(Luận văn) nghiên cứu khả năng tái sinh in vitro của một số giống đậu dải (cowpea vigna unguiculata (l )) phục vụ cho tạo giống mới

Đại học Thái Nguyên TRNG I HC NễNG LM NGUYN VĂN CHIỂN Tên đề tài: lu an ″NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH IN VITRO CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU DẢI (Cowpea - Vigna unguiculata (L.)) PHỤC VỤ CHO TẠO GIỐNG MỚI″ n va p ie gh tn to d oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC va an lu u nf Hệ đào tạo : Chính quy ll : Cơng nghệ sinh học Khóa học : CNSH - CNTP z at nh Khoa oi m Chuyên ngành : 2010 – 2014 z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên - 2014 n va ac th si Đại học Thái Nguyên TRNG I HC NÔNG LÂM NGUYỄN VĂN CHIỂN Tên đề tài: lu ″NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH IN VITRO CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU DẢI (Cowpea - Vigna unguiculata (L.)) PHỤC VỤ CHO TẠO GIỐNG MỚI″ an n va p ie gh tn to KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC d oa nl w Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Khóa học ll u nf va an lu : Chính quy : Công nghệ sinh học : CNSH - CNTP : 2010 – 2014 oi m Giáo viên hướng dẫn: TS Hà Thị Thúy Viện Di truyền nông nghiệp Việt Nam Th.S Lương Thị Thu Hường Khoa CNSH – CNTP – Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên z at nh z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên - 2014 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp trước hết xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Hà Thị Thúy, phó Viện trưởng Viện Di Truyền Nông Nghiệp Cô tạo điều kiện thuận lợi tận tình hướng dẫn tơi tồn q trình thực tập hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới cô ThS Lương Thị Thu Hường khoa CNSHCNTP, trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên hướng dẫn, giúp thực tập hồn thành khóa luận lu an Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Hoàng Thị Giang, ThS Nguyễn n va Thị Huế tận tình bảo tơi suốt thời gian thực tập khóa ln phịng thí tn to nghiệm trọng điểm quốc gia Công nghệ tế bào thực vật – Viện Di Truyền Nơng Tơi xin chân thành cảm ơn tồn thể anh chị làm việc phịng thí p ie gh Nghiệp nghiệm trọng điểm quốc gia Công nghệ tế bào thực vật – Viện Di Truyền Nông w oa nl Nghiệp, giúp đỡ tạo điều kiện tối đa cho tơi tồn q trình thực tập d Tôi xin gửi lời cảm ơn biết ơn sâu sắc tới tập thể thầy cô giảng lu va an dạy khoa CNSH – CNTP, Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên hướng dẫn, u nf giảng dạy tơi suốt q trình học tập trường ll Cuối xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln bên động viên tạo m oi điều kiện giúp tơi hồn thành khóa luận z at nh Thái Nguyên, ngày 01 tháng 06 năm 2014 z Sinh viên m co l gm @ Nguyễn Văn Chiển an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to : Acid deoxyribonucleic BAP : 6-Benzylaminopurine B5 : Gamborg and Miller , 1968 CT : Công thức cs : Cộng CV : Coefficient of Variation Đậu đen : Đậu đen quốc phòng Cao Bằng Đậu thúa đắm : Đậu Thúa đắm Nghệ An IAA : Indol axetic acid IM : Môi trường LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s, 1962 MSB : MS salts + B5 vitamins : α - Naphlene axetic acid w ADN oa nl NAA : United States Department of Agriculture USDA d ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết so sánh hiệu khử trùng hóa chất khác với thời gian xử lý khác 16 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường tới khả tái sinh đậu dải 18 Bảng 4.3 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm 20 lu Bảng 4.4 Kết đánh giá ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh in an vitro nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm 22 va n Bảng 4.5 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro to gh tn nhân nhanh từ nốt mầm kèm mầm 24 p ie Bảng 4.6 Kết đánh giá ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm kèm mầm 26 oa nl w Bảng 4.7 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 27 d an lu Bảng 4.8 Kết đánh giá ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh in u nf va vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 28 Bảng 4.9 Đánh giá ảnh hưởng loại mô cấy đến khả tái sinh nhân ll oi m nhanh đậu dải 29 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC Trang PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học lu 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn an PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU va n 2.1 Giới thiệu chung đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) tn to 2.1.1 Nguồn gốc phân bố ie gh 2.1.2 Phân loại p 2.1.3 Đặc điểm thực vật học đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) nl w 2.1.4 Giá trị đậu dải (đậu đũa) (Vigna unguiculata (L.)) oa 2.1.5 Tình hình nghiên cứu tái sinh in vitro đậu dải d 2.2 Cơ sở khoa học nhân giống trồng nuôi cấy mô tế bào lu va an 2.2.1 Tính tồn tế bào thực vật u nf 2.2.2 Sự phân hóa phản phân hóa ll 2.3 Một số chất điều hịa sinh trưởng ni cấy mơ tế bào thực vật m oi 2.3.1 Auxin z at nh 2.3.2 Cytokinin 10 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN z gm @ CỨU 11 3.1 Đối tượng (vật liệu) phạm vi nghiên cứu 11 l m co 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 11 3.1.2 Hóa chất sử dụng phạm vi nghiên cứu 11 an Lu 3.1.3 Thiết bị sử dụng 11 n va ac th si 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 11 3.3 Nội dung nghiên cứu 11 3.4 Phương pháp nghiên cứu 12 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng mẫu đến khả nảy mầm số giống đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) 12 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường tới khả tái sinh in vitro số giống đậu dải 13 3.4.3 Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng loại mơ cấy chất điều hịa sinh lu trưởng đến tái sinh in vitro 14 an PHẦM 4: KẾT QUẢ, NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16 va n 4.1 Kết thí nghiệm xác định phương pháp khử trùng mẫu 16 tn to 4.2 Kết thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng mốt số môi trường ie gh đến khả tái sinh in vitro 17 p 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng loại mô cấy chất điều hòa sinh w trưởng đến khả tái sinh, nhân chồi 20 oa nl 4.3.1 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh in d vitro nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm 20 lu va an 4.3.2 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh u nf in vitro nhân nhanh từ nốt mầm kèm mầm 23 ll 4.3.3 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh m oi in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 27 z at nh 4.3.4 Kết đánh giá ảnh hưởng loại mô cấy đến khả tái sinh nhân nhanh đậu dải 29 z gm @ PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 5.1 Kết luận 31 l m co 5.2 Kiến nghị 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 an Lu PHỤ LỤC n va ac th si PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Cây đậu dải (Vigna unguiculata) biết đến trồng từ lâu đời Đậu dải hay gọi đậu cowpea, lương thực có tiềm việc cung cấp nguồn protein cho người gia súc Hạt đậu chứa khoảng 2030% protein gần 60% carbohydrate (Aurora, 1995) [6]; (Aguirre cs, lu 1998) [5]; (Castro cs, 2002) [11] Đậu dải nguồn thức ăn quan an trọng cho phụ nữ mang thai hạt đậu giàu axit folic dinh dưỡng cần va n thiết cho phát triển thai nhi Lá đậu dải cịn non dùng làm gh tn to rau ăn ngon bổ Thân đậu sau thu hoạch sử dụng để ủ làm ie thức ăn cho gia súc Đậu dải bao gồm có ba lồi phụ: đậu đen (Vigna unguiculata p subsp cylindrica), đậu đũa (Vigna unguiculata subsp sesquipedalis) đậu dải nl w trắng rốn nâu (Vigna unguiculata subsp unguiculata) Đậu đũa loại rau phổ d oa biến thị trường châu Á Đậu dải trồng phổ biến vùng khí hậu an lu nóng ấm, nửa khô hạn nước châu Phi, Ấn Độ, Mexico, miền Nam u nf va nước Mỹ Việt Nam thuộc vùng sinh thái thích hợp cho nhóm đậu này, nhiên lâu phải nhập thêm đậu từ nước Nghiên cứu ll oi m giải pháp gia tăng sản lượng đậu dải nước mang lại ích lợi kinh tế z at nh cho đất nước, cải thiện sức khỏe cộng đồng z Đậu dải có khả chịu hạn, cải tạo đất tốt đậu ve (Phaseolus vulgaris) có rễ ăn sâu cố định đạm mạnh Tuy nhiên theo nghiên cứu nước ngoài, suất canh tác (trọng lượng thu hoạch đơn vị diện tích) giống đậu dải đạt 20-30% so với suất thực thụ Nguyên nhân gây giảm suất sâu bệnh tuyến trùng, bệnh thối rễ, nấm hại lá, trùng (bọ xít, rệp, sâu ăn ), thời tiết bất thường v.v (Duke , 1990) [14] Việt Nam khơng nằm ngồi yếu m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to tố bất thuận Việc chọn tạo giống đậu có khả chống chịu giúp cải thiện suất đồng thời giảm thiểu sử dụng thuốc trừ sâu, phân bón, góp phần tăng hiệu canh tác, bảo vệ môi trường Để phục vụ cho công tác chọn tạo giống công nghệ tế bào đặc biệt chọn giống thông qua chuyển gen đột biến tế bào sôma, tạo giống có khả chống chịu, kháng bệnh, kháng sâu, kháng thuốc diệt cỏ tiến hành nghiên cứu đề tài ″Nghiên cứu khả tái sinh in vitro số giống đậu dải (Cowpea - Vigna unguiculata (L.)) phục vụ cho tạo giống mới″ 1.2 Mục đích nghiên cứu Xác định điều kiện nuôi cấy in vitro phù hợp cho tái sinh số giống đậu dải 1.3 Yêu cầu đề tài - Xác định phương pháp khử trùng cho tỉ lệ nảy mầm cao - Xác định môi trường nuôi cấy phù hợp với số giống đậu dải nghiên cứu - Xác định ảnh hưởng loại mơ cấy chất điều hịa sinh trưởng đến tái sinh, tạo đa chồi 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Bổ sung thêm vào phương pháp khử trùng cho tỉ lệ nảy mầm cao số giống đậu dải - Đưa môi trường nuôi cấy phù hợp với số giống đậu dải nghiên cứu - Góp phần xây dựng quy trình ni cấy in vitro phù hợp với số giống đậu dải 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Kết nghiên cứu đánh giá khả tái sinh in vitro giống đậu dải có giá trị Việt Nam Qua chọn giống có khả tái sinh cao, phục vụ công tác chọn tạo giống, đặc biệt chuyển gen d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU lu an n va p ie gh tn to 2.1 Giới thiệu chung đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) 2.1.1 Nguồn gốc phân bố - Loài đậu đũa hay đậu dải - cowpea (Vigna unguiculata) có nguồn gốc Châu Phi, lồi đậu có dài, hạt to, có nhiều phân lồi khác với dạng hạt có nhiều kích cỡ màu sắc khác (Rachie cs, 1985) [24] - Phân loài Đậu đũa (Vigna unguiculata subsp Sesquipedalis) trồng phổ biến khắp giới như: nhiều nước Châu Phi, Châu Âu, Châu Mỹ, Châu Á nhiệt đới (Ấn Độ, Bangladesh, Thái Lan, Việt Nam, Indonesia, Malaysia, Philippines) Châu Á ôn đới (Trung Quốc, Đài Loan) (Rachie cs, 1985) [24] Đậu đũa bắt nguồn từ bốn loài phụ đậu cowpea (Vigna unquiculata) trồng nhiều Trung Quốc; vùng Đông Nam Châu Á Thái Lan, Philippines; Nam Châu Á Bangladesh, Ấn Độ, Pakistan, Indonesia mở rộng sang Châu Phi (Rachie cs, 1985) [24] Đậu đũa loại rau phổ biến thị trường Châu Á, nhu cầu thị trường nước năm gần tiêu thụ tươi đông lạnh Phẩm chất dựa màu sắc chiều dài Tuy nhiên, yêu cầu nhập đậu đũa thay đổi tùy thị trường (Rachie cs, 1985) [24] 2.1.2.Phân loại Phân loại khoa học (Rachie cs, 1985) [24]: Giới (regnum) Plantae Bộ (ordo) Đậu (Fabales) Họ (familia) Đậu (Fabaceae) Chi (genus) Vigna d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z V unguiculata Phân loài (subspecies) Vigna unguiculata subsp Sesquipedalis l gm @ Loài (species) m co Trong Hệ thống Cronquist năm 1981 số hệ thống phân loại thực vật khác, Đậu (Fabales) chứa họ Đậu (Fabaceae) an Lu n va ac th si Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:23 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.39284 2.46428 153.74 0.000 * RESIDUAL 128231 160288E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.52107 683734 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:23 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la lu MEANS FOR EFFECT CT$ - an CT$ n va HSN 3.93333 5.30000 3.61481 3.21111 tn to NOS 3 3 p ie gh SE(N= 3) 0.730955E-01 5%LSD 8DF 0.238357 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:23 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - d GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 4.0148 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.82688 0.12661 3.2 0.0000 HSN | | | | ll u nf va an lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:29 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.38016 1.79339 70.86 0.000 * RESIDUAL 202464 253080E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 5.58263 507512 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:29 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la lu an MEANS FOR EFFECT CT$ - va CT$ n HSN 3.14815 3.65926 2.72222 1.83333 gh tn to NOS 3 3 p ie SE(N= 3) 0.918477E-01 5%LSD 8DF 0.299506 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:29 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la d F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 2.8407 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.71240 0.15908 5.6 0.0000 | | | | ll u nf va an HSN lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 4.3.3 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 4.3.3.1 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 12/ 6/14 23:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu not la mam VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.29571 1.57393 14.41 0.000 * RESIDUAL 10 1.09229 109229 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.38799 527714 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 12/ 6/14 23:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu not la mam an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ p ie gh NOS 3 3 HSN 3.32143 3.48148 2.48148 2.08929 1.86667 w d oa nl SE(N= 3) 0.190813 5%LSD 10DF 0.301258 - u nf va an lu ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 12/ 6/14 23:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu not la mam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.72644 0.33050 8.5 0.0005 oi m | | | | z at nh HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.6481 ll VARIATE z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu đen quốc phòng Cao Bằng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.04896 1.01224 18.75 0.000 * RESIDUAL 10 539976 539976E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.58894 327781 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not lu MEANS FOR EFFECT CT$ - an CT$ n va HSN 2.72685 3.58889 3.20370 2.44048 2.14286 gh tn to NOS 3 3 3 p ie SE(N= 3) 0.134161 5%LSD 10DF 0.352746 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not d F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.8206 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.57252 0.23237 8.2 0.0002 | | | | ll u nf va an HSN lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.93882 1.73471 17.88 0.000 * RESIDUAL 10 970254 970254E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.90907 564934 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not lu MEANS FOR EFFECT CT$ - an CT$ n va HSN 2.42130 3.93704 3.41667 2.77116 2.04762 gh tn to NOS 3 3 3 p ie SE(N= 3) 0.179838 5%LSD 10DF 0.41177 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not d F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.9188 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.75162 0.31149 7.7 0.0002 | | | | ll u nf va an HSN lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 4.3.3.2 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin tới khả tái sinh, nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm Giống đậu đen quốc phòng Cao Bằng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:42 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.32444 1.10815 11.24 0.003 * RESIDUAL 788868 986086E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.11331 373937 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:42 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat an n va MEANS FOR EFFECT CT$ NOS 3 3 HSN 3.25926 4.07037 3.59722 2.62500 ie gh tn to CT$ p SE(N= 3) 0.181300 5%LSD 8DF 0.391199 - w d oa nl ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:42 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat lu VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.61150 0.31402 9.3 0.0034 | | | | ll u nf HSN GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 3.3880 va an F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:36 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.18181 2.39394 28.09 0.000 * RESIDUAL 681684 852105E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.86349 714863 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:36 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat lu MEANS FOR EFFECT CT$ - an CT$ n va HSN 3.30159 4.49444 3.17460 2.32341 tn to NOS 3 3 p ie gh SE(N= 3) 0.168533 5%LSD 8DF 0.549570 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:36 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - d GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 3.3235 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.84550 0.29191 8.8 0.0002 HSN | | | | ll u nf va an lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:49 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.93066 2.31022 56.16 0.000 * RESIDUAL 329095 411369E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.25975 659977 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:49 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat lu an MEANS FOR EFFECT CT$ - va CT$ n HSN 2.92593 4.25926 3.00000 2.13690 gh tn to NOS 3 3 p ie SE(N= 3) 0.117100 5%LSD 8DF 0.381850 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:49 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat d F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 3.0805 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.81239 0.20282 6.6 0.0000 | | | | ll u nf va an HSN lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 4.3.4 Ảnh hưởng loại mô cấy đến khả tái sinh nhân nhanh đậu dải Giống đậu đen quốc phòng Cao Bằng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 2: :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 700274 350137 20.84 0.002 * RESIDUAL 100823 168038E-01 * TOTAL (CORRECTED) 801097 100137 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 2: :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau an n va MEANS FOR EFFECT CT$ NOS 3 gh tn to CT$ HSN 3.86667 4.53333 4.07037 p ie SE(N= 3) 0.748417E-01 5%LSD 6DF 0.258889 - d oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 2: :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.31644 0.12963 3.1 0.0024 | | | | ll u nf GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 4.1568 va HSN an VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 1:54 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.09747 1.54873 55.69 0.000 * RESIDUAL 166852 278086E-01 * TOTAL (CORRECTED) 3.26432 408040 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 1:54 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau lu MEANS FOR EFFECT CT$ - an CT$ va NOS 3 n HSN 3.86667 5.30000 4.49444 ie gh tn to SE(N= 3) 0.962785E-01 5%LSD 6DF 0.333043 - p ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 1:54 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau nl w GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 4.5537 d VARIATE oa F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - | | | | ll u nf va an lu HSN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.63878 0.16676 3.7 0.0003 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 2:13 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.27789 638944 17.81 0.004 * RESIDUAL 215309 358848E-01 * TOTAL (CORRECTED) 1.49320 186650 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 2:13 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau lu an MEANS FOR EFFECT CT$ - n va CT$ HSN 3.35185 3.65926 4.25926 tn to NOS 3 3 ie gh SE(N= 3) 0.109369 5%LSD 6DF 0.158325 - p ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 2:13 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau oa nl w F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - d GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 3.7568 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.43203 0.18943 5.0 0.0035 HSN | | | | ll u nf va an lu VARIATE oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC MÔI TRƯỜNG THÀNH PHẦN DUNG DỊCH MẸ Môi trường MS lu an n va g/L NH4NO3 33 g KNO3 38 g MgSO4,7H2O 7,4 g KH2PO4 3,4 g Micro MS (stock 1000X) g/L MnSO4,H2O 16,7 g ZnSO4,7H2O 8,6 g H3BO3 6,2 g CuSO4,5H2O 0,025 g Na2MoO4,2H2O 0,25 g CoCl2,6H2O 0,025 g KI 0,83 g p ie gh tn to Macro MS (stock 20X) g/L CaCl₂.2H2O 44 g oa nl w CaCl₂ (stock 100X) g/L d MS FeEDTA (stock 100X) 3,73 g an 2,78 g va FeSO₄.7H₂O lu Na₂EDTA.2H₂O g/L Acide Nicotinique 50 mg ll m 100 mg oi Pyridoxine-HCl u nf Vitamins MS (stock 100X) z at nh Thiamine-HCl 100 mg Glycine 200 mg z 2,68 g KNO3 50 g MgSO4,7H2O 5g an Lu (NH4)2SO4 m co g/L l Macro B5 (stock 20X) gm @ Môi trường B5 n va ac th si NaH2PO4 3g CaCl₂.2H2O 3g Micro B5 (stock 100X) g/L MnSO4.H2O 1g ZnSO4,7H2O 0,2 g H3BO3 0,3 g CuSO4,5H2O 0,0025 g CoCl2,6H2O 0,0025 g Na2MoO4,2H2O 0,025 g KI 0,075 g lu an B5 FeEDTA (stock 100X) = MS FeEDTA (stock 100X) n va 3,36 g/L FeSO₄.7H₂O 2,78 g/L Vitamins B5 (stock 100X) g/L Acide Nicotinique 100 mg ie gh tn to Na₂EDTA.2H₂O 100 mg p Pyridoxine-HCl Thiamine-HCl 1000 mg oa nl w MỘT SỐ MƠI TRƯỜNG NI CẤY ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM d an lu 1L Macro MS (stock 20X) 50 ml 30 g m co l 5,6 – 5,8 gm 2,5 g @ Phytagel pH 10 ml z Sucrose 10 ml z at nh Vitamins MS (stock 100X) 10 ml oi MS FeEDTA (stock 100X) m CaCl2 (stock 100X) ml ll Micro MS (stock 1000X) u nf va Môi trường nảy mầm hạt an Lu n va ac th si IM (môi trường tạo chồi) MS + 0,5 BAP 1L lu an Macro MS (stock 20X) 50 ml Micro MS (stock 1000X) ml CaCl2 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins MS (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,5 mg Sucrose 30 g Phytagel 4g 5,6 – 5,8 n va pH to tn B5 + 0,5 BAP 1L 50 ml ie gh Macro B5 (stock 20X) 10 ml p Micro B5 (stock 100X) MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml w 10 ml Myo-inositol oa nl Vitamins B5 (stock 100X) 100 mg d an 20 g va Sucrose ll 5,6 – 5,8 4g u nf Phytagel pH 0,5 mg lu BAP oi m Macro MS (stock 20X) 50 ml ml 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,5 mg an Lu Vitamins B5 (stock 100X) m co 10 ml l MS FeEDTA (stock 100X) gm 10 ml @ CaCl2 (stock 100X) z Micro MS (stock 1000X) 1L z at nh MSB + 0,5 BAP n va ac th si Sucrose 30 g Phytagel 4g pH 5,6 – 5,8 lu an n va 1L Macro MS (stock 20X) 50 ml Micro MS (stock 1000X) ml CaCl2 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins MS (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,1 mg Sucrose 30 g Phytagel 4g tn to Môi trường kéo dài chồi 5,6 – 5,8 ie gh pH 1L p ½ MS (mơi trường rễ) 25 ml w Macro MS (stock 20X) 0,5 ml oa nl Micro MS (stock 1000X) ml MS FeEDTA (stock 100X) ml d CaCl2 (stock 100X) an lu 10 ml Myo-inositol 100 mg 30 g ll m 2,5 g oi Phytagel 5,6 – 5,8 z at nh pH u nf Sucrose va Vitamins MS (stock 100X) z m co l gm @ an Lu n va ac th si