KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1 potx

1 KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN 2 QUA Ù T RÌNH NGHIÊN C Ư ÙU GENE CÔ LẬP GENE Tách chiêt DNA, RNA Phân tích đònh tính, đònh lượng Tạo dòng PCR, RT-PCR THU NHẬN GENE Giải trình tự Các phương pháp in silico XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC GENE TÌM HIỂU CHỨC NĂNG CỦA GENE Northern blot Southern blot Gây tạo đột biến Phiên mã –dòch mã in vitro ỨNG DỤNG Tổng hợp nhân tạo Mục tiêu : Hiểu rõ cấu trúc và chức năng của gene để ứng dụng vào các lónh vực khoa học và đời sống Điện di Đo OD Sử dụng các enzyme, vector 3 NỘI DUNG 1. Thu hồi nucleic acid 2. Phân tích đònh tính và đònh lượng nucleic acid 3. Sử dụng các enzyme thông dụng trong sinh học phân tử 4. Lai phân tử 5. Tạo dòng 6. PCR 7. Giải trình tự nucleic acid 8. Biến đổi vật liệu di truyền và chuyển vật liệu di truyền đã biến đổi vào tế bào 4 THU HỒI NUCLEIC ACID 1. PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT - Tách chiết DNA - Tách chiết RNA 2. PHƯƠNG PHÁP LY TÂM - Ly tâm phân đoạn - Ly tâm đẳng tỷ trọng – Thu nhận nucleic acid tinh sạch 3. PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ Thu mRNA 5 TÁCH CHIẾT DNA & RNA DNA RNA Thiocyanate 1. Phá màng tế bào, màng nhân Chất tẩy (SDS) guanidinium + siêu âm, LiCl, Urea, + cơ học, 2. Loại protein Phenol pH8 : Phenol pH4 : Chloroform:IAA Chloroform:IAA Khác Khác 3. Thu hồi nucleic acid : Tủa Ethanol tuyệt đối Ethanol tuyệt đối Isopropanol, Isopropanol, Boom Hấp phụ trên silica Hấp phụ trên silica Lọc Thu trên màng lọc Thu trên màng lọc 6 PHA Ù MA Ø NG SINH HO Ï C BA È NG CHA Á T TA Å Y Chất tẩy ion hóa có tác dụng phá màng mạnh, không ion hóa có tác dụng phá màng nhẹ hơn. Chất tẩy, là phân tử lưỡng cực, sẽ kết hợp với protein màng và các phân tử phospholipid làm phá vỡ cấu trúc màng 7 LY TÂM PHÂN ĐOẠN Ly tâm phân đọan (a) và phân đoạn vùng (b) phân tách các phần tử trong hỗn hợp dựa trên khối lượng của chúng. Thời gian và lực ly tâm được xác đònh cho từng nhóm phần tử. Dung dòch ly tâm có tỷ trọng thấp hơn các phần tử cần phân tách 8 LY TÂM ĐẲNG TỶ TRỌNG Ly tâm đẳng tỷ trọng (isopycnic) phân tách các phần tử trong hỗn hợp dựa trên tỷ trọng của chúng. Thời gian và lực ly tâm là chung cho các nhóm phần tử. Dung dòch ly tâm có tỷ trọng với giá trò đi từ thấp hơn đến cao hơn tỷ trọng của các phần tử cần phân tách 9 T HU HOI NUCLEIC ACID, PHAGE SAU LY TAM ẹANG TY TROẽNG 10 CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ Sắc ký lọc gel Sắc ký trao đổi ion Sắc ký ái lực KT-KN [...]... BẰNG SẮC KÝ ÁI LỰC 11 CÂU HỎI – PHẦN 1 1 Những khác biệt trong phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA và RNA, vì sao lại có những khác biệt đó ? 2 Phương pháp tủa, Boom có những ưu nhược điểm gì ? 3 Khác biệt giữa ly tâm phân đoạn và ly tâm đẳng tỷ trọng ? Ứng dụng của từng loại ly tâm ? 4 Phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA plasmid có gì khác với tách chiết-tinh sạch DNA bộ gene ? 12 . liệu di truyền và chuyển vật liệu di truyền đã biến đổi vào tế bào 4 THU HỒI NUCLEIC ACID 1. PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT - Tách chiết DNA - Tách chiết RNA 2. PHƯƠNG PHÁP LY TÂM - Ly tâm phân đoạn -. trọng của các phần tử cần phân tách 9 T HU HOI NUCLEIC ACID, PHAGE SAU LY TAM ẹANG TY TROẽNG 10 CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ Sắc ký lọc gel Sắc ký trao đổi ion Sắc ký ái lực KT-KN 11 THU HỒI mRNA. ký trao đổi ion Sắc ký ái lực KT-KN 11 THU HỒI mRNA BẰNG SẮC KÝ ÁI LỰC 12 CÂU HỎI – PHẦN 1 1. Những khác biệt trong phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA và RNA, vì sao lại có những khác biệt đó ? 2.