kỹ thuật di truyền

K THU T DI TRUY N Ỹ Ậ Ề TRONG NUÔI TR NG Ồ TH Y S NỦ Ả I- NGUYÊN T C K THU T CHUY N GENẮ Ỹ Ậ Ể II- B CÔNG CỘ Ụ III- CÁC B C C A K THU T CHUYÊN ƯỚ Ủ Ỹ Ậ GEN IV- NG D NG K THU T CHUY N GENỨ Ụ Ỹ Ậ Ể I-NGUYÊN T CẮ SV CHO gen VECTOR DNA TÁI T H PỔ Ợ CHUY N VÀO TB ĐÍCHỂ BI U HI N GEN MONG MU NỂ Ệ Ố S Đ CHUY N GENƠ Ồ Ể • M t s thu t ngộ ố ậ ữ: ∀ • DNA tái t h p = ổ ợ DNA lai in vitro t 2 DNA ừ khác nhau (đo n DNA ngạ ư i “ghép” trên DNA ờ virus hay plasmid vi khu n). ẩ ∀ • T o dòng gene: ạ quá trình cô l p và thu nh n ậ ậ nhi u b n sao c a m t gene hay m t ề ả ủ ộ ộ đo n geneạ . ∀ • Dòng: m t s l n ộ ố ớ t bàoế hay phân tử gi ng ố nhau sinh ra t m t t bào hay phân t ban ừ ộ ế ử đ uầ . ∀ • Ngân hàng (thư vi n):ệ b sộ ưu t p c a nhi u ậ ủ ề dòng khác nhau. ∀ • cDNA: b n sao b sung c a mRNA (không ả ổ ủ intron, nh retrotranscriptase)ờ • II. B CỘ ƠNG CỤ II.1- Các lo i Enzyme: enzyme gi i h n, ạ ớ ạ ligase, Phosphatase alkaline, Taq polimerase… II.2- Các lo i Vector: Plasmid, Phagemid, ạ Cosmid, Nhi m s c th nhân t oễ ắ ể ạ II.1- CÁC LO I ENZYMEẠ II.1.1- RESTRICTASE ENZYME (Enzym c t h n ch )ắ ạ ế ∀ • Enzyme giới hạn • Cắt DNA sợi kép ở những vùng 4-6 cặp-base = vò trí giới hạn = trình tự thuận nghòch theo hướng 5’→ 3’ (RADAR). • • TÊN G I CÁC ENZYME GI I H NỌ Ớ Ạ • Ch đ u vi t hoa: Tên gi ng vi khu n ữ ầ ế ố ẩ (ly trích enzyme) • Hai ch k không vi t hoa: Tên loài VKữ ế ế • Ch s La Mã: Th t RE đ c phát ữ ố ứ ự ượ hi nệ • Đôi khi có thêm ch vi t hoa sau tên ữ ế loài VK là tên ch ngủ • Ví d : Eco RI (Eco: ụ Escherichia coli , ch ng ủ Ry13), Eco RV Bacterial genus species strain type Named (e.g., EcoRI) for bacterial genus, species, strain, and type. [...]...RESTRICTASE ENZYME (Enzym cắt hạn chế) MỘT SỐ CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN - HpaI cắt thẳng - EcoRI cắt so le - HindIII cắt so le - PstI cắt so le CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN ( restriction enzyme) double stranded DNA digested DNA SẢN PHẨM CỦA CÁC ENZYME GIỚI HẠN Cohesive ends (sticky ends) COHESIVE ENDS EcoRI 5’…GAATTC…3’5’…G 3’…CTTAAG…5’3’…CTTAA AATTC…3’ G…5’ PstI... 5’…CTGCAG…3’5’…CTGCA 3’…GACGTC…5’3’…G G…3’ ACGTC…5’ Blunt ends (flush ends) HaeIII5’…GGCC…3’ 3’…CCGG…5’ BLUNT ENDS 5’…GG CC…3’ 3’…CC GG…5’ Enzym cắt tạo đầu dính Cohesive ends ( restriction enzyme) double stranded DNA digested DNA • II.1.2- ENZYME LIGASE • Xúc tác phản ứng nối hai đầu của 2 trình tự DNA (DNA ligase) hay RNA (RNA ligase) • Ví dụ: T4 DNA ligase Enzyme ligase Xúc tác phản ứng nối hai đầu của 2 trình tự . NỘ Ố Ắ Ủ Ớ Ạ - HpaI c t th ngắ ẳ - EcoRI c t so leắ - HindIII c t so leắ - PstI c t so leắ ( restriction enzyme) digested DNA double stranded DNA CÁCH C T C A ENZYM GI I H. K THU T DI TRUY N Ỹ Ậ Ề TRONG NUÔI TR NG Ồ TH Y S NỦ Ả I- NGUYÊN T C K THU T CHUY N GENẮ Ỹ. Ạ Cohesive ends Enzym c t t o đ u dínhắ ạ ầ ( restriction enzyme) digested DNA double stranded DNA • II.1.2- ENZYME LIGASE • Xúc tác ph n ng n i hai