Đặc điểm dịch tễ, lâm sàng bệnh lở mồm long móng ở trâu, bò tại một số địa phương thuộc tỉnh hà giang và đánh giá hiệu giá kháng thể sau tiêm phòng

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG QUỐC BẢO “ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, LÂM SÀNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG Ở TRÂU, BỊ TẠI MỘT SỐ ĐỊA PHƯƠNG THUỘC TỈNH HÀ GIANG VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ SAU TIÊM PHÒNG” LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Thái Nguyên - 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG QUỐC BẢO “ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, LÂM SÀNG BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG Ở TRÂU, BÒ TẠI MỘT SỐ ĐỊA PHƯƠNG THUỘC TỈNH HÀ GIANG VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ SAU TIÊM PHÒNG” Ngành: Thú y Mã số ngành: 8.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS Dương Thị Hồng Duyên Thái Nguyên - 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng: Trên đề tài nghiên cứu cá nhân Các số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực, khách quan khảo sát, nghiên cứu chưa sử dụng công bố cơng trình nghiên cứu khoa học Tất thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Giang, ngày tháng TÁC GIẢ Nông Quốc Bảo năm 2022 ii LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực đề tài này, ngồi nỗ lực cố gắng thân cịn có tận tình hướng dẫn giúp đỡ tận tình thầy cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn tới: Cô giáo TS Dương Thị Hồng Duyên người trực tiếp hướng dẫn, bảo, giành nhiều thời gian quý báu tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông lâm - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu học tập Trân trọng cảm ơn Chi cục Chăn nuôi Thú y, Cục thống kê tỉnh Hà Giang cung cấp số liệu giúp tơi hồn thành luận văn Xin trân trọng cảm ơn Trạm Chăn nuôi Thú y huyện địa bàn tỉnh Hà Giang tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình điều tra thu thập mẫu Nhân dịp xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè đồng nghiệp ln bên cạnh ủng hộ, tạo điều kiện, động viên, giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn q trình học tập, nghiêp cứu hoàn thành luận văn Thái Nguyên, ngày tháng Học viên Nông Quốc Bảo năm 2022 iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU viii DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ ix MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU .2 Ý NGHĨA CỦA ĐỀ TÀI Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐIỀU KIỆN TỰ NHIÊN, XÃ HỘI CỦA HÀ GIANG ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT SINH VÀ PHÁT TRIỂN BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG 1.2 LỊCH SỬ CỦA BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Lịch sử bệnh 1.2.3 Tình hình bệnh lở mồm long móng Việt Nam .6 1.3 ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VIRUS LỞ MỒM LONG MĨNG 1.3.1 Các đặc tính sinh học chung virus 1.3.2 Hình thái, cấu trúc virus lở mồm long móng 10 1.3.3 Phân loại virus lở mồm long móng 11 1.3.4 Đặc tính ni cấy virus lở mồm long móng .12 1.3.5 Độc lực virus lở mồm long móng .12 1.3.6 Sức đề kháng virus lở mồm long móng 12 1.3.7 Loài mắc bệnh 13 1.4 ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG VIỆT NAM 14 1.4.1 Về nguồn bệnh phương thức lây lan 14 1.4.2 Chất chứa virus 14 1.4.3 Đường xâm nhập .15 1.4.4 Cách sinh bệnh 15 iv 1.4.5 Cách truyền lây 16 1.4.6 Tỷ lệ nhiễm bệnh .16 1.5 TRIỆU CHỨNG VÀ BỆNH TÍCH .17 1.5.1 Triệu chứng .17 1.5.2 Bệnh tích 18 1.6 CHẨN ĐOÁN BỆNH 19 1.6.1 Chẩn đoán lâm sàng 19 1.6.2 Chẩn đoán virus học 19 1.6.3 Chẩn đoán huyết học .20 1.6.4 Chẩn đoán kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) 24 1.7 VACCINE PHÒNG BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG 25 1.7.1 Vaccine formol keo phèn 26 1.7.2 Vaccine vô hoạt .26 1.7.3 Vaccine nhược độc 26 1.7.4 Vaccine sản xuất theo công nghệ gen .27 Chương 28 ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .28 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 28 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 28 2.1.4 Vật liệu nghiên cứu 28 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 29 2.2.1 Đặc điểm dịch tễ bệnh lở mồm long móng số địa phương tỉnh Hà Giang 29 2.2.2 Đặc điểm lâm sàng bệnh lở mồm long móng Hà Giang 29 2.2.3 Chẩn đốn, phát trâu bị nhiễm kháng thể lở mồm long móng tự nhiên Hà Giang kỹ thuật ELISA .29 2.2.4 Đánh giá hiệu giá kháng thể vaccine lở mồm long móng sau tiêm phịng 29 v 2.2.5 Đề xuất biện pháp phòng bệnh lở mồm long móng hiệu cho đàn trâu, bò Hà Giang 30 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh lở mồm long móng địa phương thuộc tỉnh Hà Giang .30 2.3.2 Phương pháp xác định triệu chứng lâm sàng bệnh lở mồm long móng số địa phương thuộc tỉnh Hà Giang 30 2.3.3 Phương pháp xác định type virus lở mồm long móng lưu hành đàn trâu, bò .30 2.3.4 Phương pháp đánh giá hiệu giá kháng thể vaccine lở mồm long móng sau tiêm phòng tỉnh Hà Giang 32 2.4 Phương pháp xử lý số liệu .34 Chương 36 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .36 3.1 ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG TẠI MỘT SỐ ĐỊA PHƯƠNG CỦA TỈNH HÀ GIANG .36 3.1.1 Tình hình chăn ni thú y Hà Giang 36 3.1.2 Một số đặc điểm dịch tễ bệnh lở mồm long móng đàn trâu, bị Hà Giang 39 3.2 ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG Ở TRÂU, BỊ TẠI HÀ GIANG 53 3.3 KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN, ĐỊNH TYPE VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG Ở HÀ GIANG BẰNG KỸ THUẬT ELISA .54 3.3.1 Khảo sát tình hình nhiễm virus lở mồm long móng trâu, bò Hà Giang phương pháp ELISA CHECKIT FMD - 3ABC .54 3.3.2 Định type virus gây bệnh lở mồm long móng trâu, bò tỉnh Hà Giang.55 3.4 ĐÁNH GIÁ HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ CỦA VACCINE PHỊNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG Ở ĐÀN TRÂU, BÒ TẠI HÀ GIANG 56 3.4.1 Tỷ lệ tiêm phòng vaccine lở mồm long móng cho đàn trâu bị Hà Giang từ 2021 - 2022 56 vi 3.4.2 Tỷ lệ bảo hộ trâu, bò Hà Giang sau tiêm vaccine 58 3.5 ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG HIỆU QUẢ CHO ĐÀN TRÂU, BỊ CỦA TỈNH HÀ GIANG 60 3.5.1 Khi chưa có dịch lở mồm long móng xảy 60 3.5.2 Khi phát dịch 61 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .62 Kết luận .62 Đề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN : Axit deoxyribonucleic ARN : Axit ribonucleic BHK-21 : Baby Hamster Kidney-21 CFT : Complement Fixation Test FMD : Foot and Mouth Disease FMDV : Foot and Mouth Disease Virus FAO : Food and Agriculture Organization KD: : Kiểm dịch KDĐV : Kiểm dịch động vật KN : Kháng nguyên KT : Kháng thể KTVSTY : Kiểm tra vệ sinh thú y LMLM : Lở mồm long móng PBS : Phosphate Buffered Saline PCR : Polymerase Chain Reaction RT-PCR : Real time - Polymerase Chain Reaction WRL : Wold Reference Laboratory (+) : Dương tính (-) : Âm tính µl : Microlit viii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Số lượng đàn gia súc gia cầm tỉnh Hà Giang từ năm 2018 – 8/2022 36 Bảng 3.2 Kết công tác kiểm dịch Hà Giang từ năm 2018 – 08/2022 38 Bảng 3.3 Diễn biến dịch LMLM trâu, bò Hà Giang 40 từ năm 2018 – 08/2022 40 Bảng 3.4 Hệ số năm dịch năm giai đoạn 2018 – 2022 43 Bảng 3.5: Tỷ lệ mắc bệnh chết LMLM trâu, bò Hà Giang 44 từ 2018 – 8/2022 44 Bảng 3.6 Tốc độ mắc bệnh LMLM trâu bò Hà Giang từ 2018 - 8/2022 46 Bảng 3.7 Tỷ lệ mắc bệnh LMLM trâu, bò theo địa phương từ 8/2021 – 8/2022 47 Bảng 3.8 Tỷ lệ mắc bệnh LMLM trâu, bò theo tuổi 49 Bảng 3.9 Tỷ lệ mắc bệnh LMLM trâu, bò theo mùa 51 Bảng 3.10 Triệu chứng lâm sàng trâu, bò bị bệnh LMLM Hà Giang 53 Bảng 3.11 Tỷ lệ dương tính huyết học 3ABC trâu, bò tỉnh Hà Giang 55 từ 8/2021 – 8/2022 55 Bảng 3.12 Kết xét nghiệm, định type virus LMLM trâu, bò Hà Giang 56 Bảng 3.13: Tỷ lệ tiêm phòng vaccine LMLM cho đàn trâu, bò Hà Giang 57 từ 2021 - 2022 57 Bảng 3.14: Tỷ lệ bảo hộ trâu, bò Hà Giang sau tiêm vaccine 58 > - > Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 12.2 2.24964 21533 21540 21527.8 0.00128 11 5.8 4.79205 10101 10112 10106.2 0.00273 18 31634 31652 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 7.046 0.008 > - > 2- Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 6.44 0.0495832 21533 21540 21533.56 0.0000148 9.56 0.0333590 32007 32016 32006.44 0.0000100 16 53540 53556 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 0.083 0.773 Ở bò ≤ > – Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 3.67 5.11708 9926 9930.33 0.00189 9934 9.33 2.01112 25271 25276 25266.67 0.00074 13 35197 35210 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 7.131 0.008 ≤ > – Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 5.1 1.71869 9926 9928.9 0.00087 9934 11 13.9 0.62269 27408 27419 27405.1 0.00032 19 37334 37353 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 2.343 0.126 ≤ > Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 9.1 0.122816 9924 9922.9 0.000112 9932 14 12.9 0.085902 14186 14200 14187.1 0.000078 22 24110 24132 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 0.209 0.648 > – > Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 12.2 4.22046 25271 25276 25263.8 0.00203 14 6.8 7.51243 14186 14200 14193.2 0.00362 19 39457 39476 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 11.739 Likelihood Ratio 11.192 1 0.001 0.001 > – > Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 11 16.5 1.81682 27408 27419 27402.5 0.00109 14 8.5 3.50814 14186 14200 14191.5 0.00211 25 41594 41619 All Cell Contents Count Expected count Contribution to Chi-square Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 5.328 0.001 > – > – Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 11 8.33 0.859278 27408 27419 27410.67 0.000261 25271 25276 7.67 0.932131 All 25268.33 0.000283 16 52679 52695 Cell Contents Count Expected count Contribution to Chi-square Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 1.792 0.181 So sánh theo mùa Ở Trâu Xuân Hè & Xuân Thu Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 2.50 2.500000 90449 90454 90451.50 0.000069 2.50 2.500000 90454 90454 90451.50 0.000069 180903 180908 All Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 5.000 0.025 Xuân Đông Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Không Nhiễm nhiễm 19 90449 90435 All 90454 10.3158 0.0022 33 19 10.3158 90421 90435 0.0022 All 90454 38 180870 180908 Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 20.636 0.000 Đông Thu & Đông Hè Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 16.5 16.5000 90454 90437.5 0.0030 90454 33 16.5 16.5000 90421 90437.5 0.0030 90454 All 33 180875 180908 Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 33.006 0.000 Ở BÒ Xuân Hè & Thu Hè Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 4.00000 76819 76823 0.00021 76827 All 4.00000 76827 76823 0.00021 76827 153646 153654 Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 8.000 0.005 Xuân Thu Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Không Nhiễm nhiễm All 8 76819 76819 76827 8 76819 76819 76827 All 16 153638 153654 Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 0.000 1.000 Đông Xuân & Đông Thu Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Nhiễm Không nhiễm All 15 76819 76812 76827 All 3.26667 0.00064 22 15 3.26667 76805 76812 0.00064 30 76827 153624 153654 Cell Contents Count Expected count Contribution to Chi-square Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 6.535 0.009 So sánh khác tỷ lệ trâu, bò chết LMLM Rows: Worksheet rows Columns: Worksheet columns Chết Ko chết All Trâu 4.72 66 65.28 70 Bò 7.28 100 108 100.72 All 12 166 178 Chi-Square Test Chi-Square DF P-Value Pearson 0.194 Likelihood Ratio 0.197 1 cell(s) with expected counts less than 0.660 0.657 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8400-1:2010 BỆNH ĐỘNG VẬT - QUY TRÌNH CHẨN ĐỐN – PHẦN 1: BỆNH LỞ MỒM LONG MĨNG Phụ lục D (Quy định) Quy trình kỹ thuật ELISA phát kháng thể PIRBRIGHT D.1 Cách tiến hành Gắn đĩa (coating): Kháng huyết thỏ kháng virus lở mồm long móng pha lỗng 1:1000 với coating dung dịch đệm, nhỏ 50 ml/giếng Đậy nắp, ủ lắc nhiệt độ 37 °C/1 h ủ qua đêm °C Chuẩn bị hỗn hợp kháng nguyên-huyết (liquid phase blocking), nhỏ vào đĩa nhựa polypropylen 96 giếng đáy chữ U (Phụ lục A): - Huyết đối chứng kiểm tra pha loãng 1:16 với dung dịch đệm A, 50 ml/giếng - Kháng nguyên pha loãng theo tỷ lệ cho trước, 50 ml/giếng Hỗn hợp ủ qua đêm °C Rửa đĩa ELISA lần dung dịch rửa PBS 0,002 M (Phụ lục A) Chuyển 50 ml hỗn hợp kháng nguyên-huyết từ đĩa chữ U sang đĩa ELISA theo vị trí tương ứng (Phụ lục D) Đậy nắp, ủ lắc nhiệt độ 37°C/1 h Rửa lần dung dịch rửa PBS 0,002M (Phụ lục A) Nhỏ kháng thể phát hiện: Kháng huyết chuột lang kháng virus lở mồm long móng pha lỗng 1:100 với dung dịch đệm B, 50 ml/giếng Đậy nắp, ủ lắc nhiệt độ 37 °C/1 h Rửa lần dung dịch rửa PBS 0,002 M (Phụ lục A) Nhỏ chất gắn kết: pha loãng 1:200 với dung dịch đệm B, 50 ml/giếng Đậy nắp, ủ lắc nhiệt độ 37 °C/40 Rửa lần dung dịch rửa PBS 0,002 M (Phụ lục A) Nhỏ chất chromogen (dung dịch chromogen + % chất): 50 ml/giếng, để 20 nhiệt độ phòng, chỗ tối Dừng phản ứng: nhỏ 50 ml/giếng dung dịch H2SO4 1,25 M D.2 Đọc kết Sử dụng máy đọc ELISA, kính lọc 492 nm Sử dụng phần mềm edi để tính PI (phần trăm ức chế) Nếu PI ≥ 50 mẫu coi dương tính, huyết có kháng thể lở mồm long móng Sơ đồ đĩa ELISA phát kháng thể trình bày Phụ lục D CHÚ Ý: Xác định hiệu giá kháng thể, mẫu huyết pha sau: - Huyết kiểm tra: Pha loãng theo tỷ lệ 1:8 - Nhỏ dung dịch dung dịch đệm A: 50 ml/giếng vào lỗ đĩa chữ U cột cột thứ 12 tất hàng - Nhỏ huyết kiểm tra pha loãng 1:8 vào lỗ tương ứng 50 ml/giếng pha loãng theo số từ hàng A đến hàng D từ hàng E đến hàng H - Huyết đối chứng: Chuẩn bị giống phát kháng thể - Nhỏ kháng nguyên pha loãng theo tỷ lệ cho trước 50 ml/giếng - Hỗn hợp kháng nguyên-huyết ủ qua đêm °C - Các bước sau tiến hành theo trình tự giống phản ứng ELISA phát kháng thể Sơ đồ đĩa phản ứng ELISA Sơ đồ đĩa phản ứng ELISA phát kháng thể Sơ đồ đĩa phản ứng ELISA định lượng kháng thể CHÚ THÍCH C++: huyết ĐC dương tính mạnh C+: huyết ĐC dương tính yếu C-: huyết ĐC âm tính Ca: đối chứng kháng ngun Cơng thức tính PI: PI = 100 - MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI Ảnh 1, 2, 3, 4: Trâu chảy nhiều nước bọt bị LMLM Ảnh 5, 6: Trâu bị LMLM móng chân đau sưng Ảnh 7: Tiêm vaccine LMLM cho trâu, bò Ảnh 8, 9: Lấy mẫu máu xét nghiệm sau tiêm phòng Ảnh 10 Mẫu máu trâu, bò thu thập xác định hiệu giá kháng thể sau tiêm phòng Ảnh 11 Chắt huyết mẫu máu trâu, bò thu thập