THÔNG TIN TÀI LIỆU
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - - NGUYỄN THỊ THU HIỀN lu an n va p ie gh tn to Nghiên cứu khả nhân nhanh lan môi trường nuôi cấy lỏng d oa nl w điểm hồng (Dendrobium draconis Rchb.f) ll u nf va an lu m oi KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT lu an AIA : axit indol axetic BA : – benzyl adenine BAP : – benzyl aminopurine B5 : gamborg cs : cộng CT : công thức 2,4 – D : diclorophenoxyacetic acide va n ĐHQG – HCM : Đại học Quốc gia – Hồ Chí Minh : gibberellic acid IAA : indole – acetic acide IBA : indol – butyric acide KIN : kinetin MS : Murashinge & Skoog (1962) p ie gh tn to GA d oa nl w an lu : Chu et all (1975) u nf va M6 : α – napthalen acetic acide ll NAA : naphthoxyacetic acid z at nh : delta – isopentenyl : thidiazuron z TDZ oi N–6 m NOA m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC BẢNG Bảng Trang Ảnh hưởng lượng mẫu đưa vào đến khả nhân nhanh 3.1 19 protocorm môi trường lỏng Ảnh hưởng nồng độ đường sucrose đến khả nhân 3.2 22 nhanh protocorm môi trường lỏng Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân nhanh protocorm lu 3.3 24 an lan điểm hồng môi trường lỏng n va So sánh khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng 26 môi trường lỏng đặc gh tn to 3.4 Ảnh hưởng KIN, BAP, IBA đến khả nhân chồi in ie p 3.5 Tên bảng 28 d oa nl w vitro lan điểm hồng ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tên biểu đồ Trang Ảnh hưởng lượng mẫu đưa vào đến khả nhân 3.1 20 nhanh protocorm môi trường lỏng Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân nhanh 3.2 22 protocorm lan điểm hồng Ảnh hưởng nồng độ đường sucrose đến khả nhân lu 3.3 25 an nhanh protocorm môi trường lỏng n va So sánh khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng 26 môi trường lỏng đặc p ie gh tn to 3.4 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang Lan điểm hồng (Dendrobium draconis Rchb.f) 2.1 16 Protocorm phát sinh sau 15 ngày nuôi cấy với lượng mẫu nuôi 3.1 21 cấy ban đầu khác Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân nhanh protocorm 3.2 23 lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy lu an Ảnh hưởng nồng độ sucrose đến khả nhân nhanh 25 protocorm lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy n va 3.3 ie gh tn to 3.4 p 3.2 Protocorm lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy 27 Nhân chồi in vitro lan điểm hồng sau 60 ngày nuôi cấy 28 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Ngày nay, hoa lan trở thành mặt hàng có giá trị kinh doanh, xuất Thế giới Đặc biệt nước thuộc châu Á nhiệt đới Thái Lan, Singapore, Philippin, Indonesia…Thái Lan nước điển hình ni trồng xuất hoa lan [6] Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới ẩm Các loài lan rừng Việt Nam thành phần quan trọng cấu thành hệ sinh thái rừng Việt Nam tạo nên cho Việt Nam thành vùng phân bố loài lu lan quý Thế giới [6] Tuy nhiên thời gian gần hệ sinh thái rừng Việt Nam bị an giảm sút nghiêm trọng dẫn đến việc thu hẹp nơi sinh sống loài lan rừng va n việc khai thác mức làm cho nhiều lồi có nguy tuyệt chủng cục to tn Bằng kĩ thuật nuôi cấy phương pháp ni cấy ngập chìm điều ie gh kiện vơ trùng phận thể thực vật, phương pháp ni cấy in vitro ngập p chìm cho số lượng lớn đồng mặt di truyền cách nhanh chóng, nl w đồng thời cịn bảo tồn phục hồi loài quý có hiệu Ứng oa dụng kĩ thuật vào sản xuất giải vấn đề bảo tồn đa d dạng sinh học mà mở hướng cho sản xuất kinh doanh trồng lu va an loài dược liệu, hoa kiểng,… u nf Trong số giống lan nước ta như: Cattleya, Phalaenopsis, Oncidium, ll Mokara, Vanda, Dendrobium… Dendrobium chi lớn có giá trị kinh tế m oi cao Nhất điểm hồng (Dendrobium draconis Rchb.f) loài lan thuộc chi z at nh Dendrobium Đây loài lan đẹp, nằm sách đỏ Việt Nam có giá trị kinh tế cao z @ gm Xuất phát từ lý trên, tiến hành nghiên cứu đề tài: l “Nghiên cứu khả nhân nhanh lan điểm hồng (Dendrobium draconis m co Rchb.f) môi trường nuôi cấy lỏng” an Lu n va ac th si Mục đích đề tài Xây dựng quy trình nhân nhanh lan điểm hồng kỹ thuật nuôi cấy in vitro môi trường lỏng Nội dung đề tài - Nghiên cứu ảnh hưởng số điều kiện môi trường nuôi cấy đến khả nhân protocorm lan điểm hồng: lượng mẫu (protocorm) nuôi cấy ban đầu, tốc độ lắc, hàm lượng đường sucrose - So sánh khả nhân nhanh protocorm môi trường lỏng môi trường đặc lu an - Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp chất KTST (BAP, KIN, IBA) lên n va khả nhân chồi từ protocorm p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu lan Dendrobium 1.1.2 Nguồn gốc phân bố Giống lan đặt tên vào năm 1799 Chữ Dendrobium có nguồn gốc chữ Hy Lạp Dendro có nghĩa gỗ, lớn; bio sống, tất loài Dendrobium phụ sinh bám gỗ Dendrobium phong phú chủng loại, loài lớn thứ hai họ lan với khoảng 1600 loài phân bố vùng thuộc nhiệt đới châu Á, tập trung nhiều Đông Nam Á Úc châu Điều kiện sinh thái Dendrobium đa dạng có nhiều lồi mọc lu hoa vùng lạnh, có lồi vùng nóng, có lồi trung gian có lồi thích an n va nghi với điều kiện khí hậu [4] tn to 1.1.3 Đặc điểm hình thái gh Dendrobium loại đa thân với nhiều giả hành, giả hành thường mang p ie thân với nhiều mọc xen kẽ, thân có nhiều mắt ngủ Hoa mọc từ oa nl [4] w thân thành chùm hoa hay hoa đơn độc Hoa có màu trắng, vàng đến tím d Dendrobium chia làm hai nhóm theo dạng thân chúng: dạng lu an thòng hay Nobile dạng thân mềm thường vùng lạnh Đà Lạt; dạng đứng u nf va hay Phalaenopsis dạng thân cứng thường sống vùng có khí hậu nóng [4] ll Hình dạng Dendrobium biến thiên: nhóm có giả hành dài m oi mang dọc theo chiều dài giả hành ấy, thường rụng hết hoa Long z at nh Tu (Dendrobium primulinum), Ý Thảo (Dendrobium grastio sisimum)…; nhóm giả hành to, ngắn, tận thường có 2-3 dài, bền, khơng rụng Hoa tập trung phần z gm @ tạo thành chùm đứng hay thòng Thủy Tiên trắng (Dendrobium farmeri), Thủy Tiên vàng (Dendrobium thyrisflorum)… Nhóm giả hành mảnh mai, dài l hay ngắn, có mọc theo chiều dài chúng, dai, bền, không rụng Hoa thường cô m co độc nách Hương Duyên (Dendrobium revolutum)… an Lu n va ac th si 1.2 Vài nét lan điểm hồng 1.2.1 Nơi phân bố Nhất điểm hồng Dendrobium draconis mục sư C.P.S Parish tìm Miến Điện vào năm 1862 Cây lan mọc khắp Đông Nam Á Tại Việt Nam lan mọc Đà Nẵng, Nha Trang, Langbian, Đà Lạt, Sông Bé, Lộc Ninh Theo sách Phạm Hoàng Hộ Trần Hợp gọi điểm hồng [1] 1.2.2 Đặc điểm thực vật học Đây giống phong lan cao chừng 40 cm có 7-9 đốt với vỏ bọc đầy lông đen Hoa nở vào mùa Xuân, màu trắng, họng có màu đỏ hay đỏ cam, ngang to lu 6-7 phân, thơm mùi cam, quýt, lâu tàn mọc từ đốt gần thân an va năm trước [5] Cây mọc núi, thích hợp với thời tiết mát mẻ, sống n chậu giá thể gh tn to 1.2.3 Hiện trạng nghiên cứu lan điểm hồng p ie 1.2.3.1 Hiện trạng Thuộc loài lan quý nằm sách đỏ Việt Nam nl w d oa 1.2.3.2 Những nghiên cứu lan điểm hồng an lu Rangsayatorn cs nghiên cứu việc bảo tồn giống Dendrobium draconis từ va hạt sau tạo protocorm chuyển thành chồi Kết cho thấy môi trường oi m triển tốt [21] ll u nf Vacin Went bổ sung 200 ml/l nước dừa phát triển tốt nhất, số lượng chồi phát z at nh Rangsayatorn nghiên cứu khả nhân nhanh chồi lan điểm hồng chồi với môi trường MS bổ sung mg/l BA 1mg/l NAA [20] z Phan Hùng Vĩnh cs nghiên cứu nhân giống in vitro lan điểm hồng @ l gm (Dendrobium draconis) loài lan rừng quý [18] m co Lê Thị Nhung nghiên cứu khả nhân nhanh chồi in vitro lan Nhất Diểm Hồng (Dendrobium dranconis Rchb.f) môi trường lỏng [6] an Lu Nhìn chung nghiên cứu lan điểm hồng Thế giới chưa n va nhiều bắt đầu Việt Nam Những nghiên cứu nghiên ac th si cứu bước đầu số tổ hợp môi trường chưa nghiên cứu tồn diện để tìm mơi trường tối ưu cho việc nhân giống loài lan kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.3 Tình hình ni trồng, sản xuất hoa lan Thế giới Việt Nam 1.3.1 Tình hình ni trồng sản xuất hoa lan Thế giới Ở châu Á, hoa lan biết đến đưa vào nuôi trồng từ sớm Đến kỉ 20, người Anh đến Singapore mở đầu cho giai đoạn lập trại nuôi trồng hoa lan kỹ thuật nuôi trồng lan Các giống lan nuôi trồng là: Arachnis, Vanda, Oncidium…đồng thời lai tạo loài lu Đầu kỷ 20, kỹ thuật gieo trồng hoa lan từ nhiều nấm cộng sinh có từ an va lan mẹ bắt đầu mở giai đoạn Với kĩ thuật nhân giống n hạt mở khả phát triển ngành lan Châu Âu Thế giới to gh tn Từ năm 1957, Thái Lan, Indonexia bắt đầu phát triển nuôi trồng lan quy mô p ie ngày lớn phục vụ cho việc xuất Các loài lan rừng, lan lai, lan cắt cành Thái Lan xuất qua nhiều nước Thế giới Có thể nói Thái Lan nl w nước điển hình cho ngành nuôi trồng xuất hoa lan nước Châu Á d oa Công nghiệp sản xuất, xuất hoa lan Thái Lan Thong Lor an lu Rakhpa Busobat Bangkok Sau thành cơng Thong Lor việc sản xuất va kinh doanh hoa lan rộng sang Ấn Độ, Sri Lanka, Philippin đến Thái ll u nf Lan học hỏi kinh nghiệm sản xuất kinh doanh hoa lan oi m Mọi kỹ thuật nhân giống nuôi trồng hoa lan trở thành phận chủ z at nh yếu ngành trồng hoa cảnh xuất nhiều nước Việc nuôi trồng để xuất hoa lan nhiều nước đạt đến số lượng hàng trăm ngàn giò z lan cành lan năm Nhu cầu trồng hoa lan quy mô công nghiệp ngày @ gm phát triển Ở nhiều nước nhà nuôi trồng hoa lan nghiệp dư chuyên nghiệp l lập hội hoa lan ngày nhiều Đã có 400 hội hoa lan Thế giới có m co nhiều chuyên sang hoa lan xuất Nhiều hội thảo hoa lan an Lu quốc tế tổ chức [4] n va ac th 10 si 2.2.3 Xử lý số liệu Kết phân tích xử lý thống kê phần mềm Microsoft excel 2007 phương pháp thống kê sinh học lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 23 si CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng số điều kiện môi trường nuôi cấy đến khả nhân protocorm lan điểm hồng Hạt lan nảy mầm sản xuất khối tế bào chưa phân hóa rõ ràng gọi protocorm Tất protocorm tiếp tục phát triển nhiều tuần, nhiều tháng hay chí nhiều năm phụ thuộc loài đủ lớn để tạo rễ (McKendrick, 2000) [16] Vì việc tìm mơi trường, điều kiện ni cấy thích hợp ni cấy lỏng để nhân nhanh protocorm, làm sở cho việc sản xuất nhanh giống lan điểm hồng có ý nghĩa thực tiễn lớn lu 3.1.1 Ảnh hưởng lượng sinh khối protocorm nuôi cấy ban đầu an va Protocorm (2 tháng tuổi) ni cấy bình tam giác 250 ml chứa 50 n ml môi trường MS + 15% nước dừa + 30g/l đường sucrose + mg/l BAP + mg/l tn to NAA với lượng mẫu nuôi cấy ban đầu 1, 3, 5, gam Kết thu sau 15 ie gh ngày trình bày bảng 3.1 p Bảng 3.1 Ảnh hưởng lượng mẫu đưa vào đến khả nhân nhanh protocorm Lượng mẫu (protocorm) sau 15 ngày (g) Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 1.59 4.76 7.82 8.8 59.00% 58.56% 56.33% 25.71% ll u nf va an lu oi m Lượng mẫu nuôi cấy ban đầu (g) d oa nl w lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 24 si 70% 59.00% 60% 58.56% 56.33% 50% 40% 30% Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 25.71% 20% 10% 0% gam gam gam gam lu an Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng lượng mẫu đưa vào đến khả nhân nhanh va n protocorm lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy to gh tn Kết bảng 3.1 biểu đồ 3.1 cho thấy, lượng mẫu đưa vào có tác động ie đến hình thành protocorm Với 50ml môi trường lỏng nuôi cấy p điều kiện sau 15 ngày ni cấy, lượng mẫu nuôi cấy ban đầu gam nl w có tỷ lệ tăng cao (59%), tiếp đến gam (58,56%) gam (56,33%) với tỷ oa lệ tăng xấp xỉ nhau, thấp mẫu gam với tỷ lệ tăng đạt 25,71% đồng thời d protocorm bị hóa nâu Như vậy, qua kết khảo sát nhận thấy lượng lu ll u nf va an mẫu nuôi cấy ban đầu gam thích hợp cho nhân nhanh protocorm oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 25 si lu an n va ban đầu khác (a): lượng mẫu nuôi cấy ban đầu 1g; (b): lượng mẫu ni ie gh tn to Hình 3.1 Protocorm phát sinh sau 15 ngày nuôi cấy với lượng mẫu nuôi cấy p cấy ban đầu 3g; (c): lượng mẫu nuôi cấy ban đầu 5g; (d): lượng mẫu nuôi cấy nl w ban đầu 7g d oa 3.1.2 Ảnh hưởng tốc độ lắc an lu Nuôi cấy lỏng lắc giúp tăng tối đa việc phát triển mô qua việc loại trừ va tượng phân cực nó; ngăn chặn ức chế mơ tiết cách hòa tan ll u nf chất này; giúp mơi trường thống khí, qua hơ hấp, tổng hợp protein hấp oi m thụ muối khoáng tế bào; môi trường lỏng gia tăng bề mặt tiếp xúc mô đối z at nh với chất dinh dưỡng Tốc độ lắc nuôi cấy lỏng liên quan nhiều đến khả tăng sinh tế bào Đó tốc độ lắc ảnh hưởng đến lưu thơng bình z ni cấy nồng độ oxy hồ tan (DO) bình @ gm Trong thí nghiệm chúng tơi tiến hành khảo sát ảnh hưởng tốc m co l độ lắc khác lên khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng Protocorm (2 tháng tuổi) nuôi cấy bình tam giác 250 ml chứa an Lu 50ml môi trường MS + 2mg/l BAP + 1mg/l NAA + 30g/l đường sucrose + 5g lượng n va ac th 26 si mẫu nuôi cấy ban đầu, đặt máy lắc với tốc độ 80, 100, 120 vòng/phút Kết sau 15 ngày ni cấy trình bày bảng 3.2 biểu đồ 3.2 Bảng 3.2 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy Lượng mẫu (protocorm) sau 15 ngày (g) 7.72 9.07 8.52 Tốc độ lắc 80 vòng/phút 100 vòng/phút 120 vòng/phút 90% Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 54.33% 81.40% 70.33% 81.40% lu 80% an 70.33% va 70% n 60% 54.33% gh tn to Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 50% 40% ie p 30% nl w 20% d oa 10% lu 0% 80 vòng/phút 120 vòng/phút va an 100 vòng/phút Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân nhanh protocorm lan u nf ll điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy m oi Khi nuôi cấy mơi trường lỏng lắc vịng, khối protocorm bị vỡ z at nh nhiều mảnh nhỏ, mảnh hình thành khối protocorm z Căn vào bảng 3.2, nhận thấy với tốc độ lắc 100 vịng/phút tỷ lệ tăng @ khối lượng protocorm (81,40%) cao Khi tăng tốc độ lắc lên 120 vòng/ phút gm l khối protocorm bị vỡ va đập mạnh vào nhau, vào thành bình khó m co hình thành khối protocorm dẫn đến tỷ lệ tăng khối lượng giảm 70,33% Và giảm tốc độ lắc xuống 80 vịng/ phút xảy tượng yếm khí an Lu tốc độ lắc chậm, protocorm bị hóa nâu (chết), tỷ lệ tăng khối lượng đạt n va 54,33% ac th 27 si lu an n va tn to Hình 3.2 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân nhanh protocorm lan ie gh điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy (a): Tốc độ lắc 80 vòng/phút; (b): tốc độ lắc 100 p vòng/phút; (c): tốc độ lắc 120 vòng/phút oa nl w 3.1.3 Ảnh hưởng hàm lượng đường sucrose Mô tế bào thực vật nuôi cấy in vitro chủ yếu sống theo phương thức dị d an lu dưỡng, nhiều trường hợp chúng sống bán dị dưỡng nhờ điều kiện va ánh sáng nhân tạo lục lạp có khả quang hợp Vì việc đưa vào mơi ll u nf trường nuôi cấy nguồn carbon hữu điều bắt buộc Nguồn carbon thông dụng oi m kiểm chứng sucrose, nồng độ thích hợp phổ biến 2-3%, song z at nh phụ thuộc vào mục đích ni cấy mà thay đổi có giảm xuống tới 0,2% (chọn dòng tế bào) tăng lên đến 12% (cảm ứng stress nước) z Trong thí nghiệm tiến hành khảo sát ảnh hưởng @ gm hàm lượng đường sucrose khác lên khả nhân protocorm lan điểm m co l hồng Sử dụng 5g protocorm (2 tháng tuổi) ni cấy bình tam giác 250ml an Lu chứa 50ml môi trường MS + 15% nước dừa + 2mg/l BAP + 1mg/l NAA với nồng n va ac th 28 si độ đường sucrose 10, 20, 30, 40 g/l, đặt máy lắc 100 vòng/phút Kết sau 15 ngày ni cấy trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ sucrose đến khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy Hàm lượng đường sucrose 10 g/l 20 g/l 30 g/l 40 g/l Lượng mẫu (protocorm) sau 15 ngày (g) 6.31 8.97 7.88 7.97 Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 26.13% 79.33% 57.53% 59.33% Kết bảng 3.3 cho thấy nồng độ đường sucrose có vai trị quan trọng lu an đến phát sinh protocorm Với hàm lượng đường sucrose 10 g/l sau 15 ngày n va ni cấy tỷ lệ tăng protocorm thấp (26,13%), tăng hàm lượng lên 20 g/l tn to tỷ lệ tăng protocorm đạt cao (79,33%) Nhưng tăng hàm lượng gh đường sucrose lên 30, 40 g/l tỷ lệ tăng lại giảm xuống 57,53% p ie 59,33% Như vậy, qua khảo sát nhận thấy hàm lượng đường sucrose thích d oa nl w hợp cho nhân nhanh protocorm lan điểm hồng môi trường lỏng 20 g/l ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 29 si 90% 79.33% 80% 70% 59.33% 57.53% 60% 50% Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 40% 26.13% 30% 20% 10% 0% 10 g/l 20 g/l 30 g/l 40 g/l lu an Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng nồng độ sucrose đến khả nhân nhanh protocorm n va lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z gm @ l Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ sucrose đến khả nhân nhanh protocorm lan m co điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy (a): Hàm lượng đường sucrose 10 g/l; (b): hàm lượng đường sucrose 40 g/l an Lu hàm lượng đường sucrose 20 g/l; (c): hàm lượng đường sucrose 30 g/l; (c): n va ac th 30 si 3.2 So sánh khả nhân nhanh protocorm môi trường lỏng môi trường đặc Sử dụng 5g protocorm (2 tháng tuổi) nuôi cấy bình tam giác 250ml chứa 50ml mơi trường MS + 15% nước dừa + 20g/l đường sucrose + 2mg/l BAP + 1mg/l NAA, đặt máy lắc với tốc độ 100 vòng/phút Sử dụng 5g protocorm (2 tháng tuổi) nuôi cấy môi trường MS + 15% nước dừa + 20g/l đường sucrose + 0,8% agar + 2mg/l BAP + 1mg/l NAA Sau 15 ngày nuôi cấy, kết trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 So sánh khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng môi lu trường lỏng đặc sau 15 ngày nuôi cấy an n va Lượng mẫu (protocorm) sau 15 ngày (g) 7,05 Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 80.00% 41.00% ie gh tn to Môi trường khảo sát Lỏng Đặc p 90% Phần trăm lượng mẫu tăng sau 15 ngày nuôi cấy 41% va an lu 30% d 40% oa 50% nl 60% w 70% 80% 80% u nf 20% ll 10% MT lỏng oi m 0% MT đặc z at nh z @ gm Biểu đồ 3.4 So sánh khả nhân nhanh protocorm lan điểm hồng môi m co l trường lỏng đặc sau 15 ngày nuôi cấy Bảng 3.4 biểu đồ 3.4 cho thấy, với lượng mẫu gam nuôi cấy ban an Lu đầu sau 15 ngày, tỷ lệ tăng lượng protocorm môi trường lỏng (80%) cao n va ac th 31 si gần gấp hai lần so với môi trường đặc (41%) Như vậy, kết luận khả nhân nhanh protocorm lan Nhất Điểm hồng môi trường lỏng hiệu Theo D Puchooa so sánh phát triển tế bào lan Dendrobium môi trường nuôi cấy in vitro khác Trong tất môi trường nghiên cứu để tăng sinh protocorm, số lượng tạo nhiều môi trường lỏng MS có bổ sung 0,1 mg/l BA, mg/l NAA, 15% nước dừa với tốc độ lắc 80 vòng/ phút [20] Kết nghiên cứu cho thấy môi trường lỏng MS bổ sung mg/l BAP, mg/l NAA, 20g/l đường sucrose, 15% nước dừa với tốc độ lắc 100 vịng/phút khả phát sinh protocorm cao lu an n va p ie gh tn to nl w d oa Hình 3.4 Protocorm lan điểm hồng sau 15 ngày nuôi cấy; (a): protocorm an lu môi trường đặc sau 15 ngày nuôi cấy; (b): protocorm môi trường lỏng sau 15 u nf va ngày nuôi cấy 3.3 Ảnh hưởng tổ hợp chất KTST (BAP, KIN, IBA) lên khả nhân ll oi m chồi từ protocorm z at nh Chất điều hòa sinh trưởng thực vật, đặc biệt auxin cytokinin có vai trị đặc biệt quan trọng trình tăng trưởng phát triển thực vật Sẽ khơng z gm @ có tăng trưởng khơng có mặt chất điều hịa sinh trưởng Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành khảo sát ảnh hưởng phối hợp l m co chất KTST khác (BAP, KIN, IBA) lên khả nhân chồi lan điểm hồng sau 60 ngày nuôi cấy với kết thu bảng 3.5 an Lu n va ac th 32 si Bảng 3.5 Ảnh hưởng KIN, BAP, IBA đến khả nhân chồi in vitro lan điểm hồng sau 60 ngày nuôi cấy Chất KTST (mg/l) KIN lu 1,5 Khả nhân chồi từ protocom an IBA Số chồi/ protocorm Chiều cao chồi (cm) Số lá/chồi 0,5 - 4,56 ± 1,88 0,29 ± 0,28 2,71 ± 1,04 1,0 - 4,22 ± 2.86 0,15 ± 0,1 2,47 ± 0,86 1,5 - 5,44 ± 3,68 0,16 ± 0,11 2,41 ± 0,73 2,0 - ± 3,46 0,17 ± 0,1 2,31 ± 0,62 2,5 - 5,78 ± 4,02 0,14 ± 0,07 2,46 ± 0,75 - 0,25 4,07 ± 4,1 0,21 ± 0,23 2,71 ± 1,25 - 0,5 3,63 ± 3,5 0,58 ± 0,38 3,44 ± 1,1 - 0,75 6,63 ± 5,04 0,16 ± 0,16 2,44 ± 1,01 - 1,0 6,15 ± 4,03 0,5 ± 0,33 3,53 ± 1,33 n va BAP p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z Hình 3.5 Nhân chồi in vitro lan điểm hồng sau 60 ngày nuôi cấy (a): Chồi @ gm phát sinh môi trường MS + 1,5 mg/l KIN + 0,5 mg/l BAP; (b): Chồi m co l phát sinh môi trường MS + 1,5 mg/l KIN + mg/l IBA Kết bảng 3.5 cho thấy mơi trường có bổ sung 1,5 mg/l KIN phối an Lu hợp với (0,5 – 2,5) mg/l BAP phối hợp với (0,25 – 1)mg/ l IBA có khả n va phát sinh chồi từ protocorm Ở môi trường bổ sung 1,5 mg/l KIN 1,0 mg/l ac th 33 si IBA khả phát sinh chồi cao (6,63 chồi/ protocorm) chiều cao chồi đạt 0,5 cm (hình 3.5b) Điều cho thấy nồng độ cytokinin cao kết hợp với auxin nồng độ thấp quan trọng việc tạo chồi Sự phối hợp BAP KIN nồng độ khác có ảnh hưởng đến phát triển chồi từ protocorm nhiên mức độ ảnh hưởng không cao so với tổ hợp KIN BAP (hình 3.5a); tổ hợp nồng độ 1,5 mg/l KIN + 0,5 mg/l BAP tốt cho phát triển chồi, số chồi/protocorm đạt 4,56; chiều cao chồi 0,29 cm; số lá/chồi 2,71 3.4 Quy trình nhân nhanh in vitro lan điểm hồng môi trường nuôi cấy lỏng Từ kết nghiên cứu chúng tơi rút quy trình nhân lu an nhanh lan điểm hồng môi trường nuôi cấy lỏng sau: va n Hạt lan nảy mầm môi trường MS + 15% nước dừa + 30g/l đường sucrose + 1% than hoạt tính + 0,2 mg/l NAA p ie gh tn to d oa nl w Protocorm nuôi cấy môi trường MS + 15% nước dừa + 30g/l đường sucrose + 2mg/l BAP + 1mg/l NAA lu ll u nf va an Protocorm ni cấy bình tam giác 250ml chứa 50ml mơi trường MS + 15% nước dừa + 20g/l đường sucrose + 2mg/l BAP + 1mg/l NAA, đặt máy lắc 100 vịng/phút, với lượng mẫu đưa vào ni cấy ban đầu 5g để nhân nhanh protocorm oi m z at nh z Nuôi cấy protocorm môi trường MS + 15% nước dừa + 30g/l đường sucrose + 1% than hoạt tính + 0,8% agar + 1,5 mg/l KIN + mg/l IBA để nhân chồi m co l gm @ an Lu n va ac th 34 si KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu, rút kết luận sau: [1] Môi trường MS + 15% nước dừa + 20 g/l đường sucrose + mg/l BAP + mg/l NAA chứa gam lượng mẫu (protocorm) nuôi cấy ban đầu, đặt máy lắc với tốc độ 100 vòng/phút đạt tỷ lệ tăng 80% sau 15 ngày nuôi cấy [2] Hiệu nhân protocorm môi trường lỏng cao gấp lần so với môi trường đặc [3] Môi trường MS + 15% nước dừa + 30 g/l đường sucrose + 1% than hoạt tính + lu an 0,8% agar + 1,5 mg/l KIN + mg/l IBA thích hợp cho việc nhân chồi từ n va protocorm tn to Kiến nghị ie gh Tiếp tục nghiên cứu, khảo sát thêm số điều kiện nuôi cấy khác ảnh p hưởng đến khả nhân nhanh lan điểm hồng môi trường nuôi cấy lỏng để hồn thiện quy trình nhân nhanh lồi lan quy mơ lớn d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 35 si TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu tiếng Việt Bùi Bá Bổng (1995), Nhân giống nuôi cấy mô, Sở khoa học công nghệ môi trường An Giang Bùi Thị Tường Thu, Trần Văn Minh (2007), Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng đến q trình ni cấy phát sinh tế bào soma phơi vơ tính hoa lan (Dendrobium, Phalaenopsis, Cymbidium), Hộ nghị Khoa học Công nghệ 2007 Dương Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô tế bào thực vật II, NXB Đại học Quốc lu gia TP HCM an n va Đào Thanh Vân (2008), Giáo trình hoa lan, NXB Nơng nghiệp tn to Hồ Thiên Hoàng cs (2009), Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh gh trưởng thực vật đến trình nhân giống in vitro lan Ngọc Điểm Đỏ (Rhynchostylis p ie gigantea rild Var Rubra (red), Báo cáo hội nghị Khoa học lần III, Đại học Công w nghiệp TP HCM oa nl Lê Thị Nhung (2010), Nghiên cứu khả nhân nhanh chồi in vitro lan d điểm hồng (Dendrobium draconis Rchb.f) môi trường lỏng lu học Kỹ thuật Hà Nội u nf va an Lê Văn Hồng (2007), Cơng nghệ ni cấy mơ tế bào thực vật, NXB Khoa ll Nguyễn Đức Lượng (2002), Công nghệ tế bào, NXB Đại học quốc gia TP HCM oi m dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội z at nh Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật – Nghiên cứu ứng z 10 Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lễ (2009), Ảnh hưởng chất điều hòa sinh @ gm trưởng thực vật lên phát sinh chồi rễ phong lan giã hạt Dendrobium l anosmum, Tạp chí Khoa học Công nghệ, tập 47 (số 5), trang 99 – 107 m co 11 Phan Hùng Vĩnh (2009), Nghiên cứu nhân giống in vitro số loài lan rừng an Lu quý 12 Trần Hợp (1998), Phong lan Việt Nam, Nxb Nông Nghiệp, TP HCM n va ac th 36 si 13 Trịnh Cẩm Tú Bùi Trang Việt (2006), Sử dụng kĩ thuật nuôi cấy in vitro để nghiên cứu phát triển phát hoa Dendrobium Sonia, Tạp chí phát triển Khoa học Cơng nghệ, Tập (số 9), trang 83-88 B Tài liệu tiếng Anh 14 Guek Eng Sim et al (2007), Induction of in vitro flowering in Dendrobium Madame Thong-In (Orchidaceae) seedlings is associated with increase in endogenous N6- (D2 isopentenyl) – adenine (iP) and N6 – (D2 – isopentenyl) – adenosine (iPA) levels, Plant Cell Rep, 27 (8): 1281 -1289 15 Khin Lay Nge et al (2006), Chitosan as a growth stimulation in orchid tissue lu culture, Plant Science, 170: 1185 – 1190 an va 16 McKendrick et al (2000), Symbiotic germination and development of myco- n heterotrophic plants in nature: ontogeny of Corallorhiza trifida and gh tn to characterization of its mycorrhizal fungi, New Phytol., 145, pp 523-537 p ie 17 Murashige and Skoog (1962), A revised medium for rapid growth and bioassays w with tobacco tissue cultures, Physiol Plant, 15: 473 – 497 oa nl 18 Narayanswamy (1997), Plant cell and Tissue culture, Tata McGraw – Hill d publishing Co Ltd., New Dehli, India, pp 116 – 118 lu va an 19 Puchooa (2004), Comparison of Different Culture Media for the In vitro Culture of Dendrobium (Orchidaceae), International journal of agriculture & ll u nf biology, 6(5): 884-888 m oi 20 Rangsayatorn (2009), Micropropagation of Dendrobium draconis Rchb.f from z at nh thin cross – section culture, Scientia Horticulture, 122(4): 662 – 665 z 21 Rangsayatorn et al (2009), Slow growth in vitro conservation of Dendrobium @ Draconis Rchb.f effect of black kwao krua (Mucuna collettii lace), ISHS Acta gm m co l Horticulturae, 1(69): 829 an Lu n va ac th 37 si
Ngày đăng: 17/07/2023, 09:36
Xem thêm: