Khóa luận tốt nghiệp: Nghiên cứu bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tự tại Gia Lâm, Hà Nội

Điều tra, xác định thành phần và diễn biến một số bệnh nấm hại phổ biến trên cây rau họ hoa thập tự vụ thu đông năm 2013 tại Gia Lâm, Hà Nội. Nghiên cứu xác định nguyên nhân gây bệnh, đặc điểm hình thái, sinh học của một số loài nấm gây hại và khả năng phòng trừ bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng Trichoderma viride.

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan, đây là công trình nghiên cứu khoa học độc lập củatôi Các số liệu trong khóa luận là trung thực và có nguồn gốc cụ thể, rõràng Các kết quả của khóa luận chưa được công bố trong bất cứ công trìnhkhoa học nào Mọi sự giúp đỡ đã được cảm ơn Nếu có sai sót, tôi xin chịuhoàn toàn trách nhiệm trước pháp luật

Hà Nội, ngày … tháng… năm 2013 Sinh viên thực hiện

Hà Thị Oanh

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện đề tài khóa luận này ngoài sự phấn đấu nỗlực của bản thân, tôi còn nhận được sự quan tâm giúp đỡ tận tình của nhiềutập thể và cá nhân trong và ngoài trường

Trước hết, tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn đến các Thầy, Cô trong khoaNông học – trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội đã tạo điều kiện cho tôitrong suốt quá trình nghiên cứu và thực hiện khóa luận này

Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới PGS.TS

Đỗ Tấn Dũng giảng viên bộ môn Bệnh cây và cán bộ trong bộ môn Bệnhcây đã tận tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian nghiên cứu và viết khóa luận,

để tôi hoàn thành khóa học một cách tốt nhất

Tôi xin chân thành cảm ơn bà con xã Đặng Xá, Văn Đức, Cổ Bi, ĐaTốn đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình điều tra và thu thậpmẫu bệnh hại trên đồng ruộng

Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè, người thân đãgiúp đỡ, động viên tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày ….tháng…năm 2013

Hà Thị Oanh

PCA Potato Carrot Agar

PGA Potato Glucose Agar

PHẦN 1 MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề

Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm quanh năm nên thuận lợi cho việc gieo trồng nhiều loại cây trồng, nhưng đồng thờicũng tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của dịch hại, đặc biệt là bệnhhại Bệnh hại đã xuất hiện và gây hại ở hầu hết các cây trồng ở nước ta.Theo tính toán của FAO đến năm 1986, thiệt hại do nấm, vi khuẩn, vius,mycoplasma gây ra là rất lớn trong đó thiệt hại lớn nhất do nấm, có đến 80%bệnh hại cây trồng là do nấm gây ra, 20% còn lại do vi sinh vật khác

Họ Cải (Brassicae) hay còn gọi là Họ Thập Tự (Cruciferae) gồm: cải

bắp, su hào, súp lơ, rau cải,… là những cây trồng chính bên cạnh cây lúa.Đây là những loại rau có chứa hàm lượng dinh dưỡng cao, có ý nghĩa to lớn

về mặt y học, mang lại hiệu quả kinh tế cao cho người sản xuất Ở nước ta,việc phát triển và trồng rau họ thập tự còn có ý nghĩa quan trọng về mặt luâncanh, tăng vụ và tăng năng suất trên đơn vị diện tích, do đó rau họ thập tự làloại rau đang được khuyến khích phát triển

Tuy nhiên, cũng chính sự gia tăng đó đã tạo điều kiện cho nhiều loạidịch hại xuất hiện và gây hại, đặc biệt phải kể đến các bệnh do nấm có

nguồn gốc trong đất như bệnh đốm vòng (Alternaria brassicae, A.

brassicicola), bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani), bệnh thối hạch cải bắp

(Sclerotinia sclerotiorum), bệnh đốm lá (Cercospora brassicicola), bệnh thán thư (Colletotrichum higginanum), bệnh sương mai (Peronospora

brassicae)…

Việc phòng trừ bệnh gặp nhiều khó khăn, các biện pháp hoá học mặc

dù có ưu điểm lớn là diệt trừ dịch hại nhanh chóng, triệt để và có khi còn làbiện pháp mang lại hiệu kinh tế cao nhưng lại không thân thiện với môi

trường và gây ảnh hưởng xấu tới sức khỏe của con người Theo đó, biệnpháp sinh học sử dụng các sinh vật khác để tiêu diệt sinh vật gây hại câytrồng một cách có chọn lọc đã và đang được phát triển mạnh mẽ Đối vớinấm hại cây trồng thì biện pháp phổ biến là sử dụng vi sinh vật đối kháng

mà thường là nấm đối kháng Một số chế phẩm đã được ứng dụng rộng rãi

để trừ các bệnh nấm hại cây trồng là Trichoderma viride, Trichoderma

harzianum…

Xuất phát từ những nhu cầu của thực tiễn sản xuất rau màu hiệnnay, được sự phân công của Bộ môn Bệnh cây, Khoa Nông học, Trường Đạihọc Nông nghiệp Hà Nội, dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Đỗ Tấn Dũng

Chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Nghiên cứu bệnh nấm hại cây

rau họ hoa thập tự tại Gia Lâm, Hà Nội”.

1.2 Mục đích và yêu cầu

1.2.1 Mục đích

Điều tra, xác định thành phần và diễn biến một số bệnh nấm hại phổ biến trên cây rau họ hoa thập tự vụ thu đông năm 2013 tại Gia Lâm, Hà Nội.Nghiên cứu xác định nguyên nhân gây bệnh, đặc điểm hình thái, sinh họccủa một số loài nấm gây hại và khả năng phòng trừ bằng chế phẩm sinh học

nấm đối kháng Trichoderma viride.

Phân lập, nuôi cấy, nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học của một

số loài nấm hại cây rau họ hoa thập tự và xác định loài nấm gây bệnh

Khảo sát khả năng phòng trừ một số bệnh nấm hại bằng chế phẩm

sinh học nấm đối kháng Trichoderma viride.

PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình nghiên cứu ở ngoài nước

Dịch hại luôn là vấn đề nan giải và phức tạp đối với người trồng raunói riêng và trong sản xuất nông nghiệp nói chung Rau họ hoa thập tự dễ bịnhiễm bởi nhiều tác nhân gây bệnh, điều này phụ thuộc vào nguồn bệnh,tình trạng phát triển của cây và điều kiện môi trường Ở cùng thời điểm bệnh

có thể xuất hiện gây hại ở vùng này mà không gây hại ở vùng khác phạm vigây hại cũng như tính chất phức tạp của bệnh phụ thuộc vào bản chất củagiống, độ nhiễm bệnh, mức độ và khả năng kết hợp giữa cây ký chủ vớinguồn bệnh dưới tác động của yếu tố môi trường

Rau họ hoa thập tự thường nhiễm một số bệnh hại chính như đốmvòng, lở cổ rễ, thối nâu, thối hạch, sương mai, thán thư… Đây chính lànguyên nhân chính làm giảm năng suất và chất lượng rau

2.1.1 Bệnh đốm vòng cải bắp (Alternaria brassicae và Alternaria

brassicicola)

Bệnh đốm vòng do hai loài nấm Alternaria brassicae và Alternaria

brassicicola gây ra, nấm gây hại ở hầu hết các cây họ hoa thập tự như súp

lơ, cải canh, cải tàu, cải bắp, cải dầu, cải củ,…

Hai loài nấm A.brassicae và A.brassicicola phá hại cây ký chủ ở tất

cả các giai đoạn sinh trưởng kể cả hạt Trên cây con vết bệnh xuất hiện trên

thân màu đen, làm cho cây còi cọc hoặc làm chết rạp cây con (Valkonen vàKoponen, 1990) [41]

Trên cây trưởng thành, bệnh hại chủ yếu ở phần lá già do chúngthường xuyên tiếp xúc với đất và dễ bị xây xát khi có mưa, gió lớn Khibệnh xâm nhiễm vào lá già thường không gây thiệt hại lớn đến năng suất và

bệnh có thể được kiểm soát bằng cách loại bỏ các lá bị bệnh (Chuup vàSherf, 1960)[18].

Theo tác giả Chupp và Sherf, 1960[18] cho biết cả hai loài nấm nàyđều truyền qua hạt giống Chúng làm nhăn hạt, héo cuống quả trước khi hìnhthành hạt hoặc chúng tạo điều kiện cho vi khuẩn xâm nhiễm làm thối mềmthân, cuống dẫn tới có thể làm chết cây Ngoài việc gây hại hạt giống câytrồng, chúng còn có thể tồn tại trong hạt giống, truyền bệnh cho cây vụ saudẫn đến làm chết cây con (Rangel, 1945)[39]

Nấm gây bệnh chịu ảnh hưởng nhiều của thời tiết, nấm gây hại nặngcho cây trồng khi gặp điều kiện thời tiết mát mẻ, mưa nhiều và ở những khuvực có lượng mưa tương đối cao (Humpherson – Jone và Phelps, 1989)[23]

Các tác giả S B Mathur và Olga Kongsdal (2000) [30]đã mô tả cành

bào tử của nấm A.brassicae có màu oliu sáng hoặc màu nâu tối, bào tử

thường mọc riêng lẻ hoặc đôi khi mọc thành cụm Thể sợi nấm có màutrắng, mượt với các bào tử bao phủ lên hạt giống Bảo tử nấm thẳng, dạngchùy ngược, có vòi, bào tử có từ 6 – 19 vách ngăn ngang (thông thường có

từ 11 – 15), có từ 0 – 8 vách ngăn dọc theo chiều dọc không đối xứng Bào

tử nhẵn với kích thước 75 – 35 x 20 – 30 µm, vòi có chiều dài bằng 1/3 – 1/2chiều dài của bào tử

Cành bào tử A brassicae tạo ra bào tử vô tính có chiều dài khoảng

160 – 200 µm Sự hình thành bảo tử xảy ra ở nhiệt độ khoảng 8 – 240C,tương ứng với khoảng nhiệt độ này bào tử sẽ thành thục sau 12 – 14 giờ Tạinhiệt độ tối ưu là 16 – 240C chuỗi bào tử được hình thành sau 12 – 14 giờ

Bào tử nấm A brassicae nảy mầm được trong khoảng nhiệt độ từ 8 – 310C,nhưng hầu hết bào tử nấm nảy mầm nhanh chóng trong vòng 3 giờ khi nhiệt

khoảng thời gian cần thiết để 98% bào tử nảy mầm tăng (Degenhardt et al.,1982)[19].

Tản nấm A.brassicicola có màu đen sáng bóng bao gồm bào tử dính

trên các chuỗi đơn, hẹp dài Hiếm khi sợi nấm phân nhánh và không thấy cóthể sợi nấm trên hạt giống Bào tử thẳng, hình trụ thường thon dần về phíađỉnh có từ 1 – 11 vách ngăn ngang, vách dọc hiếm thấy (S B Mathur và

Olaga, 2000)[30] Nấm A brassicicola hình thành bảo tử ở nhiệt độ 8 –

300C, tại đó bào tử thành thục sau 13 – 14 giờ Nhiệt độ tối ưu là 18 – 300C ở

đó bào tử được hình thành sau 13 giờ

Sự xâm nhiễm của nấm lên cây trồng chỉ xảy ra với điều kiện có giọtmưa, sương hoặc độ ẩm không khí cao Quá trình xâm nhiễm sẽ xảy ra tốithiểu sau 9 – 18 giờ (Humpherson – Jone và Phelps, 1989)[23] Theo tác giảChupp và Sherf (1960)[18]; Rangel (1945)[29] cho rằng độ ẩm duy trì liêntục trong 24 giờ hoặc hơn sẽ đảm bảo cho sự xâm nhiễm thành công Độ ẩmtương đối 91.5% hoặc cao hơn nấm sẽ hình thành được một lượng lớn bào tửthành thục sau 24 giờ

Nấm gây bệnh đốm vòng tồn tại dưới dạng bào tử trên vỏ hạt hoặc sợinấm trong hạt cũng như tàn dư cây bệnh Mẫu hạt cũ trên 20 tháng nhiễm

nấm A brassicae được lưu trữ ở 00C trong 14 tháng thấy sức nảy mầm của

bào tử nấm vẫn cao Nấm A brassicae trong mẫu bảo quản 6 tháng ở nhiệt

độ 23 – 300C thấy bào tử vẫn còn hữu hiệu và còn khả năng lây nhiễm Đôikhi trong hạt còn có những sợi nấm tiềm sinh, vì vậy khi đã xử lý bề mặt hạtcây con vẫn có thể bị nhiễm bệnh (Rangel, 1945)[29]

Bào tử Aternaria brassicicola có thể tồn tại trên bề mặt hạt khoảng 2

năm khi được bảo quản ở 100C, độ ẩm 50%, sợi nấm có thể tồn tại trong hạtkhoảng 12 năm (Maude và Humpherson – Jones, 1980) Trên tàn dư cây

bệnh, bào tử nấm tồn tại được khoảng 12 tuần Những ruộng cây trồng đượcthu hoạch trong vụ này sẽ là nguồn bệnh lây nhiễm bệnh cho các ruộng trồngxung quanh và cây trồng vụ sau (Humpherson – Jones, 1989)[23].

Các tác giả Tripathi và Kasuhik (1984)[36] cho rằng nấm Aternaria

brassicae và Aternaria brassicicola còn tồn tại dạng vi hạch (microsclerotia)

và hậu bào tử khi trên lá bệnh có một phần bị thối rữa Cả vi hạch và hậubào tử đều có thể được hình thành trong tế bào bào tử đính, chúng phát triểntốt nhất ở điều kiện nhiệt độ thấp (30C) Bào tử hậu cũng có thể phát triểntrong tế bào bào tử đính trên đất tự nhiên ở nhiệt độ phòng (Tsuneda vàSkoropad, 1977)[37]

Nấm gây bệnh đốm vòng còn tồn tại trên tàn dư cây bệnh Trong một

số nghiên cứu cho thấy các tác nhân gây bệnh trên tàn dư lá cây cải dầu vàcải bắp có thể tồn tại lâu như trên lá bị bệnh còn tươi Với cải dầu tác nhângây bệnh tồn tại được trong 8 tuần, còn đối với cải bắp là 12 tuần(Humpherson – Jones, 1989)[24]

Nấm gây bệnh đốm vòng lan truyền chủ yếu qua hạt giống, nhiễmbệnh nhờ bào tử trên vỏ hạt và các sợi nấm tiềm tàng trong hạt Các bào tửđược phát tán nhờ gió, nước công cụ và động vật Nấm có thể sống đượctrên cây cỏ mẫm cảm và trên cây trồng lâu năm (Chupp và Sherf, 1960[18];Rangel, 1945[29]; Maude và Humpherson – Jones, 1989[24])

Theo nghiên cứu của tác giả Rangel (1945)[29] cho rằng phương thứclây nhiễm qua tàn dư cây bệnh thường xảy ra ở giai đoạn vườn ươm và câycon bị nhiễm bệnh ở vườn ươm có thể mang nguồn bệnh ra ruộng sản xuất

Dựa trên các nghiên cứu về đặc điểm phát sinh phát triển, đặc điểmsinh học của nấm gây bệnh đốm vòng, các tác giả đã đề xuất một số biệnpháp quản lý dịch bệnh như sau:

+ Công tác dự tính dự báo: Trong nghiên cứu invitro người ta đã chỉ

ra rằng nhiệt độ và sự nảy mầm của bào tử có mối quan hệ với nhau Nếunhững mối quan hệ này được gắn với điều kiện đồng ruộng thì có thể dựđoán được sự nảy mầm và quá trình phát triển kế tiếp theo của nấm, từ đó có

kế hoạch phòng trừ trên diện rộng (Humpherson – Jones, 1989)[23]

+ Luân canh cây trồng: Bố trí luân canh với những cây trồng khôngthuộc họ thập tự và dọn sạch tàn dư cây bệnh, cỏ dại là ký chủ phụ của bệnhđốm vòng Vì bào tử có thể sống trong mô lá từ 8 – 12 tuần, mô thân khoảng

23 tuần nên những cánh đồng trồng lại ngay sau khi thu hoạch thường bị cáctác nhân gây bệnh tấn công sớm từ giai đoạn đầu sinh trưởng của cây(Humpherson – Jones, 1989)[23]

+ Chọn giống kháng bệnh: Các giống cây trồng khác nhau trong họthập tự có tính kháng bệnh khác nhau nhưng không đáng kể (Sharma vàcộng sự., 1984)[31]

+ Sử dụng chế phẩm sinh học để phòng trừ: Nghiên cứu sơ bộ về xạkhuẩn cho thấy điều kiện thí nghiệm trong phòng và trên đồng ruộng, xạ

khuẩn Streptomyces arabicus đều có tác dụng diệt trừ nấm Aternaria

brassicae và Aternaria brassicicola (Sharma và cộng sự., 1985)[32] Ở Phần

Lan, người ta xử lý bề mặt hạt giống bằng Streptomyces griseoviridis (15

mg/g hạt giống) mang lại hiệu quả phòng trừ tốt (Valkonen và Koponen,1990)[41]

+ Sử dụng thuốc hóa học: Có nhiều loại thuốc trừ nấm đã được thử

nghiệm cho hiệu quả phòng trừ tốt đối với nấm A brassicae Có khoảng 18 loại thuốc có tác dụng phòng trừ nấm A brassicae, trong đó Dithane M – 45

(Mancozeb) và Dithane Z – 78 (Zineb) là hai thuốc hóa học có tác dụngphòng trừ hữu hiệu nhất Có 7 loại thuốc hóa học có tác dụng kìm hãm sựphát triển của bệnh trên đồng ruộng: Benlate, Dithane m – 45, Dithane Z –

78, Zỉam, Dìolatan – 80, Thiram0 và Blitox – 50 Có thể xử lý bằng Benlate,Dithane M – 45, Dithane Z – 78 (Ansari et al.,1990)

2.1.2 Bệnh lở cổ rễ và thối nâu (Rhizoctonia solani)

Nấm Rhizoctonia solani là tác nhân gây bệnh cho cây trồng có nguồn

gốc trong đất, là loài nấm phổ biến xuất hiện ở khắp các vùng trồng trọt trênthế giới (Janice Y Uchida, 2008)[25] Theo Farr D F., et al (1989)[21]chỉriêng ở Mỹ có đến hơn 500 loài thực vật là ký chủ của nấm này Ở Nhật

R.solani gây hại hơn 142 loài thực vật thuộc 52 họ thực vật Một số cây ký

chủ có thể kể đến như: đậu tương, đậu lima, đu đủ, dưa chuột, đặc biệt làcây họ cà, họ đậu, họ bầu bí (Akira ogoshi, 1996)[16] Với phạm vi ký chủ

và phân bố rộng, R.solani thực sự là một loài dịch hại nguy hiểm đe dọa

nghiêm trọng đến nền sản xuất nông nghiệp trên toàn thế giới

Nấm R solani đã được Decandolle mô tả đầu tiên vào năm 1815 khi

đó có tên là Rhizoctonia crocorum trong đó loài R solani là quan trọng nhất.

Tuy nhiên bệnh chỉ được biết đến vào năm 1858, khi Julius Kuhn nghiêncứu bệnh lở cổ rễ trên cây khoai tây (Paulo Ceresini, 1999)[28]

Triệu chứng gây bệnh hại của nấm R.solani rất khác nhau, tùy từng

bộ phận như lở cổ rễ, thối rễ, chết rạp cây con, thối bẹ lá, thối gốc,… Tuynhiên chúng chỉ tấn công vào phần dưới mặt đất của cây như rễ, trụ dưới lá

R.solani gây ra thường được biết với cái tên “damping off” Hạt giống bị

nhiễm nấm R.solani sẽ bị mất sức nảy mầm Giai đoạn cây con từ 2 lá mầm

và 1 – 2 lá thật khi bị loài nấm này tấn công có thể bị đổ gục và chết Triệuchứng thường xuất hiện trên cây bị bệnh là những chấm nâu, nâu đỏ ở gần

phần thân sát mặt đất, rễ bị thối Bên cạnh đó nấm R solani cũng có khả

năng xâm nhiễm qua thân, lá, quả, nơi có vị trí gần mặt đất hoặc tiếp giápvới đất (Jaince Y Uchida, 2008)[25]

Nấm Rhizoctonia solani gây bệnh lở cổ rễ được xác định là thuộc bộ nấm trơ (Mycelia sterilia), nhóm nấm bất toàn (Fungi imperfecti) giai đoạn hữu tính là Thanatephorus cucumeris thuộc họ Ceratobasidiaceae, bộ

Ceratobasidiales, lớp nấm đảm Basidiomycetes (Baruch Sneh và CTV,1998)[17]

Sợi nấm Rhizoctonia solani còn non không màu trong suốt và mọc

thẳng trên môi trường nhân tạo hay trên bề mặt cây trồng Các nhánh của sợinấm ngắn đi và phát triển thành hạch Trong tự nhiên, sợi nấm có màu vàngnhạt rồi chuyển sang vàng nâu (Baruch Sneh và CTV, 1998)[17]

Theo Baruch Sneh và CTV (1998)[17] thì hạch nấm có màu nâu, hìnhdạng và kích thước khác nhau, đường kính hạch nấm dao động từ 1 – 8 µm.Hạch nấm thường được hình thành trên bề mặt ký chủ, trên bộ phận câytrồng và trên mô thực vật

Nấm Rhizoctonia solani được xem là một loài nấm có sự biến động

đa dạng hình thái giữa các isolate về khả năng gây bệnh, phổ ký chủ, các đặctính hình thái và sinh lý (Sneh và cs, 1991)

Nấm Rhizoctonia solani chịu tác động của điều kiện nhiệt độ, ẩm độ,

pH và hệ vi sinh vật đất đến sự tồn tại và khả năng xâm nhiễm lan truyền

Điều kiện nhiệt độ cho nấm sinh trưởng phát triển mạnh là 25 – 300C (McCarter, SM 1993).

Theo tác giả Kokalis – Burelle, N và cs (1997) cho thấy nấm R solani

sản sinh ra một số độc tố gây hại cho cây trồng như axit oxalic có thể làmbiến đổi màu ở hạt và gây ra các vết đốm trên lá và giai đoạn đầu của bệnh

Có nhiều tác giả đã nghiên cứu và đề xuất một số biện pháp phòng trừnhư: chọn tạo giống chống chịu, canh tác, chế phẩm sinh học, thuốc hóa học

Đối với biện pháp chọn tạo giống chống bệnh các nhà nghiên cứu đã

sử dụng các biện pháp lai tạo, chọn lọc cá thể… để chọn tạo ra các giống câytrồng có khả năng kháng bệnh cao

Áp dụng biện pháp canh tác như: trước khi gieo trồng cần tưới tiêunước, trồng cây với mật độ khoảng cách thích hợp để tránh dẫn đến ẩm độcao là điề kiện thích hợp cho nấm phát sinh, phát triển Tiến hành dọn sạchtàn dư cây bệnh ra khỏi đồn ruộng cũng có tác dụng làm giảm số lượngnguồn bệnh trong đất đồng thời tiến hành luân canh với các cây trồng khác

họ hoặc ít mẫm cảm với nấm bệnh cũng có tác dụng giảm mức độ gây bệnh.Tuy nhiên để có hiệu quả phòng trừ nhanh các nhà nghiên cứu đã sử dụngcác loại thuốc hóa học Các loại thuốc trừ nấm như Methyl thiophanate,Chlorothalanil,… được sử dụng một cách hợp lý đều có tác dụng phòng trừ

bệnh do nấm R solani gây ra (Janice Y Uchida, 2008)[25].

Nhiều nghiên cứu được tiến hành ở các nước trên thế giới như Anh,Pháp, Mỹ,… đã sử dụng các loài sinh vật có ích đặc biệt là các vi sinh vật

đối kháng trong đó có loài nấm Trichoderma sp được đánh giá rất cao.

2.1.3 Bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum)

Bệnh thối hạch cải bắp gây ảnh hưởng đến bảo quản và độ tươi của

sản phẩm Nguyên nhân do nấm Sclerotinia sclerotiorum gây ra, là đối

tượng nguy hiểm gây giảm năng suất trên đồng ruộng, trong kho bảo quản,dưới điều kiện vận chuyển và tiêu thụ (Helene R Dillard, 1987)[22]

Bệnh thối hạch phá hại rất phổ biến trên 160 loài cây thuộc 32 họkhác nhau nhưng chủ yếu là cải bắp, cà rốt, đậu trắng, khoai lang, v.v Câycải bắp có thể bị bệnh từ giai đoạn còn non, nhưng bệnh phá hại chủ yếu vàothời kỳ cuốn bắp trở đi làm cây chết, bắp cải thối khô Cây con bị bệnh, gốcthân sát mặt đất bị thối nhũn làm cây chết gục đổ trên ruộng Trên cây lớn,vết bệnh thường bắt đầu từ các lá già sát mặt đất và gốc thân Ở trên thân vếtbệnh lúc đầu có màu vàng nâu, nếu trời ẩm ướt chỗ bị bệnh dễ bị thối nhũnnhưng không có mùi thối, nếu trời khô hanh, chỗ bị bệnh khô teo có màunâu nhạt Khi cắt ngang thân thấy lớp vỏ và lớp gỗ có mầu nâu sẫm Cuống

lá và phiến lá bị bệnh có màu trắng ủng nước, thường lan từ rìa mép lá vàotrong Khi trời ẩm ướt lá bệnh dễ bị thối, rách nát, các lá khác bị vàng dần.Bệnh lan rộng lên bắp đang cuốn làm bắp cải thối từ ngoài vào trong, dầndần cây chết khô trên ruộng Đặc biệt trên bề mặt hình thành lớp nấm màutrắng xen lẫn nhiều hạch nấm màu đen nâu hình dạng không đều bám chặttrên đó Đến giai đoạn này bắp cải rất dễ bị gục đổ trên ruộng Hạch nấm tồntại trong đất qua thời gian dài Trong điều kiện thuận lợi, hạch nấm nảy mầmhình thành quả thể đĩa Các quả thể đĩa mang túi các bào tử túi xâm nhiễmvào cây (Erwin D C và Ribeiro O K, 1996)[20]

Cũng theo tác giả Erwin D C và Ribeiro O K (1996)[20] cho rằng:Bào tử thường xâm nhiễm vào cây ở vị trí nách lá Các cánh hoa già cũngtạo điều kiện thuận lợi cho nấm bệnh trong quá trình xâm nhiễm

Nguồn bệnh ban đầu là các bào tử túi, chúng nảy mầm trong điều kiện

ẩm ướt trên các tàn dư cây bệnh (Steadmam, 1979)[34].

Theo tác giả Tu (1986)[38] sự lan truyền bệnh thối hạch phụ thuộcvào những yếu tố sau: nguồn bệnh trong đất, độ ẩm đất, lượng mưa, tướitiêu, độ mẫm cảm của giống, độ cao luống, mật độ cây trồng Trên ruộng khigặp không khí lạnh, độ ẩm cao bệnh có thể bùng phát thành dịch

Mật độ trồng ảnh hưởng đến tỷ lệ bệnh, mật độ cao thì tỷ lệ bệnh tăng

Độ mẫm cảm của giống cũng là một nhân tố quan trọng trong quá trình lantruyền bệnh Những giống mẫm cảm như Fleetwood, tỷ lệ bệnh có thể từ 0 –100% trong 4 tuần với bề rộng luống 80cm trong khi đó giống khángExRico 23 tỷ lệ bệnh chỉ từ 0 – 35% Lượng mưa cũng là một yếu tố rấtquan trọng trong quá trình lan truyền bệnh (Tu, 1987)[39]

Qua các nghiên cứu trên các tác giả đã đưa ra một số biện pháp phòngtrừ bệnh thối hạch như sau:

- Lựa chọn vùng trồng thích hợp: Theo tác giả Tu (1986)[38] cho rằngcác vùng trồng khác nhau có tỷ lệ bệnh khác nhau, dao động từ 0 – 85% Dovậy cần lựa chọn vùng trồng sạch bệnh hoặc vùng có tỷ lệ bệnh thấp đểtrồng cây

- Biện pháp luân canh: Luân canh với các cây trồng như ngô, bông,

không nên luân canh với những cây trồng là phổ ký chủ của Slerotinia

sclerotiorum như đậu tương, đậu cô ve lùn, đậu cô ve leo, cà chua, khoai tây,

xà lách,… kế tiếp nhau ở những vùng có mùa đông lạnh (Erwin D.C vàRibeiro O.K, 1996[20], Stirling G.R.[35])

- Xử lý hạt: Do nấm Slerotinia sclerotiorum có khả năng tồn tại trên

hạt dưới dạng sợi Nấm tiềm sinh ở mày hạt, nội nhũ trong khoảng 3 nămnên làm giảm khả năng nảy mầm của hạt tới 88 – 100%, có thể xử lý hạt

bằng Captan và Thiophanate – metylen với hiệu lực trừ nấm 100% (Tu,1989a)[40].

2.1.4 Bệnh sưng rễ cải bắp (Plasmodiophora brassicae)

Bệnh sưng rễ cải bắp do nấm Plasmodiophora brassicae gây ra và

nấm bệnh còn gây hại trên nhiều cây họ thập tự khác như: súp lơ, cải dầu,cải tàu,…

Theo tác giả Sherf và MacNab (1986)[33] khi cây bị bệnh lá trở lênvàng, cây héo và còi cọc, lá dưới có thể bị rụng Triệu chứng quan trọng nhất

là rễ cây bị sưng, nấm hại cả rễ cái, rễ phụ, thậm chí cả phần thân dưới mặtđất Rễ bị sưng phồng lên ở giữa và thắt lại ở dưới Bệnh có thể gây hại mộtphần hoặc toàn bộ hệ thống rễ

Nấm gây bệnh sưng rễ tồn tại qua đông dưới dạng bào tử tĩnh Khithuận lợi chúng nảy mầm tạo các bọc bào tử động Bào tử động nảy mầmxâm nhiễm vào trong rễ và tạo các ổ bào tử tĩnh trong rễ, mỗi ổ bào tử tĩnhtạo ra một u sưng

Theo tác giả Sherf và MacNab (1986)[33] ở điều kiện đất lạnh, ẩm vàchua thuận lợi cho nấm phát sinh phát triển Tuy nhiên nhiệt độ thích hợpcho nấm gây bệnh phát triển khoảng 15 – 250C, trong đó nhiệt độ tối thích là

18 – 200C Trong điều kiện đất kiềm, nhiệt độ cao bệnh phát triển chậm

Cũng theo tác giả này bệnh sưng rễ có thể lan truyền qua dụng cụcanh tác, động vật, con người Những ruộng sản xuất có thể nhiễm bệnh quacây giống, nước tưới (Sherf và MacNab, 1986)[33]

Từ đặc điểm phát sinh phát triển và khả năng lây lan của bệnh sưng rễcác nhà nghiên cứu đã đề ra biện pháp để quản lý, phòng trừ dịch bệnh nhưsau:

Theo nghiên cứu của tác giả Myers và Campbell (1985)[27] cho rằng:

Sử dụng giống sạch bệnh kết hợp với chọn ruộng thoát nước tốt, đất sạchbệnh, không luân canh với những cây họ thập tự có hiệu quả cao trongphòng trừ bệnh sưng rễ Những ruộng bị nặng cần luân canh với những câytrồng không phải ký chủ của bệnh sưng rễ trong vòng 7 năm, giữ cho pH đấttrên 7.2, có thể dùng giống chống chịu

Sau khi thu hoạch cần thu dọn sạch tàn dư cây bệnh có tác dụng làmgiảm nguồn bệnh lây truyền cho vụ sau Xử lý đất, vườn ươm bằngChloropicrin 14 – 21 ngày trước khi gieo trồng cũng có tác dụng hạn chếnguồn bệnh (Sherf và MacNab, 1986)[33]

2.2 Tình hình nghiên cứu ở trong nước

Nghề trồng rau ở Việt Nam đã được hình thành, phát triển từ rất lâu

và trải dài từ Bắc đến Nam Các tỉnh thành trồng nhiều nhất là Hà Nội, HảiPhòng, Hưng Yên, Hải Dương, Bắc Ninh, Bắc Giang, Đà Lạt,… Rau họthập tự là loại rau chủ lực ở vụ đông nước ta Nhưng hiện nay do xu hướngphát triển nghề trồng rau nên nông dân dần thay đổi sang trồng rau quanhnăm Sự thay đổi cơ cấu cây trồng này đã tạo điều kiện cho các loài dịch hạiphát triển trong đó có nấm bệnh

Theo tác giả Nguyễn Công Thuật và cộng sự (1996)[5] đã xác định có

3 bệnh hại chủ yếu trên rau họ thập tự trong đó có 2 bệnh do nấm gây ra là

bệnh đốm vòng (Alternaria brassicae) và bệnh thối hạch (Sclerotinia

sclerotiorum) Những bệnh hại thứ yếu trên rau họ thập tự có 6 bệnh trong

đó có 5 bệnh do nấm gây ra bao gồm: bệnh sương mai (Peronospora

parasitica), bệnh thán thư (Colletotrichum higginsianum), bệnh đốm lá

(Phyllosticta brassicae), bệnh mốc xám (Botris cinerea), bệnh sưng rễ

Bệnh đốm vòng là bệnh hại rất phổ biến trong các vùng trồng cải bắp

ở nước ta Bệnh hại từ giai đoạn cây con, cây đã cuốn bắp và trên nhiều cây

họ thập tự khác (Vũ Triệu Mân, 2007)[15]

Nấm gây bệnh là nấm Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola,

thuộc họ Dematiaceae, bộ Moniliales, lớp nấm bất toàn Trên mô bệnh cólớp nấm mốc đen, đó đám cành bào tử phân sinh và bào tử phân sinh Sợinấm đa bào phân nhánh, màu vàng nâu Cành bào tử phân sinh ngắn, đa bào,màu nâu nhạt, thẳng hoặc uốn khúc, không đâm nhánh, mọc thành cụm hoặcriêng rẽ Bào tử phân sinh đa bào, có nhiều ngăn ngang và dọc, màu nâu,hình trái lựu đạn có vòi dài, kích thước khoảng 60 – 140 x 14 – 18 µm Nấmgây bệnh là loại bán ký sinh, xâm nhập vào cây qua vết thương xây sát vàqua vết hại của côn trùng Bào tử phân sinh lan truyền nhờ gió, nước mưa,nước tưới, côn trùng, dụng cụ và con người qua quá trình chăm sóc Bệnhphát sinh phát triển thuận lợi trong điều kiện ẩm ướt, mưa nhiều, nhiệt độkhoảng 250C Bệnh cũng phá hại mạnh trên những ruộng cải bắp thấp, trũng,

ứ đọng nước, mật độ trồng dày, nhất là các vụ trồng muộn Hầu như chưa cógiống cải bắp nào có tính chống bệnh Nấm bệnh phá hại quả giống, sợi nấm

có thể ăn sâu tới phôi hạt làm hạt lép (Lê Lương Tề, 2007)[4]

Theo Vũ Triệu Mân (2007)[15] để phòng trừ bệnh đốm vòng cần kếthợp các biện pháp phòng trừ sau:

- Xử lý hạt giống bằng nước nóng (ở 480 – 500C ngâm trong 20 – 25phút) bằng các thuốc diệt nấm trước khi gieo

- Vệ sinh đồng ruộng thường xuyên, tỉa bỏ và thu nhặt các lá bị bệnhđưa ra khỏi đồng ruộng Tạo điều kiện thông thoáng trong ruộng

- Phòng trừ sâu hại để ngăn ngừa bệnh lây lan qua các vết thương do

côn trùng.

- Phun các thuốc trừ nấm khi bệnh bắt đầu lây lan trên đồng ruộng

- Khi thu hoạch hạt giống cần phơi khô và lấy hạt ngay, tránh để kéodài hạt dễ bị bệnh xâm nhập và gây hại cho vụ sau

- Xử lý tàn dư cây trồng sau khi thu hoạch, cày đất sớm và luân canhvới cây trồng khác để hạn chế tác hại của bệnh

Nấm Rhizoctonia solani là một trong những loài nấm có nguồn gốc

trong đất quan trọng, có phạm vi ký chủ rộng với những triệu chứng gây hạiphong phú, đa dạng trên các bộ phận khác nhau của cây trồng Từ trước tớinay chúng ta thường gặp loài nấm này gây hại trên lúa, ngô (gây triệu chứngkhô vằn) hoặc các bệnh thối gốc, lở cổ rễ trên rất nhiều loại cây trồng cạn

Trong những năm gần đây đã phát hiện thấy nấm R solani gây hại trên nhiều cây trồng thuộc họ thập tự (Brassicae) đặc biệt gây triệu chứng thối bắp cải (Brassia oleraceae và cappita Liz) ở vùng Hà Nội và các tỉnh lân

cận, gây thiệt hại nghiêm trọng trong sản xuất (Nguyễn Kim Vân và ctv,2002)[6]

Bệnh lở cổ rễ trên cải bắp nấm thường gây hại vào giai đoạn cây con.Triệu chứng đặc trưng nhất là rễ, cổ rễ và gốc thân sát mặt đất bị thâm đen ởgốc thân, cổ rễ sau đó lan rộng ra rất nhanh bao bọc quanh cổ rễ, sau 5 – 6ngày bị héo cây bệnh đổ gục chết lụi hàng loạt trên ruộng

Ngoài ra, nấm này còn gây triệu chứng thối bắp trên cây trưởng thànhcòn gọi là bệnh thối nâu, vết bệnh lúc đầu là những vết lá chết màu nâuvàng, ở các lá ngoài và các sợi nấm màu trắng xám, sau đó vết bệnh lan rấtnhanh và gây thối toàn bắp (Nguyễn Kim Vân, Ngô Vĩnh Viễn, 2001)[7].Theo điều tra, tỉ lệ bệnh do nấm bệnh gây ra trên cây cải bắp ở vụ xuân vào

giai đoạn chuẩn bị thu hoạch dao động từ 9 - 99% ở các vùng trồng rau xungquanh Hà Nội (vụ xuân 2002) (Trung tâm bệnh cây nhiệt đới – Trường Đạihọc Nông nghiệp Hà Nội)[13].

Bệnh lở cổ rễ do nấm Rhizoctonia solani gây ra phát triển mạnh trên

môi trường nhân tạo ở nhiệt độ 25 – 300C Ban đầu tản nấm có màu trắngđục sau chuyển sang màu nâu sẫm (Nguyễn Văn Viên, Đỗ Tấn Dũng, 2003)[9] Sợi nấm rất mịn ép sát bề mặt môi trường nuôi cấy, sợi nấm đa bào,phân nhánh nhiều, ở chỗ phân nhánh hơi thắt lại, sát đó có vách ngăn, phânnhánh gần như vuông góc Hạch nấm khi còn non có màu trắng, khi già có

màu nâu, thô Trong điều kiện ngoại cảnh thuận lợi, nấm R solani có thể

hình thành hạch non sau 3 ÷ 4 ngày và hạch già sau 5 ÷ 7 ngày nuôi cấy Sốlượng hạch nấm hình thành không nhiều, kích thước hạch nấm rất nhỏ (ĐỗTấn Dũng, 2007)[1] Nấm hình thành hạch nhiều ở nhiệt độ 30 – 320C(Đường Hồng Dật, 1973)[2]

Hạch nấm và sợi nấm có thể tồn tại trên bắp tươi, lá già tàn dư trênruộng và trên bề mặt đất, chúng chính là nguồn bệnh lan truyền từ vụ nàysang vụ khác Không phải tất cả các chủng nấm đều hình thành hạch nấm,nhưng cả hai loại hình thành hạch và không hình thành hạch đều gây bệnhcho cây trồng (Nguyễn Kim Vân và ctv, 2002)[6]

Nấm Trichoderma viride có hiệu lực phòng trừ bệnh rất cao đối với nấm Rhizoctonia solani (Lê Lương Tề và ctv, 2001)[3] Khảo sát hiệu lực của nấm đối kháng Trichoderma viride với các isolate nấm R solani gây

bệnh lở cổ rễ trên môi trường nhân tạo PGA, cho thấy khi loài nấm đối

kháng Trichoderma viride có mặt trước nấm gây bệnh thì bản thân nó có khả năng chiếm chỗ, cạnh tranh, ức chế và tiêu diệt nấm R solani (Đỗ Tấn

Dũng, 2007)[1]

Tiến hành luân canh cây trồng cạn với cây lúa nước từ 2-3 năm, càybừa kỹ, để ải khô, bón vôi để tiêu huỷ tàn dư cây bệnh, lên luống cao dễthoát nước, không gieo trồng quá sâu Có thể dùng một số thuốc hoá học

để phòng trừ bệnh lở cổ rễ như: Ridomil MZ 72WP, Topsin 70WP,Rovral (Vũ Triệu Mân, 2007)[15]

Bệnh thối hạch do nấm Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) De Bary gây

ra Nấm thuộc họ Sclerotiniceae, bộ Helotiales, lớp Nấm túi (Vũ Triệu Mân,2007)[15]

Đây là một trong những bệnh hại khá phổ biến và có ý nghĩa kinh tếđối với cây cải bắp Bệnh phát sinh, gây hại trong điều kiện ẩm độ cao vàthời tiết mát mẻ Nấm bệnh thường xâm nhiễm vào bắp gây thối bắp(Nguyễn Thị Ly và ctv, 2002)[8]

Cây con bị bệnh, gốc thân sát mặt đất bị thối nhũn làm cây đổ gục trênruộng Trên cây lớn vết bệnh thường bắt đầu từ các lá già sát mặt đất và gócthân Trên thân vết bệnh lúc đầu có màu vàng nâu, nếu trời ẩm ướt chỗ bịbệnh thối nhũn, nếu trời khô hanh chỗ bị bệnh khô teo có màu nâu nhạt.hạch nấm được hình thành bám vào bắp (Vũ Triệu Mân, 2007)[15]

Theo Phạm Thị Dung và ctv (2003)[11], bệnh thối hạch chỉ xuất hiện

và gây hại vào cuối vụ đông và vụ xuân Nhiệt độ thích hợp cho chúng pháttriển từ 18 – 220C Nấm Sclerotinia sclerotiorum phát triển tốt trong điều

kiện pH 4,5 – 5,2

Điều kiện nhiệt độ có quan hệ chặt chẽ với khả năng hình thành quảthể đĩa và mức độ nhiễm bệnh Nhiệt độ từ 12 – 200C là thích hợp cho việchình thành quả thể đĩa và sự nhiễm bệnh của cây trồng (Nguyễn Thị Ly vàctv, 2002)[8]

Nguồn bệnh chủ yếu bảo tồn ở dạng hạch nấm Bào tử túi lan truyềnnhờ gió Ngoài gió thì nước mưa và nước tưới cây cũng là con đường lantruyền bệnh (Vũ Triệu Mân, 2007)[15].

Phòng trừ bệnh thối hạch theo quy trình phòng trừ tổng hợp Chú ýluân canh triệt để, vệ sinh đồng ruộng, ruộng trồng phải khô ráo, thoát nướctốt (Tạ Thu Cúc, 2001)[12]

Bón vôi trên những diện tích bị hại nặng có thể là một trong những

biện pháp tốt có tác dụng hạn chế sự phát triển của nấm hạch Sclerotinia

Theo kết quả đề tài nghiên cứu Khoa học của chi cục bảo vệ thực vậttỉnh Lâm Đồng và trung tâm nông nghiệp thành phố Đà Lạt, (2007) bệnhsưng rễ cải bắp xuất hiện tại Đà Lạt từ tháng 10/2002 và lây nhiễm trên diệnrộng từ năm 2004 Đối tượng gây hại chủ yếu các cây họ hoa thập tự như cảibắp, cải thảo, súp lơ…

+ Bệnh do nấm Plasmodiophora brassicae Woronin ký sinh chuyên tính

gây ra Nấm bệnh tồn tại trong đất dưới dạng bào tử và có thể tồn tại từ 7 – 20năm do có lớp vỏ dày bảo vệ và có thể chịu được những tác động bất lợi củamôi trường

+ Cây nhiễm bệnh bị héo rũ, lá vàng úa, sinh trưởng chậm, nhỏ và không

hình thành bắp Phần rễ bị phình to, tạo u sưng, ở cây con chỉ phát hiện bệnhkhi nhổ cây lên.

Bệnh hại ở bộ phận rễ và gốc thân nằm sâu trong đất tạo ra u sưng nổicục sần sùi, xuất hiện từng đoạn hoặc kéo dài cả rễ Các u sưng lúc đầu cómàu sắc tương tự màu rễ cây sau chuyển sang màu nâu, thối mục Nấm cóthể xâm nhập trong suốt thời gian sinh trưởng của cây, nhưng thời kỳ còn non làgiai đoạn dễ xâm nhập và phá hại mạnh (Vũ Triệu Mân, 2007)[15]

Sau khi rễ bị hư hại và lá chuyển sang màu vàng, dày thô, lá mất độ nhẵnbóng cây chết héo dần Bệnh sưng rễ có thể phá hại trên 100 loại cây trồng vàcây dại trong họ hoa thập tự Tế bào rễ bị bệnh lớn gấp 3 – 4 lần tế bào rễ câybình thường (Vũ Triệu Mân, 2007)[15]

Nấm sưng rễ bắp cải phát triển mạnh trong điều kiện đất chua pH 5,4 –6,5, đất ẩm ướt, độ ẩm tương đối cao Trong điều kiện đó, quá trình xâm nhiễmhoàn thành trong 18 giờ Vì vậy, đất trũng, ẩm thấp, đất quá chua và có nhiệt độthích hợp 19 – 250C bệnh phát sinh phá hại mạnh (Vũ Triệu Mân, 2007)[15]

Để phòng trừ bệnh cần chọn lọc giống, canh tác cải tạo đất trồng, chọnđất trung tính hoặc hơi kiềm, bón vôi thích hợp ở vườn ươm và ruộng sản xuất.Không luân canh với các cây trồng họ thập tự Khi thấy bệnh xuất hiện phảinhổ cả gốc rễ đem đốt hoặc vùi sâu trong các hố có vôi bột (Vũ Triệu Mân,2007)[15]

PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN

CỨU 3.1 Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu

3.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tự

3.1.2 Địa điểm và thời gian nghiên cứu

Đề tài được thực hiện tại: Các vùng trồng cải bắp, su hào, súp lơ tạiGia Lâm, Hà Nội và Bộ môn Bệnh cây – Khoa Nông học – Trường Đại họcNông Nghiệp Hà Nội

Thời gian nghiên cứu: từ tháng 7 đến tháng 12 năm 2013

3.2 Vật liệu nghiên cứu

- Mẫu bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tự thu thập từ ngoài đồng ruộng

- Môi trường nuôi cấy: WA, PGA, PCA

- Nấm đối kháng Trichoderma viride.

- Các dụng cụ thiết yếu trong phòng thí nghiệm như hộp petri, que cấy nấmkhuẩn, tủ định ôn, phòng nuôi cấy nấm khuẩn, các loại cốc thủy tinh, ốngđong, bình đựng nước, nồi hấp, tủ lạnh, kính hiển vi quang học,

3.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Phương pháp điều tra bệnh nấm hại rau họ hoa thập tự

Điều tra thành phần bệnh hại

Điều tra theo quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về phương pháp điều traphát hiện dịch hại cây trồng của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thônnăm 2010, điều tra 10 điểm ngẫu nhiên nằm trên đường chéo của khu vựcđiều tra Điểm điều tra cách bờ ít nhất 2m Điều tra theo định kỳ 7 ngày mộtlần

+ Bệnh toàn cây: 10 thân ngẫu nhiên/điểm

+ Bệnh trên rễ: 10 cây ngẫu nhiên/điểm

Quan sát triệu chứng điển hình của bệnh, đánh giá mức độ phổ biếncủa bệnh:

Mức độ phổ biến của bệnh:

+ : Bệnh ít phổ biến (TLB < 10%)

++ : Bệnh khá phổ biến (TLB 10 - 20%)

+++ : Bệnh phổ biến (TLB > 20%)

Điều tra diễn biến bệnh

Đối với bệnh thối hạch, bệnh lở cổ rễ (bệnh thối nâu): Điều tra định

kỳ 7 ngày 1 lần, theo phương pháp năm điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 50cây

Đối với bệnh đốm vòng: Điều tra định kỳ 7 ngày 1 lần, theo phươngpháp năm điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 5m2

Cấp 2: Diện tích lá bị bệnh 10 – 25%

Cấp 3: Diện tích lá bị bệnh > 25- 50%

Cấp 4: Diện tích lá bị bệnh > 50 – 70%

Cấp 5: Diện tích lá bị bệnh > 75%

3.3.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng

3.3.2.1 Phân lập và nuôi cấy nấm bệnh trên các môi trường nhân tạo

Phương pháp để ẩm

Sau khi điều tra thu thập được mẫu bệnh (lá, thân, gốc) ngoài đồngruộng chọn mẫu bệnh có triệu chứng điển hình, rửa sạch đất cát, cắt thànhmẫu thích hợp để trong hộp petri có lót giấy ẩm, để ở nhiệt độ thích hợp sau

2 – 3 ngày có độ ẩm thường xuyên, đem kiểm tra dưới kính hiển vi để xácđịnh sơ bộ tác nhân gây bệnh

Phương pháp chế tạo môi trường

Trong quá trình nghiên cứu chúng tôi đã sử dụng các loại môi trườngnhân tạo PGA, PCA, WA

+ Môi trường PGA (Potato glucose agar):

Cho lần lượt Agar, đường khuấy đều cho tan hết, sau đó đổ môitrường vào bình tam giác, hay ống nghiệm có đậy nút bạc (bình tam giác,ống nghiệm, hộp Petri đã được rửa sạch và sấy khô ở nhiệt độ 1800C trong

vòng 2 giờ) Sau đó đem khử trùng trong nồi hấp ở áp suất 1.5 amt (1210C)trong 30 phút.

+ Môi trường PCA:

Cắt mảnh mô bệnh thích hợp sau đó khử trùng bề mặt bằng cách dùnggiấy mềm đã nhúng cồn (ethanol) 70% lau mặt lá hoặc bằng cách nhúngnhanh vào cồn (ethanol, rửa lại trong nước vô trùng và để khô trên giấy thấm

vô trùng

Dùng dụng cụ đã khử trùng cắt những miếng cấy nhỏ 1 – 3 mm (chứa

cả phần mô bệnh và mô khỏe), sau đó dùng panh vô trùng đặt lên môitrường nghèo dinh dưỡng (như WA, để nấm phát triển bào tử) hoặc môitrường chọn lọc, đặt những miếng cấy gần mép đĩa

Bọc đĩa lại bằng nilon gói thực phẩm và để ở điều kiện nhiệt độ vàánh sáng thích hợp để bào tử nấm hình thành Theo dõi và kiểm tra sự pháttriển của sợi nấm mọc ra từ mô bệnh.

Sau khi nấm mọc, tiến hành cắt đầu sợi nấm cấy truyền sang các đĩakhác cho tới khi thu được nguồn nấm thuần khiết Quan sát đặc điểm hìnhthái, màu sắc sợi nấm

3.3.2.2 Nghiên cứu, xác định các loài nấm gây bệnh

Sử dụng các nguồn nấm thuần khiết (isolate) đã nuôi cấy được trênmôi trường lây bệnh nhân tạo lên cây cải bắp

Giống cải bắp sử dụng để lây bệnh: Nova chịu nhiệt

+ Đối với bệnh thối nâu (Rhizoctonia solani) chúng tôi tiến hành lây

bệnh trên lá với 2 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần 5 cây,mỗi cây lây 10 vết

CT 1: Có sát thương

CT 2: Không sát thương

+ Đối với bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani) tiến hành lây bệnh ở cổ

rễ với 2 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần 10 cây

CT 1: Có sát thương

CT 2: Không sát thương

+ Đối với bệnh thối hạch chúng tôi cũng tiến hành lây bệnh như sau:

* Lây bệnh trên lá với 2 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗilần 5 cây, mỗi cây lây 10 vết

CT 1: Có sát thương

CT 2: Không sát thương

* Lây bệnh ở cổ rễ gồm 2 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần,mỗi lần 10 cây

CT 1: Có sát thương

CT 2: Không sát thương

+ Đối với bệnh đốm vòng thí nghiệm được bố trí gồm 3 công thức,mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần 5 cây, mỗi cây lây 20 vết, lây bệnhtrên lá

CT 1: Có sát thương

CT 2: Không sát thương

CT 3: Đối chứng

Chỉ tiêu theo dõi:

+ Theo dõi trong 7 ngày

+ Quan sát và ghi nhận các triệu chứng

+ Đếm số vết biểu hiện triệu chứng bệnh, tính tỷ lệ bệnh (%)

3.3.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố sinh thái đến sự phát triển của một số loài nấm bệnh hại rau họ hoa thập tự

* Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy khác nhau đến sự phát triển của các loài nấm Alternaria brassicae, Rhizoctonia solani và Sclerotinia sclerotiorum.

Sử dụng các nguồn nấm thuần khiết (Isolate) Cấy nấm vào giữa hộp petri(đường kính lỗ đục 5mm) trên các môi trường PCA, PGA, WA

Đối với mỗi loài nấm bệnh tiến hành thí nghiệm với 3 công thức, mỗi côngthức nhắc lại 3 lần, mỗi lần nhắc lại 1 hộp petri Theo dõi đến khi nấm mọckín đĩa

CT 1: Cấy nấm bệnh trên môi trường PGA

CT 2: Cấy nấm bệnh trên môi trường PCA

CT 3: Cấy nấm bệnh trên môi trường WA

Chỉ tiêu theo dõi: Đo đường kính tản nấm (mm)

* Ảnh hưởng của các mức nhiệt độ khác nhau đến sự phát triển của các loài nấm Alternaria brassicae, Rhizoctonia solani và Sclerotinia sclerotiorum

Sử dụng các nguồn nấm thuần khiết (Isolate) Cấy nấm vào giữa hộppetri (đường kính lỗ đục 5mm) trên các môi trường PGA Đặt ở các mứcnhiệt độ khác nhau

Thí nghiệm gồm 4 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lầnnhắc lại 1 hộp petri Theo dõi đến khi nấm mọc kín đĩa

CT 1: Cấy nấm bệnh lên môi trường và đặt ở nhiệt độ 170C

CT 2: Cấy nấm bệnh lên môi trường và đặt ở nhiệt độ 190C

CT 3: Cấy nấm bệnh lên môi trường và đặt ở nhiệt độ 250C

CT 4: Cấy nấm bệnh lên môi trường và đặt ở nhiệt độ 28,50C

Chỉ tiêu theo dõi: Đo đường kính tản nấm (mm)

3.3.2.4 Khảo sát khả năng phòng trừ nấm Sclerotinia sclerotiorum,

Rhizoctonia solani bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng Trichoderma viride (TV)

Thí nghiệm gồm 4 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lầnnhắc lại 1 hộp petri

Công thức 1: Cấy nấm TV, sau 24 giờ cấy nấm gây bệnh

Công thức 2: Cấy nấm gây bệnh, sau 24 giờ cấy nấm TV

Công thức 3: Cấy nấm TV đồng thời với nấm gây bệnh

Công thức 4: Đối chứng, cấy nấm gây bệnh và cấy nấm TV riêng biệt.Chỉ tiêu theo dõi:

+ Đo đường kính tản nấm của nấm TV và nấm gây bệnh ở các côngthức

+ Đánh giá hiệu lực đối kháng của nấm TV đối với nấm gây bệnhtheo công thức Abbott:

C - T

HLĐK (%) = - x 100

C

Trong đó:

C: đường kính tản nấm ở công thức đối chứng

T: đường kính tản nấm ở công thức có xử lý nấm Trichoderma

về trắc nghiệm Dulcan

PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

4.1 Điều tra thành phần bệnh nấm hại rau họ hoa thập tự

4.1.1 Thành phần và mức độ phổ biến bệnh nấm hại một số cây rau họ hoa thập tự vụ thu đông năm 2013 tại Gia Lâm, Hà Nội

Rau họ hoa thập tự có bộ rễ ăn nông, chỉ tập trung chủ yếu trong tầngđất màu Bộ lá khá phát triển, to bản nhưng mỏng, nên chịu hạn kém và dễ

bị sâu bệnh gây hại Đặc biệt trong vụ thu đông (từ tháng 8 đến tháng 11)với thời tiết mát mẻ, ẩm độ tương đối cao tạo điều kiện cho các tác nhân gâyhại phát triển mà đặc biệt là nấm gây bệnh

Chính vì vậy, việc điều tra và xác định thành phần bệnh nấm hại rau

họ hoa thập tự là việc có ý nghĩa rất quan trọng để làm cơ sở cho công tácnghiên cứu trong bảo vệ thực vật, từ đó có thể xây dựng được phương phápphòng trừ hiệu quả giúp tăng năng suất và chất lượng rau

Chúng tôi đã tiến hành điều tra thành phần bệnh nấm hại rau họ hoathập tự vụ thu đông 2013 tại Gia Lâm, Hà Nội

Kết quả điều tra bệnh nấm hại một số loại rau họ hoa thập tự tại GiaLâm, Hà Nội được trình bày ở bảng 4.1

Bảng 4.1: Thành phần bệnh nấm hại rau họ hoa thập tự vụ thu đông

năm 2013 tại Gia Lâm, Hà Nội Cây

trồng

gây hại

Mức độ phổ biến

Địa điểm điều tra Tên Việt

ở giai đoạn cây con và ít phổ biến hơn Trên cây cải thảo (cải bao) thấy xuấthiện 2 bệnh nấm hại là đốm vòng và thán thư ở mức độ ít phổ biến, khônggây ảnh hưởng nhiều đến năng suất rau

Thành phần bệnh nấm hại trên cây su hào và cây cải bắp là giốngnhau Ở hai loại rau này thấy xuất hiện bệnh lở cổ rễ và bệnh đốm vòng ởhầu hết các giai đoạn phát triển của cây với mức khá phổ biến Tuy nhiênbệnh đốm vòng hại chủ yếu ở trên lá và chủ yếu ở các lá già sát mặt đất nênảnh hưởng không nhiều đến năng suất thu hoạch Bệnh thán thư

(Colletotrichum sp.) và bệnh đốm lá (Cercospora brassicicola) xuất hiện với

mức độ ít phổ biến hơn và gây hại ở tất cả các giai đoạn phát triển của cây

và cũng chủ yếu gây hại trên lá Bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum)

gây hại chủ yếu ở giai đoạn cuốn bắp gây thối bắp làm giảm năng suấtnghiêm trọng

Tương tự, như cây su hào và cải bắp thì trên cây súp lơ cũng thấy xuất hiện

3 bệnh nấm hại là bệnh lở cổ rễ, bệnh đốm vòng và bệnh thán thư Trong đóthì bệnh đốm vòng gây hại phổ biến hơn cả Bệnh lở cổ rễ gây hại chủ yếu ởgiai đoạn cây con, làm chết rạp cây con, làm mất mật độ trồng Bệnh thánthư gây hại ít phổ biến

4.1.2 Thành phần và mức độ phổ biến bệnh nấm hại cải bắp vụ thu đông năm 2013 tại Gia Lâm, Hà Nội

Bảng 4.2: Thành phần bệnh nấm hại cải bắp vụ thu đông năm 2013 tại

Gia Lâm, Hà Nội

gây hại

Giai đoạn sinh trưởng

Mật độ phổ biến

từ cây con đến hồi xanh là thời kỳ mẫn cảm của cây, cây con là điều kiệnthuận lợi cho nấm bệnh sinh trưởng và phát triển.

Qua đó ta thấy bệnh phổ biến nhất là bệnh đốm vòng (A brassicae) và lở cổ

rễ (R.solani), hai bệnh này gây hại ở hầu hết các giai đoạn sinh trưởng, phát triển của cây Bệnh lở cổ rễ (R.solani) gây hại từ giai đoạn cây con đến giai

đoạn cuốn bắp chuẩn bị thu hoạch với mức độ khá phổ biến Đặc biệt là thời

kỳ thu hoạch bệnh còn gây thối bắp làm ảnh hưởng đến năng suất thu hoạch

Bệnh thối hạch (S sclerotiorum) chỉ gây hại khi cây đã vào thời kỳ thu hoạch Nấm Phytothora brassicae gây ra triệu chứng khi cây đã cuốn bắp

nấm gây hại trên những lá bao bắp tạo ra vết cháy lá rất điển hình

Ảnh 4.1: Triệu chứng bệnh lở cổ rễ hại cây

con cải rau Ảnh 4.2: Triệu chứng bệnh đốm vòng súp lơ

Ảnh 4.3: Triệu chứng bệnh đốm vòng trên

lá cải thảo

Ảnh 4.4: Triệu chứng bệnh sương mai trên

cải rau

Ảnh 4.5: Cành bào tử phân sinhvà bào tử

phân sinh nấm Peronospora brassicae

Ảnh 4.6: Cành bào tử phân sinh nấm

Cercospora brassicicola

Ảnh 4.7: Triệu chứng bệnh thán thư trên cải

Điều tra trên giống cải bắp Nova vụ thu đông năm 2013

4.2.1 Diễn biến bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp tại xã

Đặng Xá – Gia Lâm – Hà Nội

Bảng 4.3: Diễn biến bệnh lở cỗ rễ (Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp tại

xã Đặng Xá – Gia Lâm – Hà Nội

Ngày điều tra

Hồi xanh

Giao tán

Trải lá bàng

Trải lá bàng

Cuộn bắp

Cuộn bắp

Giai đoạn sinh trưởng

Đồ thị 4.1: Diễn biến bệnh lở cỗ rễ (Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp

tại xã Đặng Xá – Gia Lâm – Hà Nội

Qua điều tra chúng tôi nhận thấy rằng trong tất cả các giai đoạn sinh trưởng

của cây thì đều xuất hiện cây bị bệnh do nấm R solani gây ra Nhưng đáng

chú ý nhất là giai đoạn cây con từ 2 – 5 lá là giai đoạn có tỷ lệ bệnh caonhất, sau đó tỷ lệ bệnh có xu hướng giảm dần theo quá trình sinh trưởng củacây, cây càng lớn thì tỷ lệ cây nhiễm bệnh càng ít

Từ bảng 4.3 và đồ thị 4.1 cho thấy nấm R solani có mặt gây hại thường

xuyên ở tất cả các giai đoạn sinh trưởng phát triển của cây cải bắp Tuynhiên, ở các giai đoạn sinh trưởng phát triển khác nhau thì tỷ lệ bệnh cũngrất khác nhau Cụ thể là:

Đến thời kỳ hồi xanh tỷ lệ bệnh đã giảm dần từ 5,2% ở giai đoạn câycon xuống 4,1% ở giai đoạn hồi xanh Và đến thời kỳ giao tán và trải lá bàngthì tỷ lệ bệnh đã giảm xuống thấp hơn 2,9% ( giao tán), 1,5% (trải lá bàng)

và chỉ còn 0,5% ở giai đoạn cuốn bắp Sở dĩ, có sự khác nhau như vậy là do

ở giai đoạn cây con là giai đoạn xung yếu nhất của cây các tế bào mô còn