Nghiên cứu nhân chồi và tạo cây hoàn chỉnh in vitro lan huệ ngoại cánh kép double king hippeastrum hybrium

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN CHỒI VÀ TẠO CÂY HOÀN CHỈNH IN VITRO LAN HUỆ NGOẠI CÁNH KÉP DOUBLE KING (Hippeastrum hybrium) LƢƠNG THỊ THÙY DƢƠNG AN GIANG, THÁNG NĂM 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN CHỒI VÀ TẠO CÂY HOÀN CHỈNH IN VITRO LAN HUỆ NGOẠI CÁNH KÉP DOUBLE KING (Hippeastrum hybrium) LƢƠNG THỊ THÙY DƢƠNG DSH173232 Giảng viên hƣớng dẫn TS NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN AN GIANG, THÁNG NĂM 2021 CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Chuyên đề tốt nghiệp “Nghiên cứu nhân chồi tạo hoàn chỉnh in vitro Lan huệ ngoại cánh kép Double King” sinh viên Lƣơng Thị Thùy Dƣơng thực dƣới hƣớng dẫn giảng viên Nguyễn Thị Mỹ Duyên Tác giả báo cáo kết nghiên cứu đƣợc Hội đồng Khoa học Đào tạo thông qua Phản biện Phản biện Trịnh Hoài Vũ Diệp Nhựt Thanh Hằng Cán hƣớng dẫn Nguyễn Thị Mỹ Duyên LỜI CẢM TẠ Để hoàn thành chuyên đề tốt nghiệp này, em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến: Ban giám hiệu trƣờng Đại học An Giang, Ban chủ nhiệm khoa Nông nghiệp Tài nguyên thiên nhiên, Bộ môn Công nghệ sinh học tạo điểu kiện để em có hội để hồn thành chun đề tốt nghiệp Cô Ts Nguyễn Thị Mỹ Duyên hƣớng đẫn, động viên giúp đỡ, đóng góp ý kiến để em hồn thành chun đề Q thầy cô môn dành thời gian đọc đóng góp ý kiến cho chuyên đề tốt nghiệp em Cuối cảm ơn Chị Nguyễn Thị Trúc Quỳnh bạn Nguyễn Hữu Nghĩa, bạn Nguyễn Thị Thảo Nghi, bạn Phạm Thị Kim Thƣ đồng hành, giúp đỡ cho em thời gian học tập thực chuyên đề Ngƣời thực Lƣơng Thị Thùy Dƣơng i MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vii DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT viii CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.4 CÂU HỎI NGHIÊN CỨU CHƢƠNG 2: LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 GIỚI THIỆU VỀ LAN HUỆ Hippeastrum hybridum 2.1.1 Nguồn gốc vị trí phân loại 2.2 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT HOA LAN HUỆ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 2.2.1 Tình hình sản xuất hoa có củ giới 2.2.2 Tình hình sản xuất hoa lan huệ Việt Nam 2.3 TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ 2.3.1 Khái niệm phƣơng pháp nuôi cấy mô – tế bào thực vật 2.3.2 Ƣu điểm nuôi cấy mô – tế bào thực vật 2.3.3 Cơ sở nuôi cấy mô – tế bào thực vật 2.3.4 Các giai đoạn nhân giống in vitro 2.3.5 Môi trƣờng nuôi cấy điều kiện nuôi cấy 2.3.6 Điều kiện nuôi cấy 10 ii 2.4 TỔNG QUAN VỀ NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƢỚC 10 2.4.1 Các nghiên cứu nƣớc 10 2.4.2 Các nghiên cứu nƣớc 11 CHƢƠNG 3: PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 12 3.2 PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 12 3.2.1 Vật liệu 12 3.2.2 Trang thiết bị phịng thí nghiệm 12 3.2.3 Dụng cụ thí nghiệm 12 3.2.4 Môi trƣờng ni cấy hóa chất 12 3.2.5 Điều kiện nuôi cấy 13 3.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 4.1 Thí nghiệm 1: Nhân chồi in vitro cho Lan huệ ngoại cánh kép Double King 15 4.1.1 Số chồi 15 4.1.2 Chiều cao chồi 19 4.1.3 Số 22 4.2 Thí nghiệm 2: Tạo hồn chỉnh in vitro cho Lan huệ Double King26 4.2.1 Số chồi 26 4.2.2 Số rễ 27 4.2.3 Chiều dài rễ 28 4.2.3 Số 29 4.2.4 Chiều cao chồi 29 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 iii 5.1 KẾT LUẬN 32 5.2 KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC 36 PHỤ LỤC 37 iv DANH SÁCH BẢNG Tên bảng Bảng Bảng Trang Thành phần thành phần tự chọn môi trƣờng nuôi cấy Nghiệm thức thí nghiệm nhân chồi từ củ nhỏ in vitro 13 Bảng Nghiệm thức thí nghiệm tạo hồn chỉnh cho củ Lan huệ 14 Bảng Số chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (chồi) Số chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (chồi) 15 Bảng Số chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (chồi) 16 Bảng Số chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (chồi) Số chồi mẫu Lan huệ sau 10 tuần nuôi cấy (chồi) 18 Bảng Chiều cao chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (cm) 19 Bảng 10 Chiều cao chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (cm) 19 Bảng 11 Chiều cao chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (cm) 20 Bảng 12 Chiều cao chồi mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (cm) Chiều cao chồi mẫu Lan huệ sau 10 tuần nuôi cấy (cm) Số mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (lá) Số mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (lá) 21 Bảng Bảng Bảng 13 Bảng 14 Bảng 15 v 16 18 21 22 23 Bảng 16 Số mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (lá) 23 Bảng 17 Số mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (lá) 24 Bảng 18 Số mẫu Lan huệ sau 10 tuần nuôi cấy (lá) 25 Bảng 19 Số rễ mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (rễ) 27 Bảng 20 Chiều dài rễ mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (cm) 28 Bảng 21 Số mẫu Lan huệ sau tuần nuôi cấy (lá) 29 Bảng 22 Chiều cao chồi mẫu Lan huệ sau tuần ni cấy (cm) 30 vi DANH SÁCH HÌNH Tên hình Trang Hình Hoa Lan huệ ngoại cánh kép Double King Hình Sự phát triển mẫu cấy Lan huệ sau 10 tuần ni cấy 26 Hình Sự phát triển chồi rễ Lan huệ Double king sau tuần 31 vii Sara Zakizadeh, Behzad Kaviani, Rasoul Onsinejad (2013), “In vitro rooting of Amaryllis (Hippeastrum johnsonii), a bulbous plant, via NAA and 2-iP”, Annals of Biological Research, (2), pp 69-71 Seabrook, J.E and Cumming, B.G., 1977 The in vitro propagation of Amaryllis (Hippeastrum spp hybrids) In vitro, 13(12), pp.831-836 Siddique M.N.A, Sultana J., Sultana N., Hossain M.M (2007), “Ex vitro Establishment of in vitro Produced Plantlets and Bulblets of Hippeastrum (Hippeastrum hybridum)”, Int J Sustain Crop Prod, 2(3): 22-24 Smith, R.H., Burrows, J and Kurten, K., 1999 Challenges associated with micropropagation of Zephyranthes and Hippesatrum sp (Amaryllidaceae) In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, 35(4), pp.281-282 Sultana, J., Sutlana, N., Siddique, M.N.A., Islam, A.K.M.A., Hossain, M.M and Hossain, T., 2010 In vitro bulb production in Hippeastrum (Hippeastrum hybridum) Journal of Central European Agriculture The flower bulb sector within an international perspective (k.n) Truy cập từ http://uk.ibulb.org/275 Theron K & De Hertogh A A (2001) “Amaryllidaceae: Geophytic Growth, Development, and Flowering” Horticultural Review, Volume 25, pp.1-70 Tombolato, A., Matthes, L 1996 Collection of Hippeastrum spp., Alstroemeria spp and other Brazilian bulbous species In: III International Symposium on New Floricultural Crops 454 p 91-98 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm & Hồng Minh Tấn (2000) Sinh lí thực vật Nhà xuất giáo dục 252 trang 35 PHỤ LỤC Bảng pl1: Thành phần môi trƣờng MS STT Nhóm Hóa chất Đa lƣợng MS1 NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O Thành phần môi trƣờng (mg/l) 1.650 1.900 370 CaCl2 330 100 KH2PO4 170 100 FeSO4.7H2O Na2EDTA H3PO3 MnSO4 ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.2H2O KI CoCl2 Pyridoxine Niccotinic Thiamine HCl Glycine Myo-Inositol 27.8 37.3 6.2 22.3 11.5 0.25 0.025 0.83 0.025 0.5 0.5 0.4 0.2 100 10 Đa lƣợng MS2 Đa lƣợng MS3 Fe EDTA Vi lƣợng Vitamine Chất hữu Chất điều hòa sinh trƣởng Thành phần khác Lấy từ dung dịch mẹ (ml) 100 1 1 NAA, BA,TDZ Thạch Đƣờng Than hoạt tính 9g/l 30g/l 0.5g/l (Murashire Skoog, 1962) 36 PHỤ LỤC CÁC BẢNG PHÂN TÍCH ANOVA Thí nghiệm 1: Nhân chồi in vitro cho Lan huệ ngoại cánh kép Double King Bảng pl2: Phân tích ANOVA số chồi Trung bình Nguồn biến Độ tự Tổng bình bình Giá trị F P động phương phương Loại mẫu cấy 0,06234444 0,03117222 33,8