Báo cáo thực hành thực tập nghiên cứu trong phòng thí nghiệm bài 2 (NLU)

Báo cáo thực hành thực tập nghiên cứu trong phòng thí nghiệm bài 2 Báo cáo thực hành thực tập nghiên cứu trong phòng thí nghiệm bài 2 Báo cáo thực hành thực tập nghiên cứu trong phòng thí nghiệm bài 2 Báo cáo thực hành thực tập nghiên cứu trong phòng thí nghiệm bài 2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA NẤM TRICHODERMA SP VỚI NẤM GÂY BỆNH THỰC VẬT FUSARIUM SP Mơn học: Thực tập Nghiên cứu Phịng thí nghiệm Giáo viên hướng dẫn: TS Lê Thị Diệu Trang Sinh viên thực hiện: Nhóm – Sáng thứ Họ tên MSSV Ngô Khánh Linh 20126786 Võ Sông Hương 20126254 Huỳnh Minh Nguyệt 20126320 Kiều Trọng Vinh 20126412 Phạm Thị Kiều My 18126096 Tháng 05 năm 2022 MỤC LỤC CHƯƠNG MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Nội dung đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI KIỆU Nấm đối kháng Nấm Trichoderma sp 2.1 Phân loại 2.2 Nguồn gốc 2.3 Đặc điểm hình thái 2.4 Đặc điểm sinh học 2.5 Ứng dụng Nấm Fusarium sp 10 3.1 Phân loại 10 3.2 Nguồn gốc 10 3.3 Đặc điểm hình thái 11 3.4 Đặc điểm sinh học 11 3.5 Ứng dụng 12 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 Vật liệu nghiên cứu 13 1.1 Đối tượng nghiên cứu 13 1.2 Dụng cụ thiết bị 13 1.3 Hóa chất 13 Phương pháp nghiên cứu 13 2.1 Cách bố trí thí nghiệm: 13 2.2 Các bước thực hiện: 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 14 Kết 14 Xử lý số liệu 17 CHƯƠNG KẾT LUẬN 19 Kết luận 19 Kiến nghị 19 TÀI LIỆU THAM KHẢO 20 CHƯƠNG MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Bệnh hại trồng đóng vai trị trực tiếp việc phá hủy tài nguyên thiên nhiên nông nghiệp nguyên nhân làm giảm sản lượng lương thực hàng năm giới, ước tính giảm 10–40% Những thiệt hại nghiêm trọng nhất, hệ sinh thái tự nhiên sản xuất, mầm bệnh truyền qua đất, nấm nhóm tác nhân gây bệnh thực vật nhiều nhất, phá hủy tới phần ba tổng số trồng hàng năm Theo Tổ chức Nông lương Liên hợp quốc (FAO), loại nấm thực vật thường ảnh hưởng nhiều đến loại trồng quan trọng giới - lúa, lúa mì, ngơ, khoai tây đậu tương Trong thập kỷ gần đây, phương pháp phổ biến để bảo vệ thực vật chống lại nấm sử dụng loại thuốc bảo vệ thực vật Các sản phẩm hóa chất bảo vệ thực vật có hiệu cao cịn nhiều lo ngại tính an toàn, tác động tiêu cực đến sức khỏe người, động vật tạo áp lực nghiêm trọng lên hệ sinh thái Kết việc lạm dụng thuốc trừ sâu hóa học gia tăng sức đề kháng mầm bệnh với thuốc trừ sâu, ô nhiễm đất nước ngầm Hơn nữa, thuốc trừ sâu có tác động bất lợi sinh vật mục tiêu (ví dụ, trùng có ích, bao gồm loài thụ phấn), vi sinh vật đất,… Để bảo vệ môi trường khỏi tác động tiêu cực thuốc diệt nấm hóa học, hành động chiến lược khác hệ thống sản xuất lương thực bền vững thực hiện, bao gồm Quản lý Dịch hại Tổng hợp (IPM) canh tác hữu Một chiến lược sử dụng Tác nhân Kiểm soát Sinh học (BCA), dựa vi sinh vật sống chất chuyển hóa chúng, sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên để kiểm soát quần thể mầm bệnh thực vật Trong vài thập kỷ qua, người ta nỗ lực nhiều để kiểm tra tính hiệu tính thực tiễn vi khuẩn nấm khơng gây bệnh với hy vọng thương mại hóa chúng dạng BCA Kết nghiên cứu tiến hành, số lượng lớn chủng vi khuẩn nấm sử dụng làm BCA, bao gồm Pseudomonas spp., Bacillus spp., Streptomyces spp., Trichoderma spp., Glomus mosseae , Gliocladium virens , Pythium oligandrum Beauveria bassiana , kiểm sốt thành cơng bệnh truyền qua đất loại trồng có giá trị nấm, oomycetes, vi khuẩn tuyến trùng gây Trong số loài nấm sợi, hầu hết BCA thuộc họ Ascomycota phylum chủ yếu đại diện nhiều loài thuộc chi Trichoderma Nhiều nghiên cứu ghi nhận đặc tính có lợi chủng nấm Trichoderma có lợi cho phép sử dụng chúng việc bảo vệ thực vật, kích thích sinh học thụ tinh sinh học Mục tiêu đề tài Khảo sát khả đối kháng chủng nấm Trichoderma sp với nấm gây bệnh thực vật Fusarium sp Nội dung đề tài Khảo sát khả đối kháng chủng nấm Trichoderma sp với nấm gây bệnh thực vật Fusarium sp Dựa vòng kháng khuẩn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI KIỆU Nấm đối kháng Nấm đối kháng tên thường gọi chủng nấm vi sinh có khả tiêu diệt nấm bệnh gây hại trồng Chúng ngăn cản, phá vỡ, làm tan vách tế bào, sau chúng tiết kháng sinh tiêu diệt chủng nấm bệnh xâm nhập gây vùng rễ, thân trồng Đây chủng nấm hữu ích trồng Trichoderma chủng nấm đối kháng mạnh có vai trị lớn canh tác trồng ăn trái Nấm Trichoderma sp 2.1 Phân loại Giới: Fungi Ngành: Ascomycota Lớp: Sordariomycetes Họ: Hypocreales Bộ: Hypocreaceae Chi: Trichoderma Hình 1: Nấm Trichodarma sp Theo phân loại MycoBank tại, Trichoderma thuộc Eukaryota, giới Nấm, ngành Ascomycota, phân ngành Pezizomycotina, lớp Sordariomycetes, Hypocreales, họ Hypocreaceae, chi Trichoderma bao gồm 300 lồi có đặc điểm hình thái phân tử, nhiều lồi số chưa mơ tả thức 2.2 Nguồn gốc Trichoderma phổ biến khắp giới, chúng thường cư trú gỗ mục nát dạng vật chất hữu khác thực vật Trichoderma thành phần chủ yếu mycobiome hệ sinh thái đất khác (chẳng hạn đất nông nghiệp, đồng cỏ, rừng, đầm lầy muối sa mạc) tất vùng khí hậu, bao gồm vùng ôn đới nhiệt đới, Nam Cực, lãnh nguyên Chi Trichoderma phân loại nấm thiên dưỡng, thường sống dạng nội sinh thực vật thân gỗ Trichoderma không phổ biến môi trường dễ phân lập mà cịn dễ dàng nhân lên điều kiện có kiểm sốt nhiều loại giá thể bảo quản nhiều tháng mà không bị khả sống đặc tính 2.3 Đặc điểm hình thái Trichoderma chi chủ yếu nấm sợi vơ tính (dạng đa hình Hypocrea ), chúng phát triển sợi nấm màu trắng suốt (hyalin) Potato Dextrose Agar (PDA), khuẩn lạc có nhiều màu sắc khác (thường màu xanh lục - vàng đỏ) tùy thuộc vào màu sắc bào tử Những loại nấm đặc trưng tế bào đồng bào nhiều nhánh có hình chóp cụm phân kỳ, thường uốn cong khơng đối xứng, phialit hình bình / hình trụ , bào tử khơng màu có nhiều sắc thái khác xanh lục, xám nâu 2.4 Đặc điểm sinh học Nấm Trichoderma loại nấm có khả tiết số enzym cellulase, chitinase, protease, pectinase, amlylase giúp phân hủy mùn đất sau giải phóng chất dinh dưỡng mà trồng dễ hấp thu Hơn nữa, số loài tạo mùi mùi dừa đặc trưng Các lồi Trichoderma có tiềm chất bảo vệ thực vật sinh học mô tả lần vào đầu năm 1930 Nhà nghiên cứu Weindling quan sát thấy chủng T lignorum bảo vệ có múi chống lại mầm bệnh Rhizoctonia solani thông qua chế gây bệnh viêm màng túi hoại tử Kể từ đó, đặc tính kiểm sốt sinh học Trichoderma nghiên cứu rộng rãi để kiểm soát bệnh nhiều loại phytopathogens đất gây Các loài thuộc giống Trichoderma đóng vai trị tác nhân kiểm soát sinh học hệ sinh thái đất nhờ khả phát triển nhanh, sử dụng nhiều loại giá thể khả chống lại nhiều hóa chất độc hại, bao gồm thuốc diệt nấm (ví dụ: azoxystrobin, 3,4 dichloroaniline, trifloxystrobin), chất diệt cỏ, chất ô nhiễm hữu khác Ngồi ra, Trichoderma cịn phát có khả phân giải số chất gây ô nhiễm độc hại thông qua enzym tham gia vào trình phân hủy cellulose/lignin chứng minh có tiềm enzym chuyển hóa xenobiotic Nấm Trichoderma sử dụng nhiều chế phức tạp trực tiếp gián tiếp làm giảm xuất bệnh thực Tác động trực tiếp lên mầm bệnh bao gồm sản xuất enzym phân hủy thành tế bào (CWDE) nấm bệnh, tổng hợp kháng sinh, tổng hợp chất chuyển hóa kháng nấm, cạnh tranh khơng gian chất dinh dưỡng (chủ yếu cacbon, nitơ sắt) thiết lập mối quan hệ ký sinh trực tiếp với nấm bệnh (Mycoparasitism) cảm ứng kháng thuốc trồng Mycoparasitism tượng loại nấm đối kháng (mycoparasite) ký sinh loại nấm khác (vật chủ) Các loại nấm thuộc giống Trichoderma hầu hết phân loại nấm mycoparasite hoại sinh Hơn 75 lồi Trichoderma có tiềm ký sinh trùng Tác động ký sinh nấm Trichoderma nấm bệnh bao gồm cảm ứng mồi phản ứng hóa học, bám dính vào vật chủ, cơng vật lý thông qua phân nhánh mạnh cuộn quanh sợi nấm vật chủ Mặt khác, Trichoderma gián tiếp gây sức đề kháng chỗ toàn thân cho trồng thông qua sản phẩm (chất tạo màng) tiết từ thành tế bào vật chủ thực vật (endoelicytors) vi sinh vật lây nhiễm (exoelicytors) Loại chế liên quan thường đặc tính dịng phụ thuộc vào kiểu tương tác vi sinh vật đối kháng, mầm bệnh ký chủ Việc bổ sung chủng Trichoderma vào đất làm tăng suất chất lượng loại mầm hai mầm, chẳng hạn dưa chuột, cà chua, cà rốt, đậu, ngô, bông, thuốc lá, kê cỏ cảnh Hơn nữa, Trichoderma thích nghi với thay đổi điều kiện môi trường tạo nhiều bào tử bào tử bào tử trùng Trichoderma hoạt động tốt khoảng nhiệt độ từ 15 - 21 ° C Tuy nhiên, chủng DEMTkZ3A0 nhiệt độ 12 ° C tối ưu cho khả tổng hợp auxin gibberellin thích hợp cho ACC (1aminocyclopropan-1-cacboxylat) ngừng hoạt động Tuy nhiên, nấm Trichoderma gây hại cho số lĩnh vực nông nghiệp sức khỏe người Tác dụng bất lợi chúng nông nghiệp chủ yếu liên quan đến khả nhiễm nấm gây thực thể bệnh gọi nấm mốc xanh trồng nấm (nấm hương, nấm sị nấm champignons) Một số lồi Trichoderma nằm tác nhân gây bệnh cho trồng Ví dụ, T viride tác nhân gây bệnh thối mốc hành Đặc biệt, T brevicompactum , T atroviride , T harzianum , gây nhiễm trùng hội người bao gồm viêm xoang, nhiễm trùng da gan, viêm phổi viêm miệng 2.5 Ứng dụng Hiệu việc sử dụng nấm Trichodermatrong nông nghiệp phụ thuộc vào hoạt động trao đổi chất chúng kiểu tương tác với thực vật vi sinh vật khác Những loại nấm cư trú hiệu thân rễ cây, sinh quyển, đồng thời tạo số chất chuyển hóa có tính chống vi khuẩn (enzym phân hủy thành tế bào, kháng sinh, hợp chất dễ bay không bay hơi) kích thích sinh học (phytohormones, phytoregulators) Hơn nữa, Trichoderma biết đến với khả hấp thụ sâu lịch trình rễ tương tác khơng với vi sinh vật gây bệnh, mà cịn tương tác với tồn hệ vi sinh vật đất Nấm Trichoderma sử dụng nhiều q trình xử lí phân chuồng giúp rút ngắn q trình ủ khử mùi phân chuồng phế phẩm nông nghiệp Trichoderma tiết loại enzym có khả làm tan vách tế bào loại nấm có hại khác, enzym công vào bên nấm bệnh gây hại, biến chúng thành thức ăn tạo nên hữu có lợi cho đất trồng, bảo vệ vùng rễ trồng chống lại nấm thối rễ Trichoderma giúp tiêu diệt nấm Fusarium solani (tác nhân gây Vàng thối rễ nhiều loại trồng, chết nhanh chết chậm tiêu) Giúp phân hủy cellulose, phân giải lân tan chậm Giúp tăng số lượng rễ mọc sâu Tăng khả chống khô hạn trồng, cân pH, giải độc đất hiệu Trichoderma giúp tiết kiệm lượng phân bón q trình chăm sóc Chúng có khả phịng trị, cạnh tranh tiêu diệt tác nhân gây bệnh giúp cải thiện sức khỏe Ngoài hiệu trực tiếp tác nhân gây bệnh cây, nhiều lồi Trichoderma kí sinh bề mặt rễ giúp thay đổi khả biến dưỡng Nhiều dịng nấm kích thích tăng trưởng Giúp gia tăng khả hấp thụ dinh dưỡng, cải thiện suất giúp kháng bệnh Nấm Trichoderma sử dụng đất bám vào xung quanh rễ cây, tiết đất chất kích thích giúp rễ ăn sâu vào lòng đất, làm cho rễ khỏe tăng khả hút dinh dưỡng, tăng khả phòng vệ trước nấm khuẩn cho rễ Trichoderma sống đất, liên tục sinh khối tạo thành lớp lớp trichoderma xung quanh rễ lớp bảo vệ rễ tránh xâm nhập nhiều loại nấm hại từ bên Làm giảm khả nhiễm bệnh vùng rễ cho lên đến 70% Nhờ nấm Trichoderma bám vào đầu rễ, liên tục sản sinh enzym chất dinh dưỡng cho rễ nên giúp cho tăng khả hoa, thụ phấn, tăng trọng lượng chiều cao cây, tăng suất, chất lượng trồng Đối với nấm Trichoderma có khả sinh khối nhanh đất Gần chúng xâm chiếm hoàn toàn vùng đất xung quanh tán cấy vào Tuy nhiên, Trichoderma có điểm yếu chủng nấm hại đất đông khiến khả đối kháng chúng giảm nhiều Đây lý Trichoderma chủ yếu sử dụng việc phịng bệnh khơng phải trị bệnh Nấm Fusarium sp 3.1 Phân loại Giới: Fungi Ngành: Ascomycota Lớp: Sordariomycetes Họ: Hypocreales Bộ: Nectriaceae Chi: Fusarium Hình 2: Nấm Fusarium sp 3.2 Nguồn gốc Fusarium có mối liên kết với rễ cây, tìm thấy ao, sơng, hệ thống cống rãnh ống dẫn nước tìm thấy độ sâu 80 cm Chúng sinh sống khu vực nhiệt đới, cận nhiệt đới nói có khí hậu ơn hịa khơng sinh sống vùng núi cao Độ pH đất không ảnh hưởng đến Fusarium cho lắm, hun khói đất lại khiến chúng xuất nhiều Fusarium nhạy cảm loại thuốc diệt nấm đất Ngoài ra, thể loài thuộc chi Glischrochilus có cá thể cịn non trưởng thành 10 3.3 Đặc điểm hình thái Fusarium sp hình thành tản nấm có hình dạng trịn, có màu trắng tuyết, sau ngày nuôi cấy môi trường PGA thấy có xuất màu tím hồng đậm trung tâm tản nấm lan dần xung quanh, bề mặt xốp dày Bào tử Fusarium sp nhỏ có vách ngăn tế bào mỏng, chúng có dạng hình trứng, bầu dục hay hình elip, hình thành sau - ngày ni cấy Các bào tử hình thành đơn lẻ hình thành cụm bao tử hệ sợi Bào tử lớn thường có - vách ngăn tế bào, vách tế bào dày Chúng có hình liềm, đầu cong nhọn, đầu hình bàn chân, hình thành sau - ngày ni cấy Các bào tử lớn hình thành đơn lẻ hình thành cụm hệ sợi nấm tạo thành túi bào tử 3.4 Đặc điểm sinh học Fusarium sinh sản vơ tính trung bình kiểu bào tử vơ tính bào tử đính lớn (Macroconidia), bào tử đính nhỏ (Microconidia) bào tử vách dày (hậu bào tử Chlamydospores) Macroconidia dài, nhiều nhân, hình liềm thân cong sinh từ cuống bào tử Đầu cuối bào tử lớn thn nhọn Một vài lồi bào tử lớn tách rời không gắn cuống bào tử, tế bào sinh bào tử lớn gọi thể bình (phialide) Microconidia thường đơn nhân, đơi ngăn, hình cầu hình trứng sinh từ thể bình hay cuống bào tử phân nhánh khơng phân nhánh Tiểu bào tử đính thường giữ nhóm nhỏ tiểu bào tử đính Fusarium giống bào tử Cephalosporium giai đoạn thường qui vào nấm Cephalosporium Chlamydospores hình trịn hình trứng, vách dày, nằm tận chen sợi nấm giả Chúng phát triển đơn thành chuỗi, chúng tách mọc ống mầm bào tử gặp điều kiện thuận lợi, Hậu bào tử hay bào tử vách dầy bền tồn độc lập thời gian dài Các yếu tố khách quan làm tăng phát triển nấm Fusarium sp là: bón phân đạm nhiều, yếu tố hệ vi sinh vật có đất, ẩm độ đất, nhiệt độ tối ưu cho 11 nấm Fusarium sp phát triển 27 – 30 °C, tối đa 36 - 40°C tối thiểu – 8°C, nhiệt độ thích hợp cho xâm nhiễm 35°C Nấm Fusarium sp gây nhiều bệnh trồng: bệnh nghẽn mạch (héo), thối rễ, thối thân, thối hạt thối trái Nấm Fusarium sp sống phổ biến đất lưu tồn dạng bào tử áo khuẩn ty sống xác bã thực vật dư thừa hay chất hữu Nấm Fusarium sp công chủ yếu vào rễ Đặc biệt, bệnh gây hại nặng nề điều kiện stress nước, dùng phân bón nhiều hay rễ bị tổn thương Nấm Fusarium sp có phạm vi ký chủ rộng lớn tồn nhiều dạng khác đất Mặt khác, thành phần phân bố nấm đất có liên quan chặt chẽ với xuất mức độ gây hại vùng sinh thái khác 3.5 Ứng dụng Chi Fusarium bao gồm nhiều loài gây bệnh cho héo tắc bó mạch, thối rễ, thân bắp, thối cổ rễ thối củ Một số loài gây bệnh sản sinh độc tố nấm lẫn tạp hạt ngũ cốc Các bệnh héo Fusarium vấn đề quan trọng Việt Nam bệnh đề cập đến cách chi tiết sau phần Những bệnh héo dạng loài F oxysporum gây Một vài dạng F oxysporum gây thối dưa hấu củ khoai tây bị sâu dụng cụ gặt hái làm tổn thương Thối bắp ngô, chủ yếu F graminearum F verticillioides gây ra, ngày trở nên nghiêm trọng Việt Nam Cả hai loài sản sinh độc tố nấm tồn hạt Một số dạng Fusarium solani gây thối cổ rễ họ đậu đậu Hà Lan, đậu cô ve, thối rễ trưởng thành Các dạng khác gây hại khu vực gốc thân lớn, vải, bị yếu yếu tố môi trường làm stress bệnh khác Fusarium decemcellulare phân lập từ cành nhãn bị thối miền bắc Việt Nam từ cà phê Tỉnh Đắc Lắc Danh mục chưa phải đầy đủ cịn nhiều lồi khác có mặt Việt Nam 12 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu 1.1 Đối tượng nghiên cứu Nấm Trichoderma sp Nấm fusarium sp 1.2 Dụng cụ thiết bị Dụng cụ: chai thủy tinh, đĩa petri, que cấy thẳng, đèn cồn,… Thiết bị: Nồi hấp, tủ cấy, tủ sấy,… 1.3 Hóa chất Mơi trường Potato Dextrose agar (PDA) - Thạch khoai tây môi trường dùng để phát nấm men, nấm mốc bơ, sản phẩm từ sữa thực phẩm khác Môi trường PDA sử dụng để chuẩn bị nấm Aspergillus niger xét nghiệm Harmonised Microbial Limit Tests (enumeration test) Vai trị mơi trường PDA: Potato Dextrose Agar (PDA) chứa dextrose nguồn carbonhydrate cho trình tăng trưởng, dịch khoai tây cung cấp nguồn dinh dưỡng cho phát triển hầu hết loại nấm Thạch tác nhân làm đặc môi trường Một số ứng dụng môi trường PDA: Phân lập nấm men nấm mốc sản phẩm từ sữa, thịt thực phẩm khác (thực phẩm) Phát nấm mốc chịu nhiệt sản phẩm (trái cây) qua xử lý nhiệt (thực phẩm) Phương pháp nghiên cứu Phương pháp đồng nuôi cấy chủng nấm Trichoderma sp chủng nấm Fusarium sp đĩa chứa mơi trường PDA 250C 2.1 Cách bố trí thí nghiệm: 13 Thí nghiệm tiến hành theo phương pháp đồng nuôi cấy gồm nghiệm thức (1 chủng nấm Trichoderma sp nghiệm thức đối chứng), nghiệm thức lặp lại lần, lần lặp lại mẫu 2.2 Các bước thực hiện: Bước 1: Chuẩn bị đĩa giống nấm Trichoderma sp nấm Fusarium sp Chuẩn bị đĩa petri với môi trường PDA dụng cụ cấy Bước 2: Khử trùng đĩa petri dụng cụ cấy Bước 4: Cấy truyền từ đĩa giống Trichoderma sp Fusarium sp sang đĩa Hai điểm cấy đối xứng nhau, cách thành đĩa 2cm Đối với nghiệm thức đối chứng, cấy nấm gây bệnh Fusarium sp Bước 5: Nuôi cấy đĩa tủ cấy nhiệt độ 250C Bước 6: Quan sát ghi nhận phát triển sợi nấm sau 3, 5, ngày CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết Sau q trình ni cấy quan sát phát phát triển hệ sợi nấm Trichoderma sp Fusarium sp sau 3, 5, ngày, ghi nhận kết nhưu sau 14 Hình 3: Nấm Trichodarma sp Fusarium sp sau ngày ni cấy Hình 4: Nấm Trichoderma sp Fusarium sp sau ngày ni cấy 15 Hình 5: Nấm Trichodarma sp Fusarium sp sau ngày nuôi cấy Lần Fusarium sp Trichoderma sp Đối chứng Đường kính sau khoảng thời gian (mm) lặp lại ngày 20 23 32 18 24 28 17 32 42 50 56 77 56 66 80 42 73 80 30 36 42 22 30 34 20 36 50 Bảng 1: Đường kính (mm) cụm nấm sau khoảng thời gian 3, ngày 16 Hình 6: Biểu đồ đường kính Fusarium sp cấy chung với Trichoderma sp cấy riêng Xử lý số liệu Đánh giá tính đối kháng chủng Trichoderma sp với nấm Fusarium sp gây bệnh dựa vào phần trăm ức chế theo công thức: (C - T)/C *100 Trong đó: - C: bán kính khuẩn lạc Fusarium sp nghiệm thức đối chứng (mm) - T: bán kính khuẩn lạc Fusarium sp cấy với Trichoderma sp (mm) Tính đối kháng Lần lặp lại Tricoderma sp (%) Ngày 33,33 18,18 15 Ngày 36,11 20 11,11 Ngày 23,81 17,65 16 Bảng 2: Đánh giá tính đối đối kháng chủng Trichoderma sp 17 với nấm Fusarium sp gây bệnh dựa vào khả ức chế Giá trị phần trăm tính đối kháng Tricoderma sp trung bình sau lần lặp lại là: - Lần 1: 31,08% - Lần 2: 18,61% - Lần 3: 14,04% Giá trị phần trăm trung bình tính đối kháng Tricoderma sp qua lần đối kháng là: 21,24% Tính độ lệch chuẩn SD cho giá trị thể tính đối kháng Tricoderma sp qua ngày, ngày ngày điều chỉnh Ghi lại hai độ lệch chuẩn Tính tổng bình phương độ lệch: Lần lặp Phần trăm tính lại đối kháng Độ lệch (sd) Trung bình (2) (1)-(2) Bình phương độ lệch (sd)2 Tricoderma sp (1) 31,08 21,24 9,84 96,82 18,61 21,24 -2,63 6,92 14,04 21,24 -7,2 51,84 Tổng bình phương độ lệch 155,58 Bảng 3: Bảng số liệu tính tốn thơng số sau khoảng thời gian Tính giá trị phương sai Variance: • Phương sai =Tổng bình phương độ lệch/N-1 = 155,58/(3-1) =77,79 18 • Độ lệch chuẩn SD (standart deviation) = (phương sai)1/2 =8,82 Vậy thấy khả đối kháng Tricoderma sp với nấm Fusarium sp 21,24±8,82% Từ kết thấy, sinh trưởng phát triển nấm Trichoderma sp có khả đối kháng với nấm Fusarium sp gây bệnh trồng nhờ khẳng cạnh tranh không gian sống, nguồn dưỡng, sản xuất enzym phân hủy vách tế bào nấm Fusarium sp CHƯƠNG KẾT LUẬN Kết luận Hoạt động chủng nấm Trichoderma sp môi trường nuôi cấy cho thấy chúng có khả đối kháng với chủng nấm Fusadium sp gây bệnh thực vật, làm dần khả sinh trưởng chế sinh học nấm Fusadium sp., từ làm suy giảm đáng kể khả gây bệnh hại cho trồng Do vây, việc dụng nấm đối kháng Trichoderma sp hồn tồn có hiệu việc điều trị bệnh thối rễ, vàng lá,… liên quan đến chủng nấm Fusadium sp Kiến nghị Cần thực thêm thí nghiệm kéo dài thời gian đối kháng nấm Trichoderma sp với nấm Fusadium sp dể kiểm tra hiệu phòng trị bệnh nấm Trichoderma sp trông thời gian dài tác động chúng đến người hệ sinh thái 19 TÀI LIỆU THAM KHẢO https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8875981/ https://nongnghiepthuanthien.vn/nam-doi-khang-trichoderma/ https://chephamvisinh.vn/trichoderma-phuong-phap-phong-tru-nam-benh/ https://en.wikipedia.org/wiki/Fusarium 20