THỰC TẬP HÓA SINH Y HÀ NỘI

THỰC TẬP HÓA SINH Y HÀ NỘI THỰC TẬP HÓA SINH Y HÀ NỘI THỰC TẬP HÓA SINH Y HÀ NỘI THỰC TẬP HÓA SINH Y HÀ NỘI THỰC TẬP HÓA SINH Y HÀ NỘI

Trang 1

Giới thiệu sơ lược:

1 Lưu ý phần nguyên tắc chắc thi nên cần phải học thuộc

2 Cũng không kém phần quan trọng là biện luận tăng trong hợp nào và giảm trong trường hợp nào

3 Phần mà các bạn nên chú ý nhất là phần kết luận lúc cho ra kết quả là phải dựa vào biện luận trong khỏang giới hạn bình thường và kết luận ngay

4 Trong công thức biến đổi đơn vị nếu trong bài không có mà các bạn lấy ở ngòai vào thì phải chú thích rõ ràng ngắn ngọn

Thực Tập Hóa Sinh Phần Định Lượng Phần Định Tính

Cholesterol tòan phần trong

huyết thanh

Glucose trong máu

Tính hòa tan

Urê

Acid Uric trong nước tiểu

Protein tòan phần trong

huyết thanh bằng p 2 Biuret

Tìm Ceton trong nước tiểu

Xác định hoạt độ Amylase trong nước tiểu

Định tính Protein trong nước tiểu bằng p 2 đông kết

Định tính Protein trong nước tiểu bằng p 2 Heller

Họat động của Catalase

Aûnh hưởng của to đến hoạt động của Urease

Một số thí nghiệm phản

ứng

P.Ứng Pehling.Ứng dụng tìm Gluco trong nước tiểu P.Ư Ninhydrin

Phản ứng Seliwanoff

Bilibrubin trong huyết

thanh

Phản ứng mayer Tìm máu trong nước tiểu Phản ứng Hay Tìm muối mật trong n.Tiểu

Trang 2

I Cholesterol tòan phần trong huyết thanh: chương Lipid

1. Nguyên tắc

2. Kết Quả: lưu ý đơn vị đo

a) Được xác định bởi công thức

Cholesterol (mg/dl) = x 200

3. Biện Luận:

a) Cholesterol toàn phần trong huyết thanh ở khỏang giới hạn

 Có nguy cơ vừa đối với bệnh mạch vành : 200 – 250 mg/dl

 Nguy cơ cao đối với bệnh mạch vành: 250 – 300 mg/dl

 Kết luận: khi thực tập xong có kết quả dựa vào giới hạn trên và kết luận rồi sao đó diến giải thêm

b) Ngòai ra khi nhận định vòn phải kết hợp với các thông số lipid và lipoprotein kháckhi gặp

các yếu tố thuận lợi như lứa tuổi giới tính tiền sử bệnh Ví dụ:

 Nếu cholesterol tòan phần < 200 mg/dl nhưng

 Apo B (v.c thành mạch ra) > 130 mg/dl

2

Cholesterol ester + H O Cholesterol + Acid Béo

Cholesterol ester + O Cholestene – 3 – one + H O

H O + 4 – amino – phenazone + Phenol Quinoneimine + H O

CHE

2

Ống chuẩn Ống thử

Trang 3

Thì vẫn có nguy cơ

II Glucose trong máu: Chương Glucid

1 Nguyên tắc:

Glucose khử dung dịch thuốc thử đồng sulfat thành đồng I oxid (Cu O).Tủa màu đỏ Cu O dễ bị oxy hóa, không đo trực tiếp được sẽ tác dụng với arsenomolybdat,khử chất này thành molyben oxid màu xanh,đo được bằng quang sắc kế,phản ứng thực hiện trong môi trường kiềm nóng

2 Kết quả:lưu ý đơn vị

Nồng độ glucose trong huyết tương:

C (g/l) =

3 Biện luận:

a) Glucose trong máu khỏang 0,7 – 1,1 g/l

 Nước tiểu có đường không phát hiện được khi glucose trong máu tăng vượt khỏi ngưỡng thận (khỏang 1,7 – 1,8 g/l) thì có glucose niệu

b) Thay đổi có hai trường hợp

 Tăng: sau khi ăn ,sau khi tập thể dục

 Giảm : khi đói,có thai, đang cho con bú.sau luyện tập kéo dài

 Nhất thời: thời kỳ có thai,strees

 Tăng: lúc đói chủ yếu bệnh đái tháo đường tụy,nhẹ hơn trong các rối loạn nội tiết: cường năng tuyến thận,tuyến giáp,tuyến yên,tổn thương nội sọ,……

 Giảm:

 Khi tiêm quá liều insulin,cường năn tuyến tụy,u tụy

2 2

D

Do

Trang 4

 Thiểu năng tuyến thượng thận,tuyến giáp,tuyến yên…

III. ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN TOÀN PHẦN TRONG HUYẾT THANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP BIURET (Chương Protid 1)

1. Nguyên tắc:

Trong môi trường kiềm,biuret có nhóm CO – NH, giống như 1 liên kết peptid sẽ kết hợp với Cu2+ để cho phức chất có màu tím hồng.

Tương tự như trường hợp Protein dùng để nhận biết Protein

2. Kết quả: lưu ý đơn vị:

Được tính theo công thức sau:

Protein TP (g/l) = x 6,25 x 1 / 0,1

a) Protein toàn phần trong huyết thanh khỏang 65 – 85 g/l

b) Thay đổi bệnh lý:

 Tăng:

 Hội chứng mất nước (nôn,tiêu chảy)

 Sốt kéo dài

 Bệnh u tủy

 Bệnh Addsion (thiểu năng vỏ thượng thận)

 Giảm:

 Suy dinh dưỡng

 Xơ gan,viêm gan

 Thận hư nhiễm mỡ

 Tăng nhu cầu protein: thai nghén,đang cho con bú

D Do

Trang 5

IV. Định lượng URÊ Chương Protid 2)

Trong môi trường acid và nóng,urê phản ứng với diacetyl monoxim (DAM) cho một hợp chất màu hồng.Thêm thíoemicarbazid (TSC) vào thuốc thử (DAM) sẽ làm tăng cường độ màu của hợp chất.

URÊ (g/l) = x 0,3

a) Ure là sản phẩm thóai hóa quan trọng nhất của protein bình thường protein máu vào

khỏang 0,2 - 0,4 g/l

b) Thay đổi có hai trường hợp

 Thay đổi chút ít theo chế độ ăn và theo tuổi

 Tăng:

+ Nguyên nhân tại thận: cấp tính ( Viêm cầu thận cấp,viêm

ống thận,sốt vàng da chảy máu do xoắn khuẩn Liptospira gây nên hội

chứng Gan thận cấp…),Mạn tính ( viêm thận mạn tính hay suy thận)

 Giảm lưu lượng máu đến thận: suy tim ứ huyết,sốc giảm thể tích,…

 Ứ nứơc tiểu do chứng ngày tiết niệu: Sỏi niệu quản,u tiền liệt tuyến,…

D Do

Trang 6

 Tăng Urê nội sinh do hủy hoại mạnh tế bào: bỏng rộng,chấn thương,phẩu thuật lớn,…

 Giảm:

+ Có thai,truyền nước nhiều quá,tổn thương gan nặng,chế độ ăn thiếu protid lâu ngày

V. Định lượng ACID URIC trong nước tiểu: Chương Enzym

Trong môi trường kiềm acid uric khử acid phosphotungstic cho màu xanh,độ đậm của màu tỉ lệ với nồng độ acid uric.

Acid uric (mg/l) = x 500 (1)

 Bình thường mỗi ngày lượng nước tiểu trung bình là 1,5 lít / 24 h Ta mới chuyển sang số lượng mg/l trong 24 giờ như sau:

 Acid uric mg/l trong 24 = (500 x 1000 ) / 1500 = 333,333 mg/l

 Acid uric mg/l trong 24 = (800 x 1000 ) / 1500 = 533,333 mg/l

mg/l

 Tăng: thống phong (guot) trong máu thường tăng rõ rệt nhưng trong nước tiểu có thể có giai đoanj giảm,trường hợp suy thận

 Giảm: trong bệnh về thận như viêm thận mạn,suy thận

VI. Định lượng Bilibrubin trong huyết thanh (phương pháp Malloy và Evelyn):

Bilirubin phản ứng với acid sulgganilic diazote hóa tạo nên azobilirubin có màu hồng (phản ứng Ehrlich).

2. Kết quả:

Dựa vào bảng biểu trong phòng thí nghiệm

3.Biện luận:

Trị số bình thường: tòan phần 5 – 10 mg/l;trực tiếp: nhỏ hơn hoặc bằng 2mg/l ( thường không quá 15% của tòan phần); gián tiếp nhỏ hơn hoặc bằng 8mg/l ( thường không quá 85% của tòan phần)

D Do

Trang 7

 kết luận dựa trên kết quả của thí nghiệm vừa làm xong Tăng trong các trường hợp sau: vàng da trước gan: vàng da sinh ly ở trẻ sơ sinh,truyền nhằm nhóm máu,thiếu men G6PD,sốt rét,…  chủ yếu tăng bilirubin gián tiếp và cũng có thể có trong các trường hợp tại gan và sau gan: viêm gan siêu vi,ung thư tụy tạng,ung thư gan,tắc đường mật,…  tăng bilirubin trực tiếp là chính

1) Nguyên tắc:

Dung môi phân cực tan trong dung môi phân cực và ngược lại dung môi không phân cực tan trong dung môi không phan cực.

2) Kết quả:

Dầu không tan trong nước nhưng tan trong aceton

3) Giải thích:

Dựa trên nguyên tắc trên

Dầu có công thức KHÔNG phân cực nên tan trong dung dịc không phân cực

Natri nitroprussiat tác dụng với các thể ceton cho phức chất màu tím,phản ứng xảy ra trong môi trường kiềm

2 Kết quả:

Thấy vòng tím ở mặt phân cách hai lớp dung dịch

Bình thường không có thể ceton trong nước tiểu có trong các trường hợp bệnh đái tháo đường nặng,nhịn đói lâu ngày

III Xác định hoạt độ Amylase trong nước tiểu (phương pháp Wohlgemuth) (Chương Glucid)

Dùng phương pháp pha lõang dần nước tỉeu để tìm lượng enzym tối thiểu phân hủy hết 2 ml dung dịch hồ tinh bột 1 % o ở nhiệt độ 37 o C trong 30 phút

C C R

R C C O

O C C R

1

3 2

Trang 8

Kiểm sóat độ phân hủy của hồ tinh bột bằn iod.Tính hoạt độ của amylase theo đơn vị Wohlgemuth.

Qui ước: 1 Đơn vị Wohlgemut là lượng amylase / 1ml nước tiểu có khả năng thủy phân 1 ml dung dịch hồ tinh bột 1 % o ở nhiệt độ 37 o C trong 30 phút

Ống có màu xanh dương đầu tiên hiện ra ta làm điểm móc,và đọc kết quả là ống nghiệm ngay trước

đó,bởi vì đó là ống có lượng amylase tối thiểu kết quả x 2 = hoạt độ amylase theo Wohlgemuth.

a) Bình thường hoạt độ amylase trong nước tiểu từ 16 – 32 đơn vị

Wohlgemuth Nhưng có thể thay đổi từ 8 – 64 Wohlgemuth.

trường hợp viêm tuyến mang tại,quai bị,hay những tổn thương thứ phát của tụy do những bệnh của các bộ phận chung quanh tụy.

(Chương Protid 1)

 Protein hòa tan trong nước hình thanh dung dịch keo,trong đó các tiểu phân protein tích điện cùng dấu và mang lớp áo nước (hydrat).Nhờ tích điện cùng dấu nên các tiểu phân protein đẩy nhau và nhờ có lớp áo nước nên chúng ngăn cách nhan,vì vậy dung dịch keo protein bền vững

 Nếu làm mất hai yếu tố trên thì các tiểu phân tử protein do chuyển động sẽ gặp nhau dính vào nhau thành những hạt to và kết tủa.

PH đẳng điện của Protein Các tiểu phân tử protein khi đã mất điện tích chỉ có lớp áo nước dễ bị kết tủa,nếu làm mất lớp áo nước thì protein sẽ kết tủa

 Thêm chất khử nước vào môi trường chứa protein ( alcol,aceton…)

sôi,thêm acid hay kiềm mạnh hoặc muối kim loại nặng

Trang 9

V Định tính protein trong nước tiểu bằng phương phápHeller (Chương Protid 2)

Các acid vô cơ mạnh như HNO 3 , HCl,… và các acid hữu cơ như acid Trichloracetic (TCA, CCl 3 COOH) acid sulfosalicylic làm biến tính và tủa đại đa số protein

Protein sẽ kết tủa trắng như đám mây mờ ở mặt phân cách giữa hai lớp chất lỏng

Bình thường không có protein trong nước tiểu

Protein niệu xuất hiện thường xuyên trong: Thai độc sản giật

thận,viêm cầu thận cấp và mạn

 Tuy nhiên Protein trong nước tiểu không giúp ta chuẩn đóan được tình trạng bệnh

Catalase xúc tác cho phản ứng phân hủy hydroperoxyd (H 2 O 2 ) thành H 2 O và oxy phân tử

+ O

Catalase có trong tất cả các tổ chức động vật và trong hồng cầu, có tác dụng che chở tế bào chống tính độc của được tạo thành từ các quá trình oxy hóa khử trong cơ thể.

Có phản ứng đốt chảy tạo ra hiện tượng que nhang còn đang đỏ bỏng phừng cháy

Dựa vào nguyên tắc trên.

VII. Ảnh Hưởng của Nhiệt độ đến hoạt động của Urease :(Chương Enzym)

Dưới tác dụng của ureasse,urê bị thủy phân tạo thành N H và CO Sản phẩm thủy phân này làm pH môi trường trở thành kiềm.Phát hiện sản thành bằng phenolphtalein

(Bản chất của enzym là protein khi bị nhiệt độ tác động sẽ làm biến tính protein dẫn đến protein bị bất hoạt khỏang nhiệt độ tác động là 60 – 80 o C.Mặt khác enzym có nhiệm vụ xúc tác phản ứng tạo nên phản ứng nhanh hay chậm chứ không có tác để căn bằng phản ứng do đó khi để thời gian sau khi bị tác động của nhiệt độ thì enzym vẫn sẽ tiệp tục hoạt động trở lại)

 Ống nghiệm để nhiệt độ phòng thí nghiệm 37 o C sau quá trình làm thí nghiệm sẽ có màu hồng đậm,

H O 2 2 Catalase 2H O2 2

H O 2 2

Trang 10

 Ở nhiệt độ 60 o C sẽ có màu nhạt hơn ở nhiệt độ phòng thí nghiệm

 Ở Nhiệt độ sôi sẽ không có hiện tượng màu hồng.

Do có mặt của enzym amylase ure bị thủy phân tạo rao môi trường kiềm dẫn đến phenolphtalein dùng để nhận biết dung dịch kiềm bằng cách có xuất hiện màu hồng trong dung dịch

VIII. Tìm sắc tố mật trong nước tiểu (kỹ thuật Fouchet)

Dùng BaCl để kết tủa lilirubin dưới dạng muối không tan bari bilirubinat:

BaCl + Bilirubin  bari bilirubinat Oxy hóa muối này bằng FeCl biến bilirubin thành biliverdin có màu xanh ve

Quan sát có màu xanh ve

3 Biện luận: bình thường không có bilirubin trong nước tiểu nếu có chỉ là bilirubin trực tiếp

1) Nguyên tắc:

Trong môi trường kiềm mạnh MS ở dạng Enediol không bền sẽ dễ dàng khử các ion kim loại nặng như Cu 2+ , Ag + ,Hg 2+ , Các nối đôi bị cắt đứt tạo thành những hỗn hợp đường acid.Đặc biệt là phản ứng khử với Cu 2+

Được tóm tắc như sau:

MS + base enediol (chất khử) Cu 2+ Cu + + Đường acid

2) Kết quả:

Thấy vòng tím ở mặt phân cách hai lớp dung dịch

3) Biện luận:

Dựa vào Nguyên tắc trên Nhưng lưu ý lactose là MS đôi và bán bão hòa

Ứng Dụng Tìm Glucose trong nước tiểu:

Cu 2+ (phức hợp Cu 2+ trong thuốc Thử Fehling hay Benedict

2 Tủa Đỏ gạch

2

3 2

Trang 11

Glucose có nhóm Aldehyd sẽ khử Cu 2+ thành Cu + tạo oxid đồng nhất kết tủa mà đỏ gạch

Co ùkết tủa màu đỏ gạch là có mặt glucose trong nước tiểu và ngược lại

II.Phản ứng Seliwanoff ( đặchiệu cho ceton) Chương Glucid

Aldose cũng có thể tạo thành hydroxymethylfurfur khi đun nóng với acid,nhưng phản ứng xảy ra rất chậm nên phản ứng seliwanoff có tính đặc hiệu cho ceton

Dung dịch có furtose cho màu đỏ (hay vàng cam)

Dung dịch có glucose không cho màu có dung dịch trong suốt

Dựa vào nguyên tắc trên

III.Phản ứng Nynhydrin (Chương Acid Amin và Protein)

1.Nguyên tắc:

Dung dịch Protein,peptid hoặc acid amin khi đun nóng với nynhydrin 0,2% sẽ cho màu xanh tím Nynhydrin là chấy oxy hóa nên có thể tạo phản ứng khử cacboxy oxy hóa của acid amin với nước để cuối cùng cho ra CO ,NH và một aldehyd Nynhydrin khi bị khử lại tác dụng với NH vừa được phóng thích và kết hợp với 1 phân tử Nynhydrin thứ hai,tạo thành sản phẩm ngưng kết màu xanh tím.

2.Kết quả:

Dung dịch sau phản ứng có màu xanh tím

3 Biện Luận:

IV.Tìm muối mật trong nước tiểu (Phản ứng Hay)

Các muối kiềm của acid mật làm giảm rõ rệt sức căng bề mặt của nước tiểu.Dùng lưu hùynh thăng hoa để phát hiện hiện tượng này.

Lưu hùynh không rơi xuống là kết quả âm tính

V Tìm máu trong nước tiểu (Phản Ứng Mayer)

HCl đậm đặc -3 H O2

OHH C2

H H

H

OH

OH OH

CH OH2

Phức hợp màu đỏ

hydroxymethylfurfur

Resorcinol

OH

fructose

Trang 12

Hemoglobin (ngay cả khi bị biến tính) có tác dụng như peroxidase giải phóng oxy hoạt động từ Hydroperoxid (nước oxy già).Oxy này có khả năng oxy hóa một số thuốc thử để cho những màu đặc biệt (ví dụ: Pyramidin,phenolphtalein bị khử,pyridin)

Xuất hiện màu đỏ trong hai phút

Bình thường trong nước tiểu không có hồng cầu,trong một số trường hợp bệnh lý,có thể tiểu ra

Hb : thiếu G6PD,truyền nhầm nhóm máu … có thể tiểu ra máu như: sạn đường tiểu,lao đường tiểu,ung thư bọng đái,ung thư thận,…

Định dạng
Số trang	12
Dung lượng	151,5 KB