KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1 potx

QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU GENECÔ LẬP GENE Tách chiêt DNA, RNA Phân tích định tính, định lượng Tạo dòng PCR, RT-PCR THU NHẬN GENE Giải trình tự Các phương pháp in silico XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC

KỸ THUẬT DI TRUYỀN

QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU GENE

CÔ LẬP

GENE

Tách chiêt

DNA, RNA

Phân tích

định tính,

định lượng

Tạo dòng

PCR, RT-PCR

THU NHẬN GENE

Giải trình tự

Các phương pháp in silico

XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC GENE

TÌM HIỂU CHỨC NĂNG CỦA GENE

Northern blot

Southern blot

Gây tạo đột biến

Phiên mã – dịch mã

in vitro

ỨNG DỤNG

Tổng hợp nhân tạo

Điện

di

Đo

OD

Sử dụng các enzyme, vector

NỘI DUNG

1 Thu hồi nucleic acid

2 Phân tích định tính và định lượng nucleic acid

3 Sử dụng các enzyme thông dụng trong sinh học phân tử

4 Lai phân tử

5 Tạo dòng

6 PCR

7 Giải trình tự nucleic acid

8 Biến đổi vật liệu di truyền và chuyển vật liệu di truyền đã biến đổi vào tế bào

THU HỒI NUCLEIC ACID

1 PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT

- Tách chiết DNA

- Tách chiết RNA

2 PHƯƠNG PHÁP LY TÂM

- Ly tâm phân đoạn

- Ly tâm đẳng tỷ trọng – Thu nhận nucleic acid tinh sạch

3 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ

Thu mRNA

TÁCH CHIẾT DNA & RNA

Thiocyanate

1 Phá màng tế bào, màng nhân Chất tẩy (SDS) guanidinium

+ siêu âm, LiCl, Urea,

+ cơ học,

2 Loại protein Phenol pH8 : Phenol pH4 :

Chloroform:IAA Chloroform:IAA Khác Khác

3 Thu hồi nucleic acid :

Tủa Ethanol tuyệt đối Ethanol tuyệt đối

Isopropanol, Isopropanol, Boom Hấp phụ trên silica Hấp phụ trên silica Lọc Thu trên màng lọc Thu trên màng lọc

PHÁ MÀNG SINH HỌC BẰNG CHẤT TẨY

Chất tẩy ion hóa có tác dụng phá màng mạnh, không ion hóa có tác dụng phá màng nhẹ hơn

Chất tẩy, là phân tử lưỡng cực, sẽ kết hợp với protein màng và các phân tử

phospholipid làm phá vỡ cấu trúc màng

LY TÂM PHÂN ĐOẠN

Ly tâm phân đọan (a) và phân đoạn vùng (b) phân tách các phần tử trong hỗn hợp dựa trên khối lượng của chúng Thời gian và lực ly tâm được xác định cho từng nhóm phần tử

Dung dịch ly tâm có tỷ trọng thấp hơn các phần tử cần phân tách

LY TÂM ĐẲNG TỶ TRỌNG

Ly tâm đẳng tỷ trọng

(isopycnic) phân tách

các phần tử trong hỗn

hợp dựa trên tỷ trọng

của chúng

Thời gian và lực ly tâm

là chung cho các nhóm

phần tử

Dung dịch ly tâm có tỷ

trọng với giá trị đi từ

thấp hơn đến cao hơn

tỷ trọng của các phần

tử cần phân tách

THU HỒI NUCLEIC ACID, PHAGE SAU LY TÂM

ĐẲNG TỶ TRỌNG

CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ

Sắc ký

lọc gel

Sắc ký

trao

đổi ion

Sắc ký ái lực KT-KN

THU HỒI mRNA BẰNG SẮC KÝ ÁI LỰC

CÂU HỎI – PHẦN 1

1 Những khác biệt trong phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA và RNA, vì sao lại có những khác biệt đó ?

2 Phương pháp tủa, Boom có những ưu nhược điểm gì ?

3 Khác biệt giữa ly tâm phân đoạn và ly tâm đẳng tỷ trọng ? Ứng dụng của từng loại ly tâm ?

4 Phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA plasmid có gì khác với tách chiết-tinh sạch DNA bộ gene ?