Tổng hợp và thiết lập tạp chất đối chiếu a và b của amlodipin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÕ NGUYỄN HOÀNG THƠ TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHẤT ĐỐI CHIẾU A VÀ B CỦA AMLODIPIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÕ NGUYỄN HOÀNG THƠ TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHẤT ĐỐI CHIẾU A VÀ B CỦA AMLODIPIN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS CHƯƠNG NGỌC NÃI GS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2021 i LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan công trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Võ Nguyễn Hoàng Thơ ii Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2019 – 2021 Ngành: Kiểm nghiệm Thuốc & Độc chất – Mã số: 8720210 TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHẤT ĐỐI CHIẾU A VÀ B CỦA AMLODIPIN Võ Nguyễn Hoàng Thơ Người hướng dẫn khoa học: TS Chương Ngọc Nãi, GS.TS Nguyễn Đức Tuấn Từ khóa: Amlodipin phthalimido; 3-ethyl 5-methyl (4RS)-4-(2-chlorophenyl)-2-[[2(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)ethoxy]methyl]-6-methyl-1,4dihydropyridine-3,5-dicarboxylat, tạp A amlodipin, 3-ethyl 5-methyl (4RS)-4-(2chlorophenyl)-6-methyl-2-[[2-[[2 (methylcarbamoyl)benzoyl]amino]ethoxy]methyl]1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylat, tạp B amlodipin Mở đầu: Tạp A tạp B amlodipin tạp trình, gây ảnh hưởng đến hiệu điều trị tính an tồn amlodipin Dược điển hành dược điển Việt Nam V yêu cầu phải kiểm tra tạp A và/hoặc tạp B nguyên liệu thành phẩm amlodipin Cho đến nay, tạp A chuẩn tạp B chuẩn bán với giá đắt Từ nhu cầu thực tế trên, đề tài thực với mục tiêu tổng hợp thiết lập tạp chất đối chiếu A B amlodipin Đối tượng Phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Tạp A tạp B amlodipin theo BP 2020 Phương pháp nghiên cứu: Tạp A tổng hợp từ amlodipin base phản ứng ngưng tụ với anhydrid phthalic acid acetic tinh chế phương pháp sắc ký cột kết tinh dung môi Tạp B tổng hợp từ tạp A phản ứng với methyl amin tetrahydrofuran tinh chế phương pháp sắc ký cột Sản phẩm sau tổng hợp xác định cấu trúc phương pháp phổ nghiệm, định lượng phương pháp HPLC thiết lập chất đối chiếu Sau cùng, tạp A tạp B nguyên liệu chế phẩm amlodipin kiểm tra phương pháp HPLC, sử dụng tạp A tạp B đối chiếu thiết lập Kết quả: Hiệu suất tổng hợp tinh chế tạp A 54,57% (7,46 g) tinh chế sắc ký cột 71,54% (9,78 g) tinh chế kết tinh dung môi Hiệu suất tổng hợp tinh chế tạp B 65,79% (2,12 g) Sản phẩm tổng hợp đạt hàm lượng 99% tính nguyên trạng, đủ điều kiện thiết lập chất đối chiếu Kết kiểm tra số nguyên liệu chế phẩm amlodipin thị trường cho thấy hàm lượng tạp A B nằm giới hạn cho phép Kết luận: Tạp A B tổng hợp thành công thiết lập chất đối chiếu để sử dụng kiểm nghiệm tạp chất liên quan amlodipin iii Master’s Thesis – Academic course: 2019-2021 Specialty: Drug Quality Control and Toxicology – Code: 8720210 SYHTHESIS AND STANDARDIZATION OF AMLODIPINE IMPURITY A AND IMPURITY B Vo Nguyen Hoang Tho Supervisor: Dr Chuong Ngoc Nai, Prof Dr Nguyen Duc Tuan Keywords: Amlodipine phthalimido, 3-ethyl 5-methyl (4RS)-4-(2-chlorophenyl)-2-[[2(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)ethoxy]methyl]-6-methyl-1,4dihydropyridine-3,5-dicarboxylate, amlodipine impurity A, 3-ethyl 5-methyl (4RS)-4(2-chlorophenyl)-6-methyl-2-[[2-[[2 (methylcarbamoyl)benzoyl]amino]ethoxy]methyl]-1,4-dihydropyridine-3,5dicarboxylate, amlodipine impurity B Introduction: Amlodipine impurity A and impurity B are process-related impurities that affect the therapeutic efficacy and safety of amlodipine The reference and Vietnamese pharmacopeias require testing impurity A and/or impurity B in amlodipine drug substance and drug products However, these related compounds are costly with limited accessibility Therefore, this study was carried out with the aim of synthesis and standardization of impurity A and impurity B as the related compounds of amlodipine Materials and methods: Object of study: Amlodipine impurity A and impurity B according to BP 2020 Methods: Impurity A was synthesized from amlodipine base by condensation reaction with phthalic anhydride in acetic acid and purified by column chromatography and recrystallization Impurity B was synthesized from impurity A by reaction with methyl amine in tetrahydrofuran and purified by column chromatography The products were structurally determined by spectroscopic techniques, assayed by HPLC, and established as reference standard Finally, impurity A and B in amlodipine raw materials and corresponding pharmaceuticals were tested by HPLC method, using these established reference standards Results: The synthesis and purification (column chromatography/recrystallization) yield of amlodipine impurity A was 54.57% (7.46 g), and 71.54% (9.78 g), respectively The synthesis and purification yield of impurity B was 65.79% (2.12 g) The assay of both products were over 99% on the basis and conformed to establish reference standard Impurity A and impurity B were tested in several amlodipine raw materials and available corresponding pharmaceuticals and the results showed that the concentration of these impurities was below the acceptance limit Conclusion: Impurity A and B were successfully synthesized and established as the reference standards for related compound test of amlodipine iv MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH x DANH MỤC SƠ ĐỒ xii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan amlodipin 1.2 Tổng quan tạp A amlodipin 11 1.3 Tổng quan tạp B amlodipin 14 1.4 Kiểm nghiệm tạp A tạp B nguyên liệu thành phẩm amlodipin 17 1.5 Chất chuẩn đối chiếu 19 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Nguyên vật liệu 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 39 3.1 Tổng hợp tạp A 39 3.2 Tổng hợp tạp B 49 3.3 Hiệu suất tổng hợp tinh chế tạp A tạp B 58 3.4 Xây dựng quy trình định lượng tạp A tạp B kỹ thuật sắc ký lỏng 61 3.5 Đánh giá tạp A tạp B 67 3.6 Thiết lập chất đối chiếu tạp A tạp B 69 3.7 Kiểm tra tạp A tạp B nguyên liệu viên nén amlodipin 76 CHƯƠNG BÀN LUẬN 78 4.1 Tổng hợp tinh chế tạp A B 78 4.2 Xác định cấu trúc tạp A B 83 4.3 Xây dựng quy trình định lượng tạp A tạp B kỹ thuật sắc ký lỏng 84 4.4 Thiết lập chất đối chiếu tạp A tạp B 84 4.5 Kiểm tra tạp A tạp B nguyên liệu viên nén amlodipin………… 84 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt 1,4-DHP ACN ANOVA ASEAN Từ nguyên 1,4-Dihydropyridine Acetonitrile Analysis of variance The Association of Southeast Asian Nations Attenuated Total Reflectance British Pharmacopoeia British Pharmacopoeia Chemical Reference Substances Chất chuẩn đối chiếu Dung dịch đối chiếu Dung dịch đối chiếu gốc Dung dịch thử Dược điển Việt Nam V Độ không đảm bảo đo Dimethyl sulfoxide Differential scanning calorimetry European Pharmacopoeia European Directorate for the Quality of Medicines European Pharmacopoeia Chemical Reference Standards Electrospray Ionization Ethyl acetate Factor Food and Drug Administration ATR BP BPCRS CCĐC DDĐC DDĐCG DDT DĐVN V ĐKĐBĐ DMSO DSC EP EDQM EPCRS ESI EtOAc F FDA GC GMP GTAĐ HĐDĐ HPLC Gas Chromatoghraphy Good Manufacturing Practices Giá trị ấn định Hội đồng dược điển High Performance Liquid Chromatography International Conference on Harmonization International Chemical Reference Standards ICH ICRS Nghĩa tiếng Việt Phân tích phương sai Hiệp hội quốc gia Đơng Nam Á Phản xạ tồn phần suy giảm Dược điển Anh Chuẩn đối chiếu hóa học dược điển Anh Phân tích nhiệt quét vi sai Dược điển Châu Âu Hội đồng chất lượng thuốc Châu Âu Chuẩn đối chiếu hóa học dược điển Châu Âu Ion hóa tia điện Hệ số đáp ứng Cơ quan quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ Sắc ký khí Thực hành tốt sản xuất thuốc Sắc ký lỏng hiệu cao Hội nghị quốc tế hài hòa Chuẩn đối chiếu hóa học quốc tể Ký hiệu, chữ viết tắt IR ISO LD50 M MeOH MS NLĐC NMR NSX PCRS vi Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt Infrared International Organization for Standardization Lethal Dose Hồng ngoại Tiêu chuẩn hóa quốc tế Methanol Mass Spectrometry Nguyên liệu đối chiếu Nuclear Magnetic Resonance Nhà sản xuất Primary Chemical Reference standards Photodiode Array Phương pháp phân tích Parts per billion Parts per million Phịng thí nghiệm PDA PPPT ppb ppm PTN r Rf RRT SCRS Retention Factors Relative Retention Time Secondary Chemical Reference Standards Sắc ký lớp mỏng Tiêu chuẩn chất lượng Thermal Gravimetric Analysis Tetrahydrofuran Thông tư – Bộ Y tế United States Pharmacopoeia United States Pharmacopeia Reference Substances Ultraviolet–Visible World Health Organization SKLM TCCL TGA THF TT- BYT USP USPRS UV-Vis WHO Liều lượng hóa chất phơi nhiễm thời điểm, gây chết cho 50% nhóm động vật dùng thử nghiệm Khối lượng phân tử Khối phổ Cộng hưởng từ hạt nhân Chuẩn đối chiếu hóa học gốc Dãy diod quang Phần tỷ Phần triệu Đáp ứng pic Hệ số lưu giữ Thời gian lưu tương đối Chuẩn đối chiếu hóa học thứ cấp Phân tích nhiệt trọng lượng Dược điển Mỹ Chất đối chiếu hóa học dược điển Mỹ Tử ngoại – khả kiến Tổ chức Y tế giới vii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Phản ứng tổng hợp amlodipin base ứng với nhóm tiền chất bảo vệ X Bảng 1.2 Các phương pháp định tính nguyên liệu amlodipin besylat theo dược điển tham chiếu Bảng 1.3 Các đỉnh đặc trưng phổ IR amlodipin base amlodipin besylat Bảng 1.4 Các chuyên luận thành phẩm amlodipin dược điển tham chiếu Bảng 1.5 Các phương pháp định tính amlodipin besylat thành phẩm theo dược điển tham chiếu Bảng 1.6 Định tính amlodipin besylat thành phẩm phương pháp SKLM Bảng 1.7 Định lượng amlodipin besylat nguyên liệu theo dược điển tham chiếu Bảng 1.8 Định lượng amlodipin besylat viên nén amlodipin besylat HPLC Bảng 1.9 Các tạp chất liên quan amlodipin besylat theo dược điển tham chiếu Bảng 1.10 Các điều kiện phản ứng tổng hợp dẫn xuất isoindolin-1,3-dion 13 Bảng 1.11 Kiểm nghiệm tạp A B nguyên liệu amlodipin besylat HPLC 17 Bảng 1.12 Kiểm nghiệm tạp A B viên nén amlodipin besylat HPLC 19 Bảng 2.1 Hóa chất dung mơi dùng nghiên cứu 24 Bảng 2.2 Dụng cụ, thiết bị dùng nghiên cứu 24 Bảng 2.3 Nồng độ dung dịch chuẩn tạp A 31 Bảng 3.1 Phổ IR sản phẩm tinh chế A 45 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR sản phẩm tinh chế A tạp A chuẩn 46 Bảng 3.3 Kết khảo sát tỷ lệ mol phản ứng tổng hợp tạp B 49 Bảng 3.4 Kết khảo sát thời gian phản ứng tổng hợp tạp B 50 Bảng 3.5 Kết khảo sát nhiệt độ phản ứng tổng hợp tạp B 50 Bảng 3.6 Phổ IR sản phẩm tinh chế B 54 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ NMR sản phẩm tinh chế B tạp B chuẩn 56 Bảng 3.8 Khối lượng hiệu suất quy trình tổng hợp tinh chế tạp A tạp B 60 viii Bảng 3.9 Điều kiện sắc ký định lượng tạp A tạp B 61 Bảng 3.10 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống (n=6) 61 Bảng 3.11 Kết khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng tạp A tạp B (n=2) 64 Bảng 3.12 Phân tích tính tuyến tính quy trình định lượng tạp A tạp B 64 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ lặp lại quy trình định lượng tạp A tạp B 65 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác trung gian quy trình định lượng tạp A tạp B 65 Bảng 3.15 Kết khảo sát độ quy trình định lượng tạp A 66 Bảng 3.16 Kết khảo sát độ quy trình định lượng tạp B 66 Bảng 3.17 Kết xác định tạp chất liên quan tạp A tạp B 68 Bảng 3.18 Các tiêu đánh giá tạp A tạp B 68 Bảng 3.19 Đánh giá đồng lọ tạp A 69 Bảng 3.20 Phân tích ANOVA yếu tố đánh giá đồng lọ tạp A 69 Bảng 3.21 Kết đánh giá tính phù hợp hệ thống quy trình HPLC xác định độ tinh khiết tạp A phịng thí nghiệm 70 Bảng 3.22 Kết xác định độ tinh khiết tạp A phòng thí nghiệm 70 Bảng 3.23 Kết phân tích ANOVA đánh giá đồng liên phịng tạp A…… 70 Bảng 3.24 Kết tính giá trị ấn định độ tinh khiết tạp A 71 Bảng 3.25 Giá trị ấn định độ tinh khiết tạp A theo Z-score 71 Bảng 3.26 Đánh giá đồng lọ tạp B 72 Bảng 3.27 Phân tích ANOVA yếu tố đánh giá đồng lọ tạp B 73 Bảng 3.28 Kết đánh giá tính phù hợp hệ thống quy trình HPLC xác định độ tinh khiết tạp B phịng thí nghiệm 73 Bảng 3.29 Kết xác định độ tinh khiết tạp B phịng thí nghiệm 73 Bảng 3.30 Kết phân tích ANOVA yếu tố đánh giá đồng liên phòng tạp B 74 Bảng 3.31 Kết tính giá trị ấn định độ tinh khiết tạp B 74 Bảng 3.32 Giá trị ấn định độ tinh khiết tạp B theo Z-score 75 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 81 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 82 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 83 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 84 Phụ lục 8: Phiếu phân tích tạp A chuẩn, tạp B chuẩn, nguyên liệu amlodipin besylat chất đối chiếu amlodipin besylat Tạp A chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 85 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tạp B chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 86 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 87 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Nguyên liệu amlodipin besylat Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 88 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chất đối chiếu amlodipin besylat Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL - 89 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 90 Phụ lục 9: Dự thảo tiêu chuẩn sở tạp A tạp B amlodipin Tạp A ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH DỰ THẢO TIÊU CHUẨN CƠ SỞ TẠP A AMLODIPIN Mã số: 01 Ngày HL: YÊU CẦU CHẤT LƯỢNG STT CHỈ TIÊU YÊU CẦU Mô tả Bột tinh thể màu vàng nhạt Định tính 2.1 - IR Sản phẩm phải đáp ứng phép thử định tính tạp A amlodipin 2.2 - MS 2.3 - NMR Nhiệt độ nóng chảy 152,0  0,5 oC Độ ẩm Không 0,5% Tạp chất liên quan Không q 1,0% Định lượng Khơng 99,0% tính chế phẩm nguyên trạng PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 Mô tả Thử cảm quan, sản phẩm phải đạt yêu cầu nêu 2.2 Định tính 2.2.1 Phổ hồng ngoại Phổ hồng ngoại sản phẩm KBr (hoặc đo trực tiếp ATR) có đỉnh hấp thu tương ứng với phổ hồng ngoại phổ chuẩn tạp A amlodipin thư viện (hay phổ hồng ngoại chất chuẩn tạp A amlodipin) 2.2.2 Phổ khối lượng ESI-MS có m/z phù hợp với cơng thức phân tử C28H27ClN2O7 tạp A amlodipin 2.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Pha 10 mg mẫu thử 0,5 ml CDCl3 Tiến hành đo phổ 1H-NMR 13C-NMR Phổ 1H-NMR 13C-NMR có tín hiệu cộng hưởng phù hợp với phổ 1H-NMR 13 C-NMR chất chuẩn tạp A amlodipin phổ tạp A amlodipin từ thư viện phổ Nhiệt độ nóng chảy Xác định máy phân tích nhiệt vi sai DSC Cân khoảng mg chất thử vào chén đựng mẫu Tiến hành đo nhiệt độ nóng chảy Độ ẩm Xác định độ ẩm phân tích nhiệt trọng lượng (TGA) Mẫu thử cân nhiệt độ 20 °C, gia nhiệt mẫu với tốc độ 10 °C/phút 120 °C Lưu lượng dịng khí nitơ suốt q trình thực 50,0 ml/phút Cân khoảng – 10 mg, cho vào dụng cụ chứa mẫu Tiến hành đo độ ẩm máy TGA Xác định hàm ẩm có mẫu dựa vào thay đổi phần trăm trọng lượng mẫu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 91 Tạp chất liên quan Xác định lúc với định lượng theo phương pháp mục dựa vào phương pháp qui phần trăm diện tích pic Tính hàm lượng % tạp chất liên quan có mẫu thử dựa sắc ký đồ dung dịch thử, trừ pic mẫu trắng Định lượng Hệ thống sắc ký: Shimadzu CBM 20A Điều kiện sắc ký: Cột sắc ký: Phenomenex NX C18 (150 x 4,6 mm; µm) Nhiệt độ cột: 30 °C Đầu dị PDA, bước sóng phát 237 nm Tốc độ dịng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 10 µl Pha động: H3PO4 0,1% nước - H3PO4 0,1% acetonitril (60:40) Mẫu thử: cân xác 5,0 mg tạp A, cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml acetonitril, siêu âm phút Để nguội, bổ sung dung môi đến vạch Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm Mẫu chuẩn: cân xác 5,0 mg tạp A chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml acetonitril, siêu âm phút Để nguội, bổ sung dung môi đến vạch Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm Mẫu trắng: acetonitril Tiến hành: Tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn Phép thử có giá trị độ lệch chuẩn tương đối thơng số thời gian lưu diện tích pic tạp A amlodipin không lớn 2,0 % hệ số đối xứng khoảng 0,8-1,5 Lần lượt tiêm vào hệ thống dung dịch mẫu trắng, dung dịch chuẩn, dung dịch thử Ghi nhận sắc ký đồ Tính hàm lượng % tạp A amlodipin theo công thức: 𝑆𝑇 𝑚𝐶 𝑋𝑇 (%) = × × 𝑋𝐶 𝑆𝐶 𝑚 𝑇 XT : hàm lượng tạp A (%) ST : diện tích pic tạp A mẫu thử SC : diện tích pic tạp A mẫu chuẩn mT : khối lượng cân tạp A (mg) mC : khối lượng cân tạp A chuẩn (mg) XC : độ tinh khiết tạp A chuẩn tính theo chế phẩm nguyên trạng (%) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 92 Tạp B ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH DỰ THẢO TIÊU CHUẨN CƠ SỞ TẠP B AMLODIPIN Mã số: 02 Ngày HL: YÊU CẦU CHẤT LƯỢNG STT CHỈ TIÊU YÊU CẦU Mô tả Bột màu trắng Định tính 2.1 - IR Sản phẩm phải đáp ứng phép thử định tính tạp B amlodipin 2.2 - MS 2.3 - NMR Nhiệt độ nóng chảy 177,5  0,5 oC Độ ẩm Không 0,5% Tạp chất liên quan Không q 1,0% Định lượng Khơng 99,0% tính chế phẩm nguyên trạng PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 Mô tả Thử cảm quan, sản phẩm phải đạt yêu cầu nêu 2.2 Định tính 2.2.1 Phổ hồng ngoại Phổ hồng ngoại sản phẩm KBr (hoặc đo trực tiếp ATR) có đỉnh hấp thu tương ứng với phổ hồng ngoại phổ chuẩn tạp B amlodipin thư viện (hay phổ hồng ngoại chất chuẩn tạp B amlodipin) 2.2.2 Phổ khối lượng ESI-MS có m/z phù hợp với cơng thức phân tử C29H32ClN3O7 tạp B amlodipin 2.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Pha 10 mg mẫu thử 0,5 ml CDCl3 Tiến hành đo phổ 1H-NMR 13C-NMR Phổ 1H-NMR 13C-NMR có tín hiệu cộng hưởng phù hợp với phổ 1H-NMR 13 C-NMR chất chuẩn tạp B amlodipin phổ tạp B amlodipin từ thư viện phổ Nhiệt độ nóng chảy Xác định máy phân tích nhiệt vi sai DSC Cân khoảng mg chất thử vào chén đựng mẫu Tiến hành đo nhiệt độ nóng chảy Độ ẩm Xác định độ ẩm phân tích nhiệt trọng lượng (TGA) Mẫu thử cân nhiệt độ 20 °C, gia nhiệt mẫu với tốc độ 10 °C/phút 120 °C Lưu lượng dịng khí nitơ suốt q trình thực 50,0 ml/phút Cân khoảng – 10 mg, cho vào dụng cụ chứa mẫu Tiến hành đo độ ẩm máy TGA Xác định hàm ẩm có mẫu dựa vào thay đổi phần trăm trọng lượng mẫu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 93 Tạp chất liên quan Xác định lúc với định lượng theo phương pháp mục dựa vào phương pháp qui phần trăm diện tích pic Tính hàm lượng % tạp chất liên quan có mẫu thử dựa sắc ký đồ dung dịch thử, trừ pic mẫu trắng Định lượng Hệ thống sắc ký: Shimadzu CBM 20A Điều kiện sắc ký: Cột sắc ký: Phenomenex NX C18 (150 x 4,6 mm; µm) Nhiệt độ cột: 30 °C Đầu dị PDA, bước sóng phát 235 nm Tốc độ dịng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 10 µl Pha động: H3PO4 0,1% nước - H3PO4 0,1% acetonitril (50:50) Mẫu thử: cân xác 5,0 mg tạp B, cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml acetonitril, siêu âm phút Để nguội, bổ sung dung môi đến vạch Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm Mẫu chuẩn: cân xác 5,0 mg tạp B chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml acetonitril, siêu âm phút Để nguội, bổ sung dung môi đến vạch Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm Mẫu trắng: acetonitril Tiến hành: Tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn Phép thử có giá trị độ lệch chuẩn tương đối thơng số thời gian lưu diện tích pic tạp B amlodipin không lớn 2,0 % hệ số đối xứng khoảng 0,8-1,5 Lần lượt tiêm vào hệ thống dung dịch mẫu trắng, dung dịch chuẩn, dung dịch thử Ghi nhận sắc ký đồ Tính hàm lượng % tạp B amlodipin theo công thức: 𝑆𝑇 𝑚𝐶 𝑋𝑇 (%) = × × 𝑋𝐶 𝑆𝐶 𝑚 𝑇 XT : hàm lượng tạp B (%) ST : diện tích pic tạp B mẫu thử SC : diện tích pic tạp B mẫu chuẩn mT : khối lượng cân tạp B (mg) mC : khối lượng cân tạp B chuẩn (mg) XC : độ tinh khiết tạp B chuẩn tính theo chế phẩm nguyên trạng (%) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 94 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 95 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn