Ảnh hưởng của tá dược dính đến tính chất hạt trong công nghệ tầng sôi với hoạt chất hàm lượng thấp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ DIỄM PHÚC ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC DÍNH ĐẾN TÍNH CHẤT HẠT TRONG CƠNG NGHỆ TẦNG SƠI VỚI HOẠT CHẤT HÀM LƯỢNG THẤP LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ DIỄM PHÚC ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC DÍNH ĐẾN TÍNH CHẤT HẠT TRONG CÔNG NGHỆ TẦNG SÔI VỚI HOẠT CHẤT HÀM LƯỢNG THẤP NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 8720202 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS LÊ MINH QUÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Lê Thị Diễm Phúc LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC - KHĨA: 2019 - 2021 Chun ngành: Cơng nghệ dược phẩm bào chế thuốc Mã số: 8720202 ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC DÍNH ĐẾN TÍNH CHẤT HẠT TRONG CÔNG NGHỆ TẦNG SÔI VỚI HOẠT CHẤT HÀM LƯỢNG THẤP LÊ THỊ DIỄM PHÚC Hướng dẫn khoa học: TS Lê Minh Quân Đặt vấn đề Kỹ thuật tạo hạt ướt thiết bị tầng sôi sử dụng ngày nhiều sản xuất thuốc Việc làm rõ ảnh hưởng thơng số điều chế đến tính chất hạt tạo thành cần thiết để nâng cao khả làm chủ kỹ thuật Đề tài “Ảnh hưởng tá dược dính đến tính chất hạt cơng nghệ tầng sôi với hoạt chất hàm lượng thấp” thực nhằm làm rõ xu hướng, mức độ chế ảnh hưởng loại tá dược dính tỉ lệ khác đến tính chất hạt tạo q trình tạo hạt tầng sơi từ hỗn hợp chứa hoạt chất hàm lượng thấp Đối tượng phương pháp nghiên cứu Hai hoạt chất có tính tan tốt Clorpheniramin maleat (CLM) tan Meloxicam (MLX) sử dụng hoạt chất mơ hình nghiên cứu Ba nhóm tá dược dính sử dụng bao gồm nhóm Hydroxypropyl cellulose (Klucel LF); Povidon (Plasdon K90); Hydroxypropylmethyl cellulose (Methocel E15) Hỗn hợp chứa hoạt chất (2,0 %) cellulose vi tinh thể tạo hạt thiết bị tầng sôi kiểu phun đỉnh với dịch dính khác Ba nhóm tá dược dính với tỉ lệ 2,0 %, 4,0 %, 6,0 % cơng thức khảo sát Biến thiên hình thái hạt, độ ầm, độ đồng hàm lượng hoạt chất khối hạt tạo thành đánh giá Kết Đối với hoạt chất mơ hình tan nước Meloxicam: Tá dược dính tạo dịch lỏng có sức căng bề mặt thấp, góc tiếp xúc nhỏ tạo hạt viên nén có tính chất tốt Tá dược dính nhóm Hydroxypropyl cellulose (HPC) cho thích hợp để tạo hạt tầng sơi nhóm hoạt chất khó tan so với nhóm HPMC Povidon nhờ vào góc tiếp xúc dịch dính tạo thành với hỗn hợp bột nhỏ Đối với hoạt chất mơ hình dễ tan nước Clorpheniramin maleat: Tá dược dính tạo dịch lỏng có sức căng bề mặt lớn tạo hạt viên nén có tính chất tốt Nhóm Povidon cho thích hợp để tạo hạt tầng sơi nhóm hoạt chất dễ tan hai nhóm tá dược dính khảo sát cịn lại HPMC HPC Ở hai hoạt chất mơ hình: Khi tăng tỉ lệ tá dược dính cơng thức làm thuận lợi cho trình tạo hạt Kết luận Đề tài xác định ảnh hưởng, chế ảnh hưởng loại tá dược dính tỉ lệ khác quy trình tạo hạt tầng sơi hoạt chất mơ hình tan nước Meloxicam hoạt chất mơ hình dễ tan nước Clorpheniramin maleat MASTER’S THESIS - ACADEMIC COURSE: 2019 - 2021 Major: Pharmaceutical technology and Pharmaceutics Code: 8720202 EFFECTS OF BINDERS ON GRANULE CHARACTERISTICS OF LOW-DOSE DRUGS PRODUCED BY FLUIDIZED BED GRANULATION LE THI DIEM PHUC Scientific mentor: Minh Quan Le, Ph.D Introduction The fluidized bed wet granulation technique is increasingly used in pharmaceutical industry It is necessary to clarify the influence of formulation parameters on the formed granule properties to improve the understanding of this technique The thesis "Effect of binders on granule characteristics of low dose drugs produced by fluidized bed technology" was carried out to determine the trend, extent and mechanism of effect of different binders at different formulation rates on granule characteristics of low dose drugs produced by fluidized bed technology Materials and methods Two active substances with good solubility Chlorpheniramine maleate and poorly soluble Meloxicam were used as model active ingredients in the study Three groups of binders are used, including Hydroxypropyl cellulose (Klucel LF); Povidone (Plasdone K90); and Hydroxypropyl methyl cellulose (Methocel E15) Mixtures containing active ingredients (2%, w/w), microcrystalline cellulose were fluidized bed granulated (top-spray) by employing different binders Three groups of binders at different ratios (2%, 4% and 6% in the formula, w/w) were investigated The change of particle/granule morphology, moisture content variation during the granulation, and drug content uniformity in resultant granule bulk was also examined i Results For the poorly water-soluble model active ingredient Meloxicam: Binders can create a liquid with low surface tension, small contact angle will produce better granules and tablets Hydroxypropyl cellulose (HPC) group is considered to be suitable for fluidized bed granulation for the poorly water-soluble model active ingredient than HPMC and Povidone because of the smaller contact angle of the binders to the powder mixture For the water-soluble model active ingredient Chlorpheniramine maleate: Binders can create a liquid with high surface tension, which will create better granules and tablets The Povidone group is considered more suitable for fluidized bed granulation for the water-soluble model active ingredient than the other two groups HPMC and HPC In both models active ingredients: When increasing the percentage of binders in the formula, will facilitate the granulation process Conclusion The thesis has determined the effect and the mechanism of the effect of different binders at different rates on the fluidized bed granulation process on the poorly soluble model active ingredient Meloxicam and the soluble model active ingredient Chlorpheniramine maleate MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BẢNG vi MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Kỹ thuật tạo hạt tầng sôi .3 Nguyên lý tầng sôi Q trình tạo hạt tầng sơi Thiết bị tạo hạt tầng sôi Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình tạo hạt tầng sơi 13 1.2 Tá dược dính sử dụng tạo hạt 16 1.3 Một số nghiên cứu ảnh hưởng tá dược dính lên tính chất hạt sử dụng kỹ thuật tạo hạt khác 21 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu .24 Nguyên vật liệu, hóa chất 24 Trang thiết bị 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 Đánh giá tính chất nguyên liệu hoạt chất tá dược đầu vào 26 Đánh giá tính chất vật lý dịch dính 27 Nghiên cứu ảnh hưởng loại tỉ lệ tá dược dính 28 Các phương pháp đánh giá tính chất hạt 31 i Các phương pháp đánh giá tính chất viên nén 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 39 3.1 Đánh giá tính chất nguyên liệu hoạt chất tá dược đầu vào .39 Nguyên liệu dạng rắn 39 Tính chất dịch tá dược dính 41 3.2 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC DÍNH TRÊN CƠNG THỨC CHỨA HOẠT CHẤT MELOXICAM .42 Ảnh hưởng trình tạo hạt 43 Ảnh hưởng lên tính chất viên nén 53 3.3 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC DÍNH TRÊN CƠNG THỨC CHỨA HOẠT CHẤT CLORPHENIRAMIN MALEAT 54 Ảnh hưởng trình tạo hạt 54 Ảnh hưởng lên tính chất viên nén 64 CHƯƠNG BÀN LUẬN 65 4.1 Các tính chất nguyên liệu hoạt chất tá dược 72 4.2 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA LOẠI TÁ DƯỢC DÍNH TRÊN CƠNG THỨC CHỨA HOẠT CHẤT MELOXICAM 73 4.3 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA LOẠI TÁ DƯỢC DÍNH TRÊN CƠNG THỨC CHỨA HOẠT CHẤT CLORPHENIRAMIN MALEAT 77 4.4 Ảnh hưởng tỷ lệ tá dược dính lên tính chất hạt viên nén 78 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ Diễn giải tiếng Anh Diễn giải tiếng Việt API Active Pharmaceutical Ingredient Hoạt chất dược phẩm CLM Clorpheniramin maleat Clorpheniramin maleat DSC Differential Scanning Calorimetry Phân tích nhiệt vi sai HPC Hydroxypropyl cellulose Hydroxypropyl cellulose HPMC Hydroxypropylmethyl cellulose Hydroxypropylmethyl cellulose ISPE International Society for Hiệp hội thực hành kỹ thuật Pharmaceutical Engineering dược quốc tế KLR - Khối lượng riêng MCC Microcrystalline cellulose Cellulose vi tinh thể MLX Meloxicam Meloxicam PVP Povidone Povidon QTSX Quy trình sản xuất Quy trình sản xuất SEM Scanning Electron Microscope Kính hiển vi điện tử quét USP 42 US Pharmacopeia Dược điển Mỹ UV-Vis Ultraviolet-visible spectroscopy Quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến VCA Variance component analysis Phân tích phương sai thành phần XRD X Ray diffraction Phổ nhiễu xạ tia X Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TLTK-3 27 Brittain H G, (2020), Profiles of drug substances, excipients, and related methodology, Academic press, 28 Du J, Bück A, Tsotsas E J P T, (2020), "Influence of process variables on spray agglomeration process in a continuously operated horizontal fluidized bed", 363, 195-206 29 Hausman D S J D d, pharmacy i, (2004), "Comparison of low shear, high shear, and fluid bed granulation during low dose tablet process development", 30, 259-266 30 M.Parikh D, (2016), Handbook of Pharmaceutical Granulation Technology, Informa Healthcare USA, Inc., 31 Mahmoodi F Compression mechanics of powders and granular materials probed by force distributions and a micromechanically based compaction equation: Acta Universitatis Upsaliensis, 2012 32 Mahours G M, Shaaban D E Z, Shazly G A, Auda S H J J o D D S, et al, (2017), "The effect of binder concentration and dry mixing time on granules, tablet characteristics and content uniformity of low dose drug in high shear wet granulation", 39, 192-199 33 Rowe R J I j o p, (1990), "Correlation between predicted binder spreading coefficients and measured granule and tablet properties in the granulation of paracetamol", 58, 209-213 34 Sheskey P J C, Walter G; Cable, Colin G, (2017), Handbook of pharmaceutical excipients, 174-177 35 Srivastava S, Mishra G J I J o P S, Research D, (2010), "Fluid bed technology: overview and parameters for process selection", 2, 236-246 36 Sun W-J, Sun C C J I J o P, (2020), "A microcrystalline cellulose based drugcomposite formulation strategy for developing low dose drug tablets", 119517 37 Suresh P, Reddy N S, Hariharan R, Sreedhar I J M T P, (2020), "Studies on Fluid bed Granulation of Lactose-MCC mixture", 24, 519-530 38 Vandevivere L, Denduyver P, Portier C, Häusler O, et al, (2020), "Influence of binder attributes on binder effectiveness in a continuous twin screw wet granulation process via wet and dry binder addition", 119466 39 Yamamoto K, Shao Z J (2017) Process development, optimization, and scaleup: fluid-bed granulation, Developing Solid Oral Dosage Forms Elsevier, pp 777-792 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-1 PHỤ LỤC Xây dựng thẩm định quy trình định lượng Meloxicam cốm, dịch thử độ hòa tan viên nén phương pháp quang phổ UV-Vis ❖ Quy trình định lượng Meloxicam Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác khoảng 150,0 mg Meloxicam cho vào bình định mức 100 mL Thêm khoảng 50 mL methanol (TT); lắc siêu âm 10 phút cho tan hồn tồn Bổ sung thể tích methanol (TT) đến vạch Dung dịch chuẩn: Hút xác khoảng 10,0 mL dung dịch chuẩn gốc Meloxicam cho vào bình định mức 100 mL, thêm dung dịch đệm pH 7,5 đến vạch Lắc đều, siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn, thu dung dịch chuẩn Meloxicam có nồng độ 150 µg/mL Dung dịch thử: Cho khối lượng cốm khoảng 375,0 mg vào bình định mức 50 mL Thêm khoảng 30 mL dung dịch đệm pH 7,5; lắc Siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn Thêm dung dịch đệm pH 7,5 đến vạch, lắc đều, thu dung dịch (1) Tiếp tục hút xác khoảng 5,0 mL dung dịch (1) cho vào bình định mức 50,0 mL, thêm dung dịch đệm pH 7,5 đến vạch; lắc đều, siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn thu dung dịch thử Dung dịch thử thử nghiệm hòa tan: Tiến hành thử nghiệm độ hòa tan Tại thời điểm lấy mẫu, hút 10 mL dung dịch thử hòa tan Lọc qua màng lọc 0,45 µm Thu dịch lọc tiến hành định lượng Dung dịch placebo: Cho khối lượng cốm khoảng 375,0 mg khơng chứa hoạt chất vào bình định mức 50 mL Thêm khoảng 30 mL dung dịch đệm pH 7,5; lắc Siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn Thêm dung dịch đệm pH 7,5 đến vạch, lắc đều, thu dung dịch (2) Tiếp tục hút xác khoảng 5,0 mL dung dịch (2) cho vào bình định mức 50,0 mL, thêm dung dịch đệm pH 7,5 đến vạch; lắc đều, siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn thu dung dịch placebo Điều kiện tiến hành Đo độ hấp thu dung dịch bước sóng 362 nm cốc đo thạch anh, mẫu trắng dung dịch đệm pH 7,5 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-2 ❖ Thẩm định quy trình định lượng Meloxicam - Tính đặc hiệu Tiến hành: quét phổ dung dịch mẫu trắng, dung dịch placebo, dung dịch chuẩn dung dịch thử khoảng bước sóng từ 200 nm đến 400 nm với mẫu trắng dung môi pha mẫu Ghi nhận kết Yêu cầu: dung dịch mẫu trắng mẫu placebo khơng có cực đại hấp thụ tương tự mẫu chuẩn, phổ hấp thụ dung dịch mẫu thử tương tự phổ hấp thụ mẫu chuẩn - Tính tuyến tính Tiến hành: pha dải mẫu chuẩn có nồng độ khác cách hút xác thể tích dung dịch chuẩn vào bình định mức tương ứng trình bày Bảng 1., bổ sung dung môi pha mẫu đến vạch Bảng Dải mẫu chuẩn thẩm định phương pháp phân tích định lượng Meloxicam Mẫu Thể tích dung dịch Dung mơi vừa đủ Nồng chuẩn (mL) (mL) (µg/mL) 1 50 2 50 3 50 4 50 12 5 50 15 25 18 độ Tiến hành định lượng dung dịch Meloxicam chuẩn có nồng độ khoảng 3,0 - 18,0 µg/mL Bảng Yêu cầu: Xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính nồng độ độ hấp thu với R2 ≥ 0,998 Sử dụng “phân tích hồi quy” với trắc nghiệm F để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy trắc nghiệm t để kiểm tra ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Trắc nghiệm F (phân phối Fisher) Giả thiết thống kê: Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-3 H0: “Phương trình hồi quy khơng tương thích” HA: “Phương trình hồi quy tương thích” Phân tích thống kê: giá trị P tính tốn sẵn sử dụng cơng cụ Regression MS - Excel Biện luận kết : Nếu P ≥ α (0,05)  chấp nhận giả thiết H0 Nếu P < α (0,05)  bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Trắc nghiệm t (phân phối Student) Giả thiết hệ số b: H0: “Hệ số b khơng có ý nghĩa thống kê” HA: “Hệ số b có ý nghĩa thống kê” Giả thiết hệ số a: H0: “Hệ số a ý nghĩa thống kê” HA: “Hệ số a có ý nghĩa thống kê” Phân tích thống kê: giá trị t tính tốn sẵn nhờ sử dụng cơng cụ Regression MS - Excel Biện luận kết quả: Nếu P ≥ α (0,05)  chấp nhận giả thiết H0 Nếu P < α (0,05)  bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA - Độ Tiến hành: thêm vào mẫu placebo lượng Meloxicam chuẩn 80, 100 120 % lượng Meloxicam mẫu thử (với mức phần trăm chuẩn bị ba mẫu) Đo độ hấp thu ghi nhận kết Yêu cầu: tỉ lệ phục hồi mẫu thử phải nằm khoảng 98,00 - 102,00 % - Độ lặp lại Tiến hành: định lượng Meloxicam mẫu thử nồng độ 100 % lặp lại 06 lần, tính RSD (%) tỷ lệ phục hồi mẫu thử Yêu cầu: RSD (%) ≤ 2,00 % Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-4 ❖ Kết thẩm định quy trình định lượng Meloxicam - Tính đặc hiệu Tiến hành quét phổ UV để xác định bước sóng hấp thu cực đại dung dịch mẫu trắng, mẫu placebo, mẫu chuẩn, mẫu thử khoảng bước sóng 200 - 400 nm Kết phổ đồ mẫu trình bày Hình Hình Phổ đồ thẩm định quy trình định lượng hoạt chất phương pháp quang phổ hấp thu UV của: (A) mẫu trắng, (B1,B2,B3) mẫu plaecbo, (C) mẫu chuẩn, (D) mẫu thử Kết cho thấy, mẫu chuẩn mẫu thử có đỉnh hấp thu cực đại bước sóng 362 nm Mẫu trắng mẫu placebo khơng có đỉnh hấp thu cực đại bước sóng 362 nm Vì vậy, quy trình định lượng Meloxicam phương pháp quang phổ hấp thu UV đạt tính đặc hiệu - Tính tuyến tính Kết khảo sát tính tuyến tính Meloxicam mơi trường đệm pH 7,5 trình bày Bảng Bảng Kết thẩm định tính tuyến tính Meloxicam Dung dịch chuẩn Nồng độ hoạt chất (µg/mL) Độ hấp thụ 0,169 0,328 0,489 12 0,655 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-5 Dung dịch chuẩn Nồng độ hoạt chất (µg/mL) Độ hấp thụ 15 0,789 18 0,971 Sử dụng công cụ Regression MS - Excel để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Cụ thể, sử dụng trắc nghiệm F để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy trắc nghiệm t để kiểm tra ý nghĩa hệ số Hình Biến thiên độ hấp thu theo nồng độ mẫu chuẩn Xét phương trình hồi quy: ŷ = 0,0529x + 0,0109 với R2 = 0,9991 (Hình 2.) Kết sau: Trắc nghiệm F: P = 2,9 x 10-7 < 0,05; bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Phương trình hồi quy có tính tương thích Trắc nghiệm t: Pb = 0,30 > 0,05; chấp nhận giả thiết H0 Hệ số b khơng có ý nghĩa Pa = 2,9 x 10-7 < 0,05; bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Hệ số a có ý nghĩa Vậy, độ hấp thu nồng độ hoạt chất tương quan tuyến tính khoảng nồng độ 3,0 - 18, µg/mL biểu diễn phương trình: ŷ = 0,0529x với R2 = 0,9991 - Độ Thêm chuẩn vào mẫu placebo với lượng 80, 100, 120 % lượng hoạt chất mẫu thử (n=3) Tiến hành đo độ hấp thu kết thể Bảng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-6 Bảng Kết thẩm định độ quy trình định lượng Meloxicam Lượng Mức 80 % 100 % 120 % thêm Lượng tìm Tỷ lệ phục Trung bình vào (mg) thấy (mg) hồi (%) 6,1 6,18 101,31 6,0 6,05 100,83 6,2 6,25 100,81 7,5 7,58 101,07 7,5 7,58 101,07 7,6 7,68 101,05 9,1 9,26 101,76 9,0 9,17 101,89 9,2 9,35 101,63 (%) 100,98 101,06 101,76 Kết quả: Tỉ lệ phục hồi ba mức nồng độ thêm vào 80, 100 120 % nằm giới hạn cho phép 98,0 - 102,0 % Do đó, quy trình định lượng đề xuất đạt tiêu độ tiến hành thẩm định - Độ lặp lại Độ xác khảo sát cách định lượng Meloxicam mẫu thử nồng độ 100 % lặp lại 06 lần (Bảng 4.) Bảng Nồng độ Meloxicam mẫu thử nghiệm độ lặp lại Mẫu Độ hấp thụ Xử lý thống kê 0,786 TB = 0,786 0,788 SD = 0,002 0,786 RSD = 0,192 0,784 0,784 0,786 Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) mức thấp (0,002 %) Phương pháp định lượng đề xuất đạt độ lặp lại Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-7 Kết luận: Quy trình định lượng Meloxicam phương pháp quang phổ hấp thụ UV bước sóng 362 nm đạt tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại, độ Quy trình sử dụng để định lượng Meloxicam mẫu cốm/viên nén/dịch thử độ hịa tan Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-8 PHỤ LỤC Xây dựng thẩm định quy trình định lượng Clorpheniramin maleat cốm, dịch thử độ hòa tan viên nén phương pháp quang phổ UV-Vis ❖ Quy trình định lượng Clorpheniramin maleat Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác khoảng 80,0 mg Clorpheniramin maleat cho vào bình định mức 200 mL Thêm khoảng 100 mL dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt); lắc siêu âm 10 phút cho tan hồn tồn Bổ sung thể tích đến vạch Dung dịch chuẩn: Hút xác 10,0 mL dung dịch chuẩn gốc Clorpheniramin maleat cho vào bình định mức 100 mL, thêm dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt) Lắc đều, siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn, thu dung dịch chuẩn Clorpheniramin maleat có nồng độ 40 µg/mL Dung dịch thử: Cho khối lượng cốm khoảng 200,0 mg vào bình định mức 200 mL Thêm khoảng 100 mL dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt); lắc Siêu âm cho tan hoàn toàn Thêm dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt) đến vạch Lắc đều, thu dung dịch thử Dung dịch thử thử nghiệm hòa tan: Tiến hành thử nghiệm độ hòa tan Tại thời điểm lấy mẫu, hút 10 mL dung dịch thử hòa tan Lọc qua màng lọc 0,45 µm Thu dịch lọc tiến hành định lượng Dung dịch placebo: Cho khối lượng cốm khoảng 200,0 mg khơng chứa hoạt chất vào bình định mức 200 mL Thêm khoảng 100 mL dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt); lắc Siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn Thêm dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt) đến vạch Lắc đều, thu dung dịch placebo Điều kiện tiến hành Đo độ hấp thu dung dịch bước sóng 264 nm cốc đo thạch anh, mẫu trắng dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt) ❖ Thẩm định quy trình định lượng Clorpheniramin maleat - Tính đặc hiệu Tiến hành: quét phổ dung dịch mẫu trắng, dung dịch placebo, dung dịch chuẩn dung dịch thử khoảng bước sóng từ 200 nm đến 400 nm với mẫu trắng dung môi pha mẫu Ghi nhận kết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-9 Yêu cầu: dung dịch mẫu trắng mẫu placebo khơng có cực đại hấp thụ tương tự mẫu chuẩn, phổ hấp thụ dung dịch mẫu thử tương tự phổ hấp thụ mẫu chuẩn Tính tuyến tính Tiến hành: pha dải mẫu chuẩn có nồng độ khác cách hút xác thể tích dung dịch chuẩn vào bình định mức tương ứng trình bày Bảng 1., bổ sung dung mơi pha mẫu đến vạch Bảng Dải mẫu chuẩn thẩm định phương pháp phân tích Mẫu Thể tích dung dịch Dung mơi Nồng chuẩn (mL) vừa đủ (mL) (µg/mL) 10 100 4,20 10 50 8,40 10 25 16,80 13 25 21,84 15 25 25,20 18 25 30,24 20 25 33,60 20 - 42,00 25 20 52,50 độ Tiến hành định lượng dung dịch Clorpheniramin chuẩn có nồng độ khoảng 4,20 – 52,50 µg/mL Bảng Yêu cầu: Xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính nồng độ độ hấp thu với R2 ≥ 0,998 Sử dụng “phân tích hồi quy” với trắc nghiệm F để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy trắc nghiệm t để kiểm tra ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Trắc nghiệm F (phân phối Fisher) Giả thiết thống kê: H0: “Phương trình hồi quy khơng tương thích” HA: “Phương trình hồi quy tương thích” Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-10 Phân tích thống kê: giá trị P tính tốn sẵn sử dụng cơng cụ Regression MS - Excel Biện luận kết : Nếu P ≥ α (0,05)  chấp nhận giả thiết H0 Nếu P < α (0,05)  bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Trắc nghiệm t (phân phối Student) Giả thiết hệ số b: H0: “Hệ số b khơng có ý nghĩa thống kê” HA: “Hệ số b có ý nghĩa thống kê” Giả thiết hệ số a: H0: “Hệ số a khơng có ý nghĩa thống kê” HA: “Hệ số a có ý nghĩa thống kê” Phân tích thống kê: giá trị t tính tốn sẵn nhờ sử dụng cơng cụ Regression MS - Excel Biện luận kết quả: Nếu P ≥ α (0,05)  chấp nhận giả thiết H0 Nếu P < α (0,05)  bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA - Độ Tiến hành: thêm vào mẫu placebo lượng Clorpheniramin maleat chuẩn 80, 100 120 % lượng Clorpheniramin maleat mẫu thử (với mức phần trăm chuẩn bị ba mẫu) Đo độ hấp thu ghi nhận kết Yêu cầu: tỉ lệ phục hồi mẫu thử phải nằm khoảng 98,00 - 102,00 % - Độ lặp lại Tiến hành: định lượng Clorpheniramin maleat mẫu thử nồng độ 100 % lặp lại 06 lần, tính RSD (%) tỷ lệ phục hồi mẫu thử Yêu cầu: RSD (%) ≤ 2,00 % Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-11 ❖ Kết thẩm định quy trình định lượng Clorpheniramin maleat - Tính đặc hiệu Tiến hành quét phổ UV để xác định bước sóng hấp thu cực đại dung dịch mẫu trắng, mẫu placebo, mẫu chuẩn, mẫu thử khoảng bước sóng 200 - 400 nm Kết phổ đồ mẫu trình bày Hình Hình Phổ đồ thẩm định quy trình định lượng hoạt chất phương pháp quang phổ hấp thu UV của: (A) mẫu trắng, (B1,B2,B3) mẫu placebo, (C) mẫu chuẩn, (D) mẫu thử Kết cho thấy, mẫu chuẩn mẫu thử có đỉnh hấp thu cực đại bước sóng 264 nm Mẫu trắng mẫu placebo khơng có đỉnh hấp thu cực đại bước sóng 264 nm Vì vậy, quy trình định lượng Clorpheniramin maleat phương pháp quang phổ hấp thu UV đạt tính đặc hiệu - Tính tuyến tính Kết khảo sát tính tuyến tính Clorpheniramin maleat mơi trường dung dịch HCl 0,1 % (tt/tt) trình bày Bảng Bảng Kết thẩm định tính tuyến tính Clorpheniramin maleat Dung dịch chuẩn Nồng độ hoạt chất (µg/mL) Độ hấp thu 4,20 0,094 8,40 0,198 16,80 0,377 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-12 Dung dịch chuẩn Nồng độ hoạt chất (µg/mL) Độ hấp thu 21,84 0,490 25,20 0,567 30,24 0,662 33,60 0,736 42,00 0,925 52,50 1,150 Sử dụng công cụ Regression MS - Excel để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Cụ thể, sử dụng trắc nghiệm F để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy trắc nghiệm t để kiểm tra ý nghĩa hệ số Hình Biến thiên độ hấp thu theo nồng độ mẫu thử Xét phương trình hồi quy: y = 0,0217x + 0,0111 với R2 = 0,9997 (Hình 2.) Kết sau: Trắc nghiệm F: P = 9,03 x 10-4 < 0,05; bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Phương trình hồi quy có tính tương thích Trắc nghiệm t: Pb = 0,027 < 0,05; bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Hệ số b có ý nghĩa Pa = 9,03 x 10-4 < 0,05; bác bỏ giả thiết H0, chấp nhận giả thiết HA Hệ số a có ý nghĩa Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-13 Vậy, độ hấp thu nồng độ hoạt chất tương quan tuyến tính khoảng nồng độ 4,20 – 52,50 µg/mL biểu diễn phương trình: ŷ = 0,0217x + 0,0111 với R2 = 0,9997 - Độ Thêm chuẩn vào mẫu placebo với lượng 80, 100, 120 % lượng hoạt chất mẫu thử (n=3) Tiến hành đo độ hấp thu kết thể Bảng Bảng Kết thẩm định độ quy trình định lượng Clorpheniramin maleat Mức 80 % 100 % 120 % Lượng thêm Lượng tìm Tỷ lệ phục Trung vào (mg) thấy (mg) hồi (%) 6,5 6,58 101,23 6,4 6,45 100,78 6,4 6,45 100,78 8,1 8,19 101,11 8,0 8,08 101,00 8,0 8,08 101,00 9,6 9,78 101,88 9,5 9,68 101,89 9,6 9,77 101,77 bình (%) 100,60 101,04 101,85 Kết quả: Tỉ lệ phục hồi ba mức nồng độ thêm vào 80, 100 120 % nằm giới hạn cho phép 98,0 - 102,0 % Do đó, quy trình định lượng đề xuất đạt tiêu độ tiến hành thẩm định - Độ lặp lại Độ xác khảo sát cách định lượng Clorpheniramin maleat mẫu thử nồng độ 100 % lặp lại 06 lần (Bảng 4.) Bảng Nồng độ Clorpheniramin maleat mẫu thử nghiệm độ lặp lại Mẫu Độ hấp thụ Xử lý thống kê 0,925 TB = 0,923 0,925 SD = 0,002 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-14 Mẫu Độ hấp thụ Xử lý thống kê 0,920 RSD = 0,253 0,922 0,920 0,924 Độ lệch chuẩn tương đối mức thấp (0,253 %) Phương pháp định lượng đề xuất đạt độ lặp lại Kết luận: Quy trình định lượng Clorpheniramin maleat phương pháp quang phổ hấp thu UV bước sóng 264 nm đạt tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại, độ Quy trình sử dụng để định lượng Clorpheniramin maleat hỗn hợp cốm/viên nén/dịch thử độ hòa tan Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn