nghiên cứu sự lây truyền hbv từ mẹ sang con qua sự biểu hiện gen core/precore ở thời điểm sơ sinh và 12 tháng

nghiên cứu sự lây truyền hbv từ mẹ sang con qua sự biểu hiện gen core/precore ở thời điểm sơ sinh và 12 tháng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI …….***……. HỒ MẠNH TUẤN NGHIÊN CỨU SỰ LÂY TRUYỀN HBV TỪ MẸ SANG CON QUA SỰ BIỂU HIỆN GEN CORE/PRECORE Ở THỜI ĐIỂM SƠ SINH VÀ 12 THÁNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ Y KHOA Khóa 2007 – 2013 Hà Nội – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI …….***……. HỒ MẠNH TUẤN NGHIÊN CỨU SỰ LÂY TRUYỀN HBV TỪ MẸ SANG CON QUA SỰ BIỂU HIỆN GEN CORE/PRECORE Ở THỜI ĐIỂM SƠ SINH VÀ 12 THÁNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ Y KHOA Khóa 2007 – 2013 Ngƣời hƣớng dẫn: ThS. ĐÀM THỊ TÚ ANH Hà Nội – 2013 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc và chân thành nhất đến cô Đàm Thị Tú Anh – giảng viên Bộ môn Miễn dịch Sinh lý bệnh của trƣờng Đại học Y Hà Nội. Trong suốt thời gian dài qua, cô đã luôn tận tình hƣớng dẫn, chỉ bảo và giúp đỡ em rất nhiều. Em cũng xin bày bỏ lòng cảm ơn của mình đến PGS – TS. Nguyễn Thị Vinh Hà, cô đã hỗ trợ kinh phí và hóa chất để làm đề tài này. Em cũng xin cảm ơn cử nhân Nguyễn Minh Tiến đã tham gia giúp em thực hiện các kỹ thuật nghiên cứu cho khóa luận này. Em cũng xin vô cùng biết ơn Ban chủ nhiệm cùng toàn thể các thầy cô trong bộ môn. Các thầy cô đã tạo điều kiện thuận lợi nhất, đã đóng góp ý kiến quý báu, kinh nghiệm của mình để khóa luận này đƣợc hoàn thiện hơn. Cho em xin cảm ơn Ban Giám Hiệu, các thầy cô, bạn bè trong trƣờng Đại Học Y Hà Nội đã tận tình dạy dỗ, giúp đỡ em trong suốt 6 năm qua. Cuối cùng, em vô cùng biết ơn bố mẹ, gia đình và ngƣời thân đã luôn ở bên động viên, khích lệ tinh thần cho em trong quá trình học tập, nghiên cứu cũng nhƣ trong cuộc sống. DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Anti – HBc : Antibody against Hepatitis B Core Antigen (Kháng thể kháng kháng nguyên lõi vi rút viêm gan B) Anti – HBe : Antibody against Hepatitis B e Antigen (Kháng thể kháng kháng nguyên e vi rút viêm gan B) Anti – HBs : Antibody against Hepatitis B surface Antigen (Kháng thể kháng kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B) CDC : Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm kiểm soát và phòng ngừa bệnh tật Hoa Kỳ) DNA : Deoxyribonucleic acid (Axít deoxyribonucleic) ELISA : Enzyme-linked immuno sorbent assay (Kỹ thuật miễn dịch hấp phụ gắn men) HBcAg : Hepatitis B Core Antigen (Kháng nguyên lõi vi rút viêm gan B) HBeAg : Hepatitis B e Antigen (Kháng nguyên e vi rút viêm gan B) HBsAg : Hepatitis B surface Antigen ((Kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B) HBV : Hepatitis B Virus (Vi rút viêm gan B) HCC : Hepatocellular carcinoma (Ung thƣ biểu mô tế bào gan) ORF : Open Reading Frames (Khung đọc mở) PCR : Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại chuỗi) WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) (–) : Âm tính (+) : Dƣơng tính MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. Dịch tễ học viêm gan B 3 1.2. Đặc điểm sinh học của vi rút viêm gan B 7 1.3 Các dấu ấn huyết thanh của HBV 11 1.3. Biểu hiện của viêm gan B 13 1.5. Phòng bệnh 16 1.6 Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu 17 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.3 Các bƣớc tiến hành nghiên cứu 21 2.4 Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu 22 2.5 Thời gian tiến hành nghiên cứu 26 2.6 Địa điểm nghiên cứu 26 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1. Sự biểu hiện của gen Core/PreCore và các dấu ấn huyết thanh liên 27 quan ở mẹ mang HBsAg (+) 27 3.2. Đánh giá sự lây truyền vi rút qua sự biểu hiện gen Core/PreCore của HBV từ mẹ sang con qua các thời điểm 29 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 31 4.1 Sự biểu hiện của gen Core/PreCore và các dấu ấn huyết thanh liên 31 quan ở mẹ mang HBsAg (+) 31 4.2 Đánh giá sự lây truyền vi rút qua sự biểu hiện gen Core/PreCore của HBV từ mẹ sang con qua các thời điểm 34 KẾT LUẬN 36 KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm gan vi rút B là bệnh phổ biến nhất của viêm gan vi rút và đang là vấn đề sức khỏe đƣợc cộng đồng đặc biệt quan tâm trên khắp thế giới. Theo ƣớc tính của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO – World Health Organization), trên toàn thế giới hiện có khoảng 2 tỷ ngƣời bị nhiễm HBV, trong đó 350 triệu ngƣời mang vi rút mạn tính và 600 000 ngƣời chết mỗi năm do hậu quả của các bệnh viêm gan B cấp tính hay mạn tính [1]. Ở những nƣớc có dịch lƣu hành cao đặc biệt nhƣ Trung Quốc, Đông Nam Á (trong đó có Việt Nam), Thái Bình Dƣơng thì phƣơng thức lây truyền dọc (lây truyền chu sinh) là một đƣờng lây chủ yếu. Trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ là lứa tuổi mà sự đáp ứng miễn dịch chƣa hoàn chỉnh, nếu bị nhiễm vi rút ở lứa tuổi này sẽ làm tăng khả năng nhiễm vi rút kéo dài và làm tăng tỷ lệ mang vi rút mạn tính trong cộng đồng. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng: 90% trẻ bị nhiễm HBV trong giai đoạn chu sinh sẽ trở thành mạn tính, 70% đến 96% con của những bà mẹ có HBeAg (+) sẽ bị nhiễm vi rút và trên 90% sẽ trở thành mạn tính sau này [29]. Hơn nữa, với những trẻ bị nhiễm HBV trƣớc 6 tháng tuổi nguy cơ trở thành ngƣời mang vi rút mạn tính là 80% đến 90% và khoảng 25% số trẻ này chết vì xơ gan hoặc ung thƣ gan ở tuổi trƣởng thành. Trong khi đó, những trẻ bị nhiễm sau 12 tháng tuổi chỉ có 5% đến 10% trở thành ngƣời mang vi rút mạn tính [26]. Đây thật sự là một thiệt hại to lớn đối với gia đình và xã hội. Ở Việt Nam, tỷ lệ lƣu hành HBV cao theo xếp loại của tổ chức y tế thế giới (WHO). Tỷ lệ ngƣời Việt Nam hiện mắc viêm gan B là 10% đến 19,5% dân số [10,11,12,13,14,15,16,17,18]. Vì vậy số phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ mang HBV cũng theo đó tăng cao, dẫn đến tỷ lệ cao lây truyền HBV cho con họ. 2 Để làm rõ cơ chế của sự lây truyền HBV từ mẹ sang con đồng thời nâng cao hiệu quả công tác phòng và chống lây nhiễm HBV trong cộng đồng, hƣớng đến mục đích góp phần đƣa ra những giải pháp hữu hiệu để phòng ngừa và bảo vệ các trẻ trƣớc nguy cơ lây nhiễm HBV từ mẹ, chúng tôi tiến hành đề tài: ―Nghiên cứu sự lây truyền HBV từ mẹ sang con qua biểu hiện gen Core/PreCore ở thời điểm sơ sinh và 12 tháng‖. Và đề tài đƣợc tiến hành với hai mục tiêu: 1. Xác định sự biểu hiện của gen Core/PreCore và các dấu ấn huyết thanh liên quan ở mẹ mang HBsAg (+). 2. Đánh giá sự lây truyền của HBV ở các cặp mẹ con qua sự biểu hiện của gen Core/PreCore. 3 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Dịch tễ học viêm gan B 1.1.1. Trên thế giới Viêm gan B là một bệnh truyền nhiễm do vi rút viêm gan B (HBV – Hepatitis B Virus) gây ra. Theo ƣớc tính của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO – World Health Organization), trên toàn thế giới hiện có khoảng 2 tỷ ngƣời bị nhiễm HBV, trong đó 350 triệu ngƣời mang vi rút mạn tính và 600 000 ngƣời chết mỗi năm do hậu quả của các bệnh viêm gan B cấp tính hay mạn tính [1]. Tỷ lệ ngƣời mang vi rút HBV mạn tính dao động từ 0,2% đến 20%, khác nhau giữa các châu lục [2]. Căn cứ vào tỷ lệ nhiễm HBV (có kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B – HBsAg dƣơng tính) trong cộng đồng, ngƣời ta chia thế giới thành ba khu vực với ba mức độ có tỷ lệ hiện mắc khác nhau. Khu vực có dịch lƣu hành thấp (dƣới 2%) đó là các vùng nhƣ Bắc Mỹ, Tây Âu, Mê-xi- cô, Cô-lum-bia, Chilê, Úc, Nhật Bản và Niu-di-lân. Khu vực có dịch lƣu hành trung bình (2% đến 7%) đó là các vùng nhƣ Vê-nê-zu-ê-la, Pê-ru, Ê-cu-a-đo, Ấn Độ, Hàn Quốc, Sing-ga-po, Ma-lay-si-a, In-đô-nê-si-a, Thái Lan. Khu vực có dịch lƣu hành cao (từ 8% trở lên) đó là các vùng nhƣ Châu Á, Đông Nam Á, khu vực tiểu Sahara thuộc Châu Phi [3]. Khoảng 45% dân số thế giới sống trong khu vực có dịch lƣu hành cao nhƣ Châu Phi, Châu Á – Thái Bình Dƣơng (trừ các nƣớc nhƣ Nhật Bản, Úc, Niu-di-lân), lây truyền chủ yếu trong giai đoạn chu sinh [4,5]. Ở những khu vực dịch lƣu hành thấp hầu hết các trƣờng hợp lây truyền là do sinh hoạt tình dục không an toàn hoặc do tiêm truyền khi còn trẻ tuổi. Trung tâm kiểm soát và phòng ngừa bệnh tật Hoa Kỳ (CDC – Centers for Disease Control and Prevention) ƣớc tính năm 2012 có 800 000 đến 1,4 triệu ngƣời sống ở Mỹ mang vi rút HBV mạn tính [6]. Viêm gan vi rút B mạn [...]... sự lây truyền vi rút qua sự biểu hiện gen Core/PreCore của HBV từ mẹ sang con qua các thời điểm Bảng 4: Đánh giá sự lây truyền gen Core của HBV từ mẹ sang con Đối tƣợng Mẹ Con sơ sinh Con 12 tháng Dƣơng tính 4 3 2 Âm tính 2 3 4 Gen Core Nhận xét: - Tỷ lệ phát hiện gen Core tại thời điểm con sơ sinh là 3/6 - Tỷ lệ phát hiện gen Core tại thời điểm con 12 tháng là 2/6 Bảng 5: Đánh giá sự lây truyền gen. .. thức lây truyền dọc (lây truyền chu sinh) là một đƣờng lây chủ yếu: lây truyền trong tử cung, lây truyền trong khi chuyển dạ đẻ và lây truyền do tiếp xúc trong thời gian ngắn sau đẻ Theo nghiên cứu của Chen và CS thì mổ đẻ không làm giảm tỷ lệ lây truyền HBV dọc từ mẹ sang con [27] Nồng độ HBV trong máu (HBV DNA) của các bà mẹ cao (≥ 109 copies /mL) và có HBeAg (+) thì khả năng truyền vi rút cho con. .. phát hiện DNA, ta dùng Ethilium Bromide, là một chất màu bám vào DNA và thấy đƣợc dƣới đèn cực tím 2.5 Thời gian tiến hành nghiên cứu - Thu thập mẫu từ tháng 1/2008 đến tháng 12/ 2009 - Thực hiện kỹ thuật ELISA từ tháng 1/2008 đến tháng 12/ 2009 - Thực hiện kỹ thuật PCR từ tháng 11/2 012 đến tháng 4/2013 - Xử lý số liệu và viết khóa luận từ tháng 1/2013 đến tháng 5/2013 2.6 Địa điểm nghiên cứu - Các mẫu nghiên. .. TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu - Huyết thanh mẹ có HBsAg (+), không có các biểu hiện bệnh lý về gan kèm theo - Huyết thanh con của các mẹ nói trên tại hai thời điếm sơ sinh và sau 12 tháng - Chọn cỡ mẫu dùng cho nghiên cứu với mỗi nhóm đối tƣợng n = 6 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Phƣơng pháp: nghiên cứu tiến cứu 2.3 Các bƣớc tiến hành nghiên cứu - Các mẹ có HBsAg (+), không có biểu. .. gen Core tại thời điểm con 12 tháng là 2/6 Bảng 5: Đánh giá sự lây truyền gen PreCore của HBV từ mẹ sang con Đối tƣợng Mẹ Con sơ sinh Con 12 tháng Dƣơng tính 5 3 2 Âm tính 1 3 4 Gen PreCore Nhận xét: - Tỷ lệ phát hiện gen PreCore tại thời điểm con sơ sinh là 3/6 - Tỷ lệ phát hiện gen PreCore tại thời điểm con 12 tháng là 2/6 29 ... HBV từ mẹ sang con (lây truyền dọc) rất cao Đƣờng lây truyền này có vai trò quan trọng trong diễn tiến của HBV bởi những bà mẹ nhiễm HBV có HBeAg (+) thì nguy cơ lây cho con là 90% đến 100%, còn HBeAg (–) thì nguy cơ lây cho con chỉ là 5% đến 20% Và có 85% đến 90% trẻ đƣợc sinh ra từ những bà mẹ có cả HBsAg (+) và HBeAg (+) sẽ chuyển thành mang HBV mạn tính Còn với những trẻ bị nhiễm HBV trƣớc 6 tháng. .. Bên cạnh các đƣờng lây truyền phổ biến nhƣ: lây qua tiêm truyền, lây qua đƣờng tình dục thì phƣơng thức lây truyền từ mẹ sang con (lây truyền dọc) và những lây truyền sớm do tiếp xúc khi trẻ còn nhỏ là một nguyên nhân quan trọng dẫn đến tỷ lệ cao HBsAg (+) cao trong cộng đồng Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ trẻ ở nông thôn Việt Nam có HBsAg (+) giai đoạn chu sinh là 12, 5%, tiền học đƣờng (4 – 6 tuổi) là 18,4%,... nghiên cứu đƣợc lấy từ mẫu trong đề tài cấp nhà nƣớc của PGS.TS Nguyễn Thị Vinh Hà, thu thập ở Bệnh viện E Hà Nội, Bạch Mai, Hộ sinh B - Các phản ứng ELISA, PCR đƣợc thực hiện tại la bô sinh học phân tử, Bộ môn Miễn dịch – Sinh lý bệnh, Trƣờng Đại học Y Hà Nội 26 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Sự biểu hiện của gen Core/PreCore và các dấu ấn huyết thanh liên quan ở mẹ mang HBsAg (+) Bảng 1: Sự biểu hiện. .. nhiễm HBV trƣớc 6 tháng tuổi nguy cơ trở thành ngƣời mang vi rút mạn tính là 80% đến 90% và khoảng 25% số trẻ này chết vì xơ gan hoặc ung thƣ gan ở tuổi trƣởng thành Trong khi đó, những trẻ bị nhiễm sau 12 tháng tuổi chỉ có 5% đến 10% trở thành ngƣời mang vi rút mạn tính [26] 1.1.3 Các phƣơng thức lây truyền của HBV 1.1.3.1 Lây truyền dọc (lây truyền từ mẹ sang con) Ở những nƣớc có dịch lƣu hành cao đặc... mang HBsAg (+) Bảng 1: Sự biểu hiện gen Core/PreCore ở mẹ có HBsAg (+) Loại gen Core PreCore Dƣơng tính 4 5 Âm tính 2 1 Kết quả Nhận xét: - Tỷ lệ bà mẹ mang gen Core trong số bà mẹ có HBsAg (+) là 4/6 - Tỷ lệ bà mẹ mang gen PreCore trong số bà mẹ có HBsAg (+) là 5/6 Bảng 2: Mối liên quan giữa sự biểu hiện của gen PreCore, HBeAg và Anti – HBe trong huyết thanh ở mẹ HBsAg (+) Dấu ấn huyết HBeAg HBeAg