KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 2 ppt

13 PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯNG NUCLEIC ACID 1. ĐIỆN DI - Gel agarose - Gel polyacrylamide 2. QUANG PHỔ KẾ : Đo mật độ quang (OD – Optical density) 14 ĐIỆN DI DNA TRÊN GEL AGAROSE - Điện di theo phương nằm ngang - Giá thể là gel agarose - Phát hiện với màu nhuộm ethidium bromide, … phát huỳnh quang dưới đèn tử ngoại - Khả năng phân giải trung bình, phụ thuộc vào nhiều yếu tố, đặc biệt là nồng độ agarose 15 Ñ IEÄN DI TRONG TR Ö Ô Ø NG XUNG (PULSED-FIELD ELECTROPHORESIS) 16 ĐIỆN DI TRÊN GEL POLYACRYLAMIDE - Điện di theo phương thẳng đứng - Giá thể là gel polyacrylamide - Phát hiện với màu nhuộm Coomassie blue, nhuộm bạc, phát hiện trên phim tín hiệu đồng vò phóng xạ - Khả năng phân giải cao, phân biệt được những trình tự chỉ cách nhau 1 nucleotide 17 ÑIEÄN DI PROTEIN TREÂN GEL POLYACRYLAMIDE 18 ÑIE Ä N DI 2 CHIE À U PROTEIN TREÂN GEL POLYACRYLAMIDE 19 KỸ THUẬT RFLP (RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM – ĐA HÌNH KÍCH THƯỚC CÁC TRÌNH TỰ CẮT GIỚI HẠN 20 VNTR (VARIABLE NUMBER OF TANDEM REPEATS) Phân tích VNTR để nhận biết tính đa hình di truyền ở cá thể. Sử dụng mẫu dò kết hợp với RE để phân tích VNTR 21 Ư ÙNG DU Ï NG KỸ THUẬT ĐIỆN DI TRONG NGHIÊN CỨU PHẢ HỆ Ví dụ về việc sử dụng PCR và điện di trong xác đònh phả hệ. Đây là phả hệ của Sa hoàng, vợ, 3 con, bác só gia đình và các người hầu 22 KỸ THUẬT “ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ASSAY : PHÁT HIỆN NHÂN TỐ TRANS Các phân đọan protein được ủ với một đoạn DNA đã được đánh dấu phóng xạ và có mang một trình tự CIS. Các tổ hợp trên sau đó sẽ được phân tích bằng điện di không biến tính (đối với protein). Các phân đọan DNA không gắn protein sẽ di chuyển xa hơn các phân đọan trong đó trình tự CIS liên kết với protein (7, 8 trong hình). Như vậy các phân đọan protein tương ứng với các tổ hợp 7 và 8 sẽ được xác đònh. [...]...CÂU HỎI - PHẦN 2 1 Các điểm khác biệt trong phương pháp tiến hành điện di trên gel agarose và gel polyacrylamide 2 Các ứng dụng của điện di trên gel agarose, điện di trên gel polyacrylamide 3 Phương pháp đo mật độ quang (OD) : - Nguyên lý và cách xác đònh hàm lượng nucleic acid - Nguyên lý và cách xác đònh độ sạch của nucleic acid 4 Nguyên lý... (Restriction Fragment Length Polymorphism) 5 Nguyên lý và cách tiến hành phương pháp VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) 6 Nguyên lý và cách tiến hành phương pháp Electrophoretic Mobility Shift Assay 23 . ĐIỆN DI - Gel agarose - Gel polyacrylamide 2. QUANG PHỔ KẾ : Đo mật độ quang (OD – Optical density) 14 ĐIỆN DI DNA TRÊN GEL AGAROSE - Điện di theo phương nằm ngang - Giá thể là gel agarose -. xác đònh. 23 CÂU HỎI - PHẦN 2 1. Các điểm khác biệt trong phương pháp tiến hành điện di trên gel agarose và gel polyacrylamide 2. Các ứng dụng của điện di trên gel agarose, điện di trên gel. tính đa hình di truyền ở cá thể. Sử dụng mẫu dò kết hợp với RE để phân tích VNTR 21 Ư ÙNG DU Ï NG KỸ THUẬT ĐIỆN DI TRONG NGHIÊN CỨU PHẢ HỆ Ví dụ về việc sử dụng PCR và điện di trong xác đònh