Hoàn thiện quy trình làm bộ mẫu ký sinh trùng sốt rét theo tiêu chuẩn của tổ chức y tế thế giới sử dụng trong chương trình ngoại kiểm của trung tâm kiểm chuẩn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN THỊ LÀI HỒN THIỆN QUY TRÌNH LÀM BỘ MẪU KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT THEO TIÊU CHUẨN CỦA TỔ CHỨC Y TẾ THẾ GIỚI SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM CỦA TRUNG TÂM KIỂM CHUẨN LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ LÀI HỒN THIỆN QUY TRÌNH LÀM BỘ MẪU KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT THEO TIÊU CHUẨN CỦA TỔ CHỨC Y TẾ THẾ GIỚI SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM CỦA TRUNG TÂM KIỂM CHUẨN NGÀNH: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC MÃ SỐ: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS VŨ QUANG HUY PGS.TS LÊ THÀNH ĐỒNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các tài liệu trích dẫn, số liệu luận văn hoàn toàn trung thực tuân theo yêu cầu nghiên cứu Luận văn chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn NGUYỄN THỊ LÀI MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chương TỔNG QUAN 1.1 Tình hình sốt rét 1.1.1 Tình hình sốt rét giới 1.1.2 Tình hình sốt rét Việt Nam 1.2 Hình thái ký sinh trùng sốt rét 1.2.1 Hình thái Plasmodium falciparum 1.2.2 Hình thái Plasmodium vivax 1.2.3 Hình thái Plasmodium ovale 10 1.2.4 Hình thái Plasmodium malariae 11 1.3 Chu trình phát triển ký sinh trùng sốt rét 13 1.3.1 Giai đoạn phát triển vơ tính thể người 13 1.3.2 Giai đoạn phát triển hữu tính thể muỗi 14 1.4 Phương pháp test nhanh chẩn đoán ký sinh trùng sốt rét 15 1.5 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm .17 1.5.1 Khái niệm ngoại kiểm 17 1.5.2 Mẫu ngoại kiểm 17 1.5.3 Tiêu chuẩn sản xuất mẫu ngoại kiểm .17 1.5.3.1 Tính đồng mẫu ngoại kiểm 18 1.5.3.2 Độ ổn định mẫu ngoại kiểm 18 1.5.4 Tình hình ngoại kiểm 19 1.5.4.1 Tình hình ngoại kiểm giới 19 1.5.4.2 Tình hình ngoại kiểm nước 20 1.5.4.3 Các chương trình ngoại kiểm ký sinh trùng sốt rét 22 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu 24 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 24 2.1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 24 2.2.2 Cỡ mẫu 25 2.2.3 Phương pháp chọn mẫu 25 2.2.4 Thu thập số liệu 25 2.2.5 Xử lý số liệu 25 2.3 Quy trình sản xuất tiêu KSTSR 27 2.3.1 Làm tiêu giọt dày giọt mỏng 27 2.3.2 Cố định giọt máu mỏng 28 2.3.3 Quy trình nhuộm tiêu với dung dịch giêm sa 28 2.3.4 Kỹ thuật dán lamen, cách bảo quản 29 2.3.5 Đánh giá chất lượng tiêu nhuộm 29 2.4 Đếm mật độ ký sinh trùng 31 2.5 Đánh giá tính đồng mẫu ngoại kiểm 32 2.6 Đánh giá độ ổn định mẫu ngoại kiểm 32 2.7 Bảo quản mẫu, lưu trữ mẫu 32 2.8 Đóng gói, vận chuyển mẫu đến đơn vị tham gia ngọai kiểm 33 2.9 Đánh giá kết ngoại kiểm 35 2.10 Vấn đề y đức tính ứng dụng 36 Chương KẾT QUẢ .37 3.1 Thực mẫu ký sinh trùng sốt rét để dùng ngoại kiểm 37 3.1.1 Thu thập mẫu máu làm tiêu 37 3.1.2 Thực mẫu ký sinh trùng sốt rét để dùng ngoại kiểm 37 3.2 Đánh giá tính đồng độ ổn định mẫu ngoại kiểm 38 3.2.1 Đánh giá tính đồng 38 3.2.2 Đánh giá độ ổn định 50 3.3 Ngoại kiểm ký sinh trùng sốt rét 69 Chương BÀN LUẬN 74 4.1 Thu thập mẫu thực mẫu ngoại kiểm 74 4.2 Đánh giá tính đồng 77 4.2 Đánh giá độ ổn định 79 4.3 Đánh giá ngoại kiểm 80 KẾT LUẬN 85 KIẾN NGHỊ 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phụ lục Phụ lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT An Anopheles BNSR Bệnh nhân sốt rét BYT Bộ Y tế CDC Centers for Disease Control and Prevention CRM Certified referrence material EDTA Ethylene diamin tetraacetic acid EQA External Quality Assessment GMS Greater Mekong Subregion KST Ký sinh trùng KSTSR Ký sinh trùng sốt rét P Plasmodium PCSR Phòng chống sốt rét PXN Phòng xét nghiệm QĐ Quyết định RM Referrence material SRLH Sốt rét lưu hành TB Tiêu TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TP HCM Thành phố Hồ Chí Minh WHO World Health Organization DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình thể P falciparum Hình 1.2 Hình thể P vivax Hình 1.3 Hình thể P ovale 11 Hình 1.4 Hình thể P malariae 12 Hình 1.5 Chu kỳ phát triển ký sinh trùng sốt rét .15 Hình 2.1 Số ngẫu nhiên Sách “Căn xác suất thống kê y học” 26 Hình 2.2 Tiêu máu giọt dày giọt mỏng 28 Hình 2.3 Nhuộm tiêu KSTSR 29 Hình 2.4 Tiêu KSTSR giọt mỏng .30 Hình 2.5 Tiêu KSTSR giọt dày 31 Hình 2.6 Bảo quản mẫu KSTSR hộp 33 Hình 2.7 Đóng gói mẫu KSTSR .33 Hình 3.1 Chứng nhận cấp độ Tổ chức Y tế Thế giới cấp 37 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết định loại mật độ KST/µl mẫu… 38 Bảng 3.2 Đánh giá tính đồng mật độ KSTSR mẫu PM01… 38 Bảng 3.3 Đánh giá tính đồng hình thể KSTSR mẫu PM01 ……… 39 Bảng 3.4 Đánh giá tính đồng mẫu PM02 ………… … 40 Bảng 3.5 Đánh giá tính đồng mẫu PM03 … … … 41 Bảng 3.6 Đánh giá tính đồng mẫu PM04 .… … 41 Bảng 3.7 Đánh giá tính đồng mẫu PM05 .…………… 42 Bảng 3.8 Đánh giá tính đồng mẫu PM06 .…………… 43 Bảng 3.9 Đánh giá tính đồng mẫu PM07 ………… 44 Bảng 3.10 Đánh giá tính đồng mẫu PM08 .………… 45 Bảng 3.11 Đánh giá tính đồng mẫu PM09 .………… 45 Bảng 3.12 Đánh giá tính đồng mẫu PM10 .………… 46 Bảng 3.13 Đánh giá tính đồng mẫu PM11 .………… 47 Bảng 3.14 Đánh giá tính đồng mẫu PM12 .………… 48 Bảng 3.15 Đánh giá tính đồng mẫu PM13 .………… 48 Bảng 3.16 Đánh giá tính đồng mẫu PM14 .………… 49 Bảng 3.17 Đánh giá độ ổn định mẫu PM01… ………… … 51 Bảng 3.18 Đánh giá độ ổn định mẫu PM02… ………… … 52 Bảng 3.19 Đánh giá độ ổn định mẫu PM03… ………… … 53 Bảng 3.20 Đánh giá độ ổn định mẫu PM04… ………… … 55 Bảng 3.21 Đánh giá độ ổn định mẫu PM05… ………… … 56 Bảng 3.22 Đánh giá độ ổn định mẫu PM06… ………… … 57 Bảng 3.23 Đánh giá độ ổn định mẫu PM07… ………… … 59 Bảng 3.24 Đánh giá độ ổn định mẫu PM08… ………… … 60 Bảng 3.25 Đánh giá độ ổn định mẫu PM09… ………… … 61 Bảng 3.26 Đánh giá độ ổn định mẫu PM10… ………… … 62 Bảng 3.27 Đánh giá độ ổn định mẫu PM11… ………… … 64 Bảng 3.28 Đánh giá độ ổn định mẫu PM12… ………… … 65 Bảng 3.29 Đánh giá độ ổn định mẫu PM13… ………… … 66 Bảng 3.30 Đánh giá độ ổn định mẫu PM14… ………… … 68 Bảng 3.31 Kết cho mẫu 1(P.vivax, mật độ KST 33.360 KST /μl) … … 70 Bảng 3.32 Kết cho mẫu (P.falciparum, mật độ KST 49.714 KST/μl) … …70 Bảng 3.33 Kết cho mẫu (P.vivax, mật độ KST 6.006 KST/μl ………… 71 Bảng 3.34 Kết cho mẫu (tìm khơng thấy KSTSR) ……………71 Bảng 3.35 Kết ngoại kiểm KSTSR đơn vị tham gia ……….72 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình làm tiêu mẫu KSTSR … …… … .34 81 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh khác với điểm tham chiếu cho mẫu tương ứng 9,7% 2,9% người tham gia ghi nhiều “++” khác Khi biểu thị số lượng KST/μl, hai phần ba (66,67%) kết nằm giá trị tham chiếu Mean ± 2SD[37] Theo kết nghiên cứu Senegal, Diallo Mamadou Alpha (2018) xây dựng mẫu ngoại kiểm gồm mẫu: mẫu dương tính với P falciparum có mật độ ký sinh trùng khác từ cao (28.000/µl) xuống thấp (192µl), mẫu tư dưỡng giao bào P falciparum mẫu lam máu âm tính [32] Có 17 phịng xét nghiệm tham gia có 11 phịng đạt kết đánh giá tốt, có kết xác định lồi ký sinh trùng sốt rét Có 4/17 (23,53%) phịng xét nghiệm đọc kết từ dương tính sang âm tính có 2/17 (11,76%) PXN đọc nhầm chủng từ P falciparum sang lồi khác Lỗi mà phịng xét nghiệm thường gặp xác định nhầm chủng lại P falciparum P malariae, P vivax P ovale [32] Nghiên cứu Sori (2018) có 30 trung tâm chẩn đốn bệnh sốt rét kính hiển vi tham gia, có (3,3%) phịng xét nghiệm đọc xác tất lam dương tính với định lượng ký sinh trùng xác, khoảng 40% khơng báo cáo mật độ ký sinh trùng Các phòng xét nghiệm xác định xác mật độ KSTSR 17 chiếm 56,7% Trong đó, phịng xét nghiệm xác định xác mẫu dương tính chiếm 20% có 66,7% phịng xét nghiệm báo cáo xác tất mẫu âm tính[34] Theo kết nghiên cứu Akili K Kalinga cộng (2020), thực đánh giá chất lượng ngoại kiểm kính hiển vi để cải thiện khả phát ký sinh trùng chẩn đoán bệnh sốt rét sở y tế Quân đội Tanzania kết ghi nhận 38,5% chẩn đốn khơng xác xét nghiệm viên với tỷ lệ dương tính giả âm tính giả 46,7% 16,4% Chỉ số chất lượng tổng thể hàng quý hàng năm tất phòng xét nghiệm tăng dần, từ 60% năm 2016 lên 78% năm 2017 90% năm 2018 Điểm số thực thử nghiệm thành thạo trung bình tăng từ 75% năm 2016 lên 82% năm 2017 lên 90% vào năm 2018 Việc chuẩn bị nhuộm lam máu góp phần làm tăng tỷ lệ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 82 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh dương tính giả âm tính chương trình ngoại kiểm giúp cải thiện chẩn đoán xác định ký sinh trùng sốt rét[26] Trong năm 2020, Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệm y học – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh thực đánh giá ngọai kiểm đợt Đợt 1(1 mẫu P.falciparum mẫu âm tính) có 24 đơn vị tham gia, có 21/24 (chiếm 87,5%) phịng xét nghiệm định loại KSTSR mẫu, có 12,5% PXN nhầm chủng KSTSR từ P.falciparum sang P.vivax nhiễm phối hợp mẫu Tất 100% phòng xét nghiệm xác định thể KSTSR qua nhận dạng thể tư dưỡng, thể giao bào nhận dạng sai chiếm 4,17%, tỉ lệ đạt chiếm 87,5% Đợt gồm mẫu âm tính có 24 đơn vị tham gia, có 24/24 chiếm 100% phịng xét nghiệm định loại KSTSR mẫu, khơng có trường hợp định loại từ âm tính sang dương tính tỉ lệ đạt chiếm 100% Đợt (1 mẫu P vivax mẫu âm tính) có 25 đơn vị tham gia, có 20/25 (80%) định loại KSTSR mẫu, 20% nhầm chủng từ KSTSR P vivax sang KSTSR P falciparum nhiễm phối hợp mẫu Xác định thể KSTSR tất phòng xét nghiệm nhận dạng thể tư dưỡng, thể phân liệt giao bào tìm thấy chiếm 88% 68% Tỉ lệ đạt chiếm 80% Đợt (1 mẫu P falciparum mẫu âm tính) có 25 đơn vị tham gia, có 20/25 chiếm (80 %) phòng xét nghiệm định loại KSTSR mẫu, nhầm chủng chiếm 12 % từ P falciparum sang P vivax nhiễm phối hợp mẫu có 8,0% phản hồi kết từ từ dương sang âm cụ thể từ mẫu nhiễm KSTSR P falciparum sang âm tính Ở mẫu 02 tỷ lệ phản hồi kết từ âm tính sang dương tính chiếm 4,0% Xác định, nhận dạng thể tư dưỡng chiếm 92%, thể phân liệt giao bào tìm thấy chiếm 60% 2,0% Tỉ lệ khơng đạt chiếm 80% Các đợt ngoại kiểm đánh giá mật độ KSTSR theo hệ thống dấu cộng, có 100% PXN tính mật độ ký sinh trùng tính hệ thống dấu cộng 50% đợt[20] Trong nghiên cứu này, mật độ ký sinh trùng có 9,09% kết nằm khoảng ±25% 15,15%, khoảng ± 50%, lại 75,76% PXN kết đếm vượt sai số cho phép mẫu 1, có 35,48% kết đếm nằm khoảng ±25% 6,45% khoảng ± Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 83 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 50%, cịn lại 58,07% PXN kết đếm vượt sai số cho phép mẫu 3, có 3,23% kết nằm khoảng ±25%và 6,45%, khoảng ± 50%, 90,32% kết đếm vượt sai số cho phép mẫu Mật độ KSTSR/µl lần ngoại kiểm này, có 58,06% kết phản hồi đạt ≥ 50% so với kết tham chiếu mật độ ký sinh trùng sốt rét microlit (≥ 25 điểm) Kết cho thấy tỉ lệ xác định lượng mật độ ký sinh trùng sốt microlit thấp so với kết tính mật độ ký sinh trùng theo hệ thống dấu cộng Do đợt ngoại kiểm sử dụng phương pháp đếm mật độ ký sinh trùng sốt rét microlit theo tiêu chuẩn đánh giá Tổ chức Y tế Thế giới thay cho phương pháp đếm theo hệ thống dấu cộng, nên đa số đơn vị tham gia chưa làm quen với phương pháp đếm Bên cạnh đó, đa số phịng xét nghiệm tham gia khu vực bệnh sốt rét lưu hành[6] nên khơng tập huấn sốt rét thường xuyên Xếp loại phịng xét nghiệm đợt có 18/31 (chiếm 58,06 %) đơn vị tham gia xếp loại đạt, cịn lại 13/31 (chiếm 41,94%) PXN khơng đạt u cầu Có phịng xét nghiệm khơng xếp loại đợt ngoại kiểm Đây kết dựa phương pháp đánh giá kết nghiên cứu Tổ chức Y tế Thế giới, hai kết định loại mật độ ký sinh trùng microlit khơng đạt xếp loại khơng đạt, kết tổng điểm đánh giá đạt 100%, khác với đợt đánh giá trước dựa tổng điểm định loại đếm theo hế thống dấu cộng, nên tỉ lệ đạt thấp so với đợt khác Theo kết nghiên cứu Mukadi cộng sự, năm 2011, khoảng 20% 10% người tham gia đánh giá “+” ≥ “++” khác với giá trị tham chiếu Định lượng ký sinh trùng theo hệ thống dấu cộng khơng qn Tổ chức Y tế Thế giới khuyến nghị thay số lượng ký sinh trùng sốt rét microlit Số lượng ký sinh trùng sai sót lớn thấp 10 lần cao giá trị tham chiếu Mật độ ký sinh trùng thấy có vấn đề số lần ngoại kiểm sở không lưu hành, với tỷ lệ thất bại lên đến 39% [ 37] Về định loại KSTSR 100% PXN có kết phản hồi đạt ≥ 60% ( ≥ 39 điểm) kết định loại Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 84 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Về đếm mật độ KSTSR có 58,06% kết phản hồi đạt ≥ 50% (≥ 25 điểm) Xếp loại phòng xét nghiệm có 18/31 ( chiếm 58,06 %) đơn vị tham gia đước xếp loại đạt, lại 13/31 (chiếm 41,94%) PXN khơng đạt u cầu Có phịng xét nghiệm không xếp loại đợt ngoại kiểm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 85 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh KẾT LUẬN Hồn thiện quy trình làm mẫu ký sinh trùng sốt rét theo tiêu chuẩn Tổ chức Y tế Thế giới THU THẬP MẪU MÁU ĐÁNH GIÁ MẪU MÁU QUY TRÌNH LÀM TIÊU BẢN MẪU ĐỊNH LOẠI VÀ ĐẾM MẬT ĐỘ KSTSR (6 xét nghiệm viên có chứng nhận WHO) ĐÁNH GIÁ TÍNH ĐỒNG NHẤT Chọn mẫu 10 lam, đánh giá lặp lại lần ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH Chọn mẫu lam, lặp lại lần sau tuần, tuần, 12 tuần, 24 tuần BẢO QUẢN, LƯU TRỮ MẪU Bảo quản hộp kín có gói hút ẩm, nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng trực tiếp NGOẠI KIỂM KSTSR Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 86 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Đánh giá tính đồng độ ổn định mẫu dùng ngoại kiểm ký sinh trùng sốt rét Tổng cộng có 14 mẫu có giọt dày giọt mỏng tiêu với mật độ ký sinh trùng từ 325 KST/μl đến 60486 KST/μl Cả 14 mẫu đạt tính đồng độ ổn định thời gian nghiên cứu 24 tuần, bảo quản hộp kín có gói hút ẩm, để nhiệt độ phịng, tránh ánh sáng trực tiếp Đánh giá ngoại kiểm phịng xét nghiệm Có 33/33 (100%) phịng xét nghiệm phản hồi kết Tuy nhiên, có 31/33 (93,94 %) phòng xét nghiệm gửi kết đầy đủ thời gian quy định, 2/33 (6,16% ) phòng xét nghiệm trả kết định loại tính mật độ ký sinh trùng sốt rét theo hệ thống dấu cộng Kết có 23/33 (đạt 69,7%) xác tất định loại KSTSR Có 18/31 (58,06%) phịng xét nghiệm đạt 50% định lượng mật độ KSTSR Về định loại KSTSR 100% PXN có kết phản hồi đạt ≥ 60% ( ≥ 39 điểm) kết định loại Về đếm mật độ KSTSR có 58,06% kết phản hồi đạt ≥ 50% (≥25 điểm) Xếp loại phịng xét nghiệm có 18/31 (chiếm 58,06 %) đơn vị tham gia xếp loại đạt, lại 13/31 (chiếm 41,94%) PXN khơng đạt u cầu Có phịng xét nghiệm khơng xếp loại đợt ngoại kiểm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 87 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh KIẾN NGHỊ Thực ngoại kiểm với phương pháp khác đánh giá phần nhuộm giêmsa đơn vị tham gia Thực ngoại kiểm hình ảnh ký sinh trùng sốt rét với nhiều chủng loại khác Đánh giá độ ổn định thời gian dài 24 tuần để lưu trữ mẫu dài hạn dùng ngoại kiểm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng việt: Trần Quang Bính,(2011), "Tình hình kháng thuốc sốt rét artemisinin dẫn chất giải pháp chiến lược phòng chống sốt rét Việt Nam", Y học Tp Hồ Chí Minh, 15(4), tr 15-18 Bộ Y tế, (2013), Thông tư 01/2013/TT-BYT Hướng dẫn thực quản lý chất lượng xét nghiệm tạ sở khám bệnh chữa bệnh Bộ Y tế, (2015), Báo cáo tình hình sốt rét năm 2015, Chương trình quốc gia phịng chống sốt rét Bộ Y tế (2016), Quyết định số 741/QĐ-BYT ngày 02/3/2016,"Hướng dẫn giám sát phòng chống bệnh sốt rét" Bộ Y tế (2017) Quyết định số 2429/QĐ-BYT ngày 12/6/2017 Bộ trưởng Bộ y tế ban hành Tiêu chí đánh giá mức chất lượng phịng xét nghiệm Bộ y tế (2020), Quyết số 1609/QĐ- BYT ngày 08/04/2020 Bộ trưởng Bộ y tế ban hành kết phân vùng dịch tễ sốt rét Việt Nam năm 2019 Đỗ Văn Dũng (2003), “Căn xác suất thống kê y học” Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Hồng Hà, (2014), Nghiên cứu thực trạng sốt rét đánh giá kết can thiệp phòng chống sốt rét số xã biên giới huyện Hướng Hóa tỉnh Quảng Trị, Luận án tiến sĩ, Đại học Y Dược Huế, tr 4-6 Nguyễn Ngọc Hiền (2019)," Quy trình sản xuất mẫu phết máu xét nghiệm P.falciparum P vivax dùng cho ngoại kiểm", Tạp chí Y học Việt Nam, tập 479, tháng 6, số (Issn 1859 - 1868) 10 Vũ Quang Huy cộng sự, (2016), "Khảo sát nhu cầu tham gia ngoại kiểm đánh giá chất lượng năm 2015 phòng xét nghiệm thuộc Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng y học – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh", Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 20 (5), tr 397-403 11 Trần Xuân Mai, (2013), Ký sinh trùng y học, NXB Y học Tp Hồ Chí Minh, tr 83-86 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 12 Lục Tiểu Nguyên, (2005), " Tình hình sốt rét nhóm dân rừng ngủ rẫy số biện pháp can thiệp xã Sơn Thái, huyện Khánh Vĩnh, tỉnh Khánh Hòa", Y học Thực hành 511, tr 110-114 13 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 8245:2009 ISO Guide 35:2006,(2009), Mẫu chuẩn - Nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận, tr 1843 14 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 7366:2011 ISO Guide 34:2009,(2011), Yêu cầu chung lực nhà sản xuất mẫu chuẩn, tr 20-22 15 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 17043:2011 hay ISO 17043:2010, (2011), Đánh giá phù hợp - yêu cầu chung thử nghiệm thành thạo, tr 1323 16 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 9596:2013 ISO13528:2003, (2013), Phương pháp thống kê dùng thử nghiệm thành thạo cách so sánh liên phịng thí nghiệm, tr 56-61 17 Nguyễn Văn Thắng, Vũ Quang Huy cộng sự, (2014), "Đánh giá chất lượng xét nghiệm 86 phịng xét nghiệm tham gia chương trình ngoại kiểm(EQA) Hóa sinh- miễn dịch hợp tác quốc tế với Australia năm 2013 Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng y học – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh", Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 18 (5), tr 214-219 18 Thủ tướng phủ, (2016), Quyết định phê duyệt đề án tăng cường lực hệ thống quản lý chất lượng xét nghiệm y học giai đoạn 2016-2025 19 Trung tâm Kiểm soát bệnh tật tỉnh Bình Phước (2020), Báo cáo cơng tác phịng chống sốt rét năm 2020, Số 29/BC-KSBT-SR 20 Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng y học – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh (2020), báo cáo phân tích kết ngoại kiểm 21 Viện sốt rét - KST - Cơn trùng TP HCM (2016), Nghiên cứu tính dễ tổn thương người di cư với sốt rét đặc điểm dịch tễ sốt rét kháng artemisinin Bình Phước, Việt Nam, Tổ chức di cư quốc tế (IOM) 22 Viện sốt rét - KST - Côn trùng TP HCM (2019, Báo cáo tình hình sốt rét năm 2019 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 23 Viện sốt rét - KST - Côn trùng Trung Ương (2019), Báo cáo hội nghị tổng kết công tác phòng chống loại trừ sốt rét, ký sinh trùng, côn trùng năm 2019 24 Lê Thị Xuân, (2013), Ký sinh trùng thực hành, tái lần 2, NXB Giáo dục Việt Nam, tr 68 B Tiếng Anh 25 Adewoyin AS & Nwogoh B, (2014), “ Peripheral blood film-a review”, Annals of Ibadan postgraduate medicine, 12(2), pp.71-79 26 Akili K Kalinga, Saidi Mgata, Reginald A Kavishe, et al, (2020), “Implementation of external quality assessment of microscopy for improved parasite detection and confrmatory diagnosis of malaria in Tanzanian Military health facilities” 27 Anthony Moody, (2002), "Rapid Diagnostic Tests for Malaria Parasites", Clinical microbiology reviews, 15(1), pp 66-78 28 Aparna Narasimha, Harendra Kumar & Prasad, (2008), “Anticoagulant induced artefacts in peripheral blood smears”, Indian Journal of Hamatology and Blozikiod Transfusion, 24 (2), pp.43-48 29 Azikiwe CC, Ifezulike CC, et al, (2012) “ A comparative laboratory diagnosis of malaria: microscopy versus rapid diagnostic test kits”, Asian Pac J Trop Biomed, 2(4), pp.37-41 30 Costa M R F, Barcelos A L R, et al, (2019) “Performance of an immunorapid malaria P.f/P.v rapid diagnostic test for malaria diagnosis in the Western Brazilian Amazon”, pp 170-175 31 Cho S J, Lee H J, et al, (2016), “A Novel Malaria P.f/P.v Ab Rapid Diagnostic Test Using a Differentical Diagnostic Marker Identified by Netwoark Biology”, Int J Biol Sci, 12(7), pp 824-835 32 Diallo M A, (2018), Quality control of malaria microscopy reveals misdiagnosed non - falciparum species and other microscopically detecttable pathogens in Senegenl", Annals of clincal microbiology and antimicrobials, pp 110-115 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 33 Emmanuel Ifeanyi Obeagu, Chijioke UO, Ekelozie IS,(2018),"Malaria Rapid Diagnostic Tests (RDTs)", iMedPub Journals, 6(4), pp 1-3 34 Getachew Sori, Olifan Zewdie, Geletta Tadele and Abdi Samue, (2018), “External quality assessment of malaria microscopy diagnosis in selected health facilities in Western Oromia, Ethiopia” Malaria Journal 35 Kwoolwal, (2018), “ Anticoagulant EDTA Induced Storage effect on Peripheral Blood Cells”, Journal of medical science and clinical research, 6(1), pp 430-433 36 Matjan Van Blerk, Ste'phanie Albare de, Adre' Deom, Silke Heller, (2008), "Comparison of evaluation procedures used by European external quality assessment scheme organizers for haemoglobin concentration and leukocyte concentration", Accred Qual Assur, 13 pp.145-148 37 Pierre Mukadi, Philippe Gillet, Albert Lukuka, Ben Atua, Simelo Kahodi, Jean Lokombe, Jean-Jacques Muyembe and Jan Jacobs Mukadi et al,(2011), “External quality assessment of malaria microscopy in the Democratic Republic of the Congo”, http://www.malariajournal.com/content/10/1/308 38 Ricos C, Baadenhuijsen H, Libeer C J, Petersen P H, et al, (1996), " External quality assessment: currently used criteria for evaluating performance in European countries, and criteria for future harmonization", Eur J Clin Chem Clin Biochem, 34(2), pp 159-165 39 Robert J Commons, Prof Julie A Simpson P, et al,(2018), “ The effect of choloroquine dose and primaquine on Plasmodium vivax recurrence: A WorldWide Antimalarial Resistance Network systematic review and individual patient pooled meta-analysis”, The Lancet, 18(9, pp 1025-1034 40 Wang L, Pan Y, Zhang K, Zhang R, et al, (2013), " A 10 - year human hepatitis B virus nucleic test external quality assessment in China: continual improvement", Clin Chim Acta, 425 pp 139-147 41 WHO, (2003), Manual of basic techniques for a health laboratory 2nd Edition, pp.172-182 42 WHO, (2009), Overview of External Quality Assessment (EQA) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 43 WHO, (2010), Basis malaria microscopy 2nd edition, Part 1: Learner's guide, pp.21-35 44 WHO, (2015), Malaria microscopy quality assurance manual - Version 2, pp 18-19 45 WHO, (2016), SOP 01: Cleaning and storing microscope slides, pp 1-2 46 WHO, (2016), SOP 5a: Collection of finger-prick blood and preparation of thick and thin blood films 47 WHO, (2016), SOP 5b: Collection of blood by venipuncture and preparation of blood films from venous blood collected in tubes containing anticoagulant 48 WHO, (2016), SOP 7a: Giemsa staining of malaria blood films 49 WHO, (2016), SOP 09: Malaria parasite counting 50 WHO, (2016), Public report Prequalification of In Vitro Diagnostics Programme Product: SD BIOLINE Malaria Ag P.f/P.v 51 WHO, (2016), WHO manual for organizing a national external quality assessment programme for health laboratories and other testing sites 52 WHO, (2016), SOP 08: Validation of the Malaria blood films by Microscopy 53 WHO, (2019), List of rapid diagnostic tests( RDTs) kits for malaria classified according to the global fund quality assurance policy 54 Wongtanachai J, Silamut K, Zhang K, et al,(2012), “ Effects of antimalarial drugs on movement of Plasmodium falciparum”, Southeast Asian J Trop Med Public Health, 43(1), pp.1-9 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục BẢNG GHI KẾT QUẢ ĐẾM MẬT ĐỘ KSTSR STT 10 11 12 13 14 Bộ Mẫu PM01 PM02 PM03 PM04 PM05 PM06 PM07 PM08 PM09 PM10 PM11 PM12 PM13 PM14 XNV_1 Lần 60522 40808 4465 72690 45333 54481 368 11849 22375 59493 38430 850 15881 1996 XNV_2 Lần Lần 73931 45753 50800 63250 5052 9672 68933 73939 32630 22415 52300 54162 334 253 12800 13440 21913 24995 54921 58817 35282 33311 763 1272 16000 23059 1905 1439 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn XNV_3 Lần Lần 51692 53714 58203 40377 8232 8760 64369 47689 36228 24459 47172 37855 266 367 12887 12533 23187 14145 50190 59288 30090 25114 1197 1202 19584 18565 1628 2877 Lần 47736 44000 7137 52800 33889 46311 349 12458 20896 49448 31044 1070 18480 2680 XNV_4 Lần Lần 54278 43705 45034 47814 4672 7647 50635 57973 40160 32832 54481 46174 363 317 11962 11760 21833 20537 57577 52152 38430 39686 935 873 17228 19640 1689 1915 XNV_5 Lần 35593 33705 4338 35655 15029 37811 336 6962 14416 44697 27651 901 16360 1000 Lần 41385 43200 4650 47385 22188 41633 303 7921 12480 55897 31515 798 18420 1244 XNV_6 Lần 42887 34483 5731 63000 36613 64508 240 13134 18368 45307 34286 1625 20020 1882 Lần 54588 38990 6280 70133 40615 51282 286 12402 20139 43717 33574 1326 18581 1792 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TPHCM TRUNG TÂM KIỂM CHUẨN CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Y HỌC PHIẾU KẾT QUẢ NGOẠI KIỂM PHẾT MÁU TÌM KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT THÔNG TIN ĐƠN VỊ I ĐƠN VỊ THAM GIA NGOẠI KIỂM CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM 1.Tên đơn vị: 6.Đợt: QPM-0121 2.Mã đơn vị: 7.Ngày gởi phiếu: Chọn ngày 3.Người phụ trách: 8.Mã Ngoại kiểm: 4.Điện thoại: 9.Nhân viên thực hiện: 5.Email: 10.Email nhận kết quả: II eqa.qcc.ump@gmail.com KẾT QUẢ NGOẠI KIỂM *Kết định loại đếm mật độ KSTSR: BỘ MẪU 21-01 KẾT QUẢ ĐỊNH LOẠI 21-01-QPM01 KẾT QUẢ THỂ Tư dưỡng (Trophozoite) KẾT QUẢ Phân liệt (Schizonte) KẾT QUẢ Giao bào (Gametocyte) KẾT QUẢ KẾT QUẢ ĐỊNH DANH 21-01-QPM02 KẾT QUẢ THỂ MẬT ĐỘ Tư dưỡng (Trophozoite) KẾT QUẢ Phân liệt (Schizonte) KẾT QUẢ Giao bào (Gametocyte) KẾT QUẢ KẾT QUẢ ĐỊNH DANH THỂ MẬT ĐỘ Tư dưỡng (Trophozoite) KẾT QUẢ Phân liệt (Schizonte) KẾT QUẢ Giao bào (Gametocyte) KẾT QUẢ 21-01-QPM03 KẾT QUẢ MẬT ĐỘ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn SỐ LƯỢNG ……………… KST/ µl SỐ LƯỢNG ……………… KST/ µl SỐ LƯỢNG ……………… KST/ µl Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh KẾT QUẢ ĐỊNH DANH THỂ Tư dưỡng (Trophozoite) 21-01-QPM04 KẾT QUẢ KẾT QUẢ Giao bào (Gametocyte) KẾT QUẢ KẾT QUẢ THỂ SỐ LƯỢNG KẾT QUẢ Phân liệt (Schizonte) KẾT QUẢ ĐỊNH DANH 21-01-QPM05 MẬT ĐỘ ……………… KST/ MẬT ĐỘ Tư dưỡng (Trophozoite) KẾT QUẢ Phân liệt (Schizonte) KẾT QUẢ Giao bào (Gametocyte) KẾT QUẢ SỐ LƯỢNG ……………… KST/ * Cách trả lời: Mật độ KSTSR  Mật độ dấu cộng: Chỉ đếm giọt dày 1+: có đến 10 KST/ 100 vi trường 100x 2+: 10 KST/ 100 vi trường 100x 3+: có đến 10 KST/ vi trường 100x 4+: 10 KST/ vi trường 100x  Mật độ KST/ µl: đếm cách a Giọt dày: Công thức: KST/ μl = Số KST đếm x 000 / Số BC đếm Số KST đếm được: + đếm đến 200 BC, số KST ≥ 100, ngừng đếm tính số KST đếm + đếm đến 500 BC, số KST ≤ 99, ngừng đếm tính số KST đếm Số BC đếm được: số BC thực đếm với số KST b Làn mỏng: Công thức: KST/ μl = Số HC bị KST vơ tính ký sinh x 000 000 / Số HC đếm Số HC bị KST ký sinh: đếm 20 quang trường, tính số HC bị KST vơ tính ký sinh (khơng tính số lượng giao bào) Số HC đếm được: tổng số HC đếm số quang trường khảo sát  Lưu ý: - Chọn mũi tên bên phải ô kết để xổ lựa chọn chọn kết tương ứng - Trả lời đầy đủ: tên KSTSR, mật độ, số lượng  Tài liệu tham khảo: - MM-SOP-06b – Recording and reporting microscopy results - WHO; - MM-SOP-08 - Microscopy examination of thick and thin blood films for identification of malaria parasites – WHO; - MM-SOP-09 - Malaria parasite counting – WHO; Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn µl µl