Kháng sinh là một loại chất kháng khuẩn hoạt động chống lại vi khuẩn và là loại chất kháng khuẩn quan trọng nhất dùng trong đối phó nhiễm khuẩn. Các thuốc kháng sinh được sử dụng rộng rãi trong điều trị và phòng ngừa nhiễm khuẩn. Chúng có thể tiêu diệt hoặc cản trở vi khuẩn sinh trưởng. Hiện nay tình hình kháng kháng sinh ngày càng tăng cao, việc nghiên cứu ra nhiều loại thuốc kháng sinh nhất là các kháng sinh từ tự nhiên ngày càng được quan tâm. Để biết được dịch chiết của một loài cây có khả năng kháng sinh hay không người ta tiến hành khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết
KHOA Y – DƯỢC BỘ MÔN DƯỢC BÁO CÁO THỰC HÀNH VI SINH Mã số học phần 650110 TRÀ VINH, NĂM 2022 KHOA Y – DƯỢC BỘ MÔN DƯỢC BÁO CÁO THỰC HÀNH VI SINH Mã số học phần 650110 Ngành Dược học, Khoá 2021 - 2026 Mã lớp: DA21DC Họ tên thành viên: TRÀ VINH, NĂM 2022 PHẦN I KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Kháng sinh loại chất kháng khuẩn hoạt động chống lại vi khuẩn loại chất kháng khuẩn quan trọng dùng đối phó nhiễm khuẩn Các thuốc kháng sinh sử dụng rộng rãi điều trị phịng ngừa nhiễm khuẩn Chúng tiêu diệt cản trở vi khuẩn sinh trưởng Hiện tình hình kháng kháng sinh ngày tăng cao, việc nghiên cứu nhiều loại thuốc kháng sinh kháng sinh từ tự nhiên ngày quan tâm Để biết dịch chiết loài có khả kháng sinh hay khơng người ta tiến hành khảo sát hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết 1.2 PHƯƠNG PHÁP 1.2.1 Mẫu thử cao Ethyl acetate Biến hoa sông Hằng nồng độ: 62.5, 125, 250, 500, 1000 µg/ml 1.2.2 Chủng vi khuẩn: S aureus (nêu đặc điểm chủng vi khuẩn) 1.2.3 Chuẩn bị Dung dịch chuẩn McFaland Chuẩn bị dung dịch bari clorua khan (BaCl2) 1% dung dịch axit sunfuric (H2SO4) 1% Gộp trộn hoàn toàn dung dịch bari clorua axit sunfuric để tạo thành huyền phù đục 1.2.4 Phương pháp khuếch tán đĩa (giấy kháng sinh): kháng sinh tẩm vào giấy với nồng độ thích hợp khuếch tán mặt thạch xung quanh, ngăn chặn phát triển vi khuẩn Đường kính vịng vi khuẩn bị ức chế diễn đạt tính nhạy cảm vi khuẩn thuốc kháng sinh Trường hợp khơng có vịng vơ khuẩn đường kính vịng vơ khuẩn nhỏ đường kính tiêu chuẩn, vi khuẩn kháng lại thuốc kháng sinh (đối chứng âm Ethyl acetate nước (theo mẫu thử), đối chứng dương Gentamycin 10 µg/dĩa 1.3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết đo đường kính vịng trịn ức chế vi khuẩn; Nồng 62.5 125 250 500 1000 Gentamyci độ (µg/ n 10 ml) d (µg/ml) 22 6.3 7.6 9.6 14.3 17.6 (mm) - S aureus nhạy cảm từ nồng độ 62,5mg/ml với đường kính vịng kháng khuẩn đo 6,3mm Đường kính tăng dần nồng độ sử dụng tăng lên Điều chứng tỏ nhạy cảm vi khuẩn phụ thuộc vào nồng độ Vòng tròn kháng khuẩn rộng ghi nhận với nồng độ 1000mg/ml (17,6 mm) - Sự khác phương pháp khuếch tán đĩa phương pháp đục lỗ: + Phương pháp khuếch tán đĩa phép thử hoạt tính kháng khuẩn, đĩa giấy lọc có chứa nồng độ biết dung dịch chiết xuất đặt môi trường thạch + Phương pháp đục lỗ phép thử hoạt tính kháng khuẩn lỗ tạo mơi trường thạch dung dịch chiết xuất thêm vào PHẦN II ĐẾM MẬT SỐ VSV 2.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Để biết số lượng tế bào vi khuẩn 1g hay 1ml mẫu thử mật số vi khuẩn cần phân tích Ta tiến hành đếm số lượng vi sinh vật phương pháp trực tiếp gián tiếp 2.2 PHƯƠNG PHÁP 2.2.1 Đếm trực tiếp buồng đếm hồng cầu (nấm men) 2.2.2 Đếm gián tiếp (đếm khuẩn lạc): thực băng phương pháp đổ đĩa Mẫu phân tích pha lỗng từ 10-1 đến 10-4 2.3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết đếm khuẩn lạc 10-1 10-2 10-3 10-4 Từ độ pha loãng 10-3 số lượng khuẩn lạc nằm khảng từ 15 – 300 khuẩn lạc/đĩa (10-3 148 khuẩn lạc, 10-4 la 82 khuẩn lạc) So sánh phương pháp đếm trực tiếp đếm gián tiếp Phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm hồng cầu: Ưu điểm: cho kết nhanh Nhược điểm: không phân biệt tê bào sống tế bào chết không nhuộm Phương pháp đếm gián tiếp: Ưu điểm: xác định số lượng vi sinh vật sống diện mẫu phân tích Nhược điểm: tốn thời gian, dễ gây sai sót trình đếm