[Kl-Hup] Nghiên Cứu Hấp Phụ Nano Tinh Thế Fenofibrat Lên Chất Mang Rắn Và Ứng Dụng Vào Bào Chế Viên Nén.pdf

BỌ YTE TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÃ NỘI $$$ LÊ THỊ GIANG NGHIÊN CỨU HẤP PHỤ NANO TINH THẺ FENOFIBRAT LÊN CHẤT MANG RẲN VÀ ỨNG DỤNG VÀO BÃO CHẾ VIÊN NÉN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI 2022 BỘ YTÉ TRƯỜNG[.]

BỌ YTE TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÃ NỘI $$$ LÊ THỊ GIANG NGHIÊN CỨU HẤP PHỤ NANO TINH THẺ FENOFIBRAT LÊN CHẤT MANG RẲN VÀ ỨNG DỤNG VÀO BÃO CHẾ VIÊN NÉN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI - 2022 BỘ YTÉ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ GIANG MÃ SINH VIÊN: 1701123 NGHIÊN CỨU HẤP PHỤ NANO TINH THÊ FENOFIBRAT LÊN CHẤT MANG RẮN VÀ ỨNG DỤNG VÀO BÀO CHẾ VIÊN NÉN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ Người hưởng dẫn: GS.TS Nguyễn Ngọc Chiến Nơi thực hiện: Viện Công nghệ dược phẩm Quốc gia HÃ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến thầy GS.TS Nguyễn Ngọc Chiến, người thầy đà tận tình dạy, truyền đạt kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện giúp đờ em suốt thời gian qua để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy ThS Trần Ngọc Bảo, người thầy, người anh tràn đầy lượng, nhiệt huyết đà trực tiếp hướng dẫn, đưa ý tưởng, giúp đờ, giải đáp thắc mắc, khó khăn mà em gặp phải suốt thời gian thực khóa luận Cảm ơn thầy giúp em mở mang tầm nhìn mình, truyền cho em niềm dam mê, niềm tin có định hướng tốt đường sau Em xin cảm ơn ThS Đào Anh Hoàng, người anh đà cho em lời khuyên, định hướng chia sẻ kinh nghiệm để trình thực nghiệm em diễn thuận lợi Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô giáo anh, chị kỹ thuật viên Viện Công nghệ Dược phấm Quốc gia - nơi em thực đề tài khóa luận nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thiết bị, máy móc, hóa chất cho em trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám Hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo phòng ban khác, thầy cô cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt năm học tập Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn vơ hạn tới gia đình, người thân, bạn bè ln bên cạnh, động viên, khuyến khích giúp đờ em suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 24 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Lê Thị Giang MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỦ CÁI VIÉT TẮT DANH MỤC CẮC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VỄ, ĐÒ THỊ ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TÔNG QUAN 1.1 Tồng quan Fenofibrat 1.1.1 Công thức cấu tạo 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Độ ổn định 1.1.4 Đặc điểm dược động học 1.1.5 Dược lý chế tác dụng 1.1.6 Chỉ định, chống định, liều dùng 1.1.7 Một số chế phẩm thị trường 1.1.8 Các phương pháp định lượng FENO 1.2 Hệ nano tinh thể phương pháp bào chế 1.2.1 Hệ nano tinh thể 1.2.2 Phương pháp bào chế 1.2.3 Kỹ thuật phân chia (top - down) 1.2.4 Một số thiết bị nghiền bi 1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến đặc tính tiểu phân nano trình nghiền ướt 1.3 Một số phương pháp rắn hóa hệ tiểu phân nano 1.3.1 Đông khô 1.3.2 Phun sấy 1.3.3 Tạo hạt tầng sôi 1.3.4 Phun hỗn dịch nano lên hạt 1.3.5 Hấp phụ lên chất mang rắn có diện tích bề mặt lớn 1.4 Tổng quan calci silicat dạng lỗ xốp 1.4.1 FLR 1.4.2 Vai trò silica 10 1.4.3 Đặc điềm silica ảnh hưởng đến khả mang giải phóng thuốc 10 1.5 Một sổ chất mang có diện tích bề mặt lớn khác 11 1.5.1 Silicon dioxyd 11 1.5.2 Magnesium aluminometasilicat 11 1.5.3 Montmorillonite (MMT) 11 1.5.4 Một số tá dược độn đóng vai trị chất mang 12 1.6 Một số nghiên cứu liên quan 13 1.6.1 Một số nghiên cứu hệ tiểu phân nano FENO phương pháp nghiền bi 13 1.6.2 Một số nghiên cứu rắn hóa phương pháp hấp phụ lên calci silicat 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 15 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 15 2.1.1 Nguyên vật liệu 15 2.1.2 Thiết bị 15 2.1.3 Viên đối chiếu 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp bào chế 16 2.3.2 Phương pháp đánh giá số tiêu chất lượng 19 2.3.3 Phương pháp đánh giá tính chất hệ nano bột hấp phụ 24 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG THỤC NGHIỆM, KÉT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Kết xây dựng phương pháp định lượng fenofibrat 25 3.1.1 Phương pháp đo quang phổ UV-VĨS 25 3.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 25 3.2 Kết bào chế hồn dịch chứa tiểu phân nano FENO 26 3.3 Kết bào chế bột hấp phụ mang dược chất ứng dụng vào dạng bào chế viên nén 27 3.3.1 Phương pháp (ngâm) 27 3.3.2 Phương pháp (nghiền) .32 3.4 Đánh giá số đặc tính hệ tiểu phân nano FENO sau rắn hóa 36 3.4.1 Kết đo phổ hồng ngoại IR 36 3.4.2 Kết đo XRD 36 3.4.3 Kết đo DSC 38 3.4.2 Kết chụp SEM 39 3.5 So sánh phương pháp bào chế bột hấp phụ 39 KẾT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT 40 TÃI LIỆU THAM KHẲƠ PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẢT Ký hiệu Nghĩa đầy đủ (tên Tiếng Anh) CDH Chất diện hoạt Cros Natri croscamelose CT Công thức DC Dược chất DSS Natri docusat FENO Fenofibrat FLR Florite HLDC Hàm lượng dược chất HPMC Hydroxypropyl methylcelulose KTTP Kích thước tiểu phân NaLS Natri lauryl sulfat (Sodium lauryl sulfat) PDI Chỉ so đa phân tán (Polydispersity index) rpm Vòng/phút (revolution per minute) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard deviation) SD Độ lệch chuân (Standard deviation) TD Tá dược w/v Khối lượng/Thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các nguyên liệu dùng thực nghiệm 15 Bảng 2.2 Cơng thức thơng số quy trình bào chế hỗn dịch FENO 17 Bảng 3.1 Tóm tắt kết thẩm định phương pháp HPLC 26 Bảng 3.2 Kết KTTP, PDI hỗn dịch nano FENO cỡ lô 26 Bảng 3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ FLR:FENO đến đặc tính bột hấp phụ 27 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ FLR:FENO đến đặc tính bột hấp phụ 27 Bảng 3.5 Công thức khảo sát ảnh hưởng thành phần chất mang đến khả tái phân tán hòa tan bột hấp phụ 29 Bảng 3.6 Khảo sát ảnh hưởng cùa thành phần chất mang đến đặc tính bột hấp phụ 30 Bảng 3.7 Công thức viên nén Fenofibrat 145mg theo phương pháp 31 Bảng 3.8 Ành hưởng lượng chất mang đến đặc tính hệ tiểu phân nano FENO 32 Bảng 3.9 Khảo sát ảnh hưởng thành phần chất mang đến đặc tính bột hấp phụ 33 Bảng 3.10 Kết khảo sát đặc tính bột hấp phụ thay phần FLR tá dược độn 34 Bảng 3.11 Công thức viên FENO theo phương pháp 35 Bảng 3.12 Kết thử độ rã so sánh đường cong giải phóng với viên đối chiếu 35 Bảng 3.13 So sánh phương pháp bào chế bột hấp phụ 39 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Fenofibrat Hình 1.2 So sánh công thức FENO [381 Hình 1.3 Thiết bị nghiền bi hành tinh kiểu đứng Hình 1.4 Thiết bị nghiền bi kiểu rung lắc Hình 1.5 Ảnh SEM silicat [23] 10 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình rắn hóa hệ tiểu phân nano FENO 18 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan độ hấp thụ quang nồng độ dung dịch FENO 25 Hình 3.2 Đồ thị hòa tan bột hấp phụ với tỳ lệ FLR:FENO khác 28 Hình 3.3 Đồ thị hịa tan bột hấp phụ với thành phần thao tác tiến hành khác 30 Hình 3.4 Đồ thị hịa tan viên theo phương pháp (ngâm) 31 Hình 3.5 Đồ thị hịa tan bột hấp phụ tỷ lệ FLR:FENO khác 33 Hình 3.6 Đồ thị hịatan bột theo phương pháp (nghiền) 34 Hình 3.7 Đồ thị hòa tan viên nén theo theo phương pháp 35 Hình 3.8 Phổ FT-TR mẫu 36 Hình 3.9 Hình ảnh chụp XRD mẫu bột hấp phụ theo phương pháp 36 Hình 3.10 Hình ảnh chụp XRD mẫu bột viên theo phương pháp ngâm (trái) nghiền (phải) 37 Hình 3.11 Hình ảnh đo DSC mẫu 38 Hình 3.12 Hình ảnh chụp SEM FLR (trái, [30]) bột hấp phụ CT3.05 (phải) 39 ĐẶT VÁN ĐÈ Fenofibrat (FENO) dẫn chất acid fibric, sử dụng từ năm 90 kỷ XX FDA chấp nhận có nhiều ưu điểm so với dẫn chất nhóm, đặc biệt có khả kết hợp với thuốc hạ lipid khác [34], [49] Tuy nhiên, có độ tan kém, tốc độ hòa tan chậm, hấp thu phụ thuộc vào cá thể, chế độ ăn tình trạng tháo rỗng dày nên sinh khả dụng thấp ổn định [55] Do đó, để cải thiện sinh khả dụng cải thiện độ tan, mức độ tốc độ hòa tan lựa chọn ưu tiên Đã có nhiều biện pháp áp dụng để cải thiện độ tan, khả hòa tan sinh khả dụng FENO bào chế hệ tự nhũ hóa, hệ phân tán rắn, tạo vi hạt siêu vi hạt , giảm KTTP kỹ thuật nghiền ướt biện pháp đơn giản, có tính khả thi cao, giảm đến kích thước nano dễ áp dụng thực tế sản xuất Việc giảm KTTP làm tăng tốc độ hịa tan, tăng độ tan, từ làm tăng sinh khả dụng, giảm liều dùng, giảm phụ thuộc vào bừa ăn hạn chế tác dụng không mong muốn [55] Tuy nhiên, hệ dạng lỏng thường ổn định dễ bị kết tụ nhiễm vi sinh vật Vì vậy, cần rắn hố để trì tính chất hệ sau đưa vào dạng bào chế cuối trình phân tán lại sử dụng Hấp phụ lên chất mang có diện tích bề mặt lớn phương pháp rẳn hóa đơn giản có khả nâng quy mơ cơng nghiệp Florite (FLR) tá dược mang thuộc loại calci silicat dạng lỗ xốp, khác với cấu trúc lỗ xốp nhóm silica thơng thường, tá dược có cấu trúc tinh thể petaloid (hình cánh hoa) tạo thành nhiều lỗ xốp xen kẽ nên có diện tích bề mặt riêng lớn, có khả mang thuốc cao nên hấp phụ giữ lại tiểu phân dược chất kích thước nano [50] Trên sở đó, chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu hấp phụ nano tinh fenofibrat lên chất mang rắn ứng dụng vào bào chế viên nén” với mục tiêu sau: Hấp phụ nano tinh thểfenofibrat lên chất mang đảnh giá tính chất bột Bào chế viên nén từ bột hấp phụ nano có độ hịa tan 80% sau 30 phút CHƯƠNG TÔNG QUAN 1.1 Tổng quan Fenofibrat 1.1.1 Công thức cấu tạo o o p.t.l: 360,8 C20H21CIO4 Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Fenofibrat Tên khoa học: Isopropyl 2-[4-(4-chlorobenzoyl) phenoxy]-2-methylpropanoat [5] 1.1.2 Tính chất lý hóa Cảm quan: Bột kết tinh trắng gần trắng Độ tan: Thực tế không tan nước (0,42 mg/L 25°C); tan methanol, ethanol; tan aceton, ether, benzene, chloroform [43] Thân dầu, hệ số phân bố dầu/nước logP = 5,24 [42] Nhiệt độ nóng chảy: 80-8l°c Fenofibrat thuộc nhóm II hệ thống phân loại BCS [45] 1.1.3 Độ ổn định Ôn định điều kiện thường 1.1.4 Đặc điểm dược động học Sinh khả dụng FENO phụ thuộc nhiều vào chế độ ăn tình trạng tháo rỗng dày Hấp thu thuốc bị giảm chưa ăn uống Sau uống, FENO hấp thu chủ yếu ruột non [32], [53], thuốc nhanh chóng bị thủy phân thành acid fenofibric chất có hoạt tính, chất gắn tới 99% vào albumin huyết tương nồng độ đỉnh huyết tương xuất khoảng sau uống thuốc Sự hấp thu acid fenofibric tăng lên khoảng 35% uống với thứ ăn [38] Ớ người có chức thận bình thường nửa đời huyết tương acid fenofibric vào khoảng 20 thời gian tăng lên nhiêu người mắc bệnh thận acid fenofibric tích lũy đáng kể người suy thận uống fenofibrat hàng ngày Acid fenofibric đào thải chủ yếu nước tiểu (70% vòng 24 giờ), dạng liên hợp glucuronic, ngồi cịn dạng khử acid fenofibric chất liên hợp glucuronic Hầu hết sản phẩm đào thải vòng ngày [6] 1.1.5 Dược lý chế tác dụng Fenofibrat, dẫn chất acid fibric, thuốc hạ lipid máu Thuốc ức chế sinh tống họp cholesterol gan, làm giảm thành phần gây vữa xơ, làm tăng sản xuất 39 Loh Z.H., Samanta A.K., et al (2015), "Overview of milling techniques for improving the solubility of poorly water-soluble drugs", Asian journal of pharmaceutical sciences, 10(4), pp 255-274 40 Masters Keith (1985), Spray drying handbook, George Godwin Ltd., London 41 Monteiro A., Afolabi A., et al (2013), "Continuous production of drug nanoparticle suspensions via wet stirred media milling: a fresh look at the Rehbinder effect", Drug development and industrial pharmacy, 39(2), pp 266- 283 42 Munoz A., Guichard J.P., et al (1994), "Micronised fenofibrate", Atherosclerosis, 110, pp S45-S48 43 O'Neill M.J., (2013), The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, Division of Merck and Co., Inc 44 Patel C.M., Chakraborty M., et al (2014), "Preparation of fenofibrate nanoparticles by combined stirred media milling and ultrasonication method", Ultrasonics sonochemistry, 21(3), pp 1100-1107 45 Sanganwar G.P., Gupta R.B (2008), "Dissolution-rate enhancement of fenofibrate by adsorption onto silica using supercritical carbon dioxide", International journal ofpharmaceutics, 360(1-2), pp 213-218 46 Schmidt c., Lamprec L (2009), "Nanocarriers in drug delivery-Design, Manufacture and Physicochemical properties", Nanotherapeutics-drug delivery concepts in nanoscience, pp 3-37 47 Shanmugam s., Baskaran R., et al (2011), "Solid self-nanoemulsifying drug delivery system (S-SNEDDS) containing phosphatidylcholine for enhanced bioavailability of highly lipophilic bioactive carotenoid lutein", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 79(2), pp 250-257 48 Srivastava s., Mishra G., et al (2010), "Fluid bed technology: overview and parameters for process selection", International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2(4), pp 236-246 49 Tarantino N., Santoro F., et al (2017), "Fenofibrate/simvastatin fixed-dose combination in the treatment of mixed dyslipidemia: safety, efficacy, and place in therapy", Vascular health and risk management, 13, pp 29 50 Tomita Pharmaceutical Co ltd (2018), "Florite new technology for innovative fomulation design", pp 51 Tran B.N., Pham Q.V., et al (2022), "Supercritical CO2 impregnation approach for enhancing dissolution of fenofibrate by adsorption onto high-surface area carriers", The Journal of Supercritical Eluids, 184, pp 105584 52 Vauthier c., Bouchemal K (2011), "Processing and scale-up of polymeric nanoparticles", Intracellular Delivery, springer, pp 433-456 53 Vo C.L.N., Park c., et al (2013), "Current trends and future perspectives of solid dispersions containing poorly water-soluble drugs", European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics, 85(3), pp 799-813 54 Xu w., Riikonen J., et al (2013), "Mesoporous systems for poorly soluble drugs", International journal ofpharmaceutics, 453(1), pp 181-197 55 Yousaf A.M., Kim D.W., et al (2015), "Enhanced oral bioavailability of fenofibrate using polymeric characterization and in vivo nanoparticulated investigation", systems: physicochemical International journal of nanomedicine, 10, pp 1819 56 Zhang L., Chai G., et al (2010), "Preparation of fenofibrate immediate-release tablets involving wet grinding for improved bioavailability", Drug development and industrial pharmacy 36(9), pp 1054-1063 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết thẩm định phương pháp đánh giá chất lượng bột hấp phụ viên nén FENO Phụ lục 2: Kết đánh giá giai đoạn bào chế hỗn dịch nano tinh thể FENO Phụ lục 3: Kết đánh giá giai đoạn bào chế bột hấp phụ Phụ lục 4: Kết đánh giá giai đoạn bào chế viên nén PHỤ LỤC Kết thẩm định phương pháp đánh giá chất lượng bột hấp phụ viên nén FENO Thẩm định phương pháp định lượng FENO UV-VIS ỉ ỉ Kết quét phố hấp thụ dung dịch fenofib rat Pha dung dịch chuẩn FENO có nồng độ 10 pg/mL dung dịch NaLS 0,72%, quét phổ ƯV-VIS từ bước sóng 200 - 400 nm với mẫu trắng dung dịch NaLS 0.72% Kết thu bước sóng hấp thụ cực đại FENO 289 nm Do chọn bước sóng X = 289 nm đế định lượng FENO giải phóng mơi trường thử hịa tan 7.2 Tính tích hợp máy đo quang PL1.1 Tính tích họp hệ thống Độ hấp thụ 0,496 0,496 0,489 0,487 0,490 0,486 0,491 0,89% < 2,0% STT Trung bình RSD(%) Yêu cầu 1.3 Độ tuyến tính PL1.2 Mối tương quan độ hấp thụ quang nồng độ FENO dung dịch NaLS 0,72% Nồng độ (pg/mL) 4,104 6,156 8,208 10,26 12,312 Độ hấp thụ quang 0,2 0,284 0,382 0,478 0,568 Thẩm định phương pháp định lượng FENO HPLC 2.1 Tính tích họp hệ thống Tiến hành chạy sắc ký lặp lại lần dung dịch chuẩn FENO có nồng độ 50pg/mL PL1.2 Kết khảo sát tính thích họp hệ thống sắc ký STT Trung bình RSD(%) Yêu cầu Kết luận: Đạt Thòi gian lưu t (phút) 8,677 8,711 8,648 8,714 8,746 8,751 8,708 0,46% < 1.0% Diện tích pic (mAU.s) 1422,8 1426,4 1418,5 1422,0 1419,2 1423,1 1422,0 0,2% < 2.0% Độ đặc hiệu 9 Các dung dịch chuân, dung dịch thử chuân bị mô tả phương pháp định lượng HPLC định lượng dược chât (mục c, phân 2.3.2.2) r Dung dịch trăng: dung mơi pha động (ACN : nước acid hóa = 80:20) Dung dịch placebo: Cân mâu gôm thành phân tá dược nghiên cứu khơng có dược chât cân phân tích, pha dung mơi pha động Print of window 38: Current Chromatogram(9) Data File : E:\HPLC\DA ISX2022XFENOFIBRATX20220621XTHAMDINH 2022-06-21 11-39-17X016-2001.D Sample Name : 100% Acq Operator : Giang Acq Instrument : Instrument Injection Date : 6/21/2022 5:50:32 PM Acq Method Last Changed : : Analysis Method : Last changed : Seq Line : 20 Location : Vial 16 Inj : Inj volume : 10.000 pl E:\HPLC\DATA\ANALYSIS\2022\FENOFIBRAT\20220621\THAMDINH 2022-06-21 11-39-17XCHAYTHUHOATANGIANG.M 6/21/2022 1:34:38 PM by Giang (modified after loading) C:\CHEM32\1\METHODS\DEF_LC.M 6/25/2022 6:27:20 PM by Hien Instrument 6/25/2022 6:31:05 PM Hien Page PL1.3 Sắc ký đồ thời gian lưu mẫu chuẩn Print of window 38: Current Chromatogram(s) Data File : E:XHPLCXDA ISX2022XFENOFIBRATX20220621XTHAMDINH 2022-06-21 11-39-17X004-0602.D Sample Name : ComCT3.05.1 Xcq Operator : Giang Xcq Instrument : Instrument Injection Date : 6/21/2022 2:09:18 PM Xcq Method Last changed : : Analysis Method : Last changed : Seq Line : Location : Vial Inj : Inj Volume : 10.000 pl E:XHPLC\DATA\ANALYSIS\2022\FENOFIBRAT\20220621\THAMDINH 2022-06-21 11-39-17XCHAYTHUHOATANGIANG.M 6/21/2022 1:34:38 PM by Giang (modified after loading) E:XHPLC\METHOD\ANALYSIS\2021\FENOFZBRAT\RUACOTGIANG\RUACOTGIANG.M 6/15/2022 8:56:38 AM by Huyen Instrument 6/24/2022 4:43:41 PM Giang Page ' — — « 'T' PL1.4 Săc ký đô thời gian lưu mâu thử of Print of window 38: Current chromatogram(s) Data File : E:\HPLC\DA IS\2022\FENOFIBRAT\20220621\THAMDINH 2022-06-21 11-39-17X003-0901.D Sample Name : Placebo : Giang Acq Instrument : Instrument Injection Date : 6/21/2022 3:27:15 PM Acq Operator Acq Method Last changed Seq Line : Location : Vial Inj : Inj Volume : 10.000 pl E:\HPLC\DATA\ANALYSIS\2022\FENOFIBRAT\20220621\THAMDINH 2022-06-21 11-39-17XCHAYTHUHOATANGIANG.M 6/21/2022 1:34:38 PM by Giang (modified after loading) E:\HPLC\METHOD\ANALYSIS\2021\CLARITHROMYCIN\CHAYMAYDIEU.M 3/15/2022 9:10:35 AM by Huyen : : Analysis Method : Last changed : Instrument 7/15/2022 6:19:38 PM Dieu Page of PL1.5 Sắc ký đồ thời gian lưu mẫu placebo Print of window 38: Current Chromatogram(s) Data File : E:\HPLC\DA IS\2022\FENOFIBRAT\20220621\THAMDINH 2022-06-21 11-39-17X002-0401.D Sample Name : Trang Seq Line : Location : Vial Inj : Inj Volume : 10.000 pl E:\HPLC\DATA\ANALYSIS\2022\FENOFIBRAT\20220621\THAMDINH 2022-06-21 11-39-17XCHAYTHUHOATANGIANG.M 6/21/2022 1:34:38 PM by Giang (modified after loading) E:\HPLC\METHOD\ANALYSIS\2022\TIOCONAZOL\RUACOT.M 6/21/2022 2:31:39 PM by Giang (modified after loading) Peak(s) manually integrated Acq Operator : Giang Acq Instrument : Instrument Injection Date : 6/21/2022 1:30:21 PM Acq Method Last changed : : Analysis Method : Last changed : Additional Info : Instrument 6/21/2022 2:33:16 PM Giang Page of r PL1.6 Săc ký đô thời gian lưu mâu trăng Kết thấm định độ đặc hiệu phương pháp HPLC định lượng dược chất cho thấy: sắc ký đồ, mẫu trắng mẫu placebo khơng có pic thời gian lưu pic FENO dung dịch thử dung dịch chuẩn Độ tuyến tính Pha dãy chn FENO có nồng độ khoảng 0,25 - 200 pg/mL tiến hành chạy HPLC theo điều kiện nêu mục c phần 2.3.2.2 PL1.7 Đồ thị thể mối tương quan diện tích pic nồng độ FENO dung dịch pha động Kết cho thấy hệ số tương quan R2 = (>0,995), chứng tở khoảng nồng độ khảo sát có mối quan hệ tuyến tính với diện tích pic Kết luận: Có thể sử dụng phương pháp HPLC với điều kiện sắc ký chọn để định lượng FENO trình nghiên cứu PHỤ LỤC Kết đánh giá giai đoạn bào chế hỗn dịch nano tinh thể FENO Kết đánh giá độ ổn định hỗn dịch bào chế Xác định KTTP, PDI, HLDC sau ly tâm điều kiện ly tâm khác PL2.1 KTTP, PDI, HLDC sau ly tâm điều kiện ly tâm khác KTTP (nm) PDI HLDC sau ly tâm (%) T rưó’c ly tâm 331,2 + 3,03 0,311+0,022 1000rpm/5 phút 218,3 ±8,71 0,335 + 0,131 76,05 1000rpm/10 phút 257,4 ± 4,94 0,156 + 0,032 67,82 1000rpm/20 phút 255,7 ± 10,52 0,277 + 0,048 53,81 3000rpm/10 phút 223,6+ 1,19 0,124 + 0,020 30,43 5000rpm/10 phút 192,6 + 2,96 0,092+ 0,007 16,95 10000rpm/10 phút 167,4 + 3,22 0,096 + 0,043 5,29 ^MKTTP(nm) HLDC sau ly tâm —«»PDI 350 0.5 PL2.2 KTTP, PDI HLDC sau ly tâm dịch nghiền điều kiện khác Nhận xét: Trong khoảng thời gian 10 phút, tốc độ ly tâm tăng dần, KTTP, PDI, HLDC sau ly tâm giảm dần Điều tăng lực học tác động lên tiểu phân dược chất, tiểu phân dược chất có xu hướng kết tập với để hình thành nên tiếu phân có kích thước lớn lắng xuống đáy Với tốc độ ly tâm lOOOrpm, tăng thời gian ly tâm PDI, HLDC sau ly tâm giảm dần, KTTP khơng thay đổi Do đó, chọn tốc độ ly tâm 1000rpm/10 phút để tiến hành khảo sát lựa chọn công thức Sample Name: Dich nghien truoc ly tam Project Name: Fenofibrate Date and Time: Wednesday, April 06 2022 09.09:42 PM Type: Size Result Source: Instrument Cell Name: DTS0012 Temperature CQ: 25 Material Name: Fenofibrate Dispersant Name: Water Material Rl: 1.55 Dispersant Rl: 1.33 Dispersant Viscosity (cP): 0.887 Material Absorption: 0.001 Dispersant Dielectric Constant: 78.5 Mean Name Dich nghien truoc ly tarn No data quality issues detected Standard Deviatic Z-Average (nm) 296 Polydispersity Index (PI) 0.1779 - Peak Mean by Intensity ordered by area (nm) 350.3 - In Range (%) 95.03 - Mean Count Rate (kcps) 214.7 - PL2.3 Ket KTTP, PDI hỗn dịch nano PHỤ LỤC Kết đánh giá giai đoạn bào chế bột hấp phụ 3.1 Kết đo KTTPị PDI mẫu bột hấp phụ Malvern Panalytical Size Report - Fenofibrat Sample Name: Project Name: Date and Time: Com CT3.O5 Fenofibrate Thursday, May 19 2022 05:1727 PM Type: Cell Name: Material Name: Material Rl: Material Absorption: Size DTSOO12 Fenofibrate 1.55 O.OO1 Result Source: Temperature CO: Dispersant Name: Dispersant Rl: Dispersant Viscosity (cP): Dispersant Dielectric Constant: Instrument 25 Water 133 0.887 78.5 ằ 0.8 - 0.7 •c 0.6 0*5 0.4 - 2•? J To 0.2 g oil s O.O1 -Com CT3.O5 [Steady state] O.1 IO 1OO 1e-*O31 e*O41e-*-O51e*O61e*O71e*O8 Time (ps) -Com CT3.OS [Steady state] Com CT3.O5 [Steady state] Com CT3.O5 [Steady state] Com CT3.OS [Steady state] -Com CT3.O5 [Steady state] Name Com CT3.O5 Mean Standard Deviatio Z-Ave rage (nm) 429.7 8.021 Polydispersity Index (PI) 0.2496 0.02681 Com CT3.O5 Peak Mean by Intensity ordered by area (nm) 533.2 54.5 No data quality issues detected Peak Mean by Intensity ordered by area (nm) In Range (%) 4792 94.44 0.5313 Mean Count Rate (kcps) 238.7 3.031 No data quality issues detected Com CT3.O5 Multiple populations PL3.1 Kêt KTTP, PDI bột hâp phụ CT3.05 - 3.2 Kết thử hịa tan bột hấp phụ mơi trường NaLS 0,72% PL3.2 Kết thử hòa tan bột hấp phụ phương pháp môi trường NaLS 0,72% T(phút) F1 F2 F3 F4 F5 51.11 ±2,41 44.17+1,32 18.47 + 3,28 23.57 + 1,43 21.35 ±2,36 10 58.60 ± 3,57 54.39 + 3,03 23.65 + 3,47 32.31+5,64 29.61 ±2,46 15 62.32 ± 3,40 59.45 + 4,54 27.34 + 2,11 37.31+3,73 35.77 ± 4,37 30 68.91 ±2,36 68.56 + 3,72 35.41 ± 1,52 46.94 + 3,52 46.68 ± 4,55 45 73.71 ±3,13 74.89+ 1,39 41.68 + 2,45 52.21 + 1,29 55.30 ±4,12 60 78.15 + 2,20 79.82 + 3,35 47.36 + 4,52 58.30 ± 2,44 62.23 ± 3,27 PL3.3 Kêt thử hòa tan bột hâp phụ phương pháp môi trường NaLS 0,72% T (phút) 10 15 30 45 60 CT1 42,37 ± 1,30 52,54 ±3,14 58,53 ± 1,11 69,29 ± 2,68 CT2 51,29 ±2,54 59,68 ± 1,13 65,51 ±3,12 74,47 ± 1,65 77,59 ±3,17 84,37 ± 2,67 CT4 54,73 ± 3,21 62,31 ±2,56 68,00 ± 5,2 75,72 ± 1,01 CT3 87,44 ±4,11 92,22 ± 5,30 94,36 ± 1,24 95,01 ± 1,43 96,31 ±4,31 96,31 ±3,71 84,44 ± 3,43 PL3.4 Kết thử hòa tan bột hấp phụ phương pháp môi trường NaLS 0,72% T FLR 3:3 FLR 4:3 FLR 8:3 FLR 12:3 FLR 15:3 4,58 ±43,52 25,55 ± 3,21 72,29 ± 2,77 71,68 ±5,06 76,92 ± 3,29 10 8,12 ±2,74 48,49 ± 1,12 89,85 ± 2,00 86,53 ± 1,12 88,69 ± 1,67 15 17,34 ±2,52 63,58 ± 3,24 96,26 ± 1,14 94,57 ± 3,00 96,72 ±4,12 30 55,02 ±4,21 85,61 ±2,19 98,13 ±4,21 100,76 ± 2,56 104,36 ± 1,11 45 86,96 ±4,21 95,02 ± 2,01 100,10 ±3,10 102,39 ±4,09 105,85 ± 5,07 60 98,07 ± 1,19 98,40 ± 4,32 100,10 ± 1,76 104,00 ± 1,24 106,85 ± 3,87 (phút) T(phút) 10 15 30 45 60 CT3.01 75,85 ± 1,21 94,42 ±4,31 101,12 ±3,42 105,50 ±3,90 107,44 ±4,23 108,41 ±5,32 CT3.05 70,72 ±2,11 85,35 ± 1,06 92,70 ± 3,45 100,01 ±4,21 102,44 ± 5,32 103,72 ± 2,87 CT3.02 75,52 ± 4,60 89,98 ± 1,49 98,64 ± 1,71 101,56 ±5,03 102,21 ± 3,15 103,82 ±2,81 HHVL 22,97 ± 3,90 32,99 ± 1,41 39,20 ± 3,53 50,41 ± 1,42 57,52 ± 3,50 62,34 ± 4,32 3.3 Kêt đo FI-IR 120 100 %T 80H 601- 40 4000 3600 3200 2800 2400 2000 1900 1800 1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 Wavenumber ịcm-1 Ị PL 3.5 Phổ IR FENO nguyên liệu PL 3.6 Phổ IR hỗn dịch nano FENO Wavenumber [cm-1) PL 3.7 Phổ IR bột hấp phụ CT3 (ppỉ) 900 800 700 600 500 400 Wavenumber |cm*1 Ị PL 3.8 Phổ IR bột hấp phụ CT3.05 (pp2) 4000 3600 3200 2800 2400 2000 1900 1800 1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 Wavenumber [cm-1J PL 3.9 Phổ IR viên CT3.05 Kêt đo DSC 1000 900 800 700 600 500 400 Aexo Aexo Aexo Lab: METTLER STAR- sw 15.00 Aexo Aexo PL3.10 Kết đo DSC mẫu Kết chụp SEM PL3.11 Anh chụp SEM bột hấp phụ CT3.05 vi trường khác PHỤ LỤC Kết đánh giá giai đoạn bào chế viên nén Kết thử hịa tan viên mơi trường NaLS 0,72% PL4.1 Kết thử hòa tan viên bào chế theo phương pháp môi trường NaLS 0,72% Viên CT3 Viên CT8 15,77 ± 3,22 22,47 ± 3,90 13,5 + 2,11 14,82 + 3,21 10 29,14 ±2,73 47,87+ 1,12 30,08 + 4,70 29,53 + 1,87 20 65,47 + 2,11 78,68 + 1,52 58,96+ 1,90 58,86+ 1,34 30 86,36 + 2,26 85,86 ± 1,21 81,55 + 2,05 79,24 + 3,61 45 91,55 + 2,22 90,07 + 5,45 81,55 + 2,90 95,91 ±2,78 60 96,57 + 2,64 94,27 + 3,57 94,79 ±3,21 98,84 ± 1,90 T(phút) Viên CT11 Viên CT9 r F PL4.2 Kêt thử hòa tan viên bào chê theo phương pháp môi trường NaLS 0,72% T (phút) CT3.01 CT3.02 CT3.05 Lipanthyl Viên HHVL 38,75 + 2,67 37,68 ±1,14 37,28 ±2,12 14,95 ±5,43 1,45 ±3,4 10 74,00 ± 2,78 75,20 ±4,32 68,46 ± 5,32 42,08 ± 2,76 1,87 ±2,36 15 90,25 ±5,13 83,58 ± 3,24 86,57 ± 1,09 2,85 ± 4,00 91,37 ± 1,24 20 30 101,59 + 1,14 92,64 ± 5,02 97,07 ± 2,04 45 104,62 + 3,45 96,83 ± 5,00 100,72 ±3,57 99,54 ± 2.,25 12,99 ±5,21 60 105,18 ±4,12 98,47 ± 1,13 102,28 ±2,36 20,00 ± 1,54 99,03 ± 1,56 100,05 ±3,00 6,50 ± 2,09