhƣ̃ng sai sót Em rấ t mon g nhâ ̣n đƣơ ̣c nhƣ̃ng ý kiế n đó ng góp của thầ y cô và các bạn để đề tài của em đƣợc hoàn thiện nf va an gian có ̣n , trình độ và kỹ bản thân còn nhiều hạn chế lm ul thành công cuộc sống z Em xin chân thành cảm ơn! z at nh oi Lời cuố i em xin kiń h chúc các thầ y , cô giáo nhà trƣờng , khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công n ghê ̣ thƣ̣c phẩ m , cùng các bạn đồng nghiệp sức khoẻ , @ Thái Nguyên, ngày 21 tháng năm 2016 m co l gm Sinh viên thƣc̣ hiêṇ an Lu Trầ n Thi Phƣơng Nhung ̣ n va ac th si ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các nhóm lan Hài Việt Nam theo thứ hạng bảo tồn của Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Quố c tế (IUCN) [1] Bảng 3.1 Thiế t bi,dụng cụ nghiên cƣ́u .23 ̣ Bảng 3.2 Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng cuả nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ trùng của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng lan hài Giáp 26 Bảng 4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian khƣ̉ trùng của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 32 lu Bảng 4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA đế n khả tái sinh an n va chồ i lan hài Giáp (sau 40 ngày nuôi cấy) 35 nhân nhanh giố ng lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 gh tn to Bảng 4.3 Kế t quả nghiên cƣ́u ản h hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả ie Bảng 4.4 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin và TDZ đến p khả nhân nhanh giống lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 40 nl w Bảng 4.5 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ d oa lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 43 an lu Bảng 4.6 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA kế t hơ ̣p với than hoa ̣t tính đế n nf va khả rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 45 z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii DANH MỤC CÁC HÌ NH Hình 2.1 Hình ảnh về lan hài Giáp (Paphiopedilum malipoense) .12 Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu ảnh hƣởng của mợt số chất kích thích sinh trƣởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ của lan hài Giáp 25 Hình 4.1 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣, thời gian của HgCl đến khả tạo vật liê ̣u vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 33 Hình 4.2 Biể u đồ ảnh hƣởng của BA đế n khả tái sinh giố ng lan hài Giáp sau 40 ngày nuôi cấy .35 lu Hình 4.3 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA tố t nhấ t kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả an n va nhân nhanh giố ng lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 đến khả nhân nhanh giống lan hài Giáp (sau 40 ngày nuôi cấy) 40 gh tn to Hình 4.4 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA tố t nhấ t kế t hơ ̣p với Kinetin và TDZ ie Hình 4.5 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ lan hài Giáp p (sau 30 ngày nuôi cấy) 43 nl w Hình 4.6 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA tố t nhấ t kế t hơ ̣p với THT đế n khả d oa rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 46 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si iv DANH MỤC CÁC TƢ̀, CỤM TỪ VIẾT TẮT BA : 6-Benzyladenine BT : Bình thƣờng Cs : Cô ̣ng sƣ̣ CT : Công thƣ́c CV : Coeficient of Variation Đ/C : Đối chứng Kinetin : 6-Furfurylaminopurine lu an n va p ie gh tn to d oa nl w : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog’s, 1962 MT : Môi trƣờng NAA : α-Naphthalene acetic acid ND : Nƣớc dƣ̀a PLB : Protocorm like body RE : Robert Ernst TDZ : Thidiazol THT : Than hoa ̣t tính an lu LSD : Thí nghiệm nf va TN z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TƢ̀, CỤM TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề lu 1.2 Mục đích nghiên cứu an n va 1.3 Yêu cầ u của đề tài Phần 2: TỔNG QUAN TÀ I LIỆU gh tn to 1.4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài .2 ie 2.1 Tổ ng quan về lan Hài p 2.1.1 Phân loa ̣i và nguồ n gố c .3 nl w 2.1.1.1 Phân loa ̣i d oa 2.1.1.2 Nguồ n gố c an lu 2.1.2 Đặc điểm hình thái nf va 2.1.3 Sinh thái 2.1.4 Hiê ̣n tra ̣ng lan Hài Viê ̣t Nam lm ul 2.2 Giới thiê ̣u về giố ng lan Hài Giáp .10 z at nh oi 2.2.1 Nguồ n gố c và sƣ̣ phân bố 10 2.2.2 Hình thái 11 2.2.3 Các điều kiện bản để nuôi trồng giống lan hài P malipoense 13 z gm @ 2.2.3.1 Nhiê ̣t đô ̣, đô ̣ ẩ m, ánh sáng 13 l 2.2.3.2 Nhu cầ u bón phân 13 co 2.2.3.3 Giá thể trồng 13 m 2.2.4 Các phƣơng pháp nhân giống vô tính lan hài Giáp 13 an Lu 2.3 Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật .14 n va ac th si vi 2.3.1 Tính toàn của tế bào thực vật 14 2.3.2 Sƣ̣ phân hoá tế bào 14 2.3.3 Sƣ̣ phản phân hoá tế bào 15 2.3.4 Mô ̣t số yế u tố ảnh hƣởng đế n quá trin ̀ h nuôi cấ y mô tế bào thƣ̣c vâ ̣t .15 2.3.4.1 Vâ ̣t liê ̣u nuôi cấ y 15 2.3.4.2 Điề u kiê ̣n nuôi cấ y .16 2.3.5 Môi trƣờng dinh dƣỡng 16 2.3.5.1 Nguồ n Cacbon 16 2.3.5.2 Các nguyên tố khoáng đa lƣợng, vi lƣơ ̣ng 16 lu an 2.3.5.3 Vitamin 17 n va 2.3.5.4 Các chất hữu tự nhiên 17 2.3.5.6 pH của môi trƣờng .18 gh tn to 2.3.5.5 Các thành phần khác 18 ie 2.3.5.7 Các chất điều hoà sinh trƣởng 18 p 2.4 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài thế giới và nƣớc .20 nl w 2.4.1 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài tr ên thế giới 20 d oa 2.4.2 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài nƣớc .22 an lu Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U 23 nf va 3.1 Vâ ̣t liê ̣u, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 23 3.1.1 Đối tƣơ ̣ng, vâ ̣t liê ̣u nghiên cƣ́u 23 lm ul 3.1.2 Hoá chất sử dụng .23 z at nh oi 3.1.3 Thiế t bi,dụng cụ nghiên cứu 23 ̣ 3.2 Phạm vi, điạ điể m và thời gian nghiên cƣ́u 24 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 24 z gm @ 3.2.2 Điạ điể m nghiên cƣ́u .24 l 3.2.2 Thời gian nghiên cƣ́u 24 co 3.3 Nô ̣i dung nghiên cƣ́u 24 m 3.3.1 Nô ̣i dung 1: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ an Lu trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng lan hài Giáp .24 n va ac th si vii 3.3.2 Nô ̣i dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ BA đến khả tái sinh chồi lan hài Giáp từ đoạn thân mang chồi ngủ 24 3.3.3 Nô ̣i dung 3: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ n g đô ̣ BA, Kinetin, TDZ đế n khả nhân nhanh chồ i lan hài Giáp 24 3.3.4 Nô ̣i dung 4: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA và than hoa ̣t tính đế n khả rễ của lan hài Giáp 24 3.4 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 25 3.4.1 Chuẩ n bi môi trƣờng nuôi cấ y in vitro 25 ̣ 3.4.2 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 25 lu 3.4.3 Phƣơng pháp bố trí thí nghiê ̣m 25 an n va 3.4.3.1 Nô ̣i dung 1: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ 3.4.3.2 Nô ̣i dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ BA đến khả tái sinh gh tn to trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng lan hài Giáp .26 ie chồi lan hài Giáp từ đoạn thân chứa mắt ngủ 27 p 3.4.3.3 Nô ̣i dung 3: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của của nồng độ BA, Kinetin, TDZ đế n nl w khả nhân nhanh chồ i lan hài Giáp 27 d oa 3.4.3.4 Nô ̣i dung 4: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA và hoa ̣t tin ́ h đế n khả an lu rễ của lan hài Giáp 28 nf va 3.5 Phƣơng pháp đánh giá và xƣ̉ lý số liê ̣u 29 Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CƢ́U VÀ THẢO LUẬN 31 lm ul 4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ trùng HgCl z at nh oi đến khả tạo vật liệu vô trùng 31 4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng củ a nồ ng đô ̣ BA đế n khả tái sinh chồ i lan hài Giáp .34 z gm @ 4.3 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA, Kinetin, TDZ đế n khả l nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 37 co 4.3.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả m nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 37 an Lu n va ac th si viii 4.3.2 Kế t quả nghiên cứu ảnh hƣởng của BA kết hợp với Kinetin và TDZ đến khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 39 4.4 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA và hoa ̣t tin ́ h đế n khả rễ của lan hài Giáp 42 4.4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ của lan hài Giáp .42 4.4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA kế t hơ ̣p với than hoa ̣t tính đế n khả nhân nhanh lan hài Giáp 45 Phầ n 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI 48 ̣ lu 5.1 Kế t luâ ̣n 48 an n va 5.2 Kiế n nghi 48 ̣ I Tiế ng Viê ̣t gh tn to TÀI LIỆU THAM KHẢO ie II Dịch từ tiếng nƣớc ngoài p III Tiế ng Anh d oa nl w PHỤ LỤC nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiế ng Viêṭ Leonid Averyyanov, Phillip Cribb, Phan Kế Lô ̣c , Nguyễn Tiế n Hiê ̣p (2004), Lan Hài Vệt Nam – Với phầ n giới thiê ̣u về ̣ thực vật Viê ̣t Nam, Nxb Giao thông vâ ̣n tải Trịnh Đình Đạt (2008), Công nghê ̣ sinh học – T4, Nxb Giáo du ̣c Hoàng Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Mạch Hồng Thắm, Đỗ Thị Thu Hà (2010), “Nghiên cứu nhân giống in vitro và nuôi trồng giống lan hài quý P lu hangianum perner Gurss (Hài Hằng) thu thập Việt Nam”, Tạp chí Khoa an va học và Phát triển 2010 - tập 8, số 2, tr 194-201, Trƣờng Đại Học Nông n Nghiệp Hà Nội Cao Điǹ h Hù ng, Phan Xuân Nguyên , Nguyễn Đin ̀ h Si ̃ (2013), “Nghiên cƣ́u ie gh tn to Nguyễn Thu Hâ ̣u , Nguyễn Trí Minh, Đinh Văn Khiêm, Nguyễn Thi ̣Thanh Hằ ng, p nhân giố ng cỏ ngo ̣t (Stevia rebaudiana Bertond) in vitro”, Hội thảo Quố c tế nl w Khoa học và Công nghê ̣ phục vụ sản xuất Nông nghiệp Công nghệ cao tỉnh d oa Lâm Đồ ng, Đà La ̣t ngày 29 tháng năm 2013, trang 239-245 an lu Th.S Lê Thị Huyên, Ts Nguyễn Tiến Hiệp (2004), Hình thái phân loại thực nf va vật, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Trƣờng Đa ̣i ho ̣c Lâm Nghiê ̣p Hà Nô ̣i Trầ n Thi ̣Lê ̣ , Trƣơng Thi ̣Bích Phƣơ ̣ng , Trầ n Thi ̣Triêu Hà (2008), Giáo trình lm ul Công nghê ̣ sinh học thực vật , Nxb Nông nghiê ̣p, Hà Nội z at nh oi Nguyễn Công Nghiê ̣p (2006), Trồ ng hoa lan, Nxb Trẻ Nguyễn Nhƣ Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011), Giáo trình các chất điều hoà sinh z trưởng thục vật, Nxb Giáo du ̣c Việt Nam gm @ Hoàng Thị Sản (2002), Phân loại học thực vật , Nxb Giáo du ̣c l 10 Nguyễn Thi ̣Sơn , Nguyễn Thi ̣Lý Anh , Vũ Ngọc Lan , Trầ n Thế Mai (2012), co “Nhân giố ng in vitro loài lan Dendrobium fimbriatum Hook (Hoàng thảo long m nhãn)”, Tạp chí Khoa học và Phát triển 2012, tâ ̣p 10(2), trang 263-271 an Lu n va ac th si 11 Nguyễn Kim Thanh , Nguyễn Thuâ ̣n Châu (2005), Giáo trình sinh lý học thực vật, Nxb Giáo du ̣c, Hà Nội 12 Nguyễn Đƣ́c Thành (2000), Nuôi cấ y mô tế bào thực vật – Nghiên cứ u và ứng dụng, Nxb Nông nghiê ̣p 13 Nguyễn Quang Tha ̣ch (2009), Cơ sở công nghê ̣ sinh học – T3, Nxb Giáo du ̣c 14 Bùi Trang Việt (2002), Sinh lý thực vật đại cương, Nxb Đa ̣i ho ̣c Quố c gia Thành phố Hồ Chí Minh Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mô ̣ng Hùng, Lê Hồ ng Điê ̣p (2009), Công nghê ̣ sinh học tập – Công nghê ̣ sinh học tế bào, Nxb Giáo du ̣c 15 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mô ̣ng Hùng , Lê Hồ ng Điê ̣p (2002), Công nghê ̣ sinh học – lu T2, Nxb Giáo dục an n va II Dịch từ tiếng nƣớc ngoài mới về loài Pinopsida dải Bắc Trƣờng Sơn , Hội thảo về đa dạng sinh học phía Bắc Trường Sơn, Đa ̣i ho ̣c Quố c gia Hài Nô ̣i, trang 104-108 ie gh tn to 16 Nguyễn Tiế n Hiê ̣p , Phan Kế Lô ̣c và Averyanov L V ( 1999),”Mô ̣t vài số liê ̣u p 17 Phan Kế Lô ̣c , Averyanov L V., Nguyễn Tiế n Hiê ̣p và Nguyễn Quố c nl w Bình,(1999),”Số liê ̣u mới về ̣ thƣ̣c vâ ̣t khu vƣ̣c Ngo ̣c Liñ h và các d oa vùng lân cận huyện Đắk Glei , tỉnh Kon Tum” , Tạp chí Lâm nghiệp Việt an lu Nam (Hà Nội), số 12, trang 35-37 nf va 18 Phan Kế Lô ̣c , Nguyễn Tiế n Hiê ̣p và Averyanov L V (1999a), “Mô ̣t số loài và quầ n xã thƣ̣c vâ ̣t bi ̣đe doa ̣ daỹ núi đá vôi của tỉnh Cao Bằ ng cầ n đƣơ ̣c lm ul bảo vệ khu bảo tồn mới đƣợc đề xuất” , Tạp chí Lâm nghiệp Việt Nam III Tiế ng Anh z at nh oi (Hà Nội), số 12, trang 35-36 19 Bubeck S.K (1973), A suty of Paphiopedilum meristem culture Ph.D Thesis, z p.109 l gm @ Rutgers University Microfilm International, Ann Arbor, Mivhigan, The USA, co 20 Chen T Y., Chen J T., Chang W C (2002), “Multiple shoot formation and m plant regeneration from stem nodal explants of Paphiopedilum orchids”, In an Lu vitro Cell, Dev Biol Plant 38, p 595-597 n va ac th si 21 Chen T Y., Chen J T., Chang W C (2004), “Plant regeneration through direct shoot bud formation from leaf culture of Paphiopedilum orchids”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 76, p 11-15 22 Chen S C., Liu F Y (1982), “Notes on some species of Paphiopedilum from Yunnan”, Acta Bot, Yunnanica 4, p 163-167 23 Hong P I., Chen J T., Chang W C (2008), “ Plant regeneration via protocormlike body formation and shoot multiplication from seed-derived callus of a maudiae type slipper orchid”, Acta Physiol Pant 30, p 755-759 24 Huang L C (1988), “A procedure for asexual multiplication of Paphiopedilum lu an in vtro, American Orchid Society Bulletin 57, p 274-278 “Paphiopedilum cloning in vitro”, Scientia Horticulturae 91, p 111-121 n va 25 Huang L C., Lin C J., Kou C I., Huang B L., Murashige T (2001), Calopogon tuberosus and Sacolia lanceolata var lanceolata: Two Florida p ie gh tn to 26 Kauth P (2005), In vitro seed germination and seedling development of native terrestrial orchids, Master thesis, University of Florida nl w 27 Koopowitz H., Hasegawa N (1987), “An introduction to slipper orchids, in d oa Koopowitz H., Hasegawa N (Eds), Novelty slipper orchids, breeding and an lu cultivating Paphiopedilum hybirds”, Harper & Colloins publisher, Inc, New nf va York, the USA, p 19-31 28 Liao Y J., Tsai Y C., Sun Y W., Lin R S., Wu F S (2011), “In vitro shoot lm ul induction and plant regeneration from flower buds in Paphiopedilum z at nh oi orchids”, In vitro Cell, Dev Biol plant 47, p 702-709 29 Lin Y.H., Chang c., Chang W.C (2000), “Plant regeneration from callus culture of a Paphiopedilum hybird”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture z gm @ 62, P.21-25 30 Nieman D (1980), “Plantlet formation of Paphiopedilum flower stem”, co l American Orchid Society Bulletin 49, p 372-373 m 31 Nhut D T, Thuy D T T., Don N T., Luan V Q., Hai N T., Tran Thanh Van an Lu K., Chinnappa C C (2007), “In vitro stem elongation of Paphiopedilum n va ac th si delenatiii Guillaumin and shoot regeneration via stem node culture”, Propagation of Ornamental Plants 7, p 29-36 32 Nhut D T, Thuy D T T., Luan V Q., Don N T., Khiem D V., Tran Thanh Van K (2005), “ Micropropagation of Paphiopedilum delenatii via stem node culture”, Vietnam – Korea International Symposium, Bio-Technology & BioSystem Engineering, p 184-190 33 Nhut D T., Trang P T T., Vu N H., Thuy D T T., Khiem D V., Binh N V., Tran Thanh Van K (2005), “ A wounding method and liquid culture in Paphiopedilum delenatiii propagation”, Propagation of Ornamental Plants lu an 5(3), p.156-161 n va 34 Sampolinski J (1983), “Formation of plantlets on Paphiopedilum flower stem”, 35.Stewart J., Button J (1975), “Tissue culture studies in Paphiopedilum”, American Orchid Society Bulletin 44, p 591-599 ie gh tn to Orchid Review 91, p 229 p 36 Tang T., Wang F T (1951) “Acta Phytotaxinomica Sinica”, Orchidee 43 (6), d oa nl w p 709-710 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌ NH ẢNH VỀ KẾT QUẢ NGHIÊN CƢ́U NHÂN GIỐNG LAN HÀI GIÁP (Paphiopedilum malipoense) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO lu an n va to p ie gh tn Ảnh chồi lan hài Giáp tái sinh từ đoạn thân sau 40 ngày nuôi cấy d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Ảnh nhân nhanh chồi lan hài Giáp sau 30 ngày nuôi cấy n va ac th si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Ảnh rễ lan hài Giáp sau 30 ngày nuôi cấ y an Lu n va ac th si PHỤ LỤC MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/l) 20 1.650,0 1.900,0 10 370,0 22,3 10,6 0,025 10 440,0 0,83 0,025 Component I NH4NO3 KNO3 82,5 95 II MgSO4.7H2O MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O 37 2,23 1,058 0,0025 III CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O 44 0,083 0,0025 KH2PO4 H3BO4 Na2MoO4.2H2O 17 0,62 0,025 10 170,0 6,2 0,25 2,784 3,724 10 27,85 37,25 lu Bottle Stock Solution (g/l) an n va p ie gh tn to d oa nl w IV lu FeSO4.7H2O Na2EDTA.2H2O nf va an V lm ul mg/100ml 100 100 100 100 0,5 2,0 0,1 0,5 30.0000,0 5.500,0 z m co l gm 5,6-5,8 @ Sucrose Agar pH 0,5 2,0 0,1 0,5 z at nh oi Vitamin Nicotinic acid Glycine Thiamine acid Pyridocine HCl an Lu n va ac th si PHỤ LỤC ́ KÊT QUẢ XƢ̉ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣, thời gian của chấ t khƣ̉ trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMSKN FILE KT 16/ 5/16 13:41 :PAGE Anh huong cua nong do, thoi gian cua HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V003 TLMSKN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 11333.3 1259.26 53.97 0.000 * RESIDUAL 20 466.667 23.3333 * TOTAL (CORRECTED) 29 11800.0 406.897 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE KT 16/ 5/16 13:41 :PAGE Anh huong cua nong do, thoi gian cua HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung an n va tn to VARIATE V004 TLMN SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 33080.0 3675.56 183.78 0.000 * RESIDUAL 20 400.000 20.0000 * TOTAL (CORRECTED) 29 33480.0 1154.48 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE KT 16/ 5/16 13:41 :PAGE Anh huong cua nong do, thoi gian cua HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung SOURCE OF VARIATION DF p ie gh LN d oa nl w SOURCE OF VARIATION nf va an LN lu VARIATE V005 TLMC DF z at nh oi lm ul SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 13280.0 1475.56 73.78 0.000 * RESIDUAL 20 399.999 19.9999 * TOTAL (CORRECTED) 29 13680.0 471.724 - z m co l gm @ an Lu n va ac th si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KT 16/ 5/16 13:41 :PAGE Anh huong cua nong do, thoi gian cua HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 3 3 10 TLMSKN 0.000000 16.6667 30.0000 43.3333 53.3333 60.0000 43.3333 66.6667 53.3333 33.3333 TLMN 100.000 83.3333 70.0000 40.0000 36.6667 16.6667 10.0000 16.6667 3.33333 3.33333 TLMC 0.000000 0.000000 0.000000 16.6667 10.0000 23.3333 46.6667 16.6667 43.3333 63.3333 lu SE(N= 3) 2.78887 2.58199 2.58198 5%LSD 20DF 6.22707 7.61678 7.61677 - an n va ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KT 16/ 5/16 13:41 :PAGE Anh huong cua nong do, thoi gian cua HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung gh tn to F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE p ie STANDARD DEVIATION C OF V |CT | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 20.172 4.8305 8.1 0.0000 33.978 4.4721 11.8 0.0000 21.719 4.4721 20.3 0.0000 d oa nl w TLMSKN TLMN TLMC GRAND MEAN (N= 30) NO OBS 30 40.000 30 38.000 30 22.000 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Thí nghiệm 2: Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồng độ BA đến khả tái sinh của giống lan hài Giáp (sau 40 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSMBC FILE TS2 16/ 5/16 11: :PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang tai sinh giong lan hai Giap VARIATE V003 TSMBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 44.6667 11.1667 33.50 0.000 * RESIDUAL 10 3.33333 333333 * TOTAL (CORRECTED) 14 48.0000 3.42857 - lu BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE TS2 16/ 5/16 11: :PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang tai sinh giong lan hai Giap VARIATE V004 TLTS an va LN SOURCE OF VARIATION DF n p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4466.67 1116.67 33.50 0.000 * RESIDUAL 10 333.333 33.3333 * TOTAL (CORRECTED) 14 4800.00 342.857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TS2 16/ 5/16 11: :PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang tai sinh giong lan hai Giap MEANS FOR EFFECT CT - oa nl w CT NOS 3 3 d TLTS 13.3333 33.3333 63.3333 53.3333 36.6667 nf va an lu TSMBC 1.33333 3.33333 6.33333 5.33333 3.66667 z at nh oi lm ul SE(N= 3) 0.333333 3.33333 5%LSD 10DF 0.505035 5.05035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TS2 16/ 5/16 11: :PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang tai sinh giong lan hai Giap F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.8516 0.57735 4.4 0.0000 18.516 5.7735 4.4 0.0000 z | | | | m co l gm @ TSMBC TLTS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 4.0000 15 40.000 an Lu n va ac th si Thí nghiệm 3: Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA và kinetin đế n khả nhân nhanh giống lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSC FILE NN12 16/ 5/16 11:19 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh giong lan hai Giap VARIATE V003 TSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 308.400 77.1000 231.30 0.000 * RESIDUAL 10 3.33334 333334 * TOTAL (CORRECTED) 14 311.733 22.2667 - lu an n va BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE NN12 16/ 5/16 11:19 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh giong lan hai Giap tn to VARIATE V004 HSNC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3.08400 771000 231.30 0.000 * RESIDUAL 10.333331E-01.333331E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.11733 222667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NN12 16/ 5/16 11:19 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh giong lan hai Giap SOURCE OF VARIATION DF p ie gh LN d oa nl w lu CT 3) 10DF TSC 6.33333 10.3333 19.3333 16.3333 13.3333 0.333334 6.05035 HSNC 0.633333 1.03333 1.93333 1.63333 1.33333 z at nh oi SE(N= 5%LSD NOS 3 3 lm ul nf va an MEANS FOR EFFECT CT - 0.333332E-01 0.605034 z ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NN12 16/ 5/16 11:19 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh giong lan hai Giap gm @ STANDARD DEVIATION C OF V |CT | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 4.7188 0.57735 4.4 0.0000 0.47188 0.57735E-01 4.4 0.0000 m an Lu TSC HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 13.133 15 1.3133 co VARIATE l F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va ac th si Thí nghiệm 4: Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin và TDZ đế n khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấ y) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSC FILE NN22 16/ 5/16 23:30 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin va TDZ den kha nang nhan nhanh giong lan VARIATE V003 TSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 176.400 44.1000 132.30 0.000 * RESIDUAL 10 3.33332 333332 * TOTAL (CORRECTED) 14 179.733 12.8381 - lu an n va BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE NN22 16/ 5/16 23:30 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin va TDZ den kha nang nhan nhanh giong lan tn to VARIATE V004 HSNC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.76400 441000 132.30 0.000 * RESIDUAL 10.333334E-01.333334E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.79733 128381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NN22 16/ 5/16 23:30 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin va TDZ den kha nang nhan nhanh giong lan SOURCE OF VARIATION DF p ie gh LN d oa nl w lu CT TSC 19.3333 22.3333 29.3333 26.3333 23.3333 HSNC 1.93333 2.23333 2.93333 2.63333 2.33333 z at nh oi NOS 3 3 lm ul nf va an MEANS FOR EFFECT CT - z SE(N= 3) 0.333333 0.333334E-01 5%LSD 10DF 3.05034 0.305035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NN22 16/ 5/16 23:30 :PAGE Anh huong cua BA ket hop voi Kinetin va TDZ den kha nang nhan nhanh giong lan gm @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 3.5830 0.57735 2.4 0.0000 0.35830 0.57735E-01 2.4 0.0000 m co an Lu TSC HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 24.133 15 2.4133 l VARIATE n va ac th si Thí nghiệm 5: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả re ̃ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSMRR FILE RR12 15/ 5/16 23:36 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cay lan hai Giap VARIATE V003 TSMRR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 80.4000 20.1000 150.75 0.000 * RESIDUAL 10 1.33334 133334 * TOTAL (CORRECTED) 14 81.7333 5.83810 - lu an n va BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMRR FILE RR12 15/ 5/16 23:36 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cay lan hai Giap tn to VARIATE V004 TLMRR SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8040.00 2010.00 150.75 0.000 * RESIDUAL 10 133.334 13.3334 * TOTAL (CORRECTED) 14 8173.33 583.810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RR12 15/ 5/16 23:36 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cay lan hai Giap MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TSMRR TLMRR 1.00000 10.0000 7.33333 73.3333 3 6.00000 60.0000 4.00000 40.0000 2.33333 23.3333 SOURCE OF VARIATION DF p ie gh LN d oa nl w nf va an lu lm ul z at nh oi SE(N= 3) 0.210819 2.10819 5%LSD 10DF 0.664298 6.64299 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RR12 15/ 5/16 23:36 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cay lan hai Giap z F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 2.4162 0.36515 8.8 0.0000 24.162 3.6515 8.8 0.0000 m co l gm TSMRR TLMRR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 4.1333 15 41.333 @ VARIATE an Lu n va ac th si Thí nghiệm 6: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA kế t hơ ̣p với than hoạt tính đến khả rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLR FILE RR22 15/ 5/16 23:59 :PAGE Anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cay lan hai Giap VARIATE V003 SLR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 419.067 104.767 314.30 0.000 * RESIDUAL 10 3.33331 333331 * TOTAL (CORRECTED) 14 422.400 30.1714 - lu an BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE RR22 15/ 5/16 23:59 :PAGE Anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cay lan hai Giap n va LN SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 693.333 173.333 6.50 0.008 * RESIDUAL 10 266.667 26.6667 * TOTAL (CORRECTED) 14 960.000 68.5714 - SOURCE OF VARIATION DF p ie gh tn to VARIATE V004 TLRR nl w d oa TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RR22 15/ 5/16 23:59 :PAGE Anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cay lan hai Giap lu CT SLR 12.3333 16.3333 27.3333 23.6667 19.3333 TLRR 73.3333 80.0000 93.3333 86.6667 86.6667 z at nh oi NOS 3 3 lm ul nf va an MEANS FOR EFFECT CT - SE(N= 3) 0.333332 2.98142 5%LSD 10DF 1.05034 6.39457 - z m co l gm @ an Lu n va ac th si ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RR22 15/ 5/16 23:59 :PAGE Anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cay lan hai Giap F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 19.800 15 84.000 SLR TLRR STANDARD DEVIATION C OF V |CT | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 5.4929 0.57735 2.9 0.0000 8.2808 5.1640 6.1 0.0079 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si