(Luận văn) nghiên cứu khả năng tái sinh cây khoai từ dioscorea esculenta (lour ) burkill bằng kỹ thuật in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÀN VĂN ĐÔNG Tên đề tài: T lu an n va KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC p ie gh tn to NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH CÂY KHOAI TỪ [Dioscorea esculenta (lour.) burkill] BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO d oa nl w an lu Hệ đào tạo u nf va : Chính quy ll Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học : CNSH - CNTP oi m Khoa : 2010 - 2014 z at nh Khoá học z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, 2014 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÀN VĂN ĐÔNG Tên đề tài: T lu NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH CÂY KHOAI TỪ [Dioscorea esculenta (lour.) burkill] BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO an n va p ie gh tn to d oa nl w KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC an lu : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học : 42 - CNSH z at nh Khoá học oi Lớp : CNSH - CNTP m Khoa ll u nf va Hệ đào tạo : 2010 - 2014 z Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, 2014 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Th.S Nguyễn Thị Tình tạo điều kiện thuận lợi hướng dẫn tận tình chu đáo q trình thực tập Em xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến KS Lã Văn Hiền dành nhiều thời gian trực tiếp hướng dẫn em thực nghiên cứu đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến tồn thể giáo viên Khoa Cơng nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên dạy bảo em suốt trình học tập lu an Và cuối cùng, em xin cảm ơn quan tâm, giúp đỡ, động viên tinh thần va người thân bạn bè suốt thời gian qua n Em xin chân thành cảm ơn! ie gh tn to p Thái Nguyên, ngày tháng năm 2014 Sinh viên d oa nl w an lu ll u nf va Làn Văn Đông oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CV : Coefficient of Variation CT : Công thức Đ/C : Đối chứng IAA : Indol axetic acid iP : N6-(2-isopentyl)adenin Kinetin : 6-Furfurylaminopurine KIN : Kinetin oa nl w AND : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s LSD d : α - Naphlene axetic acid u nf va TN an lu NAA : Thí nghiệm ll m : Woody Plant Medium oi WPM z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 26 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khoáng MS tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 28 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 29 lu Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi an Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 31 n va Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai gh tn to nhân nhanh chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 33 ie Từ (sau tuần nuôi cấy) 34 p Bảng 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến d oa nl w khả rễ chồi Khoai Từ (sau tuần nuôi cấy) 36 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ q trình phân hóa phản phân hóa tế bào thực vật Hình 2.2 Cây Khoai Từ 12 Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta ) (sau 20 ngày nuôi cấy) 27 Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ khoáng MS tới khả tái sinh lu an chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 28 n va Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi gh tn to Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 30 Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 32 ie p Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân w nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) .33 oa nl Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ d (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) .35 an lu Hình 4.7 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả ll u nf va rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) (sau tuần nuôi cấy) 36 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC Trang Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài .2 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật lu an 2.1.1 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật va 2.1.1.1 Tính tồn tế bào thực vật n 2.1.1.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào tn to 2.1.1.3 Cơ chế di truyền thông qua hệ tế bào ie gh 2.1.2 Các giai đoạn ni cấy mơ tế bào thực vật p 2.1.2.1 Khử trùng mẫu cấy khởi động 2.1.2.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy w oa nl 2.1.2.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi .5 2.1.4.4 Tạo hoàn chỉnh d an lu 2.1.2.5 Giai đoạn đưa đất .6 va 2.1.3 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật u nf 2.1.3.1 Các muối khoáng đa lượng vi lượng ll 2.1.3.2 Nguồn cacbon .7 m oi 2.1.3.3 Các vitamin acid amin .8 z at nh 2.1.3.4 Các chất điều hòa sinh trưởng 2.1.3.5 Các chất bổ sung, làm thay đổi trạng thái môi trường z 2.1.3.6 pH môi trường 10 @ gm 2.1.4 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật .10 l 2.1.4.1 Điều kiện vô trùng 10 m co 2.1.4.2 Môi trường vật lý 10 2.2 Giới thiệu Khoai Từ 11 an Lu 2.2.1 Nguồn gốc phân loại 11 n va ac th si 2.2.2 Đặc điểm thực vật học Khoai Từ .12 2.2.3 Phân bố sinh thái 13 2.2.4 Công dụng Khoai Từ 14 2.3 Tình hình nghiên cứu Khoai Từ nước giới 15 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 Phần 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 18 3.1.1 Vật liệu thực vật 18 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 18 lu an 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 va 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng 18 n 3.3.1 Hóa chất 18 tn to 3.3.2 Thiết bị 18 ie gh 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu .19 p 3.4.1 Nội dụng nghiên cứu .19 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu .19 w oa nl 3.4.2.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ 19 d an lu 3.4.2.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 va tới khả tái sinh chồi Khoai Từ 21 u nf 3.4.2.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: nghiên cứu ảnh hưởng số ll Cytokinin (BA, Kinetin) đến khả nhân nhanh Khoai Từ 22 m oi 3.4.2.4 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: nghiên cứu ảnh hưởng số auxin z at nh (NAA, IAA) đến khả rễ chồi Khoai Từ 23 3.5 Phương pháp đánh giá xử lý số liệu 24 z 3.5.1 Phương pháp đánh giá .24 @ gm 3.5.2 Phương pháp xử lý số liệu .25 l Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .26 m co 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta ) 26 an Lu n va ac th si 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khoáng MS tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 28 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 29 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 31 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 33 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) .34 lu an 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả va rễ Khoai Từ (Dioscorea esculenta) 36 n Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 tn to 5.1 Kết luận 38 ie gh 5.2 Kiến nghị 38 p TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 I Tiếng Việt 39 w d oa nl II Tiếng Anh .40 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Khoai Từ [Dioscorea esculenta (Lour.) Burkill] thuộc họ củ nâu, chi Dioscorea có củ truyền thống, cịn gọi với nhiều tên khác củ từ, từ lơng, từ gai Chúng có đặc điểm thân leo, loài giàu tinh bột Củ Khoai Từ giàu nguồn carbohydrate chất xơ, hàm lượng chất béo mức thấp tốt cho nguồn dinh dưỡng [22] Cùng với số loài khác Khoai Mỡ, củ Khoai Từ trở thành nguồn lương thực, thực phẩm có ý nghĩa quan trọng người nông dân quốc gia vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, đặc biệt nước châu Phi [25] lu an Củ Khoai Từ nguồn nguyên liệu quan trọng công nghiệp dược phẩm va y học, chất Diosgenin có củ Khoai Từ sử dụng để tổng hợp n Cortisone, Pregnenolone, progesterone sản phẩm steroid khác có hoạt tính Trong thực tế, nhân giống in vitro loài Dioscorea tác giả tiến ie gh tn to estrogen làm giảm cholesterol máu [37] p hành nghiên cứu cách khoảng 30 năm sau tăng lên nhanh Các tác giả w sử dụng phận nuôi cấy khác cho đối tượng nghiên cứu họ oa nl Kohmura cs (1995) sử dụng non làm mẫu nuôi cấy [36] Theo Alizadeh cs (1998) [21] Twyford Mantell, (1996) sử dụng mẫu cấy rễ [50] Tor cs d an lu (1998) dùng tế bào protoplasts [49] Nhiều tác Mantell Hugo (1989), va Jasik Mantell (2000), Fotso cs (2013), Borges cs (2004) thực u nf nghiên cứu đối tượng Khoai Mỡ với mẫu củ bi [29], [30], [32], [40] ll Tuy nhiên, có cơng trình nghiêm cứu hoàn thiện nhân giống Khoai Từ m oi phương pháp in vitro công bố Hầu hết nghiên cứu dừng lại việc tách chiết z at nh hợp chất hữu có hoạt tính hóa học sinh học củ Khoai Từ Trong tự nhiên, Khoai Từ tái sinh thông qua hạt hay đoạn thân tươi hay củ z Nhưng suất củ giảm nhiễm virus loài tuyến trùng, củ bị nhiễm @ gm truyền cho hệ sau làm giảm chất lượng củ [49] Nhân giống Khoai Từ phương l pháp truyền thống trở nên phổ biến hầu hết người nông dân, song kỹ thuật m co nhân giống cho hiệu thấp Nuôi cấy mô tế bào thực vật phương pháp nhân giống hiệu cao Với phương pháp nhân giống invitro đảm bảo chủ động số an Lu lượng lớn giống, đồng đều, bệnh Xuất phát từ yêu cầu trên, n va ac th si 43 50 Twyford CT and Mantell SH (1996), “Production of somatic embryos and plantlets from root cells of Greater Yam”, Plant Cell Tiss.Org.Cult, 46, pp.17-26 51 Ukaegbu M and Okpuzor J (2010), “A Study Of Changes In Some Biochemical Parameters During Bacterial Fermantation Of Dioscorea EsculentaTubers”, Report and Opinion, 2(6), pp.88-93 52 Yan H and Yang L., (2011), “Improved growth and quality of Dioscorea fordii Prain et Burk and Dioscorea alata plantlets using temporary immersion system”, Afr J Biotechnol, 10(83), pp.19444-19448 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 44 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số kết ảnh thí nghiệm lu MS an B5 WPM Hình Ảnh hưởng mơi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ n va p ie gh tn to d oa nl w va an lu 1/2MS ll u nf MS oi m z at nh z m co l gm @ 4/3MS 2MS an Lu Hình Ảnh hưởng nồng độ tối ưu mơi trường khống (MS,B5, WPM) tới khả tái sinh chồi Khoai Từ n va ac th si 45 lu an va n GA3 0,8 mg/l GA3 0,5 mg/l p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh GA3 2,0 mg/l z m co l gm @ Hình Ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Khoai Từ an Lu n va ac th si 46 lu an n va gh tn to BA 0,0 mg/l BA 2,0 mg/l p ie d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z gm @ BA 3,0 mg/l BA 4,0 mg/l m co l Hình Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ an Lu n va ac th si 47 lu an n va BA 1,5 mg/l + Kinetin 2,0 mg/l p ie gh tn to BA 1,5 mg/l + Kinetin 1,0 mg/l d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z gm @ BA 1,5 mg/l + Kinetin 3,0 mg/l BA 1,5 mg/l + Kinetin 4,0 mg/l l Khoai Từ m co Hình Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi an Lu n va ac th si 48 lu an n va tn to NAA 2,0 mg/l NAA 4,0 mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Khoai Từ p ie gh d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z l gm @ NAA 2,0 mg/l + IAA 0,0 mg/l NAA 2,0 mg/l + IAA 1,0 mg/l m co Hình Ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp IAA đến khả rễ Khoai Từ an Lu n va ac th si 49 Phụ lục 2: Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE E1 11/5/14 22:46 :PAGE Anh huong cua moi truong MS, B5, WPM toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu RIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1755.56 877.778 79.00 0.000 * RESIDUAL 66.6669 11.1112 * TOTAL (CORRECTED) 1822.22 227.778 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E1 11/ 5/14 22:46 :PAGE Anh huong cua moi truong MS, B5, WPM toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu an n va CT$ NOS 3 p TLTS 93.3333 70.0000 60.0000 w ie gh tn to MEANS FOR EFFECT CT$ - d oa nl SE(N= 3) 1.92450 5%LSD 6DF 6.65717 - u nf va an lu ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E1 11/ 5/14 22:46 :PAGE Anh huong cua moi truong MS, B5, WPM toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - ll STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 15.092 3.3333 4.5 0.0001 oi z at nh TLTS GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 74.444 m VARIATE | | | | z Bảng 4.2 Xác định nồng độ tối ưu mơi trường khống MS tới khả tái @ sinh chồi Khoai Từ gm m co l BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE E2 11/ 5/14 23: :PAGE Anh huong nong toi uu moi truong khoang MS toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN an Lu VARIATE V003 TLTS F RATIO PROB ER n va ac th si 50 SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1091.67 363.889 21.83 0.000 * RESIDUAL 133.333 16.6667 * TOTAL (CORRECTED) 11 1225.00 111.364 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E2 11/ 5/14 23: :PAGE Anh huong nong toi uu moi truong khoang MS toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 TLTS 96.6667 83.3333 80.0000 70.0000 lu an n va SE(N= 3) 2.35702 5%LSD 8DF 7.68601 - p ie gh tn to ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E2 11/ 5/14 23: :PAGE Anh huong nong toi uu moi truong khoang MS toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 82.500 d TLTS oa nl w VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.553 4.0825 4.9 0.0004 | | | | lu chồi Khoai Từ u nf va an Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 tới khả tái sinh ll BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE E3 12/ 5/14 23:33 :PAGE Anh huong nong GA3 toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu oi m LN SOURCE OF VARIATION z at nh VARIATE V003 TLTS DF z SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 777.778 155.556 9.33 0.001 * RESIDUAL 12 200.000 16.6667 * TOTAL (CORRECTED) 17 977.778 57.5163 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E3 12/ 5/14 23:33 :PAGE Anh huong nong GA3 toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu m co l gm @ an Lu MEANS FOR EFFECT CT$ - n va ac th si 51 CT$ NOS 3 3 3 TLTS 90.0000 86.6667 93.3333 100.000 83.3333 80.0000 SE(N= 3) 2.35702 5%LSD 12DF 7.26279 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E3 12/ 5/14 23:33 :PAGE Anh huong nong GA3 toi kha nang tai sinh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE lu GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 88.889 an va TLTS STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.5840 4.0825 4.6 0.0009 | | | | n tn to Bảng 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi ie gh Khoai Từ p BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE C4 20/ 5/14 16:47 :PAGE Anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai tu w LN oa nl VARIATE V003 HSN SOURCE OF VARIATION DF d SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 940000 188000 37.60 0.000 * RESIDUAL 12 600000E-01 500000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.00000 588235E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE C4 20/ 5/14 16:47 :PAGE Anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai tu ll u nf va an lu oi m z at nh MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ m co l gm HSN 1.33333 1.56667 1.76667 2.06667 1.83333 1.63333 @ NOS 3 3 3 z ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE C4 an Lu SE(N= 3) 0.408248E-01 5%LSD 12DF 0.125795 20/ 5/14 16:47 n va ac th si 52 :PAGE Anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 1.7000 HSN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.24254 0.70711E-01 4.2 0.0000 | | | | Bảng 4.5 Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Khoai Từ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE C5 22/ 5/14 17:33 :PAGE Anh huong cua BA ket hop Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai Tu lu VARIATE V003 HSN an LN SOURCE OF VARIATION DF n va p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.74933 437333 43.73 0.000 * RESIDUAL 10 100000 100000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.84933 132095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE C5 22/ 5/14 17:33 :PAGE Anh huong cua BA ket hop Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai Tu CT$ nl w MEANS FOR EFFECT CT$ NOS 3 3 oa d va an lu HSN 1.26667 1.83333 2.36667 2.10000 1.90000 ll u nf SE(N= 3) 0.577350E-01 5%LSD 10DF 0.181925 - oi m ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE C5 22/ 5/14 17:33 :PAGE Anh huong cua BA ket hop Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cay Khoai Tu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.36345 0.10000 5.2 0.0000 z | | | | @ HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.9067 z at nh VARIATE l gm Bảng 4.6 nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ Khoai Từ m co BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu an Lu VARIATE V003 TLRR n va ac th si 53 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 13796.3 3449.07 517.36 0.000 * RESIDUAL 10 66.6666 6.66666 * TOTAL (CORRECTED) 14 13862.9 990.210 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR/C FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu VARIATE V004 SR/C LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.23067 1.55767 101.59 0.000 * RESIDUAL 10 153334 153334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.38400 456000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu an n va CT$ NOS 3 3 p TLRR 20.0000 70.0000 90.0000 73.3333 50.0000 SR/C 2.16667 3.00000 3.20000 3.46667 2.73333 oa nl w ie gh tn to MEANS FOR EFFECT CT$ - d SE(N= 3) 1.49071 0.632456E-01 5%LSD 10DF 4.69728 0.199289 - an lu va ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE E5 18/ 5/14 10:42 :PAGE Anh huong cua NAA den khanang re cay Khoai tu u nf ll F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 31.468 2.5820 4.5 0.0000 0.46884 0.10954 3.8 0.0000 oi z at nh TLRR SR/C GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 57.067 15 2.9133 m VARIATE | | | | z gm @ Bảng Xác định nồng độ NAA kết hợp IAA đến khả rễ Khoai Từ m co l BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA ket hop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu VARIATE V003 TLRR SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES an Lu LN F RATIO PROB ER LN n va ac th si 54 ============================================================================= CT$ 398.944 79.7889 37.79 0.000 * RESIDUAL 12 25.3334 2.11111 * TOTAL (CORRECTED) 17 424.278 24.9575 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR/C FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA ket hop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu VARIATE V004 SR/C LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.91611 383222 45.99 0.000 * RESIDUAL 12 999999E-01 833333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.01611 118595 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA ket hop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 p ie gh SR/C 3.56667 3.66667 4.00000 4.13333 4.60000 4.13333 nl w TLRR 87.0000 90.3333 95.6667 90.6667 86.3333 80.3333 d oa SE(N= 3) 0.838871 0.720082E-01 5%LSD 12DF 2.58485 0.221882 - lu u nf va an ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE T7 21/ 5/14 15:28 :PAGE Anh huong cua nong NAA kethop IAA den kha nang re choi cay Khoai tu ll F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.9957 1.4530 1.6 0.0000 0.36501 0.12472E-01 3.1 0.0000 oi z at nh TLRR SR/C GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 88.389 18 4.0167 m VARIATE | | | | z m co l gm @ an Lu n va ac th si 55 Phụ lục 3: Môi trường Table 1: Preparation of modified Murashige AND Skoog’s MS medium Thứ tự Muối khoáng Stock (g/l lấy (ml) (mg/l) KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 lu an va n gh tn to p ie IV nl w Na2EDTA.2H2O 1.650,0 20 1.900,0 370,0 22,3 10 10,6 10 0,83 10 6,2 0,25 27,85 10 3,724 oa 37,25 mg/100ml d lu Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 100 0,1 0,1 100 0,5 0,5 u nf va an Vitamin Nồng độ 82,5 III V Thể tích cần NH4NO3 I II Dung dịch Thiamin acid ll oi m Pyridoxine HCl Inositol 100,0 z at nh Sucrose Agar 30.0000,0 8.000,0 z 5,8 m co l gm @ pH an Lu n va ac th si 56 Bảng 2: Môi trường B5 (Gamborg’s B5 medium) Thứ tự Dung dịch Stock Thể tích cần lấy Nồng độ (g/l (ml) (mg/l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.2 H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0.0025 0,025 CoCl2.6H2O 0.0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 Muối khoáng lu an n va p ie gh tn to 160 d oa mg/100ml Nicotinic acid 1,0 Thiamin HCl 100 10 10,0 Pyridoxine HCl 100 1,0 m 8000,0 oi Sucrose 5,6 - 5,8 z at nh Agar pH ll u nf 100 va an lu Vitamins 27,85 nl w Inositol 10 z m co l gm @ an Lu n va ac th si 57 Bảng 3: Mơi trường WPM - Woody Plant Medium lu Muối khống Nồng độ (mg/l) Muối khoáng Nồng độ (mg/l) NH4NO3 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8.6 CaCl2.2H2O 96 Na2EDTA.22O 37,2 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2 SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 an Các chất hữu n va 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 Thiamine HCl 1,0 Glycine 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 p ie gh tn to Myo-inositol 5,6 - 5,8 d oa nl w pH ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si